1、2012年11月-吴启恩提纲 微生物基础知识微生物基础知识一、微生物概述 二、微生物特点微生物特点 三三、微生物的类群和形态结构、微生物的类群和形态结构 四、微生物的营养四、微生物的营养 五、消毒与灭菌五、消毒与灭菌 无菌操作知识无菌操作知识 六、无菌药品概述六、无菌药品概述 七、无菌药品生产过程的质量风险管理七、无菌药品生产过程的质量风险管理一、微生物概述 什么是微生物什么是微生物 微生物（微生物（microorganism, microbemicroorganism, microbe）是）是一些肉眼看不见的微小生物的总称。一些肉眼看不见的微小生物的总称。包括属于原核类的细菌、放线菌、支原体
2、、立克次氏体、衣原体和蓝细菌（过去称蓝藻或蓝绿藻），属于真核类的真菌（酵母菌和霉菌）、原生动物和显微藻类，以及属于非细胞类的病毒、类病毒等。微生物的作用和危害微生物的作用和危害1. 微生物的作用微生物的作用 绝大多数微生物对人和动物是有益的，已广泛应用于农业绝大多数微生物对人和动物是有益的，已广泛应用于农业、食品、医药、酿造、化工、制革、石油等行业，发挥了越、食品、医药、酿造、化工、制革、石油等行业，发挥了越来越重要的作用。例如与我们日常生活密切相关的如酸奶、来越重要的作用。例如与我们日常生活密切相关的如酸奶、酒类、抗生素、疫苗等。酒类、抗生素、疫苗等。2. 微生物的危害微生物的危害 微生物中
3、也有一部分能引起人及动、植物发生病害，这些微生物中也有一部分能引起人及动、植物发生病害，这些具有致病性的微生物，称为病原微生物。如人类的许多传染具有致病性的微生物，称为病原微生物。如人类的许多传染病（感冒、伤寒、痢疾、结核、脊髄灰质炎、病毒性肝炎等病（感冒、伤寒、痢疾、结核、脊髄灰质炎、病毒性肝炎等），均是由病原微生物引起的。），均是由病原微生物引起的。 从药品生产的卫生学而言，微生物对药品的原料、生产环从药品生产的卫生学而言，微生物对药品的原料、生产环境和成品的污染是造成生产失败、成品不合格的重要因素境和成品的污染是造成生产失败、成品不合格的重要因素。二、微生物特点二、微生物特点 种类多、分
4、布广种类多、分布广 微生物在地球上几乎无处不有，无孔不入，人的皮肤上，口腔，肠道里都有许多微生物。微生物聚集最多的地方是土壤，土壤是各种微生物生长繁殖的大本营，约占微生物总量的70-90%，任意取一把土或一粒土，就是一个微生物世界，不论数量或种类均最多。 迄今为止，我们知道的微生物约有10万种，目前已知的种类只占地球上实际存在的微生物总数的20%，人类生产和生活中仅开发利用了已发现微生物种数的1%。 个体小、面积大个体小、面积大 生物的个体极其微小，必须借助显微镜放大几倍、几百倍、上千倍，乃至数万倍才能看清。杆菌的宽度是0.5微米，因此80个杆菌“肩并肩”地排列成横队，也只有一根头发丝的宽度。
5、杆菌的长度约2微米，故1500个杆菌头尾衔接起来仅有一颗芝麻长。 物体的表面积和体积之比称为比表面积。大肠杆菌的比表面积是人的30万倍。 吸收多、转化快吸收多、转化快 微生物有惊人的繁殖速度，大多数微生物几十分钟内就可以繁殖一代，如细菌一般每2030分钟既可分裂一次； 微生物的食谱非常广泛，凡是动植物能利用的营养，微生物都能利用，大量的动植物不能利用的物质，甚至剧毒的物质，微生物照样可以视为美味佳肴。如大肠杆菌在合适条件下，每小时可以消耗相当于自身重量2000倍的糖，而人体则需要40年之久。 适应强、异变适应强、异变 多数细菌能耐0196的低温；在海洋深处的某些硫细菌可在250300的高温条件
6、下正常生长；一些嗜盐细菌甚至能在饱和盐水中正常生活；产芽孢细菌和真菌孢子在干燥条件下能保藏几十年、几百年。由于微生物繁殖快，也可在短时间内产生大量变异的后代。正是由于这个特性，人们才能够按照自己的要求不断改良在生产上应用的微生物，如青霉素生产菌的发酵水平由每毫升20单位上升到近10万单位，利用变异和育种得到如此大幅度的产量提高。 三、微生物的类群和形态结构三、微生物的类群和形态结构 微生物按其结构、化学组成及生活习性微生物按其结构、化学组成及生活习性等分为三大类：等分为三大类： 原核细胞型原核细胞型：细菌、放线菌、支原体、衣原体、立克次氏体、螺旋体等 真核细胞型真核细胞型：真菌 非细胞型非细胞
