1、菌种的使用和管理菌种的使用和管理 1ppt课件课件内容提要：内容提要：菌种的质量控制和鉴定菌种的质量控制和鉴定菌种保藏菌种保藏菌种的使用过程菌种的使用过程文件及记录文件及记录2ppt课件课件菌种保藏意义菌种保藏意义目的：保证检验中有准备好的菌悬液可以使用目的：保证检验中有准备好的菌悬液可以使用。一般需要使用菌悬液的试验如下：一般需要使用菌悬液的试验如下：u防腐剂效能试验防腐剂效能试验u方法验证方法验证u培养基质量控制培养基质量控制u鉴别系统的质量控制鉴别系统的质量控制u阳性对照阳性对照3ppt课件课件菌种保藏菌种保藏药品微生物检验常用标准菌株枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis C
2、MCC（B）63 501金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus CMCC（B）26 003生孢梭菌 Clostridium sporogenes CMCC（B）64 941铜绿假单胞菌 Pseudomonas aeruginosa CMCC（B）10 104大肠埃希菌 Escherichia coli CMCC（B）44 102白色念珠菌 Candida albicans CMCC（F）98 001黑曲霉 Aspergillus niger CMCC（F）98 0034ppt课件课件菌种保藏菌种保藏样品分离菌库环境监控菌库标准菌种菌库CMCC CMCC 中国医学菌种保藏中心
3、中国医学菌种保藏中心CMCC（F）或 CMCC（B）B 代表细菌、F 代表真菌ATCC ATCC 美国标准菌种收藏所美国标准菌种收藏所 著名的微生物保藏中心，创立于1899年，设在美国马里兰州罗克维尔市。收藏有细菌、真菌、动植物病毒、噬菌体、藻类和原生生物等共计16000株以上的微生物种株。5ppt课件课件菌种保藏菌种保藏菌种保藏方法菌种保藏方法 不同的微生物受不同的环境条件影响其特性会发生改变，不同的微生物受不同的环境条件影响其特性会发生改变，故需要确保菌种在合适的储存条件下保藏。故需要确保菌种在合适的储存条件下保藏。 药典要求药典要求: :试验用菌种应采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证
4、试试验用菌种应采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。验菌株的生物学特性。 一般的保藏方式如下：一般的保藏方式如下：u 冷藏冷藏u 冷冻冷冻u 冻干保藏冻干保藏6ppt课件课件菌种保藏菌种保藏冷藏冷藏2-8冰箱保藏，是一种短期、有效储藏方法。冰箱保藏，是一种短期、有效储藏方法。工作菌悬液和稀释液均用此方法保藏，储藏时间需要进行工作菌悬液和稀释液均用此方法保藏，储藏时间需要进行相关的验证，但必须符合法规要求。相关的验证，但必须符合法规要求。保藏方式可以选择如下形式：保藏方式可以选择如下形式：u肉汤肉汤-营养肉汤等营养肉汤等u穿刺穿刺- 一般用于厌氧菌的保藏一般用于厌氧菌的保藏
5、u斜面斜面-营养琼脂营养琼脂 、改良马丁培养基、改良马丁培养基u划平板划平板- 一般为了得到单颗菌落一般为了得到单颗菌落7ppt课件课件菌种保藏菌种保藏冷冻冷冻一般在低于一般在低于-70冰箱内保藏，是一种有效的长期储藏方冰箱内保藏，是一种有效的长期储藏方法。法。需要加入保护剂，例如甘油，可以减少冷冻对菌种的伤害。需要加入保护剂，例如甘油，可以减少冷冻对菌种的伤害。储藏时间同样需要进行相关的验证。储藏时间同样需要进行相关的验证。8ppt课件课件菌种保藏菌种保藏冻干法保藏冻干法保藏是一种长期保藏菌种的方法。是一种长期保藏菌种的方法。一般情况下购买的冻干菌种即为此种方法。使用时需要进一般情况下购买的
