1、药学微生物基础教案药学微生物基础教案授课内容：授课内容：第九章第九章 常用血清学试验常用血清学试验上课时间上课时间: 200 年年 月月 日日授授 课课 人人: 汪穗福、卓家珍汪穗福、卓家珍任教班级任教班级: 200 级级 班班课课 时时:课课 型型:教学媒体教学媒体:教学目标教学目标：、熟记变态反应、疫苗、凝集反应、沉淀反应等基本概念；熟记变态反应、疫苗、凝集反应、沉淀反应等基本概念； 、理解并掌握四种变态反应的特点及防治；常用疫苗及、理解并掌握四种变态反应的特点及防治；常用疫苗及其优缺点；其优缺点； 、熟练掌握凝集试验、沉淀反应、熟练掌握凝集试验、沉淀反应、免疫标记技术等几种免疫标记技术等
2、几种常用的血清学试验的理论知识及相关操作；常用的血清学试验的理论知识及相关操作； 4 4、了解各类变态发应、几种血清学试验与医药学的关系，、了解各类变态发应、几种血清学试验与医药学的关系，在医学中的作用。在医学中的作用。教学重点、难点：教学重点、难点： 1、免疫学相关定义概念、特点、免疫学相关定义概念、特点 2、几个易混淆的知识点的比较：四种变态反应、几个易混淆的知识点的比较：四种变态反应、 死疫苗死疫苗与活疫苗等。与活疫苗等。 3、几种常用的血清学试验的原理、几种常用的血清学试验的原理 4、相关知识和实验操作与医药学的联系、相关知识和实验操作与医药学的联系内容概述第一节第一节 免疫基础知识免
3、疫基础知识 一一. 抗原与抗体抗原与抗体 1.1 抗原抗原 1.2 抗体抗体 二二. 变态反应变态反应 三三. 疫苗疫苗 3.1 传统疫苗传统疫苗 3.2 新型疫苗新型疫苗 第二节第二节 血清学试验血清学试验 一一. 凝集试验凝集试验 二二. 沉淀试验沉淀试验 三三. 免疫标记技术免疫标记技术二、变态反应二、变态反应 正常情况下机体对抗原产生的免疫反应起保护作用，正常情况下机体对抗原产生的免疫反应起保护作用，可以帮助机体消灭病原微生物、防治癌症等。但是可以帮助机体消灭病原微生物、防治癌症等。但是异常情况下的免疫应答也会对机体有害，其中最重异常情况下的免疫应答也会对机体有害，其中最重要的是变态反
4、应。要的是变态反应。变态反应也称超敏反应变态反应也称超敏反应，是机体受同一抗原或半，是机体受同一抗原或半抗原再次刺激后产生的一种异常的或病理性的，以抗原再次刺激后产生的一种异常的或病理性的，以组织损伤或生理功能紊乱为表现的免疫反应。变态组织损伤或生理功能紊乱为表现的免疫反应。变态反应与免疫反应一样，也具有特异性和记忆性。反应与免疫反应一样，也具有特异性和记忆性。引起变态反应的抗原称为变应原或过敏原。它们引起变态反应的抗原称为变应原或过敏原。它们可以是完全抗原，如异种动物血清、某些微生物、可以是完全抗原，如异种动物血清、某些微生物、花粉等；也可以是半抗原，如青霉素、磺胺等药物。花粉等；也可以是半
5、抗原，如青霉素、磺胺等药物。变态反应的发生与变应原的性质、剂量、进入机体变态反应的发生与变应原的性质、剂量、进入机体的途径及机体的免疫机能状态等因素有关。的途径及机体的免疫机能状态等因素有关。 根据变态反应的发生机理和临床特点，分为四个类型，称为为型、型、型和型变态反应。（一）（一）型变态反应型变态反应型变态反应又称过敏反应，是临床上最常见的变型变态反应又称过敏反应，是临床上最常见的变态反应。态反应。（1）本）本型特点型特点 反应发生快，消失也快，一般在接触过反应发生快，消失也快，一般在接触过敏原后数秒钟至数十秒钟内就出现反应，敏原后数秒钟至数十秒钟内就出现反应，数十分钟至数小时内即可消失；数