7、型：病毒 噬菌体 芽孢杆菌 （细菌） 淡水中的螺旋菌 spirochetes . 蜡样芽孢杆菌（细菌） 支原体扫描电镜图片支原体支原体（mycoplasma）以前被认为是最小的能独立存活的原核生物，以前也被认为是地球上迄今为止被发现的最小的细胞生物。全世界90%的猪体内寄生着支原体。立克次氏体（rickettsiae），一种微小的寄生的细菌。上图是动物的淋巴细胞，红色的是寄生的立克次氏体。 青霉是种真菌，属于子囊菌。 有的能产生青霉素，救了无数人的命。 产生无性孢子。根霉（Rhizopus)是种真菌，属于接合菌。能产生无性孢子菌丝体的直径约12 um黑的是孢子囊 噬菌体SARS病毒是一类新发现
8、的冠状病毒 禽流感病毒爱滋病毒1 1、细菌、细菌 细菌是一类细胞细而短、结构简单、细胞壁坚韧，以二分裂法进行无性繁殖的原核微生物，分布广泛。细菌的繁殖细菌的繁殖 二分裂法繁殖是细菌最普遍、最主二分裂法繁殖是细菌最普遍、最主要的繁殖方式。要的繁殖方式。当细菌生长到一定时期，在细胞中间形成横隔，由一个母细胞分裂成两个相等的子细胞。 在适应的条件下，细菌的繁殖速度在适应的条件下，细菌的繁殖速度很快，一般很快，一般2030min就分裂一次，即为就分裂一次，即为一代。一代。=细菌细胞分裂的电镜超薄切片图 杆菌二分裂过程模式图细菌的菌落细菌的菌落 单个或少数细菌细胞生长繁殖后，会单个或少数细菌细胞生长繁殖
9、后，会 形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见、形成以母细胞为中心的一堆肉眼可见、有一定形态构造的子细胞集团，这就是有一定形态构造的子细胞集团，这就是菌落。菌落。 粘质沙雷氏菌的菌落特征 沙门氏菌的菌落特征 铜绿假单孢菌的菌落特征 弗氏志贺氏菌的菌落特征 粘质沙雷氏菌的菌落特征 2 2、放线菌、放线菌放线菌的形态、大小和结构放线菌的形态、大小和结构 放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞。在显微镜下，放线菌呈分枝丝状，我们把这些细丝一样的结构叫做菌丝，菌丝直径与细菌相似，小于1微米。菌丝细胞的结构与细菌基本相同。 根据菌丝形态和功能的不同，放线菌菌丝可分为基内菌丝、气生菌丝和孢子丝三种。链霉菌属是
10、放线菌中种类最多、分布最广、形态特征最典型的类群，其形态如下图所示。链霉菌的一般形态和构造 （模式图） 放线菌的繁殖放线菌的繁殖 放线菌主要通过形成无性孢子方式放线菌主要通过形成无性孢子方式进行无性繁殖。进行无性繁殖。放线菌的菌落特征 A：诺尔斯氏链霉菌； B：皮疽诺卡氏菌； C：酒红指孢囊菌； D：游动放线菌； E：小单胞菌； F：皱双孢马杜拉放线菌产抗菌素的放线菌的菌落特征A：卡特利链霉菌； B：弗氏链霉菌；C：吸水链霉菌金泪亚种；D：卡那霉素链霉菌；E：除虫链霉菌； F：生磺酸链霉菌3 3、霉菌、霉菌 霉菌是丝状真菌的俗称，意即霉菌是丝状真菌的俗称，意即 发霉的真发霉的真菌菌 ，霉菌的菌
11、体由许多分支或不分支的，霉菌的菌体由许多分支或不分支的菌丝构成。菌丝构成。在潮湿温暖的地方，很多物品上长出一些肉眼可见的绒毛状、絮状或蛛网状的菌落，那就是霉菌。霉菌的形态、大小和结构霉菌的形态、大小和结构 霉菌的菌丝是构成霉菌营养体的基本单位。 菌丝是一种管状的细丝，把它放在显微镜下观察，很像一根透明胶管，它的直径一般为3-10微米，比细菌和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍。菌丝可伸长并产生分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。霉菌的繁殖霉菌的繁殖 有性繁殖和无性繁殖两种有性繁殖和无性繁殖两种 以无性繁殖为主以无性繁殖为主 主要靠孢子繁殖后代主要靠孢子繁殖后代霉菌的菌落霉菌的菌落 霉菌菌
12、落由菌丝体和孢子组成；由于菌丝较粗而长，因而菌落较大，有的霉菌菌丝蔓延，没有局限性，其菌落可扩展到整个培养皿，有的种类则有一定的局限性，直径1-2厘米或更小。菌落质地一般比放线菌疏松，外观干燥，不透明，呈现或紧或松的蛛网状、绒毛状或棉絮状；菌落与培养基的连接紧密，不易挑取；菌落正反面的颜色和边缘与中心的颜色常不一致。 各种曲霉的菌落 各种病原真菌的菌落 青霉的菌落 青霉的菌落 4 4、酵母菌、酵母菌 提起酵母菌这个名称，也许有人不太熟悉，但实际上人们几乎天天都在享受着酵母菌的好处。因为我们每天吃的面包和馒头就是有酵母菌的参与制成的；我们喝的啤酒，也离不开酵母菌的贡献，酵母菌是人类实践中应用比较