6、冻干菌种即为此种方法。使用时需要进行溶解、复壮、冷藏。行溶解、复壮、冷藏。9ppt课件课件菌种的质量控制菌种的质量控制菌种的质量控制菌种的质量控制u效期效期u传代传代u鉴定鉴定u标识标识u文件管理文件管理10ppt课件课件菌种的质量控制菌种的质量控制效期效期确保所有的菌种应当在有效期内。确保所有的菌种应当在有效期内。u标签标签菌种名称：沙门氏菌菌种名称：沙门氏菌储藏时间：储藏时间：2009.01.01批号：批号：601844，传代，传代2：2009.01.01培养基批号：培养基批号：0081230， 效期：效期：2012.01.0111ppt课件课件菌种的质量控制菌种的质量控制传代传代试验用菌
7、株的传代次数不得超过试验用菌株的传代次数不得超过5 5 代代（从菌种保存中心获得的冷冻干燥（从菌种保存中心获得的冷冻干燥菌种为第菌种为第0 0 代）。代）。代的定义：每接种一次即为一代（有在新鲜的培养基上生长过程代的定义：每接种一次即为一代（有在新鲜的培养基上生长过程) )传代示意图：传代示意图：原始菌种原始菌种QCS1S2S3第一代第一代12ppt课件课件菌种的质量控制菌种的质量控制菌种鉴别菌种鉴别通过一系列的检查来确认菌种的纯度和活性。通过一系列的检查来确认菌种的纯度和活性。鉴别方法鉴别方法: :传统的鉴别方法：菌落形态、个体形态、孢子形态、生化特征等。传统的鉴别方法：菌落形态、个体形态、
8、孢子形态、生化特征等。13ppt课件课件菌种的质量控制培养形态微观分析生化鉴定DNA鉴定14ppt课件课件平板划线分离法 斜面接种时斜面接种时的无菌操作的无菌操作 15ppt课件课件菌种的质量控制菌种的质量控制标签标签每一支菌种或菌液在储存期内均需要有明确的标识。标签每一支菌种或菌液在储存期内均需要有明确的标识。标签的内容应包括以下内容：的内容应包括以下内容：u冷藏、冷冻日期冷藏、冷冻日期u菌种名称和编码菌种名称和编码u批号、效期、传代代数批号、效期、传代代数菌种名称：沙门氏菌菌种名称：沙门氏菌储藏时间：储藏时间：2009.01.01批号：批号：601844，传代，传代2：2009.01.01
9、培养基批号：培养基批号：0081230， 效期：效期：2012.01.0116ppt课件课件菌种的质量控制菌种的质量控制文件管理文件管理u SOP SOPu记录记录 能够证明菌种的整个传代过程。能够证明菌种的整个传代过程。 包括接收、传代、使用、销毁。包括接收、传代、使用、销毁。17ppt课件课件菌种的质量控制菌种的质量控制注意事项：注意事项：u必须小心处理必须小心处理u使用前确认菌种身份使用前确认菌种身份u根据生产商说明书复苏菌种根据生产商说明书复苏菌种u使用接种技术；不要重复从菌种包装瓶中移取菌种或重使用接种技术；不要重复从菌种包装瓶中移取菌种或重新冷冻菌种。新冷冻菌种。u传代代数（每接种
10、一次即为一代）传代代数（每接种一次即为一代）18ppt课件课件菌种的使用过程菌种的使用过程u菌种的采购菌种的采购u菌种的接收和储藏菌种的接收和储藏u冻干菌种的恢复冻干菌种的恢复u非冻干菌种的恢复非冻干菌种的恢复u储备管制备储备管制备u工作菌悬液的制备工作菌悬液的制备u质量控制及菌种编码质量控制及菌种编码u菌种传代示意图菌种传代示意图19ppt课件课件菌种的使用过程菌种的使用过程 菌种的采购菌种的采购u所有接收的菌种应保证其传代代数所有接收的菌种应保证其传代代数 （药典要求使用时不能超过（药典要求使用时不能超过5 5代）代）20ppt课件课件菌种的使用过程菌种的使用过程 菌种的接收和储存菌种的接
11、收和储存u菌种接收时应对以下项目进行检查菌种接收时应对以下项目进行检查: :包装完整性包装完整性菌种名称菌种名称菌种编码菌种编码批号批号效期效期u菌种的储存菌种的储存严格按照说明书的要求进行储藏。严格按照说明书的要求进行储藏。所有过程均需要有相所有过程均需要有相应的记录，应的记录，无记录表示无任何活无记录表示无任何活动！动！21ppt课件课件菌种的使用过程菌种的使用过程 冻干菌种的恢复冻干菌种的恢复冻干菌种的恢复（原始菌种或叫冻干菌种的恢复（原始菌种或叫0 0代菌种）代菌种）冻干菌种处于一种深度休眠状态，生理特性受到抑制，代谢处于较低状态，冻干菌种处于一种深度休眠状态，生理特性受到抑制，代谢处