6、十分钟至数小时内即可消失；反应过程以生理功能紊乱为主，无明显反应过程以生理功能紊乱为主，无明显的组织损伤；的组织损伤；参与的抗体为参与的抗体为IgEIgE；有明显的个体差异，与遗传因素有关。有明显的个体差异，与遗传因素有关。（2 2）变应原）变应原引起引起型变态反应的变应原很多，主要型变态反应的变应原很多，主要为蛋白质或与蛋白质结合的化学半抗原，如花粉、尘螨、为蛋白质或与蛋白质结合的化学半抗原，如花粉、尘螨、霉菌、寄生虫、动物皮屑或羽毛、食物中的鱼、虾、蛋、霉菌、寄生虫、动物皮屑或羽毛、食物中的鱼、虾、蛋、奶、药物中的青霉素、链霉素、磺胺、麻醉药等均是重奶、药物中的青霉素、链霉素、磺胺、麻醉药
7、等均是重要的变应原。要的变应原。（3 3）常见疾病）常见疾病过敏性休克、呼吸道过敏反应、过敏性休克、呼吸道过敏反应、消化道过敏反应、皮肤过敏反应等均属于该型消化道过敏反应、皮肤过敏反应等均属于该型变态反应。变态反应。发生机理发生机理 型变态反应的发生分为两个阶段，第一型变态反应的发生分为两个阶段，第一阶段称致敏阶段，是机体第一次接触变应原，使机体阶段称致敏阶段，是机体第一次接触变应原，使机体处于致敏状态，不表现出疾病。处在致敏状态的机体处于致敏状态，不表现出疾病。处在致敏状态的机体再次接触变应原后即进入第二阶段（发敏阶段），表再次接触变应原后即进入第二阶段（发敏阶段），表现出过敏症状。现出过敏
8、症状。I型型超超敏敏反反应应的的发发生生机机理理IgE与肥大细胞脱题粒（二）型变态反应 型变态反应又称细胞溶解型或细胞毒型变态反应。型变态反应又称细胞溶解型或细胞毒型变态反应。 （1 1）本型特点）本型特点参与反应的抗体为参与反应的抗体为IgGIgG和和IgMIgM；有有补体、巨噬细胞及补体、巨噬细胞及K K细胞的参与，表现出的疾病主要细胞的参与，表现出的疾病主要为细胞溶解或损伤。为细胞溶解或损伤。 （2 2）变应原）变应原红细胞血型抗原，药物半抗原、微生物红细胞血型抗原，药物半抗原、微生物等吸附的靶细胞等。等吸附的靶细胞等。 （3 3）常见疾病）常见疾病物过敏性血细胞减少物过敏性血细胞减少症
9、、新生儿溶血症、输血症、新生儿溶血症、输血反应、自身免疫性溶血性反应、自身免疫性溶血性贫血、肺贫血、肺- -肺综合症等。肺综合症等。II型型超超敏敏反反应应的的发发生生机机理理II型型超超敏敏反反应应造造成成细细胞胞损损伤伤补体介导的溶菌反应补体介导的溶菌反应补体溶菌杀菌作用补体溶菌杀菌作用抗体介导的调理作用抗体介导的调理作用（三）型变态反应 本型又称免疫复合物型或血管炎型变态反应。 （1 1）本型特点）本型特点参与的抗体为参与的抗体为IgGIgG或或IgMIgM；变应原与相应变应原与相应抗体形成中等大小的可溶性免疫性复合物，并沉抗体形成中等大小的可溶性免疫性复合物，并沉积于血管基底膜等处；有