13、早的一类微生物，我国古代劳动人民就利用酵母菌酿酒；酵母菌的细胞里含有丰富的蛋白质和维生素，所以也可以做成高级营养品添加到食品中，或用作饲养动物的高级饲料。 酵母菌在自然界中分布很广，尤其喜欢在偏酸性且含糖较多的环境中生长，例如，在水果、蔬菜、花蜜的表面和在果园土壤中最为常见。 酵母菌的形态、大小和结构酵母菌的形态、大小和结构 酵母菌是单细胞真核微生物。酵母菌细胞的形态通常有球形、卵圆形、腊肠形、椭圆形、柠檬形或藕节形等。比细菌的单细胞个体要大得多，一般为1-5微米5-30微米。酵母菌无鞭毛，不能游动。 酵母菌具有典型的真核细胞结构,有细胞壁、细胞膜、细胞核、细胞质、液泡、线粒体等，有的还具有微
14、体。 酵母菌的繁殖酵母菌的繁殖1 1、芽殖、芽殖 2 2、裂殖、裂殖 3 3、孢子生殖、孢子生殖 酵母菌的无性繁殖芽殖：酵母菌最常见的无性繁殖方式是芽殖。芽殖发生在细胞壁的预定点上，此点被称为芽痕，每个酵母细胞有一至多个芽痕。成熟的酵母细胞长出芽体，母细胞的细胞核分裂成两个子核，一个随母细胞的细胞质进入芽体内，当芽体接近母细胞大小时，自母细胞脱落成为新个体，如此继续出芽。如果酵母菌生长旺盛，在芽体尚未自母细胞脱落前，即可在芽体上又长出新的芽体，最后形成假菌丝状。 酵母菌的芽殖过程 1泡；2小管；3核；4液泡 酵母菌假菌丝的形成 图中1、2、3、 4 是出芽的顺序 酵母菌的有性繁殖 酵母菌是以形
15、成子囊和子囊孢子的方式进行无性繁殖的。两个临近的酵母细胞各自伸出一根管状的原生质突起，随即相互接触、融合，并形成一个通道，两个细胞核在此通道内结合，形成双倍体细胞核，然后进行减数分裂，形成4个或8个细胞核。每一子核与其周围的原生质形成孢子，即为子囊孢子，形成子囊孢子的细胞称为子囊。 酵母菌子囊孢子的形成过程 1、2、3、4：两个细胞结合；5：接合子；6、7、8、9：核分裂；10、11：核形成孢子 裂殖裂殖：是少数酵母菌进行的无性繁殖方式，类似于细菌的裂殖。其过程是细胞延长，核分裂为二，细胞中央出现隔膜，将细胞横分为两个具有单核的子细胞。 酵母菌的菌落酵母菌的菌落 大多数酵母菌的菌落特征与细菌相
16、似，但比细菌菌落大而厚，菌落表面光滑、湿润、粘稠，容易挑起，菌落质地均匀，正反面和边缘、中央部位的颜色都很均一，菌落多为乳白色，少数为红色，个别为黑色。 各种酵母菌的菌落 啤酒酵母的菌落 红酵母的菌落 5 5、病毒、病毒形态结构形态结构 病毒的形态基本可归纳为三种：杆状、球状和病毒的形态基本可归纳为三种：杆状、球状和这两种形态结合的复合型。这两种形态结合的复合型。没有细胞构造，病毒粒子的主要成分是核酸和蛋白质，在宿主细胞协助下，通过核酸的复制和核酸蛋白装配的形式进行增殖。病毒粒子通常形成螺旋对称、二十面体对称和复合对称。 病毒粒子是无法用光学显微镜观察的亚显微颗粒，但当他们大量聚集在一起并使宿
17、主细胞发生病变时，就可以用光学显微镜加以观察。例如动、植物细胞中的病毒包涵体；有的还可用肉眼看到，如噬菌体的噬菌斑等。繁殖方式繁殖方式 病毒只有在宿主细胞里才能进行繁殖，而病毒只有在宿主细胞里才能进行繁殖，而且是通过复制的方式进行的。概括起来可且是通过复制的方式进行的。概括起来可分为吸附、侵入、脱壳生物合成、装配与分为吸附、侵入、脱壳生物合成、装配与释放五个步骤。释放五个步骤。6、热原与内毒素、热原与内毒素许多细菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能产生热许多细菌、病毒和真菌（如酵母菌）都能产生热原。原。热原是微量即可引起恒温动物体温异常升高热原是微量即可引起恒温动物体温异常升高的物质的总称。的物质的
