国家药品标准主要检测方法应用指导原则课件.ppt

1、2022-6-161国家药品标准（化学药品）国家药品标准（化学药品）主要检测方法应用指导原则主要检测方法应用指导原则浙江省食品药品检验研究院一、药品质量标准2022-6-163药品质量标准的定义 国家药品标准是国家为保证药品质量所制定的具有约束力的技术规范。它不仅属于强制性标准，具有重要的法律地位，而且还起到指导药品生产、控制药品质量以保证用药安全有效，以及作为药品监管的技术依据和促进对外贸易的重要手段。 药品质量标准分类 国家药品标准：ChP，局颁标准 临床研究用药质量标准（新药研制单位制定， 临时性的标准，仅供研制单位和临床试验单位用） 暂行或试行药品标准 企业标准（企业内控标准，由药品生

2、产企业自己制定，仅在本厂或本系统的管理上有约束力，属非法定标准） 国外药典（USP,EP,BP,JP等）2022-6-165国家药品标准技术规范 国家药品标准工作手册（2013年7月 第四版） 化学药物质量标准建立的规范化过程技术指导原则 （2005年3月）2022-6-166基本原则 一、坚持以维护人民健康、确保安全有效为最基本原则。 二、坚持科学、实用、规范原则。“科学”系指药品标准的建立应充分考虑药品在来源、生产、流通（包括贮运)及使用等各个环节影响药品质量的因素，进而有针对性地建立检测项目和相应的检测方法。2022-6-167科学 实用 规范 其科学性应体现在所检测的结果与真实值接近的

3、准确性 、最大限度减少各种偏差的精密性以及准确检测被测样品的专属性。 “实用”是指我国作为发展中国家，有些仪器、设备、技术尚不普及，在考虑国情及药品生产、检验队伍的实际情况、确保能准确控制质量的前提下，应倡导简单实用的原则，即无必要制定操作繁琐、费用高昂的监测方法去控制那些用简单方法即可实现的检测项目。 “规范”是药品标准必须坚持的一贯原则。2022-6-168三、坚持质量可控性原则 药品标准所载方法控制的质量，是指满足GMP生产的要求，在正常组织生产的情况下对产品质量所进行的控制。药品标准的制定，应对于在既定工艺下正常生产的药品质量力争实现有效的控制。建立准确、专属的检测方法，以确保公众使用

4、的是优质的药。2022-6-169四、坚持标准先进性原则 药品标准所载检测方法，应充分反映现阶段国内和国际药品质量控制的先进技术和方法，在科学合理的基础上坚持就高不就低的标准先进性原则。2022-6-1610质量标准建立的规范化过程 药品的质量研究与质量标准的制订是药物研发的主要内容之一。在药物的研发过程中需对其质量进行系统、深入的研究，制订出科学、合理、可行的质量标准，并不断地修订和完善，以控制药物的质量，保证其在有效期内安全有效。 制订药品质量标准的基础文献资料的查阅和整理有关研究资料的了解 化学结构、晶型、异构体、杂质情况、 合成工艺、制剂工艺、辅料等药品质量标准制订的要求 1、安全有效

5、性 毒性较大的杂质应严格控制，药物的晶型及异构体应重点研究。2、先进性 赶超世界先进水平，选择“准确、灵敏、简便、快速”的检验方法。经过反复试验,得到与真值相近的结果的方法，定入标准，在准确的前提下，尽可能选择简便易行的方法，尽量避免使用有毒试剂。 2022-6-16133、针对性 加强对药品内在质量的控制，有针对性的规定检测项目，标准中限度的规定要密切结合实际。必须结合实验研究和生产的实际，考虑生产的全过程、稳定性等。4、规范性 必须符合国家药典或其他法定标准的有关规定(国内外标准)。 必须坚持质量第一，充分体现“安全有效、技术先进、经济合理、不断完善”的原则。药品质量标准制订工作的长期性

6、1、质量标准将伴随产品终生 2、不断发展和提高2022-6-1616质量标准主要检测方法应用指导原则 仪器分析方法应用指导原则 容量分析方法在含量测定中的应用指导原则 专项检查法应用指导原则2022-6-1617仪器分析方法应用指导原则薄层色谱法 本法可用于鉴别与杂质检查。 方法的建立应对实验中采用的固定相、展开剂、展开条件、点样量及显色方法等进行研究，并应考察铺板条件、温度、湿度及饱和情况等因素和耐用性试验。必要时予以规定，使检验方法规范化。 固定相首选硅胶G、硅胶GF254、硅胶H或硅胶HF254。必要时可选用硅藻土G、氧化铝或微晶纤维素等。 为确保方法的准确性和重现性，应进行系统适用性试

