1、总蛋白测定及白蛋白测定实验目的：熟悉血清蛋白的测定方法（双缩脲法）。掌握血清总蛋白测定的临床意义。进一步巩固掌握721E型分光光度计的使用。 熟悉血清白蛋白的测定方法（溴甲酚绿法）。掌握血清白蛋白的测定和白蛋白和球蛋白的含量比（A/G）测定的临床意义。 测定化合物或混合物中总氮量的一种方法，即在催化剂条件下，用浓硫酸将有机氮转化为无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，然后用过量的酸液吸收用标准碱滴定，这样就可以算出样品 中的总 氮量。由于一般氮元素质量占蛋白质质量的 16% ，故样品中蛋白质含量=含氮量*6.25实验试剂n生理盐水：NaCl 0.9g 溶于100ml蒸馏水n双缩脲试剂：硫酸
2、铜 3.0g溶于500ml蒸馏水，加酒石酸钾钠9.0g,碘化钾5.0g，完全溶解后，加入24%NaOH100ml，用蒸馏水稀释到1L，置聚氯乙烯瓶内盖紧保存。n蛋白质标准液：收集混合血清，经凯氏定氮法凯氏定氮法定值，用作蛋白质标准液。贮于冰箱中备用。也可用100mg/ml牛血清白蛋白替代。n待测血清用生理盐水1:10稀释。实验操作测定管 标准管 空白管 血清（ml）1.00蛋白质标准液（ml）1.00生理盐水（ml）1.00双缩脲试剂（ml） 5.0 5.0 5.0 取3支试管，按下表操作。混匀，37水浴放置10分钟，以空白管调零点，在540nm波长处进行比色，分别读取各管的吸光度。计算公式（
3、P65）试剂1.溴甲酚绿（BCG）贮存液 取BCG 419mg，用10ml 0.1mol/L NaOH溶解，加NaN3 100mg ，定容至1000mL。贮于棕色瓶备用。如用溴甲酚绿钠盐应称取432mg.加水溶解。2.0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH 4.2）分别配制0.1mol/L柠檬酸和柠檬酸钠溶液，然后按12.3：7.7的体积比例混合。每1000ml混合液加入NaN3 100mg。3.30%聚氧化乙烯月桂醚(Brij-35)溶液 取Brij-35 30g,加少量水，60水浴溶解，加水至100ml（此可用Tween-20或Tween-80代替)。4.BCG应用液 BCG贮存液250ml，
4、0.1mol/L柠檬酸缓冲液（pH4.2)750ml,30%Brij-35 8ml(也可以用Tween-20 8ml或Tween-80 10ml代替）混合而成。5.标准蛋白溶液（10mg/ml) 称取人白蛋白1.00g，用生理盐水1234白蛋白标准液 （ml)0.100.200.400.60生理盐水(ml)0.900.800.600.40稀释后白蛋白含量（mg/ml)1.02.04.06.0注意事项1.由于各种血清蛋白质的分子量不同，故其浓度不宜用mol/L表示。2.双缩脲试剂中酒石酸钾钠的作用是络合铜离子，以维持铜离子在碱性溶液中的溶解性；碘化钾能防止两价铜离子还原3.高脂，黄疸及溶血标本应
5、作清空白对照来校正误差。含脂类极多的血清，加入双缩脲试剂后会出现混浊，可用乙醚3ml抽提后再进行比色4.血清白蛋白浓度100g/L时，需作稀释处理，结果乘上稀释倍数2. 血清白蛋白测定用生理盐水按1：10的比例稀释血清，取稀释后的血清0.2ml加入BCG应用液5.0ml混匀后立即同上比色，读取光密度，并从标注曲线上查出相应的白蛋白浓度。3.白蛋白/球蛋白比值（A/G比值）用双缩脲法测定血清标本中的总蛋白浓度，用总蛋白浓度减去白蛋白浓度即得球蛋白浓度，并可求的A/G比值：A/G比值比值=白蛋白含量白蛋白含量总蛋白含量总蛋白含量-白蛋白含量白蛋白含量临床意义n1.清总蛋白生理性波动：长久卧床者比直立活动者约低35g/L；新生儿比成人低58g/L；60岁以上的老人约比青壮年低2g/L。n2.清总蛋白增高：n血液浓缩：腹泻、呕吐等。n合成增加：如多发性骨髓瘤等。n3.清总蛋白降低：n血液稀释：过多注射低渗溶液，各种原因引起的水钠潴留。n摄入量不足和消耗增加：营养不良、慢性肠胃炎、严重结核病等。n合成障碍：肝脏疾病。n蛋白质丢失：严重烧伤时大量血浆渗出，肾综合症等。