18、总称。主要物质为细菌内毒素、胞壁酰主要物质为细菌内毒素、胞壁酰二肽及其他抗原抗体复合物、半抗体原物质和某二肽及其他抗原抗体复合物、半抗体原物质和某些药物（类固醇）等。些药物（类固醇）等。1、细菌内毒素一般指革兰阴性细菌细胞壁的结构成分，主、细菌内毒素一般指革兰阴性细菌细胞壁的结构成分，主要是脂多糖。要是脂多糖。 2、细菌内毒素生物学活性可分为两类：一是致病作用，一、细菌内毒素生物学活性可分为两类：一是致病作用，一是保护性反应。是保护性反应。3、其他理化特性、其他理化特性耐热性：耐热性：120加热加热4h，可破坏，可破坏98%。180加热加热2h或或250加热加热30min，才可彻底破坏。，才可
19、彻底破坏。滤滤过性：其体积小，约在过性：其体积小，约在15nm之间，故能通过滤器进入之间，故能通过滤器进入滤液中。滤液中。具有水溶性及不挥发性。具有水溶性及不挥发性。能被强酸、强碱和能被强酸、强碱和氧化剂破坏氧化剂破坏热原与内毒素热原与内毒素4、热源引入的途径、热源引入的途径 从溶剂中带进从溶剂中带进 从原料中带进从原料中带进 从容器、用具、管道和装置等带进从容器、用具、管道和装置等带进 制备过程中的污染制备过程中的污染 从输液器带入从输液器带入热原与内毒素热原与内毒素5、消除细菌内毒素的方法、消除细菌内毒素的方法 高温破坏法：可用高温破坏法：可用180干烤干烤34h或或250干烤干烤30mi
20、n。 吸附法：一般选用活性炭。吸附法：一般选用活性炭。 蒸馏法：此法仅限于制备蒸馏水。蒸馏法：此法仅限于制备蒸馏水。 化学酸碱和氧化法。化学酸碱和氧化法。 离子交换法。离子交换法。 反渗透法。反渗透法。 凝胶过滤法。凝胶过滤法。 超滤法超滤法 7、药品的微生物污染、药品的微生物污染药品微生物污染：微生物的产生、附着而药品微生物污染：微生物的产生、附着而给药品及生产环境带来不良影响。给药品及生产环境带来不良影响。药品的药品的微生物污染也称染菌。微生物污染也称染菌。污染药品的细菌：常见污染药物制剂的细污染药品的细菌：常见污染药物制剂的细菌是一些生命力较强的细菌，如：葡萄球菌是一些生命力较强的细菌，
21、如：葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草杆菌及一菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、枯草杆菌及一些霉菌，抵抗力弱的细菌一般不易造成污些霉菌，抵抗力弱的细菌一般不易造成污染。染。药品的微生物污染源：空气、水、厂房与药品的微生物污染源：空气、水、厂房与设备、药品生产用原辅料、包装材料、昆设备、药品生产用原辅料、包装材料、昆虫和其它啮齿动物、生产操作人员虫和其它啮齿动物、生产操作人员四、微生物的营养四、微生物的营养 水分水分：水占细胞浆的70%90%，是细胞的重要组成成分。较普遍的观点认为，只有在含水的环境中微生物才能存活。但也有人发现在无水碳氢化合物中微生物可长期存活。 碳源碳源：碳源是构成细胞的重要物质。有些
22、微生物的碳源必须来自有机碳化合物如糖、蛋白质、脂肪、有机酸等（同时利用其化学能），属异养型；有些微生物不需有机碳化合物，以CO2为碳源，属自养型（分为光能自养型和化能自养型）。 氮源氮源：氮是组成蛋白质和核酸的重要元素。 无机盐类无机盐类：细菌所需无机盐包括磷、硫、镁、铁、钾、钠、钙、氯、锰、锌、钴、铜等。其中磷、硫、镁、钾、钠、铁需要量较多，其他只需微量。 生长因子生长因子：生长因子是某些微生物生长发育所必需，而其自身又不能合成的一类营养物质。包括维生素、氨基酸、嘌呤和嘧啶。五、消毒与灭菌五、消毒与灭菌 消毒与灭菌是微生物实验技术中最基本的操作，从事药品生产和检验的人员都应当了解消毒与灭菌的
23、方法及其意义，严格遵守操作规程，否则会影响产品质量，危害患者安全。消毒与灭菌消毒与灭菌下列术语常用于表示物理或化学方法对微生物的杀灭程度下列术语常用于表示物理或化学方法对微生物的杀灭程度 消毒：消毒：杀死物体上病源微生物的方法杀死物体上病源微生物的方法,并不一定能杀死细并不一定能杀死细菌的芽胞。消毒所用的试剂称为消毒剂。菌的芽胞。消毒所用的试剂称为消毒剂。 灭菌：灭菌：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。包括杀灭细菌芽孢在内的全部病原微生物和非病原微生物。 抑菌：抑菌：抑制体内或体外细菌
