1、从毛地黄中分离提取 强心苷类药物 生物化工系 张洪鹏一 、强心苷简介( (一一) )分布与应用分布与应用o 强心苷(cardiac glycosides)是指生物界中一类对心脏有显著生理活性的甾体苷类。强心苷能加强心肌收缩性，减慢窦性频率。主要用于治疗慢性心功能不全，心房纤颤、心房扑动、阵发性心动过速等心脏疾病。 o 强心苷还有兴奋延髓催吐化学感受区和影响中枢神经系统作用，可引起恶心、呕吐等胃肠反应，并能使动物产生眩晕、头痛等症。 o 强心苷在植物界分布比较广泛，主要存在于夹竹桃科、玄参科、百合科、萝摩科、十字花科、毛茛科、卫矛科、大蕺科、桑科等十几个科的一百多种植物中。 o 强心苷在植物体中
2、主要存于花、叶、种子、鳞茎、树皮和木质部等组织器官中。 (二)强心苷结构与分类 强心苷的基本结构是由甾醇母核和连在 C 17 位上的不饱和共轭内酯环构成苷苷元部分元部分，然后通过甾醇母核 C 3 位上的羟基和糖缩而合成。o 一般根据在生物体内是原生还是次生，可分为原生苷和次生苷。次生苷是含有两个以上糖的原生苷，经水解失去一部分糖而得到的苷称为次生苷或次级苷。1 1甾核的立体结构构型及表示方法甾核的立体结构构型及表示方法 ABCD1234567891011121314151617181920*甾体母核甾体母核A A、B B、C C、D D四个环的四个环的稠合方式为稠合方式为A/BA/B环有顺、反
3、两种环有顺、反两种形式，但多为顺式；形式，但多为顺式；B/CB/C环均为环均为反式；反式；C/DC/D环多为顺式环多为顺式ABCD1234567891011121314151617ABCD1234567891011121314151617A、B反式顺式A、B构向式为：12345678910111213141516176789101112131415161712345A.B反式A.B顺式2.2.结构类型结构类型(1)(1)苷元部分苷元部分根据C17位侧链的不饱和内酯环不同分为：n甲型甲型：C17位侧链为五元环的-内酯n乙型乙型：C17位侧链为六元环的- -内酯这两类大都是-构型，个别为-构型，-
4、型无强心作用。 OOOHHHOROOOHHO3514甲型毛地黄毒苷元H202223213,14 -二羟基-5 -强心甾-20(22)-烯C17位上连六元不饱和内酯环，即，-双烯-内酯，称为海葱甾二烯或蟾蜍甾二烯。以海葱甾（scillanolide）或蟾蜍甾(bufanolide)为母核命名。OOHHHOROrOOHHOOr乙型海葱苷元20212223243,14 -二羟基海葱甾4,20,22-三烯(2)(2)糖部分的结构糖部分的结构构成强心苷的糖有20多种。根据它们C2位上有无羟基可以分成-羟基糖羟基糖（2-羟基糖）和-去氧糖去氧糖（2-去氧糖）两类。-去氧糖常见于强心苷类，是区别于其它苷类成
5、分的一个重要特征。o （1 1）-羟基糖羟基糖：除D-葡萄糖、L-鼠李糖外，还有6-去氧糖如L-夫糖（L-fucose）、D-鸡纳糖（D-quinovose）、D-弩箭子糖（D-antiarose）、D-6-去氧阿洛糖（D-6-deoxyallose）等；6-去氧糖甲醚如L-黄花夹竹桃糖（L-thevetose）、D-洋地黄糖（D-digitalose）等。o （2 2）-去氧糖去氧糖：有2，6-二去氧糖如D-洋地黄毒糖（D-digitoxose）等；2，6-二去氧糖甲醚如L-夹竹桃糖（L-oleandrose）、D-加拿大麻糖（D-cymarose）、D-迪吉糖（D-diginose）和D-