7、验。2022-6-1618 系统适用性试验系统适用性试验 包括检测灵敏度、比移值(Rf)与分离效能等指标。必要时，在质量标准中规定可行的系统适用性试验要求。鉴别或杂质检查时，按各品种项下要求对检测方法进行系统适用性试验，使斑点的检测灵敏度、比移值(Rf)和分离效能符合规定。 检测灵敏度检测灵敏度 指杂质检查时，供试品溶液中被测物质能被检出的最低量。一般采用对照溶液稀释若干倍的溶液作为灵敏度试验用溶液，与供试品溶液和对照溶液在规定的色谱条件下，在同一块薄层板上点样、展开、检视，前者应显示清晰的斑点。2022-6-1619 比移值比移值(R(Rf f) ) 系指从基线至展开斑点中心的距离与基线至展

8、开剂前沿的距离的比值。用比移值对供试品溶液主斑点与对照品溶液主斑点进行比较；或用比移值来说明主斑点或杂质斑点的位置。 分离效能分离效能 鉴别时，在对照品与结构相似药物的对照品制成混合对照溶液的色谱图中，应显示两个清晰分离的斑点。杂质检查时，在杂质对照品用供试品自身稀释对照溶液或同品种对照品溶液溶解制成混合对照溶液的色谱图中，应显示两个清晰分离的斑点，或待测成分与相邻的杂质斑点应清晰分离。 检视检视 以检测灵敏、显示清晰斑点的方法为宜。2022-6-1620应用 鉴别鉴别 依据是比移值和斑点色调的一致性，也应关注斑点的大小及颜色深浅的可比性。 采用与同浓度的对照品溶液同时展开的方法或采用供试品溶

9、液与对照品溶液等体积混合，应显示单一、紧密的斑点(尤其当制剂中辅料的含量较多时，应采用后者)； 或选用与供试品化学药物相似的药物对照品与供试品溶液的主斑点比较，两者的Rf应不同，或将上述两种溶液等体积混合，应显示两个清晰分离的斑点。2022-6-1621 杂质的限度检查杂质的限度检查 可采用杂质对照品法、供试品溶液的自身稀释对照法或杂质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用。 供试品溶液除主斑点外的其他斑点应与相应的杂质对照品溶液或系列杂质对照品溶液的主斑点比较或与供试品溶液的自身稀释对照溶液或系列自身稀释对照溶液的主斑点比较，不得更深。应注意杂质斑点与自身对照斑点的颜色或荧光有可比性。202

10、2-6-1622 对于杂质斑点数较少的药品，可控制杂质斑点数及杂质限度。对于杂质斑点数较多或确实不易控制杂质斑点数且难以判断的药品，可采用系列对照溶液点样的方法，以控制各主要杂质限度及估计杂质总量。薄层色谱例子 其他氨基酸其他氨基酸 取本品0.10g,0.10g,置10m10ml量瓶中，加浓氨溶液2ml2ml使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液；精密量取lmllml，置200ml200ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液；另取门冬氨酸对照品10mg10mg与谷氨酸对照品10mg10mg，置同一25ml25ml量瓶中，加氨试液2ml2ml使溶解，用水稀释至刻度，摇匀，作为系统适

11、用性试验溶液。照薄层色谱法（附录V B )V B )试验,吸取上述三种溶液各51 51 ，分别点于同一硅胶G G薄层板上，以冰醋酸-水-正丁醇（1:1:3)1:1:3)为展开剂，展开至少15cm15cm，晾干，喷以0.2%0.2%茚三酮的正丁醇- 2mol/L- 2mol/L醋酸溶液（95:5 )95:5 )混合溶液，在105105加热约15 15 分钟至斑点出现，立即检视。对照溶液应显一个清晰的斑点，系统适用性试验溶液应显两个清晰分离的斑点。供试品溶液如显杂质斑点，其颜色与对照溶液的主斑点比较，不得更深（0.50.5%)。2022-6-1624高效液相色谱法 本法可用于鉴别、杂质检查、溶出度

12、、释放度、含量均匀度及含量测定等。 色谱条件色谱条件 根据待测物质的性质、其存在的辅料等，选择不同的色谱条件，实现定性与定量分析的目的。色谱条件主要包括：固定相的种类，流动相的组成，检测器的种类与参数等。2022-6-1625固定相固定相 最常用的固定相为化学键合硅胶。反相色谱系统使用非极性固定相，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛烷基硅烷键合硅胶、氰基硅烷键合硅胶、氨基硅烷键合硅胶或苯基硅烷键合硅胶等也常有使用； 正相色谱系统使用极性固定相，以硅胶最为常用。 离子交换色谱常用离子交换键合硅胶作为固定相； 分子排阻色谱常用凝胶或高分子多孔微球作为固定相； 对映异构体分析常用手性键合硅胶作为固定

13、相。 注意建立色谱条件时，应对不同牌号的同类色谱柱进行考察，以确保系统具有较好的耐用性。2022-6-1626流动相 反相色谱的流动相首选甲醇一水系统(采用紫外末端波长检测时，首选乙腈一水系统)，如经试用不适合时，再选用其他溶剂系统。采用梯度洗脱系统时，应注明洗脱程序，并在“色谱条件与系统适用性试验”项下规定待测物质的保留时间。 2022-6-1627检测器 首选紫外检测器。无紫外吸收的物质可选用示差折光检测器或蒸发光散射检测器。 亦可根据待测物质的性质选用荧光检测器或电化学检测器等其他检测器。2022-6-1628系统适用性试验 为确保建立的高效液相色谱系统具有专属性、准确性与重现性，需进行