24、的生长繁殖。常用的抑菌剂为抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素，可抑制细菌的繁殖。各种抗生素，可抑制细菌的繁殖。 防腐：防腐：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法，细菌一般不死亡。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度时常死亡。同一种化学药品在高浓度时为消毒剂，低浓度时常为防腐剂。为防腐剂。 无菌：无菌：不存在活的细菌。防止细菌进入人体或其他物品的不存在活的细菌。防止细菌进入人体或其他物品的操作技术，为无菌操作。操作技术，为无菌操作。芽孢芽孢芽孢是细菌的休眠体，在适宜的条件下可芽孢是细菌的休眠体，在适宜的条件下可以重新转变成为营养态细
25、胞；以重新转变成为营养态细胞； 一般的芽孢在普通的条件下可保存几年至一般的芽孢在普通的条件下可保存几年至几十年的生活力；世界上最古老的芽孢：几十年的生活力；世界上最古老的芽孢：2.5亿年；亿年；其对热力、干燥、辐射、化学消毒等理化其对热力、干燥、辐射、化学消毒等理化因素有强大的抵抗力；因素有强大的抵抗力；杀灭芽胞最可靠的方法是高压蒸汽灭菌。杀灭芽胞最可靠的方法是高压蒸汽灭菌。消毒与灭菌消毒与灭菌一、物理灭菌方法一、物理灭菌方法热力灭菌法热力灭菌法辐射杀菌法辐射杀菌法滤过除菌法滤过除菌法消毒与灭菌消毒与灭菌l热力灭菌法：使蛋白质、酶及核酸永久性破环，细胞使蛋白质、酶及核酸永久性破环，细胞膜溶解，
26、导致细胞发生不可逆转的死亡。膜溶解，导致细胞发生不可逆转的死亡。1、干热灭菌法干热灭菌法采用灼烧或干热空气灭菌采用灼烧或干热空气灭菌 ，使，使用方便，适用于玻璃器皿和瓷器等耐高温的固体用方便，适用于玻璃器皿和瓷器等耐高温的固体物的灭菌物的灭菌 。2、湿热灭菌法湿热灭菌法利用热蒸汽杀死微生物。利用热蒸汽杀死微生物。 高压蒸汽灭菌：利用高温高压蒸汽进行灭菌的方高压蒸汽灭菌：利用高温高压蒸汽进行灭菌的方法法 ，蒸汽的穿透力较热空气强可以杀死一切微生，蒸汽的穿透力较热空气强可以杀死一切微生物，包括细菌的芽孢，真菌的孢子或休眠体等耐物，包括细菌的芽孢，真菌的孢子或休眠体等耐高温的个体高温的个体 。最可靠
27、最适用最广泛的灭菌方法。最可靠最适用最广泛的灭菌方法。消毒与灭菌消毒与灭菌3、巴氏消毒法巴氏消毒法：利用热力杀死液体中的病原菌或一般的杂菌，同时不致严重损害其质量的消耗方法。我公司用600.5连续10h。消毒与灭菌消毒与灭菌l辐射灭菌法辐射灭菌法 1、紫外线紫外线：波长波长200-300nm的紫外线具有杀的紫外线具有杀 菌作用。穿透物质的能力很差，一般要求紫外灯菌作用。穿透物质的能力很差，一般要求紫外灯距离照射物不超过距离照射物不超过1.0米为宜米为宜 2、电离辐射、电离辐射 高速电子、高速电子、X射线、射线、射线射线 3、微波、微波 波长波长1mm1m消毒与灭菌消毒与灭菌l滤过除菌法滤过除菌
28、法用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去用物理阻留的方法将液体或空气中的细菌除去, ,以以达到除菌目的。达到除菌目的。滤菌器含有微细小孔滤菌器含有微细小孔0.220.22微米微米, ,只允许液体或气只允许液体或气体通过体通过, ,而大于孔径的细菌等颗粒不能通过而大于孔径的细菌等颗粒不能通过 。适用范围：血清、毒素、抗生素以及空气等的除适用范围：血清、毒素、抗生素以及空气等的除菌。菌。消毒与灭菌消毒与灭菌二、化学灭菌方法二、化学灭菌方法许多化学药物能影响微生物的化学组成、许多化学药物能影响微生物的化学组成、物理结构和生理活性，从而发挥防腐、消物理结构和生理活性，从而发挥防腐、消毒及灭菌的作用。
29、毒及灭菌的作用。洁净室洁净室(区区)应定期消毒，使用的消毒剂不得应定期消毒，使用的消毒剂不得对设备、物料和成品产生污染。消毒剂品对设备、物料和成品产生污染。消毒剂品种应定期更换，防止产生耐药菌株。种应定期更换，防止产生耐药菌株。 消毒与灭菌消毒与灭菌常用消毒剂种类和用途常用消毒剂种类和用途类别类别作用机制作用机制常用种类常用种类用途用途酚类酚类蛋白变性，细胞膜蛋白变性，细胞膜损伤损伤石炭酸石炭酸地面、器具表面、皮肤消地面、器具表面、皮肤消毒毒醇类醇类蛋白变性蛋白变性75酒精酒精皮肤、体温计消毒皮肤、体温计消毒氧化剂氧化剂氧化、蛋白沉淀氧化、蛋白沉淀二氧化氯二氧化氯地面、器具表面、皮肤消地面、器