6、沙门糖（D-sarmentose）等。OCH3OHOHHOH OHOCH3OHOHH OHOCH3OHOHHOH OHHOOCH3OHHOH OHHO,OCH3OHOH OHHOOCH3OHHOH OHOCH3OHOH OHOCH3OHOH OHHOCH3CH3CH3,D-鸡纳糖 D-弩箭子糖 D-6-去氧阿洛糖 L-夫糖D-洋地黄糖 D-洋地黄毒糖 D-加拿大麻糖 L-黄花夹竹桃糖 OOOH（D-洋地黄毒糖）3O洋地黄毒苷甲型强心苷HR1R2狄高辛(digitoxin)(digoxin)R1R2HOHOHHOHOHC绿海葱苷OO乙型强心苷glc(scilliglaucoside) 大量的研究
7、证明，强心苷的化学结构对其生理活性有较大影响。强心苷的强心作用取决于苷元部分，主要是甾体母核的立体结构、不饱和内酯环的种类及一些取代基的种类及其构型。糖部分本身不具有强心作用，但可影响强心苷的强心作用强度。强心苷的强心作用强弱常以对动物的毒性（致死量）来表示。(六六)、强心苷的结构与活性的关系、强心苷的结构与活性的关系o 1.1.甾体母核甾体母核 甾体母核的立体结构与强心作用关系密切的是C/D环须顺式稠合。一旦这种稠合被破坏，将失去强心作用。若C14羟基为构型时即表明C/D环顺式稠合，若为构型或脱水形成脱水苷元，则强心作用消失。A/B环为顺式稠合的甲型强心苷元，必须具C3-羟基，否则无活性。A
8、/B环为反式稠合的甲型强心苷元，无论C3是-羟基还是-羟基均有活性。2.2.不饱和内酯环不饱和内酯环 C17侧链上、-不饱和内酯环为-构型 时，有活性；为构型时，无活性。3.3.取代基取代基 强心苷元甾核中一些基团的改变亦将对生理活性产生影响。如C10位的角甲基转化为醛基或羟甲基时，其生理活性增强；C10位的角甲基转为羧基或无角甲基，则生理活性明显减弱。 4.4.糖部分糖部分 强心苷中的糖本身不具有强心作用，但它们的种类、数目对强心苷的毒性会产生一定的影响。一般来说，苷元连接糖形成单糖苷后，毒性增加。随着糖数的增多，分子量增大，苷元相对比例减少，又使毒性减弱。如毒毛旋花子苷元组成的三种苷的毒性
9、比较，结果见下表。洋地黄毒苷元与不同单糖结合的苷的毒性比较洋地黄毒苷元与不同单糖结合的苷的毒性比较 化合物名称LD50（猫，mg/kg）洋地黄毒苷元0.459洋地黄毒苷元-D-葡萄糖0.125洋地黄毒苷元-D-洋地黄糖0.200洋地黄毒苷元-L-鼠李糖0.278洋地黄毒苷元-加拿大麻糖0.288 由上表可知，单糖苷的毒性次序为：葡萄糖苷甲氧基糖苷由上表可知，单糖苷的毒性次序为：葡萄糖苷甲氧基糖苷6-6-去氧糖苷去氧糖苷2 2，6-6-去氧糖苷。去氧糖苷。二.毛地黄o 毛地黄毛地黄 Digitalis purpureaDigitalis purpureao 科属：科属：玄参科o 形态：形态：多年
10、生草花，常作二年生栽培。花期6-8月，果熟期8-10月。毛花洋地黄中强心苷的种类毛花洋地黄中强心苷的种类OOO HR1R2OOC H3O HOOC H3O HOOC H3O R3OOO HO HO HC H2O H R1 R2 洋 地 黄 毒 苷 元 H H 羟 基 洋 地 黄 毒 苷 元 O H H异 羟 基 洋 地 黄 毒 苷 元 H O H双 羟 基 洋 地 黄 毒 苷 元 O H O H 吉 他 洛 苷 元 O C H HO R1 R2 R3 洋 地 黄 毒 苷 H H H 羟 基 洋 地 黄 毒 苷 O H H H异 羟 基 洋 地 黄 毒 苷 H O H H （ 地 高 辛 ）双