10、补体参与并导致组织积于血管基底膜等处；有补体参与并导致组织损伤。损伤。 （2 2）变应原）变应原某些细菌、病毒、寄生虫、异种动物血清及某些细菌、病毒、寄生虫、异种动物血清及某些药物等均可成为该型变态反应的变应原。某些药物等均可成为该型变态反应的变应原。 （3 3）常见疾病）常见疾病血清病、链球菌感染后的肾小球肾炎、类风湿血清病、链球菌感染后的肾小球肾炎、类风湿性关节炎、人类局部免疫复合物病等。性关节炎、人类局部免疫复合物病等。III型超敏反应的发生（四）型变态反应 型变态反应又称迟发型变态反应或细胞介导型变态反应。 （1）本型特点反应发生慢（一般发生于机体反应发生慢（一般发生于机体再次接触变应
11、原再次接触变应原484872h72h后），消失也慢；后），消失也慢； 由致由致敏淋巴细胞引起，与抗体和补体无关；病变部位敏淋巴细胞引起，与抗体和补体无关；病变部位以单个核细胞浸润和细胞坏死为主；多数无个体以单个核细胞浸润和细胞坏死为主；多数无个体差异。差异。（2）变应原引起引起型变态反应的变应原有胞内型变态反应的变应原有胞内寄生菌（如结核杆菌、麻风杆菌和布氏杆菌等）、寄生菌（如结核杆菌、麻风杆菌和布氏杆菌等）、病毒、某些真菌、小分子半抗原（青霉素、磺胺、病毒、某些真菌、小分子半抗原（青霉素、磺胺、农药、染料、油漆、塑料等）以及异体组织器官等。农药、染料、油漆、塑料等）以及异体组织器官等。型变态
12、反应的发生 （3）常见疾病：临床上临床上所见的传染性变态反应所见的传染性变态反应（如分枝杆菌、原虫、（如分枝杆菌、原虫、真菌感染）、接触性皮真菌感染）、接触性皮炎（如接触化学药品、炎（如接触化学药品、药物半抗原后引起的湿药物半抗原后引起的湿疹）、移植排斥反应、疹）、移植排斥反应、某些自身免疫病等均属某些自身免疫病等均属于于型变态反应。另外，型变态反应。另外，结核菌素皮肤试验时，结核菌素皮肤试验时，感染结核杆菌者的注射感染结核杆菌者的注射局部出现的红肿、硬结局部出现的红肿、硬结也属于也属于型变态反应。型变态反应。接触性皮炎系系统统性性红红斑斑狼狼疮疮 以上四种类型的变态反应是根据发生机制和参与的
13、成以上四种类型的变态反应是根据发生机制和参与的成分不同而划分的，临床实际情况却远较此复杂。分不同而划分的，临床实际情况却远较此复杂。某些某些变态反应疾病并非单一类型，可以是几型共存，而以变态反应疾病并非单一类型，可以是几型共存，而以某一类型为主某一类型为主。如肾小球肾炎，一般以。如肾小球肾炎，一般以型变态反应型变态反应为主，又有为主，又有、型超敏反应的机制参与。型超敏反应的机制参与。同一变应同一变应原在不同的机体可以引起不同类型的超敏反应，而且原在不同的机体可以引起不同类型的超敏反应，而且表现的轻重也差别很大表现的轻重也差别很大，如青霉素在不同的机体或者，如青霉素在不同的机体或者因使用时间长短
14、、剂量和途径等的不同可以引起因使用时间长短、剂量和途径等的不同可以引起型变态反应。青霉素引起的荨麻疹、哮喘、过敏性型变态反应。青霉素引起的荨麻疹、哮喘、过敏性休克属于休克属于型超敏反应；长期大剂量静脉注射青霉素型超敏反应；长期大剂量静脉注射青霉素引起的溶血性贫血属于引起的溶血性贫血属于型超敏反应；引起的关节炎型超敏反应；引起的关节炎属于属于型超敏反应；多次涂抹皮肤，引起的接触性皮型超敏反应；多次涂抹皮肤，引起的接触性皮炎又属于炎又属于型超敏反应。型超敏反应。（五）变态反应的防治 1、预防方面、预防方面（1）避免接触变应原）避免接触变应原询问病人及家属的过询问病人及家属的过敏史，查明变应原，尽量