30、具表面、皮肤消毒毒重金属盐重金属盐氧化、蛋白酶变性氧化、蛋白酶变性红汞、硫柳汞红汞、硫柳汞皮肤、粘膜、小创伤消毒皮肤、粘膜、小创伤消毒氧化剂氧化剂氧化、蛋白沉淀氧化、蛋白沉淀过氧乙酸、碘过氧乙酸、碘酒酒塑料、玻璃器材、皮肤消塑料、玻璃器材、皮肤消毒毒表面活性剂表面活性剂蛋白变性，细胞膜蛋白变性，细胞膜损伤损伤0.1新洁而灭新洁而灭地面、器具表面、皮肤消地面、器具表面、皮肤消毒毒常用消毒剂常用消毒剂 7075%乙醇水溶液乙醇水溶液 20005000mg/l84消毒液消毒液甲醛甲醛 37%40%甲醛液甲醛液4ml，再加入，再加入4g高锰酸钾高锰酸钾，每m3熏蒸量，密闭1224h，刺激性强；1000
31、2000mg/l新洁尔灭（苯扎溴铵）新洁尔灭（苯扎溴铵）水溶液水溶液，碘伏碘伏六、无菌药品概述六、无菌药品概述 无菌定义无菌定义：没有活体微生物的存在没有活体微生物的存在。 无菌药品定义无菌药品定义： 指没有活体微生物存在的药品指没有活体微生物存在的药品。 无菌药品是指法定药品标准中列有无菌检查项目的制剂和原料药，包括无菌制剂和无菌原料药。（2010版 GMP无菌药品附录）1、无菌操作相关概念、无菌操作相关概念 无菌操作无菌操作：防止细菌进入产品或其他 物品的操作技术。无菌物品无菌物品： 经过物理或化学方法灭菌后，未被污染的物品称无菌物品。无菌区域无菌区域：经过灭菌处理而未被污染的区域称无菌区
32、域。无菌操作管理无菌操作管理：防止一切微生物侵入和保持无菌物品及无菌区域不被污染的操作技术和管理方法。2、无菌药品的特性 无菌无菌 无热原或细菌内毒无热原或细菌内毒素素 无不溶性微粒无不溶性微粒 高纯度高纯度3、常用的无菌药品 小容量注射剂小容量注射剂 大容量注射剂大容量注射剂 粉针粉针 冻干粉针冻干粉针 无菌眼药水无菌眼药水 无菌混悬剂无菌混悬剂 无菌原料无菌原料 等4、无菌药品的生产工艺采用最终灭菌工艺的为采用最终灭菌工艺的为最终灭菌产品；最终灭菌产品；部分或全部工序采用无部分或全部工序采用无菌生产工艺的为非最终灭菌生产工艺的为非最终灭菌产品。菌产品。5、无菌生产工艺的基本特点无菌产品的质
33、量不能完全依赖无菌产品的质量不能完全依赖于对成品的无菌度测试，而非于对成品的无菌度测试，而非最终灭菌的产品，由于产品装最终灭菌的产品，由于产品装入最终容器后不在做进一步的入最终容器后不在做进一步的灭菌处理，因此严格的工艺过灭菌处理，因此严格的工艺过程及环境条件的控制是必须的，程及环境条件的控制是必须的，以保证整个生产过程不被微粒以保证整个生产过程不被微粒和微生物污染。和微生物污染。现行的无菌检测局限性现行的无菌检测局限性 无菌检查结果合格无菌检查结果合格X 整批产品无菌整批产品无菌 整批产品无菌整批产品无菌=无菌检查结果合格无菌检查结果合格 取样检查不能保证支支的合格 无菌的定义无菌的定义 理
34、论上理论上：无菌没有任何活的微生物 实际上实际上：我们无法证明产品中没有活微生物存在现行的无菌检测局限性现行的无菌检测局限性 无法对整批产品进行无法对整批产品进行100%检验检验 无菌检验的结果只是一个基于无菌检验的结果只是一个基于“可能性可能性”的判断的判断 操作者对机器运行的干扰和房间内的状况操作者对机器运行的干扰和房间内的状况(各种活各种活动动)，都会无菌检验的结果产生影响。，都会无菌检验的结果产生影响。 2010版版GMP无菌药品附录基本要求无菌药品附录基本要求 第三条无菌药品的生产须满足其质量和第三条无菌药品的生产须满足其质量和预定用途的要求，应当最大限度降低微生预定用途的要求，应当
35、最大限度降低微生物、各种微粒和热原的污染。生产人员的物、各种微粒和热原的污染。生产人员的技能、所接受的培训及其工作态度是达到技能、所接受的培训及其工作态度是达到上述目标的关键因素，无菌药品的生产必上述目标的关键因素，无菌药品的生产必须严格按照精心设计并经验证的方法及规须严格按照精心设计并经验证的方法及规程进行，产品的无菌或其它质量特性绝不程进行，产品的无菌或其它质量特性绝不能只依赖于任何形式的最终处理或成品检能只依赖于任何形式的最终处理或成品检验（包括无菌检查）。验（包括无菌检查）。6、无菌药品生产工艺的特殊要求、无菌药品生产工艺的特殊要求操作人员：操作人员： 洁净工作服灭菌；原料及内包装材料