11、羟 基 洋 地 黄 毒 苷 O H O H H 吉 他 洛 苷 O C H H HO R1 R2 R3毛 花 洋 地 黄 苷 甲 H H O C C H3毛 花 洋 地 黄 苷 乙 O H H O C C H3毛 花 洋 地 黄 苷 丙 H O H O C C H3毛 花 洋 地 黄 苷 丁 O H O H O C C H3毛 花 洋 地 黄 苷 戊 O C H H O C C H3由上图可知：在毛化洋地黄中存在：甲，乙，丙，丁，戊五种苷其中，乙型和丙型苷已得到较为广泛的应用 如：o 1.毛花洋地黄苷丙通过去乙酰基的反应可得到去乙酰毛花洋地黄苷丙，商品名为西地兰西地兰（cedilanid）。o
12、 2.地高辛地高辛是毛花洋地黄苷丙的次级苷。利用毛花洋地黄叶中存在的-D-葡萄糖酶水解除去葡萄糖，再用乙醇提取即可得到。 1.1.性状性状： 强心苷多为无色结晶或无定形粉末，中性物质，有旋光性，C17 侧链为-构型的味苦，-构型味不苦，但无效。对粘膜有刺激性。p强心苷的溶解性与所连糖的种类和数目有关，一般可溶于水、甲醇、乙醇、丙酮等极性溶剂；难溶于乙醚、苯、石油醚等非极性溶剂。p弱亲脂性苷微溶于氯仿-乙醇(2:1)，亲脂性苷微溶于乙酸乙酯、含水氯仿、氯仿-乙醇（3:1）。2.2.溶解性溶解性一般糖基多的原生苷比次生苷或苷元的亲水性强、亲脂性弱，可溶于水等高极性溶剂而难溶于低极性溶剂，多为无定形
13、粉末。 洋地黄毒苷是一个三糖苷，但3分子糖都是洋地黄毒糖，整个分子只有5个羟基，故在水溶液中溶解度小(1:100000000)，溶于氯仿（1:40）。OOCH3CH3ROOH洋地黄毒苷p但糖基和苷元上羟基数目的多少对溶解性也有一定的影响。如乌本苷是一个单糖苷，却有8个羟基，水溶性很大（1:75），难溶于氯仿。乌本苷OOCH3OHHOHOHOOHO鼠李糖3.3.紫外吸收光谱紫外吸收光谱 甲型强心苷由于存在不饱和共轭内酯环，在216-218nm处有最大吸收，当16，17位存在双键时，则最大吸收波长在270nm处。乙型强心苷在300nm处有最大吸收。o 1.脱水反应o 2.水解反应o 3.颜色反应四
14、四. .强心苷类化合物的化学性质强心苷类化合物的化学性质n强心苷混合强酸（3%-5%HCl）加热水解时，苷元往往发生脱水反应。（1）C14和C5-OH最易发生脱水反应生成缩水苷元。 （2） 同时存在C14-OH和C16-OH，也易脱水，得到二缩水苷元。OO HOOOOH C I海葱苷A 脱水海葱苷元 OOO HOO HOOH C I羟基洋地黄毒苷 脱水羟基洋地黄毒苷元鼠李糖-O-葡萄糖 +3 D-洋地黄毒糖+ L-鼠李糖 + D-葡萄糖 (D-洋地黄毒糖)3（1 1）温和酸水解）温和酸水解 用稀酸0.020.05mol/L的盐酸或硫酸，在含水醇中经短时间加热回流，可使I型强心苷水解为苷元和糖。
15、由于此水解条件温和，对苷元的影响较小，不致引起脱水反应，对不稳定的-去氧糖亦不致分解。 （二）水解反应（二）水解反应（2 2）氯化氢）氯化氢- -丙酮法丙酮法（Mannich和 Siewert法）将强心苷置于含1%氯化氢的丙酮溶液中，20放置两周。此法可得到原生苷元和糖衍生物。（3 3）强烈酸水解）强烈酸水解 型和型强心苷与苷元直接相连的均为- 羟基糖，由于糖的2-羟基阻碍了苷键原子的质子化，使水解较为困难，用温和酸水解无法使其水解，必须增高酸的浓度（3%5%），延长作用时间或同时加压，才能使-羟基糖定量地水解下来，但常引起苷元结构的改变，失去一分子或数分子水形成脱水苷元。强心苷的苷键不被碱水