15、避免与其接触。敏史，查明变应原，尽量避免与其接触。（2）皮肤过敏试验）皮肤过敏试验在使用青霉素、链霉素、在使用青霉素、链霉素、普鲁卡因、抗毒素等易引起过敏反应的药物普鲁卡因、抗毒素等易引起过敏反应的药物之前，除询问患者有无过敏史外，必须进行之前，除询问患者有无过敏史外，必须进行皮肤过敏试验。方法是将少量被试物质注入皮肤过敏试验。方法是将少量被试物质注入受试者皮内，在受试者皮内，在1030min内观察局部有无内观察局部有无红肿引起的硬结现象。红肿引起的硬结现象。 （3）脱敏疗法）脱敏疗法对已查明过敏原者，应尽量避免对已查明过敏原者，应尽量避免再接触变应原，对难以避免接触的患者，可用脱再接触变应原
16、，对难以避免接触的患者，可用脱敏疗法。例如，抗毒素皮试阳性而又必须采用时，敏疗法。例如，抗毒素皮试阳性而又必须采用时，可可将抗毒素血清分成小量，多次逐渐增量的方法将抗毒素血清分成小量，多次逐渐增量的方法注入体内，使患者逐渐脱去过敏性，暂时处于脱注入体内，使患者逐渐脱去过敏性，暂时处于脱敏状态敏状态，这时注入大量抗毒素血清不会发生过敏。，这时注入大量抗毒素血清不会发生过敏。 2、治疗方面、治疗方面 对已发生的过敏性疾病，临床上可根据疾病类对已发生的过敏性疾病，临床上可根据疾病类型、病情轻重采用不同的药物结合其它途径治疗，型、病情轻重采用不同的药物结合其它途径治疗，常用的抗过敏药物有：色甘酸二钠、
17、儿茶酚胺类、常用的抗过敏药物有：色甘酸二钠、儿茶酚胺类、茶碱类、苯海拉明、异丙嗪、扑尔敏、肾上腺素、茶碱类、苯海拉明、异丙嗪、扑尔敏、肾上腺素、肾上腺皮质激素类、环磷酰胺等。它们分别适应于肾上腺皮质激素类、环磷酰胺等。它们分别适应于不同类型和不同症状的过敏反应。不同类型和不同症状的过敏反应。三三. 疫苗疫苗 目前疫苗应用广泛，不仅预防，而且已作为治疗制剂使用。目前疫苗应用广泛，不仅预防，而且已作为治疗制剂使用。概念：概念：指用微生物制备而成的用于人工免疫的类生物制品指用微生物制备而成的用于人工免疫的类生物制品(剂剂)（抗原物质）（抗原物质）传统疫苗：传统疫苗：传统用于抗感染的免疫制剂传统用于抗
18、感染的免疫制剂死疫苗死疫苗活疫苗活疫苗类毒素类毒素新型疫苗：新型疫苗：近年来应用免疫学、生物化近年来应用免疫学、生物化 学和基因工程等新技术研制学和基因工程等新技术研制 的更有效和安全的免疫制剂的更有效和安全的免疫制剂亚单位疫苗亚单位疫苗结合疫苗结合疫苗重组抗原疫苗重组抗原疫苗重组载体疫苗重组载体疫苗合成肽疫苗合成肽疫苗DNA疫苗疫苗转基因植物疫苗转基因植物疫苗国际国际上统上统称为称为疫苗疫苗菌苗：菌苗：常将用细菌制备而成的制剂常将用细菌制备而成的制剂 疫苗疫苗：用病毒、螺旋体、立克次体制成的制剂：用病毒、螺旋体、立克次体制成的制剂 类毒素类毒素国内所指国内所指(一一) 传统疫苗传统疫苗-死疫