36、：原料及内包装材料：除菌、灭菌、去热原；工艺用水、氮气、压缩空气工艺用水、氮气、压缩空气：除菌过滤；6、无菌药品生产工艺的特殊要求、无菌药品生产工艺的特殊要求 生产设备生产设备： 在线或离线清洗和灭菌； 清洁工具清洁工具： 清洁灭菌或消毒； 消毒剂消毒剂： 除菌过滤；注射剂生产无菌保证的控制点注射剂生产无菌保证的控制点人员的污染：人员的污染： 人员：人员：进入无菌分装区域的人员数量;操作习惯应以减少对洁净区气流的影响； 严格的更衣程序严格的更衣程序；无菌服和人手的微生物监测。 物料的转移物料的转移: 储存于密封容器中传递;单向流保持下传递。 环境的洁净要求环境的洁净要求: 一定的换气次数和风速
37、；动态的粒子数和微生物监测。七、无菌药品生产过程的质量风险无菌药品生产过程的质量风险管理管理 无菌制剂的最大风险是微粒、微生物和内毒无菌制剂的最大风险是微粒、微生物和内毒素，会对患者带来重大的风险。素，会对患者带来重大的风险。1、现有的无菌检查法对于工艺失败的检出能力很底，我们所做的工作是将其降到最低。2、 无菌工艺和最终灭菌工艺有本质的区别，无菌操作较终端灭菌操作有更多的变量，可预见性更差。3、 降低无菌工艺的风险，减少或消除潜在的污源，提高无菌保证水平，保障患者安全是质量风险管理的最终目标。风险的构成风险的构成 可能性可能性：危害的可能性/频率 严重性严重性：危害的后果的严重程度 风险是危
38、害发生的可能性及危害的严重性的组合，有效地管理风险就是对风险的这两个因素的控制。药品风险的来源药品风险的来源 生物性生物性：病毒、细菌的污染等 化学性化学性：物料生产、储存、转运过程中一些致敏物质、有害金属方面的污染，交叉污染等 物理性物理性：主要包含杂质、性状等方面不合格 质量属性质量属性：主要指在含量、PH、释放度、装量、产品包装等方面因生产过程中的差错引起的不合格生产过程质量风险管理的目标 防止微生物污染防止微生物污染 防止热源和细菌内毒素的污染防止热源和细菌内毒素的污染 防止产品中有异物防止产品中有异物 高纯度高纯度 最终灭菌产品：无菌保证水平（SAL） 10-6 非最终灭菌制剂: 非
39、最终灭菌产品：以培养基灌装零污染为目标，实际污染率低于1/5000 A级区的微生物限度=5 m） 一个字母“P”的发音可产生100个颗（=5 m）说话1分钟可产生15,000-20,000个（=5 m） 咳嗽可产生700,000-20,000个颗粒（=5 m）打喷嚏可产生1,400,000-20,000个（=5 m）无菌药品生产对人员的基本要求和原则 建立并保持良好的质量保证系统；建立并保持良好的质量保证系统； 应配备足够数量并具有适当资质的人员完应配备足够数量并具有适当资质的人员完成各项操作；成各项操作； 所有人员应明确理解自己的职责；所有人员应明确理解自己的职责； 掌握与之相关的掌握与之相
40、关的GMP原则；原则； 接受良好的培训并通过考核。接受良好的培训并通过考核。1、GMP对人员培训要求 2010版GMP基本要求： 第二十七条与药品生产、质量有关的所有人员都应第二十七条与药品生产、质量有关的所有人员都应当经当经 过培训，培训的内容应当与岗位的要求相适应。除进行本过培训，培训的内容应当与岗位的要求相适应。除进行本 规范理论和实践的培训外，还应当有相关法规、相应岗位规范理论和实践的培训外，还应当有相关法规、相应岗位 的职责、技能的培训，并定期评估培训的实际效果。的职责、技能的培训，并定期评估培训的实际效果。 第二十九条所有人员都应当接受卫生要求的培训，第二十九条所有人员都应当接受卫
41、生要求的培训，企业企业 应当建立人员卫生操作规程，最大限度地降低人员对药品应当建立人员卫生操作规程，最大限度地降低人员对药品 生产造成污染的风险。生产造成污染的风险。2、无菌操作人员的培训内容药品生产质量管理规范（药品生产质量管理规范（GMP）无菌操作技术无菌操作技术洁净室行为洁净室行为微生物学微生物学卫生学卫生学更衣技术更衣技术接触法取样方法接触法取样方法污染控制污染控制受微生物污染的药物对病人安全的危害受微生物污染的药物对病人安全的危害关键工艺特性关键工艺特性无菌生产区域操作的特定书面规程，包括停机故障处理。无菌生产区域操作的特定书面规程，包括停机故障处理。 在无菌工序中工作的人员应该对无