14、系统适用性试验，一般通过理论板数(n)、分离度(R)、重复性与拖尾因子(T)等四个指标进行评价。 其中，应特别关注分离度，并在“色谱条件与系统适用性试验”项下对其作出具体规定。2022-6-1629理论板数 用于评价色谱柱的效能。当色谱柱长度一定时，塔板数（n）越大，柱效能越高。由于不同物质在同一色谱柱上的分配系数不同，采用理论板数作为衡量柱效能的指标时，应指明测定物质，一般为待测组分或内标物质的理论板数。2022-6-1630分离度 用于评价待测组分与相邻共存物或难分离物质之间的分离程度，是衡量色谱系统专属性的关键指标。 可以通过测定待测物质与已知杂质的分离度，也可以通过测定待测组分与某一添

15、加的指标性成分(内标物质或其他难分离物质)的分离度，对建立的色谱系统进行评价与控制。 除另有规定外，定量分析时，待测组分与相邻共存物之间的分离度应大于1.5；或经过验证，待测组分与指标性成分之间的分离度应大于某一规定值。2022-6-1631重复性 用于评价连续进样后，色谱系统响应值的重复性能。采用外标法时，通常取对照品溶液，连续进样5次，除另有规定外，其峰面积测量值的相对标准偏差应不大于2.0；采用内标法时，通常配制相当于80、100和120的对照品溶液，加入规定量的内标溶液，配成3种浓度，分别至少进样2次，计算平均校正因子，其相对标准偏差应不大于2.0。2022-6-1632拖尾因子（T）

16、 用于评价色谱峰的对称性。除另有规定外，采用峰高法定量时，T应在0.951.05之间。采用峰面积法定量时，T值偏离过大，也会影响小峰的检测和定量的准确度，必要时，应在正文项下明确规定。2022-6-1633定量方法 如满足定量精密度的要求，可选用外标法；选用内标法时，内标物质应选择易得并对测定方法无干扰的物质。 采用蒸发光散射检测器时，应采用双对数标准曲线法。 用于杂质检查时，可用杂质对照品法，如难以获得杂质对照品时，提倡采用加校正因子的自身对照法，也可采用不加校正因子的自身对照法，避免采用峰面积归一化法。2022-6-1634应用 鉴别鉴别 主要以与对照品的保留时间是否一致作为鉴别依据。 杂

17、质检查杂质检查 主要检查原料药和制剂中可能引入的杂质或降解产物。 溶出度、释放度和含量均匀度的测定溶出度、释放度和含量均匀度的测定 主要用于因杂质或辅料干扰，常规方法难以分离或分离手段繁杂或其他方法的检测灵敏度达不到要求的品种。2022-6-1635应用 原料药的含量测定原料药的含量测定 主要用于以下情况：多组分原料药的含量测定或组分测定；纯度不高且杂质存在干扰，常规方法难以分离或分离手段繁杂的原料药的含量测定。 制剂的含量测定制剂的含量测定 主要用于以下情况：所含杂质或辅料干扰含量测定、须先经繁杂分离后才能测定的制剂；复方制剂。 贮藏期间可能分解的制剂的含量测定贮藏期间可能分解的制剂的含量测

18、定 原料药及制剂的稳定性研究和考察原料药及制剂的稳定性研究和考察有关物质HPLC检查法 有关物质有关物质 取本品，精密称定，用溶剂甲醇- 0.544 % 磷酸二氢钾溶液（1 :1 ) 混合液溶解并定量稀释制成每1ml中约含1mg的溶液作为供试品溶液；另取可可碱对照品、茶碱对照品、咖啡因对照品与己酮可可碱对照品，精密称定，用上述溶剂溶解并定量稀释制成每1 ml中各约含1g 的混合溶液，作为对照品溶液。照高效液相色谱法（附录V D )试验。用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相A为甲醇- 0.544%磷酸二氢钾溶液(3: 7)，流动相B为甲醇- 0.544%磷酸二氢钾溶液(7 : 3 )；检测波长为

19、272nm，按下表进行梯度洗脱。取对照品溶液201 ，注人液相色谱仪，调节检测灵敏度，使己酮可可碱色谱峰的峰高约为满量程的10%; 各组分出峰顺序依次为可可碱、茶碱、咖啡因与己酮可可碱。 己酮可可碱的保留时间约为12分钟，茶碱峰与咖啡因峰的分离度应大于4 ,咖啡因峰与己酮可可碱峰的分离度应大于1 0 ;理论板数按己酮可可碱峰计算不低于5000。再精密量取供试品溶液与对照品溶液各20ml ,注人液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液的色谱图中如有与可可碱、茶碱或咖啡因保留时间一致的色谱峰，按外标法以峰面积计算，均不得过0.1 % ;其他单个杂质峰面积不得大于对照品溶液中己酮可可碱的峰面积(0.1%)