16、解。但强心苷分子中的酰基、内酯环会受碱的影响，发生水解或裂解、双键移位、苷元异构化等反应。又可分为：（1）酰基的水解（2）内酯环的水解3.3.碱水解反应碱水解反应（1 1）酰基的水解）酰基的水解 强心苷的苷元或糖上常有酰基存在，它们遇碱可水解脱去酰基。一般用碳酸氢钠、碳酸氢钾、氢氧化钙、氢氧化钡等。-去氧糖上的酰基最易脱去，用碳酸氢钠、碳酸氢钾处理即可，而羟基糖或苷元上的酰基须用氢氧化钙、氢氧化钡处理才可。甲酰基较乙酰基易水解，提取分离时，若用氢氧化钙处理，即可水解。l 上述四种碱只水解酰基，不影响内酯环。氢氧化钠、氢氧化钾由于碱性太强，不仅使所有酰基水解，而且还会使内酯环开裂。（2 2）内酯
17、环的水解）内酯环的水解 在水溶液中，氢氧化钠、氢氧化钾溶液可使内酯环开裂，加酸后可再环合；在醇溶液中，氢氧化钠、氢氧化钾溶液使内酯环开环后生成异构化苷，酸化亦不能再环合成原来的内酯环，为不可逆反应。三三. .强心苷的检测识别和定性强心苷的检测识别和定性、定量分析方法定量分析方法o 强心苷的显色反应包括五元不饱和内酯强心苷的显色反应包括五元不饱和内酯环、环、-去氧糖、甾体母核三部分。去氧糖、甾体母核三部分。 1.1.五元不饱和内酯环的显色反应五元不饱和内酯环的显色反应 o 间二硝基苯试剂反应（间二硝基苯试剂反应（RaymondRaymond反应）反应） OOHO202122HCOOHO22-0H
18、-NNO2OOOHONO2NOHOONO2NO2OOHONO2NO-OEtOHOo 3,53,5二硝基苯甲酸试剂反应（二硝基苯甲酸试剂反应（KeddeKedde反应）反应） 取试样的甲醇或乙醇溶液于试管中，加入3,5二硝基苯甲酸试剂（A液：2%的3,5-二硝基苯甲酸甲醇或乙醇溶液；B液：2mol/L氢氧化钾溶液，用前等量混合）34滴，产生红色或紫红色。原理与间二硝基苯试剂反应类似，本试剂可作为强心苷纸色谱和薄层色谱的显色试剂，喷雾后显紫红色，几分钟后褪色。 取试样的甲醇或乙醇溶液于试管中，加入碱性苦味酸试剂（A液：1%苦味酸乙醇溶液；B液：5%氢氧化钠水溶液，用前等量混合）数滴，呈现橙色或橙红
19、色，反应有时需要15分钟以后才能显色，原理也是活性亚甲基与苦味酸缩合显色。此缩合产物在485nm波长处有吸收峰，药典以此法测定强心苷类药物含量。 p碱性苦味酸试剂反应（碱性苦味酸试剂反应（BaljetBaljet反应）反应）o 亚硝酰铁氰化钠试剂反应（亚硝酰铁氰化钠试剂反应（LegalLegal反应）反应） 取试样1mg2mg，溶于23滴吡啶中，加3%亚硝酰铁氰化钠试剂和2mol/L氢氧化钠各1滴，反应液呈深红色并渐渐消失。Fe(CN)5NO2-+2OH-Fe(CN)5NC+2H2OH2C4- 2.2.作用于作用于-去氧糖的反应去氧糖的反应 o Keller-KilianiKeller-Kil
20、iani (K-K) (K-K)反应反应（三氯化铁三氯化铁- -冰醋冰醋酸反应）酸反应） o 过碘酸过碘酸- -对硝基苯胺反应对硝基苯胺反应 过碘酸将-去氧糖氧化成丙二醛，丙二醛与硝基苯胺试剂反应呈深黄色。C H2C H OC H OC HC H OC H O H N H2N O2H CI+N O2NNO-OC HCHC HN H2H C I.p对二甲氨基苯甲醛反应对二甲氨基苯甲醛反应 将试样的醇溶液点在滤纸上，喷以对二甲氨基苯甲醛试剂（1%对二甲氨基苯甲醛的醇溶液4ml加浓盐酸1ml），并于90加热，分子中含有-去氧糖的强心苷可显灰红色斑点。 o 呫吨氢醇反应（呫吨氢醇反应（xanthydr