42、菌技术有特别的能力和技能。在无菌工序中工作的人员应该对无菌技术有特别的能力和技能。他们的无菌技术应该通过执行例如无菌工艺模拟试验等来定期地评估他们的无菌技术应该通过执行例如无菌工艺模拟试验等来定期地评估。3、会穿无菌衣 涉及的人员：所有需进入无菌生产洁净区工作的人员，涉及的人员：所有需进入无菌生产洁净区工作的人员，包括：操作工、机修工、包括：操作工、机修工、QA、QC等；等； 会穿无菌衣标准：用接触法取样，经过会穿无菌衣标准：用接触法取样，经过3次更衣试验后，次更衣试验后，程序正确、微生物检测结果合格，才能进入无菌区；程序正确、微生物检测结果合格，才能进入无菌区； 再验证：再验证： 更衣已合格
43、的人员每年需再培训并重复一次更衣资格的更衣已合格的人员每年需再培训并重复一次更衣资格的再确认再确认 发现已合格的人员有违反更衣程序趋势时，须重复发现已合格的人员有违反更衣程序趋势时，须重复13次次 更衣试验更衣试验 有三个月没有进行无菌操作或日常监控结果超标，人员有三个月没有进行无菌操作或日常监控结果超标，人员应再培训、再考核应再培训、再考核 QA部门可以摄下每个人的更衣程序，作为染菌的研究资部门可以摄下每个人的更衣程序，作为染菌的研究资料。料。4、禁止进入无菌区域人员禁止进入无菌区域人员 建议以下健康问题禁止进入无菌区域 大面积开口的损伤或烧伤大面积开口的损伤或烧伤 （伤风发热时的）唇疱疹（
44、伤风发热时的）唇疱疹 严重的头皮屑严重的头皮屑 皮炎皮炎, 湿疹湿疹 晒伤晒伤(起皮起皮) 痤疮痤疮 真菌真菌/细菌感染细菌感染 咳嗽咳嗽 流鼻涕或者打喷嚏流鼻涕或者打喷嚏 结膜炎结膜炎5、人员在B级洁净区的姿势、动作、讲话、行为 姿势姿势-不能靠在表面上不能靠在表面上 不要挤压工作服不要挤压工作服 不能将物料靠在人身上不能将物料靠在人身上 使身体远离产品使身体远离产品 身体站直以最小化破坏气流身体站直以最小化破坏气流 保持手臂在腰线或以上保持手臂在腰线或以上 动作 深思熟虑的深思熟虑的, 缓慢的，小心的移动，不能快缓慢的，小心的移动，不能快走走 门不能快开、快关，也不能开着不关门不能快开、快
45、关，也不能开着不关 不能将任何物品拖过产品得上方不能将任何物品拖过产品得上方 人员之间保持一段距离，尽量不相互接触人员之间保持一段距离，尽量不相互接触 避免不必要的动作，尽量避免下蹲动作避免不必要的动作，尽量避免下蹲动作 当不参与工艺操作时，操作者应站或坐当不参与工艺操作时，操作者应站或坐讲话 操作人员尽量不谈话，确实需要退出关键操作人员尽量不谈话，确实需要退出关键区域再讲话区域再讲话 不能大声呼喊除非确实需要不能大声呼喊除非确实需要 不能通过洞口，进出口或气闸进行交流不能通过洞口，进出口或气闸进行交流 如果打喷嚏远离产品，之后更换口罩如果打喷嚏远离产品，之后更换口罩行为 人站得正确位置顺序应
46、为：送风先到裸露的产品，再到人站得正确位置顺序应为：送风先到裸露的产品，再到 人员、最后到回风或排风人员、最后到回风或排风 不能接触、抓挠皮肤，如发生要求人员回更衣室更换新不能接触、抓挠皮肤，如发生要求人员回更衣室更换新 手套手套 不能触摸地板，当有物品跌落，如果不会产生风险的话不能触摸地板，当有物品跌落，如果不会产生风险的话 可以在日清洁结束时去除可以在日清洁结束时去除 关键区域设备在离开该区域后，在重新进入生产状态时关键区域设备在离开该区域后，在重新进入生产状态时 需要再灭菌或再清洁需要再灭菌或再清洁 仅用无菌工具接触无菌物料，不能离开仅用无菌工具接触无菌物料，不能离开A级区级区6、操作人员要保护单向流流向 单向流流型要通过确认单向流流型要通过确认 尽量保持整个身体在单向气流通道之外尽量保持整个身体在单向气流通道之外操作操作 必要时可以通过工具协助操作必要时可以通过工具协助操作 必须进入气流通道操作，应适当的侧面必须进入气流通道操作，应适当的侧面操作操作 在垂直单向流条件下，不得在产品上游在垂直单向流条件下，不得在产品上游方向进行无菌操作方向进行无菌操作我们要思考的问题？ 在日常工作中在日常工作中 有哪些因素会对产品的无菌有影响？ 有哪些因素会对产品的热原或细菌内毒素有影响？ 有哪些因素会对产品的可见异物或不溶性微粒有影响？