20、 ;杂质总量不得过0.5% 。时间（分钟）时间（分钟） 流动相流动相A(0/0) 流动相流动相B ( % ) 0 86 14 6 86 14 13 10 90 30 10 90 38 86 14 43 86 142022-6-1638气相色谱法 本法可用于鉴别、挥发性有机杂质和残留本法可用于鉴别、挥发性有机杂质和残留溶剂检查及含量测定等。溶剂检查及含量测定等。 色谱条件色谱条件 根据待测物质的沸点与极性等性质，选择不同的色谱条件，实现定性与定量分析的目的。气相色谱通常可分为填充柱色谱与毛细管柱色谱，色谱条件主要包括：填料或固定相的种类、载气、进样方式、温度、检测器的种类与参数等。2022-6-

21、1639填料或固定相的种类 填料填充柱色谱的填料可分为吸附剂类、高分子多孔小球和涂布固定液的硅藻土担体。 吸附剂类主要用于气体分析；二乙烯苯一乙基乙烯苯交联共聚时与不同极性官能团形成不同极性的高分子多孔小球，可用于有机溶剂残留量检查及多元醇、脂肪酸、腈类与胺类等药物的测定； 不同浓度与极性的固定液涂布于经酸洗或硅烷化的白色担体，常用作不同性质药物分析时的填料。（填充柱已将淘汰）2022-6-1640固定相 毛细管柱色谱的固定相按极性分类。 非极性固定相有100二甲基聚硅氧烷，弱极性固定相有5苯基一95二甲基聚硅氧烷等，中等极性固定相有6氰丙基苯基一94二甲基聚硅氧烷等。 极性固定相有聚乙二醇(

22、PEG一20M)。用于药物分析时，通常按照“相似相溶”的原理，根据组分的极性选择适当极性的固定相。2022-6-1641载气 常用的载气有氦气、氮气与氢气，可根据供试品的性质和检测器的种类选择，除另有规定外，常用载气为氮气。 建立系统时，应注意调节载气的流速，使柱效达到最佳。2022-6-1642进样方式 一般可采用溶液直接进样或顶空进样。溶液直接进样，采用微量注射器、微量进样阀或有分流装置的气化室进样，体积一般为数微升，采用毛细管柱时，一般应采用分流进样方式。 顶空进样适用于固体和液体供试品中挥发性组分的分离和测定，尤其适用于残留溶剂测定。2022-6-1643检测器 检测器火焰离子化检测器

23、(FID)最为常用。 测定含有电负性物质的组分时，可采用电子捕获检测器(ECD)。 测定含硫、磷化合物时，火焰光度检测器(FPD)选择性较高。 亦可根据测定需要选择热导检测器(TCD)、氮磷检测器(NPD)、质谱检测器(MSD)等。 2022-6-1644 系统适用性试验系统适用性试验 同“高效液相色谱法”的规定。 定量方法定量方法 一般采用内标法。当采用自动进样器时，在保证进样重复性良好的前提下，可采用外标法。 当采用顶空进样技术时，可采用标准溶液加入法以消除基质效应的影响，当标准溶液加入法与其他定量方法结果不一致时，应以标准加入法结果为准。2022-6-1645温度 温度温度 是气相色谱分

24、析的重要操作参数，它直接影响到色谱柱的选择性、分离效能以及检测器的灵敏度与稳定性。建立色谱系统时，应控制进样口温度、柱温和检测器温度。 a进样口温度进样口温度 设定的温度应能使样品瞬间气化而不分解，一般比柱温高1050即可。 b柱温柱温 设定柱温的原则是在保证组分充分分离的前提下，尽量缩短分析时间。对于沸点范围较宽的混合物，可采用程序升温法，使沸点不同的组分在各自最佳柱温下流出，从而改善分离效果，缩短分析时间。2022-6-1646温度 检测器温度检测器温度 对于恒温操作，一般选择与柱温相同或略高于柱温；对于程序升温操作，一般选择程序设定的最高温度。除火焰离子化检测器外，大多检测器都对温度的变

25、化敏感，因此必须精密控制温度。2022-6-1647应用 鉴别鉴别 主要以与对照品的保留时间是否一致作为鉴别依据。 检查检查 主要检查原料药和制剂中的挥发性杂质、可能残留的有机溶剂及制剂中的甲醇量或乙醇量。 含量测定含量测定 主要用于具有一定挥发性的原料药及其制剂，亦可采用简单易行的柱前衍生化法测定不挥发性药物的含量。残留溶剂残留溶剂 甲醇、丙酮与乙酸乙酯 取本品约0.1g，精密称定，置顶空瓶中，精密加入二甲基甲酰胺5ml使溶解，密封，作为供试品溶液；另分别取甲醇、丙酮与乙酸乙酯适量，精密称定， 用二甲基甲酰胺定量稀释制成每1m l 中各约含5 0 g的溶液，精密量取5ml,置顶空瓶中，密封，