12、于较低状态，必须经过恢复后才能使用，即将冻干菌种溶解后将其接种于新鲜的营养培必须经过恢复后才能使用，即将冻干菌种溶解后将其接种于新鲜的营养培养基上，在一定的温度下培养一段时间。养基上，在一定的温度下培养一段时间。冻干菌种的恢复一般情况下按照说明书的要求进行，如无说明可以参考以冻干菌种的恢复一般情况下按照说明书的要求进行，如无说明可以参考以下进行：下进行：u细菌类细菌类/ /酵母类：酵母类：菌种管外表面消毒（菌种管外表面消毒（75%酒精）打开，吸取酒精）打开，吸取0.3-0.4m营养肉汤溶解后全部营养肉汤溶解后全部吸出，加入适量营养肉汤培养（细菌吸出，加入适量营养肉汤培养（细菌30-3518-2
13、4h；酵母菌；酵母菌20-2524-48h）u霉菌霉菌: :打开后，加入适量的无菌水溶解后全部吸出，加入适量的无菌水于打开后，加入适量的无菌水溶解后全部吸出，加入适量的无菌水于20-25恢复恢复2-12小时，将菌悬液接种几个改良马丁琼脂斜面上（一般用三角小时，将菌悬液接种几个改良马丁琼脂斜面上（一般用三角瓶，生长的孢子较多），瓶，生长的孢子较多）， 于于20-257-14天，用含有天，用含有0.05吐温吐温80氯化钠氯化钠胨水洗刷到其他无菌试管中。胨水洗刷到其他无菌试管中。 22ppt课件课件菌种的使用过程菌种的使用过程 非冻干菌种的恢复非冻干菌种的恢复申请申请申请申请非冻干菌种的恢复非冻干菌
14、种的恢复u接种斜面接种斜面-适用于短期保藏，一般细菌为适用于短期保藏，一般细菌为3个月；真菌为个月；真菌为4个月。个月。u如果为第一代的菌种，参考冻干菌种进行恢复后制备储备如果为第一代的菌种，参考冻干菌种进行恢复后制备储备管进行冷冻保藏。（或仅接种斜面进行传代）。管进行冷冻保藏。（或仅接种斜面进行传代）。23ppt课件课件菌种恢复 干干菌种(安瓿)的开启：24ppt课件课件菌种的使用过程菌种的使用过程 菌悬液的制备菌悬液的制备申请申请申请申请菌悬液的制备菌悬液的制备u菌液的制备：细菌和酵母菌用氯化钠蛋白胨水进行稀释；霉菌用菌液的制备：细菌和酵母菌用氯化钠蛋白胨水进行稀释；霉菌用0.8生理盐水稀
15、释）生理盐水稀释）u标识（唯一性，可以追溯）标识（唯一性，可以追溯）u效期：按照药典要求，菌悬液在室温下放置应在效期：按照药典要求，菌悬液在室温下放置应在2 小时内使用，若保存小时内使用，若保存在在28可在可在24 小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在小时内使用。黑曲霉孢子悬液可保存在28，在验证，在验证过的贮存期内使用。过的贮存期内使用。各实验室可以根据自身操作习惯总结出一套切实可行、快速稳定的菌液制各实验室可以根据自身操作习惯总结出一套切实可行、快速稳定的菌液制备标准程序。备标准程序。25ppt课件课件菌种的使用菌种的使用申请申请申请申请u 质量控制质量控制 质量控制贯穿于整个传代过程，只要
16、有传代发生，则必须有质量控质量控制贯穿于整个传代过程，只要有传代发生，则必须有质量控 制制过程。过程。 所有的过程均需要有记录。所有的过程均需要有记录。u 菌种编码菌种编码 编码必须具有唯一性，且可以追溯。例如：编码必须具有唯一性，且可以追溯。例如：冻干菌种编码冻干菌种编码ATCC8739/01-ATCC8739表示菌种编码；表示菌种编码；01表示接收表示接收的第一支。的第一支。菌悬液编码菌悬液编码D8739/01/18/1-5-20090501-5代表稀释度；代表稀释度；20090501表示表示2009年年5月月1日制备。日制备。26ppt课件课件文件和记录文件和记录申请申请申请申请u 文件文件需要有详细的贴合实际的需要有详细的贴合实际的SOP，但必须保证符合相应法规，但必须保证符合相应法规要求。要求。u 记录记录 菌种的接收、储存、领用及复苏记录菌种的接收、储存、领用及复苏记录 工作菌悬液的配制、储存、稀释及领用记录工作菌悬液的配制、储存、稀释及领用记录27ppt课件课件