21、olxanthydrol反应）反应） 取试样110g加入呫吨氢醇试剂（呫吨氢醇10mg溶解于100ml冰醋酸中，加入1ml浓盐酸）1ml，置沸水浴中数分钟后呈红色。本反应非常灵敏，只要分子中有-去氧糖都能呈色。可用于含-去氧糖化合物的定性、定量分析。 3.3.作用于甾体母核的反应作用于甾体母核的反应o Liebermann-BurchardLiebermann-Burchard反应反应 取试样溶于冰醋酸，加浓硫酸-醋酐（120）混合液数滴，反应液呈黄红蓝紫绿等变化，最后褪色。本反应液的呈色变化过程随分子中双键数目与位置不同而有所差异。o TschugaeffTschugaeff反应反应 取试样
22、溶于冰醋酸，加无水氯化锌及乙酰氯后煮沸，或取试样溶于氯仿或二氯甲烷，加冰醋酸、乙酰氯和氯化锌煮沸，反应液呈紫红蓝绿等变化，B环有不饱和双键的作用更快。 o SalkowskiSalkowski反应反应 将试样溶于氯仿，沿试管壁加入浓硫酸，静置，氯仿层呈血红色或青色，硫酸层有绿色荧光。o KahlenbergKahlenberg反应反应 将强心苷的醇溶液点在滤纸或薄层上，喷以20%三氯化锑氯仿溶液（不含乙醇和水），于100加热数分钟，在可见光或紫外光下可观察到不同颜色的斑点。 o 三氯醋酸三氯醋酸- -氯胺氯胺T(chloramines TT(chloramines T反应反应) ) 将试样醇溶
23、液点在滤纸（或薄板）上，喷以三氯醋酸-氯胺T试剂（25%三氯醋酸乙醇溶液4 ml加3%氯胺T水溶液1ml混匀），待纸片干后，100加热数分钟，于紫外光下观察。洋地黄毒苷元衍生的苷类显黄色荧光；羟基洋地黄毒苷元衍生的苷类显亮蓝色荧光；异羟基洋地黄毒苷元衍生的苷类显灰蓝色荧光。该反应可初步区别洋地黄类的苷元。 ( (二二).). 定性分析定性分析o 1.1.化学定性化学定性 依据母核结构、苷元的不饱和内酯环、-去氧糖3个方面的结构反应进行鉴别。方法见显色反应。o 2.2.色谱定性色谱定性 由于强心苷类成分的结构类似，因而，色谱法对强心苷的分析有着特殊的价值。包括：纸色纸色谱谱、薄层色谱薄层色谱等。
24、 （1 1）纸色谱）纸色谱o 根据强心苷及其苷元的极性不同可选用不同的固定相。如强心苷的亲水性较强，宜选用水为固定相，移动相多选用水饱和的丁酮、乙醇-甲苯-水（461）、氯仿-甲醇-水（1025）；如强心苷的亲水性较弱或检识苷元时，可选用甲酰胺为固定相，以甲酰胺饱和的甲苯或苯为移动相。 （2 2）薄层色谱）薄层色谱o 吸附薄层色谱吸附薄层色谱 由于强心苷分子中含有较多的极性基团，尤其是多糖苷，在氧化铝上吸附作用较强，分离效果较差，因此常采用硅胶作吸附剂，以氯仿-甲醇-冰醋酸（85132）、二氯甲烷-甲醇-甲酰胺（80191）、醋酸乙酯-甲醇-水（855）等溶剂系统作为移动相。这些展开剂中含少量
25、甲酰胺或水可以减少拖尾现象。o 分配色谱分配色谱 一般选用硅藻土、纤维素为支持剂，甲酰胺、二甲基甲酰胺或乙二醇作固定相。氯仿-丙酮（41）、氯仿-正丁醇（191）等溶剂系统作移动相。（3 3）纸色谱和薄层色谱常用的显色剂）纸色谱和薄层色谱常用的显色剂o 适用于甲型强心苷的显色剂 1%苦味酸水溶液与10%氢氧化钠水溶液（955）混合，喷后于100烘数分钟，显呈橙红色；2%3,5-二硝基苯甲酸乙醇溶液与2mol/L氢氧化钾溶液等体积混合，喷后显红色，数分钟后渐褪色。o 适用于各类强心苷的显色剂 2%三氯化锑的氯仿溶液，喷后于100烘数分钟，各种强心苷及苷元显不同颜色；25%三氯醋酸乙醇溶液与3%氯