26、作为对照品溶液。照残留溶剂测定法（附录W P第二法）试验。以6 %氰丙基苯基-94% 二甲基聚硅氧烷（或极性相近）为固定液；起始温度为50，维持3分钟，以每分钟40的速率升温至160,维持3分钟；进样口温度为200 ;检测器温度为250 ;顶空瓶平衡温度为80 ，平衡时间为30分钟。取对照品溶液顶空进样，各成分峰之间的分离度均应符合要求。再取供试品溶液与对照品溶液分别顶空进样，记录色谱图。按外标法以峰面积计算，均应符合规定。2022-6-1649分子排阻色谱法 本法可用于分子量测定、生物大分子聚合物分子量本法可用于分子量测定、生物大分子聚合物分子量分布的测定及高分子杂质的测定。分布的测定及高分

27、子杂质的测定。 本法是根据待测组分的分子大小进行分离的一种液相色谱技术。其原理为凝胶色谱柱的分子筛机制。 色谱柱多以亲水硅胶、凝胶或经修饰凝胶如葡聚糖凝胶和聚丙烯酰胺凝胶等为填充剂。2022-6-1650分子排阻色谱法 填充剂表面分布着不同尺寸的孔径，药物分子进入色谱柱后，它们中的不同组分按其分子大小进入相应的孔径内，大于所有孔径的分子不能进入填充剂颗粒内部，在色谱过程中不被保留，最早被流动相洗脱至柱外，表现为保留时间较短；小于所有孔径的分子能自由进入填充剂表面的所有孑L径，在色谱柱中滞留时间较长，表现为保留时间较长；其余分子则按分子大小依次被洗脱。 本法分常压、中压和高压。 本法的系统适用性

28、试验一般情况下同高效液相色谱法。2022-6-1651应用 分子量及分子量分布测定生物大分子聚合物如多糖等，具有分子大小不均一的特点，因此测定生物大分子聚合物的分子量及分子量分布是控制此类原料质量的重要指标。本法主要用于多糖类药物。 应根据供试品分子量大小选用孔径相适应的凝胶作为色谱柱的填充剂。 流动相通常为水溶液或缓冲液，溶液的pH值一般在28的范围。2022-6-1652 流速流速 一般为每分钟0.51.0ml。 测定多糖的重均分子量时，可用示差折光检测器，柱温保持恒定。 本方法系统适用性试验用葡萄糖和蓝色葡聚糖2000的溶液分别测得保留时间tT和t0 ，要求供试品和对照品溶液峰的保留时间

29、tR均应在 tT和t0 之间。同时应规定按葡萄糖色谱峰计算的理论板数。2022-6-1653 测定时可根据供试品的重均分子量，选择45个已知分子量并与供试品同质的对照品。以对照品重均分子量的对数值与相应的保留时间，用GPC软件计算回归方程，并计算出供试品的重均分子量及分子量分布。2022-6-1654高分子量蛋白质限度检查 指多肽或蛋白质类在生产和贮存过程中生成的高分子聚合物或在生产过程中未能除尽的高分子物质。此类物质可能在临床导致过敏性反应。因此供注射用的多肽、蛋白质类供试品均需检查高分子物质。 最常用的柱填充剂为亲水性硅胶。应根据供试品分子量大小选用孔径相适应的硅胶作为色谱柱的填充剂。除应

30、注明粒径外，必要时应注明色谱柱的柱长、内径、分离分子量的范围或色谱柱型号。2022-6-1655 根据供试品疏水性的不同，调节流动相中水相的比例，有机溶剂加入量一般不超过30。 流速一般为每分钟0.50.8ml。 检测器选用UV检测器，波长一般为276nm或214nm。2022-6-1656计算百分含量 a供试品为单一组分时，供试品色谱图中保留时间小于主成分峰的其他峰均视为高分子蛋白，用归一法计算出百分含量。 b供试品为多组分时，可选用一已知分子量多肽(或蛋白)作为“标记物”，亦可选用已知分子量的系列标准蛋白，作标准曲线，由标准曲线得到截留分子量的保留时间。供试品色谱图中凡保留时间小于“标记物

31、”或小于截留分子量的色谱峰均视为高分子蛋白，用归一法计算出百分含量。2022-6-1657内酰胺类抗生素高分子聚合物测定法 本法用于内酰胺类抗生素原料药及其制剂在生产或贮存过程中产生的高分子聚合物及在生产过程中未除尽的可能引起过敏反应的高分子物质的检查。 抗生素药物高分子聚合物系对药品中分子量大于药物本身的杂质的总称。B一内酰胺类抗生素药高分子聚合物的分子量一般在10005000，个别可达10000。2022-6-1658 本方法系统适用性试验应注重高分子杂质峰与单体峰的分离度，并应考察对照测定系统与供试品测定系统中蓝色葡聚糖2000溶液峰的保留时间(Kav=0)比值、理论板数与拖尾因子。 根

