1、病理生理学实验教学中心病理生理学实验教学中心杜舒婷杜舒婷氨在肝性脑病发病机制中的作用 前言前言本实验为高年级各专业本科生病理生理学的实验教学内容，其目的是掌握氨中毒复制肝性脑病动物模型的方法，观察肝性脑病发生发展过程中机体的一般状态及中枢神经系统变化的表现，了解氨中毒的抢救方法和原理。肝性脑病在临床上非常常见，通过该实验使学生对肝性脑病的临床表现有初步的感性认识，使学生掌握氨中毒复制肝性脑病动物模型的实验技能及相关知识。通过实验可培养学生分析问题、解决问题的能力，加强对本科学生动手能力的培养，为今后的临床实践打下坚实的基础。实验目的实验目的1. 掌握氨中毒复制肝性脑病动物模型的方法。2. 观察
2、肝性脑病发生发展过程中机体的一般状态及中枢神经系统变化的表现。3. 了解氨中毒的抢救方法和原理。实验原理实验原理肝性脑病（hepatic encephalopathy）过去称肝性昏迷，是严重肝病引起的，以代谢紊乱为基础的中枢神经系统功能失调的综合病症，其主要临床表现是意识障碍、行为失常和昏迷。多数学者认为，肝性脑病的发生与血氨升高有明显的关系，即氨中毒学说。氨中毒学说：氨（NH3）是一种机体代谢产生的毒物，必须及时将氨转变成无毒或毒性低的物质，排出体外。正常情况下，氨的生成和消除之间维持着动态平衡，使正常人的血氨不超过59mol/L。当氨的生成增多而消除减少时，可使血氨升高。增高的血氨通过血脑
3、屏障进入脑内，使脑内代谢和功能障碍，导致肝性脑病。肝性脑病的发生增高的氨可经过血脑屏障进入脑内，产生以下作用：干扰脑组织的能量代谢：进入脑内的NH3，通过消耗-酮戊二酸、NADH、ATP使脑组织内能量物质生成减少大脑处于抑制状态。使脑内的神经递质发生改变：进入脑内的NH3，与谷氨酸结合生成谷氨酰胺兴奋性神经递质（谷氨酸）减少，而抑制性神经递质（谷氨酰胺）生成增多脑内神经递质平衡失调中枢神经系统功能紊乱氨对神经细胞的抑制作用：进入脑内的NH3，抑制神经细胞膜上的Na+-K+-ATP酶活性影响细胞内外Na+、K+分布影响膜电位和兴奋及传导等功能活动血氨增高是引起肝性脑病发生的重要原因，本实验通过肝
4、大部分结扎的方法，造成肝脏功能严重受损，在此基础上经消化道输注氯化铵，使血氨迅速增高，出现抽搐、昏迷等类似肝性脑病的症状，证明氨在肝性脑病发生机制中的作用。由于肝功能正常时，输入大量氯化铵，也可以出现类似症状，因此，实验中要增设对照组，以证明肝脏功能正常与否在肝性脑病中的作用。实验动物实验动物器械与药品器械与药品常规手术器械，家兔固定台，5ml、50ml注射器，婴儿秤，细导尿管，粗棉线，婴儿头皮针。1%普鲁卡因，复方氯化铵（含2.5%氯化铵，1.5%碳酸氢钠，5%葡萄糖），复方谷氨酸钠（含2.5%谷氨酸钠，5%葡萄糖），0.1%肝素化生理盐水。1. 取成年家兔一只，称重后仰卧位固定在兔台上，剪
5、去腹部正中的兔毛，在上腹正中用1%普鲁卡因做放射状局部浸润麻醉。 2. 找到胸骨剑突，在腹部正中剑突向下做8cm左右的纵切口，分层局麻后，切开肌肉，打开腹腔，即可见到位于右肋弓下红褐色肝脏，向下压迫肝脏，找到肝与膈肌相连的镰状韧带及与胃相连的肝胃韧带，用手术剪剪开两条韧带。3. 将粗棉线用生理盐水浸湿后，从肝与肋弓的间隙把线压到肝脏根部，沿左外叶、左中叶、右中叶和方形叶的根部围绕一周并结扎。由于右外叶和尾状叶之间门脉血管为独立分支，不会同时被结扎，因而得以保留。结扎后，用手术剪在已结扎的肝叶上剪一小口，如无明显渗血，说明肝大部结扎成功，否则就要重新结扎（图7-8-1）方法与步骤方法与步骤 图7
6、-8-1 兔的肝脏（背侧面）4. 沿胃下端找到与之相连的十二指肠，用手术剪在肠壁上剪一小口，将细导尿管插入68cm（插入方向应向远胃端），做荷包缝合或直接连肠管一起结扎固定，将细导尿管另一端置于腹腔之外，然后用止血钳夹住腹壁，关闭腹腔。5. 观察家兔一般状态及呼吸、心率的变化，检查角膜反射及对疼痛刺激反应。6. 用5ml注射器每隔5分钟向十二指肠插管注入复方氯化铵5ml，细心观察家兔一般状态及呼吸、心率的变化，检查角膜反射、对疼痛刺激反应，有无抽搐、肌张力增高等情况。当以上症状出现时，停止输注复方氯化铵，记录所用总量，并计算每公斤体重的用量。7. 当出现肌张力增高时，自耳缘静脉插入含肝素化生理
7、盐水的头皮针，一旦动物发生抽搐，立即输入复方谷氨酸钠溶液，用量为30ml/kg.bw，观察并记录治疗后症状有无缓解。8. 另外取家兔一只，称重后固定于兔台上，局麻下做腹部正中切口，打开腹腔，剪断镰状韧带及肝胃韧带，但不做肝大部结扎，作为假手术对照。找出十二指肠并插管，观察动物一般状态，每隔5分钟向十二指肠内注入5ml复方氯化铵溶液，直到出现抽搐、肌张力增高等症状，记录所用总量及每公斤用量。9. 再取家兔一只，称重后固定于兔台上，腹部正中切口，打开腹腔，行肝大部结扎及十二指肠插管，术后每隔5分钟向十二指肠内注入5ml生理盐水，观察动物有无异常，并与前两只进行比较分析。注意事项注意事项1. 由于镰
8、状韧带连接于肝脏和膈肌，其根部是大血管，故剪时要特别小心，防止造成气胸和出血。2. 游离肝脏时动作要轻，以免造成肝叶破裂出血，且结扎线应尽量置于肝脏根部，避免拦腰结扎肝脏。3. 动物经输入一定量氯化铵后，一般会出现抽搐，但也有可能会发生肝结扎组与非结扎组都有抽搐，且所需氯化铵溶液用量接近或倒错的异常情况，其原因是由于动物未做全身麻醉，实验期间可能出现挣扎，误判为抽搐。故实验中应与氨中毒抽搐进行鉴别。4. 动物一旦出现抽搐，应立即停止使用氯化铵，并马上进行抢救，如间隔时间过长，则抢救效果不佳。复习讨论题复习讨论题1. 结合氨中毒学说分析为什么肠道内注入氯化铵后会出现肝性脑病的症状？2. 在十二指肠内注入氯化铵时，如果氯化铵漏入腹腔会对实验结果有何影响？3. 在肝结扎组与未结扎组偶尔会出现氯化铵用量接近或倒置情况，其可能原因有哪些? 4. 谷氨酸钠抢救氨中毒的原理是什么?
