1、雪碧中苯甲酸钠的测定.双号5组提提 纲纲 认识高效液相色谱仪仪器 高效液相色谱仪的工作原理 液相色谱仪的具体操作步骤以及注意事项 实 验高效液相色谱仪高效液相色谱仪的相关器件高效液相色谱仪的工作原理 高效液相色谱用高压输液泵将具高效液相色谱用高压输液泵将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，经进样阀注入待测固定相的色谱柱，经进样阀注入待测样品，有流动相带入柱内，在柱内各样品，有流动相带入柱内，在柱内各成分被分离后，依次进入检测器进行成分被分离后，依次进入检测器进行检测，从而实现对试样的分
2、析检测，从而实现对试样的分析。FL2200型高效液相色谱仪操作步骤 开机前准备 开机前应根据待测检测样品的检测方法准备所需的流动相，流动相必须使用0.45um滤膜过滤，并用超声波清洗脱气1015分钟。 配置样品和标准溶液，并用合适的0.45um滤膜过滤。 更换合适的色谱柱（注意色谱柱进出口位置应与流动相流向一致，不要装反） 检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。正常。第二步、开第二步、开 机机接通电源，依次开启不间断接通电源，依次开启不间断电源电源、真空脱气机真空脱气机、四元泵四元泵、检检测器测器，待泵和检测器自检结束后，打开电脑
3、显示器、主机，待泵和检测器自检结束后，打开电脑显示器、主机，最后打开色谱最后打开色谱工作站工作站。三、三、参数设定参数设定检测其参数设置在检测器显示主菜单界面时，按1键进入“单波长模式”界面。基线设置 在“单波长模式”界面下，按上下箭头键，用数字键输入所需的基线高度值，一般输入5000mV。波长设置 在“单波长模式”界面下，按2键，输入所需波长值，确认，波长范围200600nm响应时间设置 在“单波长模式”界面下，按3键选择所需的响应时间，再确认量程设置 按4键左右选择所需的量程，再确认。调零 在“单波长模式”界面下，按0键四、四、排气泡排气泡1： 将吸滤器放入装有准备好的流动相的储液瓶中；2
4、 ：顺时针转动泵的排液阀180，打开排液阀；3 ：运行泵，泵以3ml/min的流速冲洗5min（可设定）后泵流速设为0ml/min；4 ：将排液阀逆时针旋转适度拧紧，关闭排液阀。5 ：如管路中仍有气泡，则从阿注入口处拆下连接管，放入废液瓶中，设流速为5ml/min，启动泵，冲洗3min后再停止，重新接上色谱柱并将泵的流量改为原来的装置。五、五、平衡系统平衡系统 检查管路连接、柱接口及泵头处是否漏液，如漏液应予以排除。 换检验方法规定的流动相冲洗系统，观察基线和压力变化。如果冲洗至基线和压力平稳时，可认为系统已达到平衡状态，可以进样。 六、进样六、进样 针头滤器过滤试样溶液（注射液可不必过滤），
5、用试样溶液清洗进样注射器，排除气泡后抽取适量。 用定量环定容进样时，进样量应不小于定量环体积的2倍（510倍准确性更佳）。 将进样阀手柄转动至Load位置，将进样注射器针完全插入进样阀入口中，平稳地注入试样溶液，除另有规定外，让进样注射器留在进样阀上，将进样阀手柄快速转动至Inject位置，系统将自动运行，采集数据并记录图谱。 让进样阀手柄保持在Inject位置，到下次进样前12min切换回Load位置，将注射器从进样阀中拔出 先用水再用试样溶液清洗进样注射器后，按以上程序继续进样，直至完成。七、清洗进样阀七、清洗进样阀 用注射器吸10ml超纯水，将注射针导入口冲洗头连接到注射器出口上（不要针
6、），并将它们一起接到进样口上； 使进样阀保持在Inject位置，慢慢将水推入，水将通过注射针导入口、引导管、注射针导入管和注射针密封圈，由样品溢出管排出。 将进样阀换成Load位置，同样清洗一次。高效液相色谱仪操作需注意事项 高效液相色谱仪注意事项： 流动相均需色谱纯度，水用20M的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。 柱子是非常脆弱的，第一次做的方法，先不要让液体过柱子。 所有过柱子的液体均需严格的过滤。 压力不能太大，最好不要超过2000 psi。 关机时，先关计算机，再关液相色谱。（一）实训目的与要求 学习及了解高效液相色谱仪的工作原理及操作学习及了解高效液相色谱仪的工作原
7、理及操作要点。要点。 掌握高效液相色谱法定糖精钠、苯甲酸钠的原掌握高效液相色谱法定糖精钠、苯甲酸钠的原理及方法。理及方法。 学会使用高效液相色谱仪，学会识别色谱图。学会使用高效液相色谱仪，学会识别色谱图。 (二)基本原理 样品加热除去二氧化碳和乙醇，调节样品加热除去二氧化碳和乙醇，调节pHpH至近中性至近中性后，过滤，然后经高效液相色谱仪反相色谱分离，后，过滤，然后经高效液相色谱仪反相色谱分离，根据保留时间和峰面积进行定性定量。根据保留时间和峰面积进行定性定量。三 (仪器与试剂)仪器：高效液相色谱仪、紫外检测器。试剂：雪碧试样测定方法测定方法将样品配置成一定的体积，经滤膜过滤，滤液用HPLC分
8、析。然后用微量注射器吸取大于20uml的试样，排除气泡，注射于自动进样器。样品含量分析 2.850(1) 4.967 苯 甲 酸 钠3940414243444546474849mV0.91.82.73.64.55.46.37.28.19min序号 保留时间 名称 浓度（mg/ml) 校正因子 峰面积 峰标志 峰分离度 理论塔板数 1 4.967 苯甲酸钠 0.04 7.78945e-007 51352 LMV 0.61 4792 总计 0.04 51352 (1) 3.669 雪 碧40414243444546474849mV0.91.82.73.64.55.46.37.28.19min序号 保留时间 名称 浓度 （mg/ml） 校正因子 峰面积 峰标志 峰分离度 理论塔板数 1 3.669 雪碧 0.1712 41820 0.56 2753 总计 0.1712 41820 实验结果评估苯甲酸钠时常用的食品防腐剂，有防止变酸，延长保质期的作用。食品分类号：14.04.01 碳酸饮料）防腐剂（苯甲酸钠）的使用量最大为0.2g/kg的标准，试样含量为0.162g/kg,0.2g/kg，所以我们所测得雪碧试样中苯甲酸的钠含量符合国家食品（碳酸饮料）防腐剂含量的标准，该种品牌的雪碧可以饮用。