32、据内酰胺类抗生素高分子杂质的分子量特点，采用凝胶色谱分离。凝胶色谱填料首选为葡聚糖凝胶G一10(sephadex G 10)，也可用葡聚糖交联糖琼脂凝胶(superdex peptide)等。2022-6-1659 aSephadex G10其排阻分子量为700，因此除部分低聚物外，-内酰胺类抗生素高分子杂质在色谱过程中均不保留，即所有高分子杂质表现为单一色谱峰，其Kav=0。 b蓝色葡聚糖2000在色谱过程中不保留，所以可用蓝色葡聚糖2000的保留时间来表示高分子杂质的保留特性。2022-6-1660流动相选择及对色谱行为的影响 a高分子杂质测定用流动相一般选用磷酸盐缓冲液，也可根据药品性质

33、选择不同盐的缓冲液。 b缓冲液的离子强度对溶质的保留行为与响应值有影响。 c缓冲液的种类、pH以及洗脱速度对溶质的色谱行为均有影响。2022-6-1661 检测器检测器 选用UV检测器，波长一般为254nm或280nm。系统适用性试验中应进行以下试验系统适用性试验中应进行以下试验。 a a分离度分离度 照分子排阻色谱法项下规定分离度计算公式为： 分离度（R）高聚物的峰高/单体与高聚物峰间的谷高 （2.0） 分离度试验用溶液配制时，可加入一定量的蓝色葡聚糖2000，使聚合物的峰面积达到该品种限度规定的12倍。 b b以蓝色葡聚糖2000的保留时间表示高分子杂质的保留特征，并规定对照溶液色谱峰及高

34、分子杂质色谱峰与蓝色葡聚糖2000色谱峰的保留时间的比值，一般为0.931.07。 C.C.对照溶液进样的重复性，连续进样5针，峰面积相对标准偏差(RSD)应不大于5.0。2022-6-1662用自身对照外标法计算高分子杂质限度。 a-内酰胺类抗生素高分子杂质具有高度不均一性和不确定性，高分子杂质本身不稳定，对照品不易制得，经试验表明，在特定条件下(一般在以流动相为水的条件下)，B一内酰胺抗生素由于分子间的氢键、静电、疏水相互作用等可形成表观分子量较大的缔合物，在Sephadex G 10凝胶色谱系统中的色谱行为与高分子杂质相同，都在Kav=0处表现为单一色谱峰，利用该特点，制定自身对照外标法

35、。2022-6-1663b个别品种由于本身结构的影响在特定的条件下仅有少部分分子间发生缔合或缔合物本身又不稳定时，应根据药物本身分子结构特征改用其他可形成缔合物结构类似品种替代，并用校正因子计算结果。c规定供试品溶液进样量与高分子杂质峰面积间的相关性要求，相关系数(r)应不小于0.99。2022-6-1664紫外一可见分光光度法 本法主要用于制剂的含量测定、含量均匀度和溶本法主要用于制剂的含量测定、含量均匀度和溶出度检查，也可用于鉴别或部分药品杂质检查。出度检查，也可用于鉴别或部分药品杂质检查。 用于制剂的含量测定、含量均匀度或溶出度检查时，可采用对照品法或吸收系数法，但新建立的对照品或吸收系

36、数必须经过充分验证。 吸收系数若已为药典(包括中国药典、美国药典、欧洲药典、英国药典、日本药局方、国际药典)收载，则可直接引用。2022-6-1665紫外一可见分光光度法 计算分光光度法应慎用，作为法定方法原则上不宜采用。含量测定不得采用此法。 用于鉴别时，可规定除末端吸收以外的最大吸收波长，也可规定最小吸收波长或肩峰、不同波长处的吸光度比值。吸光度比值或杂质最大吸收波长处的吸光度限值也可用于药品的纯度检查。 采用本法应尽可能少使用有机溶剂，尤其应避免使用有毒溶剂；本法用于同一个品种不同项目测定时，应尽可能采用相同的溶剂。2022-6-1666 为提高本法的准确度，应避免溶剂、辅料或杂质的干扰

37、。溶剂的选用应注意其纯度和使用的截止波长。 仪器的狭缝宽度，如另有规定外系指2nm，但若所测吸收谱带的半高宽小于20nm，则应适当减小狭缝宽度。 当溶液的pH值对吸光度有影响(当制剂的辅料对pH值有影响)时，应将供试品溶液和对照品溶液的pH值调成一致。 用于测定的吸收谱带的吸收强度应足够大，其吸收系数E11cm，通常应大于100，吸光度数值以在0.30.7为宜。2022-6-1667紫外一可见分光光度法 采用比色法测定时，应注意影响显色条件的各种因素，并注意操作过程的一致性，当吸光度与浓度的关系偏离线性时应采用标准曲线法。2022-6-1668红外分光光度法 本法主要用于原料药鉴别，也可用于异

38、构本法主要用于原料药鉴别，也可用于异构体或不同晶型的限度检查和制剂鉴别。体或不同晶型的限度检查和制剂鉴别。 除特殊品种外，凡组分单一、化学结构式明确的有机原料药，原则上均应采用本法作鉴别。2022-6-1669红外分光光度法 对于具有同质多晶现象的原料，应选用稳定晶型或市场主流晶型的图谱，如已规定药用晶型，则应选用有效晶型的图谱。如未规定药用晶型，而市场上又有几种晶型同时在使用，则应规定转晶条件和重结晶溶剂，使转变成稳定晶型或主流晶型后，再依法测定。红外分光光度法 可用于药品混晶中不同晶型的限度检查，有时也可用于异构体限度的检查和控制。 用于制剂鉴别时，必须规定供试品的预处理方法，以避免或减少