26、胺T(41)混合，喷后于100加热数分钟，在紫外灯下显蓝（紫）、黄（褐）色荧光。 ( (三三).).定量分析方法定量分析方法o 利用强心苷中 ， 不饱和五元内酯不饱和五元内酯易与某些芳香硝基化合物芳香硝基化合物（如间 - 二硝基苯）形成有色加成物，采用紫外紫外 - - 可见分可见分光光度法光光度法测定生药中总强心苷的含量。 单体强心苷可用薄层扫描法、高效液相色谱法或柱前衍生化气相色谱法测定。反相薄层层析法对洋地黄叶中强心苷定量反相薄层层析法对洋地黄叶中强心苷定量分析分析（文献（文献1 1）o 将洋地黄叶冷冻干燥，粉碎成500m一下得粉末，250mg叶末中添加内标物-脱水去乙酰基毛花洋地黄苷A，
27、用50甲醇提取。提取物中加3ml甲醇及50ml乙酸乙酯过滤后，上SwpPak（二氧化硅）柱。先用氯仿-丙酮-乙酸（70：30：0.05）分离2级糖苷，在以氯仿-甲醇-水-乙酸（90：10：0.8：0.05）分离原糖苷。分别以Sep-Pak(C18)纯化，TLC出现斑点，再用KC18F板（20cm）层析，分离原糖苷的展开溶剂位乙腈-甲醇-0.5M NaCl(1:1:1)，分离2级糖苷用乙腈-甲醇- 0.5M NaCl(12:7:9），使用岛津TLC扫描仪，以反射吸收法在225nm处检测。 结果，100mg叶末中的含量依次为：毛花洋地黄苷A56.72.4g，毛花洋地黄苷B16.11.2 g,毛花洋
28、地黄苷C322.740.8 g,去毛花洋地黄苷C27.0 3.9g,-乙酰洋底黄毒苷20.52.9g， -乙酰基异羟基洋底黄毒苷17.92.7g。n强心苷含量很低，多与糖类、皂苷、色素、鞣质等共存，这些成分的存在可影响强心苷在溶剂中的溶解度。同时，强心苷的原生苷和次生苷共存，且很多结构相似的苷同存，故提取分离较难。n因酸碱可使强心苷发生水解、脱水和异构化，故提取分离时应注意控制酸碱性。( (一一) )、提取方法、提取方法o 由于强心苷易受酸、碱、酶的作用，发生水解、脱水及异构化等反应。在提取分离时要注意这些因素的影响和应用。在研究或生产中，若以提取分离原生苷为目的时，须防止酶水解。 o 常用7
29、0%80%的乙醇为提取溶剂。当原料中含脂类杂质较多时，须用石油醚或汽油脱脂后再提取。 o 原生苷:抑制酶的活性(冷冻干燥、快速提取、快速干燥)MeOH、70%EtOH提取。o 次生苷:利用酶的活性,EtOH、EtOAc提取。( (二二) )、分离纯化方法、分离纯化方法o 分离强心苷可以采用重结晶法重结晶法、溶剂萃取法溶剂萃取法、逆流分溶法逆流分溶法和色谱分离法色谱分离法。在大多数情况下需要采用多种方法配合使用，反复分离才能得到单体。 ( (三三) )分离提取工艺部分分离提取工艺部分o 1.从毛地黄中提取分离粗总苷(主要含毛花洋地黄苷甲、乙、丙)；o 2.毛花洋地黄总苷（混合苷）中苷甲、乙、丙以
30、及苷元部分的分离提取；o 3.西地兰、地高辛的分离提取；1.1.从毛地黄中提取分离粗总苷工艺流程从毛地黄中提取分离粗总苷工艺流程加乙醇至含醇量22%，用水液量的0.3倍氯仿提取2次水液氯仿液糖类等水溶性杂质）（水液回收氯仿，抽松抽松物加适量甲醇，加热回流至全溶。常压回收甲醇至剩余量为抽松物的0.3-0.4倍浓缩液加入抽松物重量的0.04倍蒸馏水，再加入少量晶种，摇匀，静置48小时以上，待结晶析出结晶的浓缩液加入适量的乙醚-丙酮（2:1），搅拌成浆状，静置过夜，抽滤，结晶以适量乙醚-丙酮（1:1）洗涤，挥散溶剂后，100烘干粗总苷（主要含毛花洋地黄苷甲、乙和丙）2.(1)2.(1)毛花洋地黄总苷