39、辅料的干扰。如不能完全消除辅料的干扰，可在指纹区适当选择待测成分的35个不受辅料干扰的特征谱带，规定其波数作为鉴别的依据。2022-6-1670红外分光光度法 除另有规定外，通常采用溴化钾压片法，如供试品为盐酸盐且制样时又易发生离子交换现象，则应采用氯化钾压片法。如制样(研磨和压片)时易发生晶型变化，则应采用石蜡糊法或其他适宜制样法。 药品存在多晶现象，而转晶结果又不易重现的品种，可采用对照品平行转晶比对法，或溶液光谱对比法。2022-6-1671红外分光光度法 阴离子具有强吸收的盐类药品(例如磷酸盐)，可采用其游离碱作红外鉴别，但应明确规定供试品的预处理方法。 多组分药品，当各组分的相对含量

40、不固定时，不宜采用标准光谱比对法。必要时经考核，也可采用特征谱带比较法，即选择有效成分的若干个特征谱带，规定其波数作为鉴别的依据。2022-6-1672原子吸收分光光度法 本法用于样品中所含的金属元素或某些非金属元素的含量测定和限度检查。测定前必须采用适当方法将供试品破坏，并在原子化器中将待测元素转化为基态原子。 根据待测元素原子化的难易程度，可选择适当的原子化器及相应的原子化条件。2022-6-1673原子吸收分光光度法 通常采用火焰型原子化器；但若待测元素所需的原子化温度较高或在火焰中易形成难离解的氧化物，则宜采用石墨炉法；易于生成挥发性氢化物的元素As、Pb、Cd、Ge、Sn、Sb、Bi

41、、Se、Te、Zn等宜采用氢化物原子化器，对易挥发性的Hg可采用冷蒸气法。2022-6-1674 参照仪器推荐的工作条件和待测元素的性质，正确设置仪器的工作参数和检测条件，例如空心阴极灯的工作电流、光谱带宽、火焰原子化器的火焰类型、燃气和助燃气的比例，石墨炉的升温程序等，为减少干扰，有时还需添加机体改进剂，所用各试验条件均应根据实际情况正确选定。2022-6-1675 根据仪器灵敏度和待测元素的性质，适当选择供试品溶液的浓度，以保证良好的线性关系。 含量测定通常采用标准曲线法，当标准曲线线性良好并通过原点时，也可采用标准加入法。 用于杂质检查时，应注意供试品溶液和对照品溶液的读数是否均在线性范

42、围内。2022-6-1676荧光分析法 荧光分析法具有灵敏度高、选择性强、试样量少等优点，因此本法适用于低浓度的具荧光性药物及经处理后产生荧光的药物的定性定量。2022-6-1677荧光分析法 根据待测成分的荧光激发光谱和荧光发射光谱，正确选择激发波长和发射波长，两者的波长差以大于30nm为宜。如荧光发射光谱显示有几个强度适宜的谱带可供选择时，为减少光分解和背景干扰，以选择波长较长的谱带为好。2022-6-1678荧光分析法 易发生光分解的荧光物质，在可能情况下应尽量采用较小的入射狭缝，并适当缩短激发光照射溶液的时间，必要时可选择一种与待测成分具有类似荧光特性且对光稳定的化合物配制对照溶液，用

43、以校正仪器的灵敏度。2022-6-1679荧光分析法 适当选择溶液的浓度，以保证荧光强度对浓度呈线性关系，此时可用单点比较法计算含量。但若明显偏离线性时，应采用标准曲线法。2022-6-1680火焰光度法 仅适用于某些碱金属或碱土金属元素(如Na、K、ca等)的含量测定。 通常采用煤气或液化石油气作燃气，空气作助燃气。 根据所用仪器的灵敏度及其线性范围，适当调整溶液的浓度，以确保信号强度与被测元素的浓度呈线性关系。2022-6-1681容量分析方法在含量测定中的应用指导原则 容量分析方法具有准确、精密等优点，因此在原料药的含量测定中仍广泛采用。 所选用的容量分析方法一般应测定药物中对生理作用有

44、效的部分。 对于纯度较高且稳定的原料药，其含量测定首选容量分析方法。为弥补容量分析方法专属性的不足，应增加有关的检查项目。2022-6-1682容量分析方法在含量测定中的应用指导原则 供试品的取用量应满足滴定精度的要求，一般消耗滴定液约20ml，非水滴定法约8ml。 滴定终点的判断要明确，如选用指示剂法，终点的颜色应按电位滴定曲线确定。 为了排除因加入其他试剂而混入杂质对测定结果的影响，可采用空白试验校正。2022-6-1683容量分析方法在含量测定中的应用指导原则 用高氯酸滴定法测定有机碱的氢卤酸盐的含量，避免使用醋酸汞。 每1ml滴定液相当于待测物质的换算因子，采用四位有效数字。2022-