31、（混合苷）中苷毛花洋地黄总苷（混合苷）中苷甲甲、乙乙、丙丙的分离提取；的分离提取；o 毛花洋地黄叶中主要含强心苷类化合物，达三十余种，其中主要由五种强心苷元组成.大多为次生苷.毛花洋地黄苷甲、乙、丙、丁、戊为原生苷.o 从粗总苷中分离原生苷即：毛花洋地黄苷甲、乙、丙的工艺流程如下图所示.毛花洋地黄总苷（混合苷）中苷甲，乙，丙的分离毛花洋地黄总苷（混合苷）中苷甲，乙，丙的分离粗总苷按粗总苷按粗总苷- -甲醇甲醇- -氯仿氯仿- -蒸馏水（蒸馏水（1:100:500:5001:100:500:500）的比例进行第一次分离的比例进行第一次分离, ,现将总苷溶于甲醇，过现将总苷溶于甲醇，过滤，在向滤液
32、中加入氯仿和水滤，在向滤液中加入氯仿和水稀甲醇层氯仿层母液 粗结晶（主要含苷丙和乙）氯仿层稀甲醇层减压浓缩至小体积，冷却，抽滤析出的结晶减压浓缩至小体积，冷却，抽滤析出的结晶常压回收氯仿常压回收氯仿氯仿 残渣（主要含苷甲和乙）按上述第一次分离配比进行第二次分离按上述第一次分离配比进行第二次分离常压回收氯仿常压回收氯仿残渣 （主含苷乙）减压浓缩减压浓缩母液结晶（主含苷丙）原生苷、次生苷分离时的注意事项原生苷、次生苷分离时的注意事项p由于苷结构特点及性质,提取原生苷时一般需要注意以下方面： 1.1.提取过程中避免接触酸或碱；提取过程中避免接触酸或碱； 2.2.设法抑制或破坏酶的活性。设法抑制或破坏
33、酶的活性。p抑制或破坏酶的活性的方法： 1.新鲜植物药材迅速干燥或加入硫酸铵水溶液研磨促使酶变性； 2.提取时用沸水、甲醇、60以上浓度的乙醇； 3.加入碳酸钙拌匀后沸水提取。(2)(2)苷元部分的分离提取苷元部分的分离提取3.(1)3.(1)去乙酰毛花洋地黄苷丙去乙酰毛花洋地黄苷丙( (西地兰西地兰) )的制取的制取o 制取过程分为提取总苷、分离苷丙(见总苷分离部分)和水解去乙酰基三个阶段。o 水解去乙酰基水解去乙酰基 毛花洋地黄苷丙去乙酰基的反应（即洋地黄毒糖上的酯键水解）较易进行。常采用氢氧化钙或碳酸钾，按苷丙-甲醇-氢氧化钙-水（1g33ml70mg33ml）的配比，先将苷丙溶于甲醇中
34、，氢氧化钙溶于水中，分别滤清，再混合均匀，静置过夜。使水溶液呈弱碱性。水解完毕，用1%的盐酸调至中性。滤过，滤液减压浓缩至约20%的体积，放置过夜，滤过得到粗结晶，用甲醇重结晶即得西地兰纯品（mp265268）。去乙酰基毛花洋地黄苷丙去乙酰基毛花洋地黄苷丙( (西地兰西地兰) )的工艺流程的工艺流程4.4.地高辛地高辛( (异羟基洋地黄毒苷异羟基洋地黄毒苷) )的制取的制取o 地高辛是毛花洋地黄苷丙的次级苷次级苷，为白色结晶或结晶性粉末。熔点235245（分解）， +9.512(吡啶)，无臭，味苦。溶于稀乙醇、吡啶或氯仿与乙醇混合液中。几不溶于水、乙醚、丙酮、醋酸乙酯、氯仿，在80%乙醇中的溶
35、解度比羟基洋地黄毒苷大。利用毛花洋地黄叶中存在的-D-葡萄糖酶水解除去葡萄糖，再用乙醇提取。 地高辛制取的工艺流程地高辛制取的工艺流程参考文献1.反相薄层层析法对洋地黄叶中强心苷定量分析.国外医学中医中药分册.1996年第18卷第2期34页2.汪洋,李孟全.HPLC 法测定糖芥不同部位强心苷的含量研究.中医药学刊.第23卷第5期2005年5月3.刘瑞源, 钟平, 戴开金.大孔吸附树脂提取中草药有效成分的研究进展.4.袁黎明,傅若农,张天佑.高速逆流色谱在植物有效成分分离中的应用.药物分析杂志.第18(1)期60页1998年5.尹茶,吴玉田.高效毛细管电泳技术及其在中药分析中的应用.药物分析杂志
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