45、6-1684专项检查法应用指导原则 残留溶剂测定法 药品中的残留溶剂系指在原料药、辅料以及制剂生产中使用的，但在工艺过程中未能完全去除的有机挥发性化合物。当药品中所含的残留溶剂水平高于安全值时，会对人体或环境产生危害，因此在药品质量标准中应予以控制。2022-6-1685残留溶剂测定法 ICH(人用药品注册技术要求国际协调会)将药品生产和纯化过程中常用的69种有机溶剂按照其对人体和环境的危害程度分成4类，并分别推荐了相应的限度值。 通常药品有机溶剂的残留量应符合ICH的规定。2022-6-1686残留溶剂测定法 对药品生产中使用的其他溶剂，应根据其毒性大小及其残留量和生产工艺等特点，结合临床用

46、药剂量，确定是否需要控制及设定相应的限度。2022-6-1687残留溶剂测定法 目前常用的残留溶剂检测方法是顶空毛细管气相色谱法。对沸点较高不易采用顶空法进样的有机溶剂如DMF(二甲基甲酰胺)等的测定，也可使用普通的填充柱，采用溶液直接进样法测定。对不宜采用气相色谱法测定的某些含氮碱性化合物，如N-甲基吡咯烷酮等，可采用其他方法如高效毛细管电泳法或离子色谱法等进行测定。2022-6-1688残留溶剂测定法 毛细管气相色谱柱的固定相通常有：100二甲基聚硅氧烷(如SPB-1)、5二苯基一95二甲基聚硅氧烷(如HP-5)、35二苯基-65二甲基聚硅氧烷(如HP-35)、6氰基丙基苯基-94二甲基聚

47、硅氧烷(如DB-624)、50氰基丙基苯基-50二甲基聚硅氧烷(如HP-50)和100聚乙二醇(如DB-WAX、FFAP)等，其极性依次增加。 应根据检测对象的特性选择适宜的色谱柱。2022-6-1689残留溶剂测定法 选择配制供试品溶液和对照品溶液所用的溶剂时，应考虑供试品在所选溶剂中的溶解性能。一般应将供试品完全溶解。采用顶空进样时，常用的溶剂有水(为增加溶解度，必要时也可采用无挥发性的酸、碱溶液作溶剂，但应证明其不干扰测定)、N,N-二甲基甲酰胺、二甲亚砜等；2022-6-1690残留溶剂测定法 采用直接进样时，还可采用其他适宜的有机溶剂(非控制对象)为溶剂，但为防止待测溶剂可能因成盐、

48、水解而降低挥发性或腐蚀仪器，应避免使用酸、碱溶液作溶剂。2022-6-1691残留溶剂测定法 对照品溶液的配制必须采用称重一稀释法，而不能用微量注射器吸取若干微升溶剂后直接配制对照品溶液。 采用顶空进样法测定时，应根据供试品中残留溶剂的沸点选择顶空温度。2022-6-1692残留溶剂测定法 对沸点较高的残留溶剂，通常选择较高的顶空温度；但此时应兼顾供试品的热稳定性，力求避免供试品在顶空气一液平衡过程中产生挥发性热分解产物干扰测定。 对以水为溶剂的供试品，顶空温度一般应小于90。顶空平衡时间一般不少于30分钟，以保证供试品溶液的气-液两相有足够的时间达到平衡。对照品溶液与供试品溶液必须使用相同的

49、顶空条件。2022-6-1693残留溶剂测定法 气相色谱的普通不锈钢管路、进样器的衬管等对有机胺等含氮碱性化合物具有较强的吸附作用，致使其检出灵敏度降低。 当采用气相色谱法测定此类化合物时，应采用惰性的硅钢材料或镍钢材料管路，同时采用脱活处理过的衬管。2022-6-1694残留溶剂测定法 残留溶剂测定通常采用火焰离子化检测器(FID)，对含卤素等强电负性元素的有机溶剂如三氯甲烷等，采用电子捕获检测器(ECD)易得到高的灵敏度。2022-6-1695残留溶剂测定法 残留溶剂测定通常属于微量或痕量分析，在质量标准中残留溶剂测定一般为限度试验。方法确定后应按中国药典的相关规定进行方法学验证，以排除残

50、留溶剂测定中常见的共出峰干扰(未知有机挥发性化合物与待测物的色谱峰重叠)、热降解干扰(供试品热裂解产生待测物。2022-6-1696残留溶剂测定法 如含甲氧基的化合物热裂解可产生甲醇)、基质效应(供试品溶液与对照品溶液组成差异对顶空气-液平衡的影响)等对测定的影响，并确定方法的线性范围、检测限、重现性等特性。2022-6-1697残留溶剂测定法 气相色谱法对残留溶剂有三种定量方法：内标法、外标法、标准加入法。通常采用内标法进行定量，当存在基质效应时，以采用标准加入法为宜。2022-6-1698溶液颜色检查法 因纯度或稳定性变化而导致其溶液颜色变化的原料药和非口服制剂，均应设置溶液颜色检查项。