19、苗死疫苗 制备：制备：选用抗原性强的病原微生物选用抗原性强的病原微生物 人工大量培养人工大量培养 采用理化方法杀死采用理化方法杀死 制成免疫制剂（即死疫苗）制成免疫制剂（即死疫苗） 免疫原理：免疫原理：病原微生物失去了生长繁殖能力，但仍保留抗原性，病原微生物失去了生长繁殖能力，但仍保留抗原性， 进入机体后仍能刺激机体产生特异性抗体。进入机体后仍能刺激机体产生特异性抗体。 优点：优点：易制备、易保存，并且保存的时间较长。易制备、易保存，并且保存的时间较长。 缺点：缺点：a. 在体内不能繁殖，即抗原量不能增加，对机体刺激时间短，在体内不能繁殖，即抗原量不能增加，对机体刺激时间短， 免疫力维持时间也
20、短免疫力维持时间也短 b. 为维持血清抗体水平，常需多次接种为维持血清抗体水平，常需多次接种 c. 有可能引起较重的局部和全身反应有可能引起较重的局部和全身反应 为了减少接种次数及降低副作用，常将几种死疫苗混合制成联合疫苗。为了减少接种次数及降低副作用，常将几种死疫苗混合制成联合疫苗。 常用的死疫苗：常用的死疫苗：伤寒、霍乱、百日咳、乙型脑炎、狂犬病毒、钩端螺伤寒、霍乱、百日咳、乙型脑炎、狂犬病毒、钩端螺 旋体、流行性感冒病毒死疫苗旋体、流行性感冒病毒死疫苗3.1 传统疫苗传统疫苗-活疫苗活疫苗定义：定义：也称为减毒活疫苗，是选用无毒或充分减毒，但仍保留抗原性也称为减毒活疫苗，是选用无毒或充分
21、减毒，但仍保留抗原性 的活的病原微生物制成的免疫制剂。的活的病原微生物制成的免疫制剂。 免疫原理：免疫原理：接种入机体后有一定的繁殖力，产生特异性抗体，产生类接种入机体后有一定的繁殖力，产生特异性抗体，产生类 似轻型感染或隐性感染似轻型感染或隐性感染优点：优点：a. 微生物有一定的繁殖力，使抗原量有一定增加微生物有一定的繁殖力，使抗原量有一定增加 b. 接种量少，一般只需接种一次接种量少，一般只需接种一次 c. 免疫效果较好且持续时间长（免疫效果较好且持续时间长（15年）年）缺点：缺点：a. 制备和鉴定要求严格制备和鉴定要求严格 b. 难于保存和运输难于保存和运输 c. 有发生极为罕见的恢复突
22、变的可能性有发生极为罕见的恢复突变的可能性 用途：用途：a. 活疫苗的接种途径一般以自然感染途径为佳活疫苗的接种途径一般以自然感染途径为佳 b. 免疫缺陷者和孕妇一般不宜接种免疫缺陷者和孕妇一般不宜接种常用的活疫苗制剂常用的活疫苗制剂：卡介苗、麻疹活疫苗、脊髓灰质炎糖丸疫苗、牛痘苗等：卡介苗、麻疹活疫苗、脊髓灰质炎糖丸疫苗、牛痘苗等死疫苗和活疫苗的比较死疫苗和活疫苗的比较死疫苗死疫苗 活疫苗活疫苗 微生物性状微生物性状 微生物已死亡微生物已死亡 活微生物（无毒或减毒）活微生物（无毒或减毒） 制备和鉴定制备和鉴定 较容易，要求不太严格较容易，要求不太严格 难，要求严格难，要求严格 保存及有效期保
23、存及有效期 易保存，易保存，4可保存可保存1年左年左右右 不易保存，不易保存，4保存约保存约23个月个月 接种量及接种次数接种量及接种次数 较大，需多次反复接种较大，需多次反复接种 较小，一般只需接种一次较小，一般只需接种一次 免疫效果免疫效果 较差，持续较差，持续0.51年年较好，持续较好，持续15年年 使用方式使用方式 可几种混合使用可几种混合使用 多单独使用多单独使用 3.1 传统疫苗传统疫苗-类毒素类毒素定义：定义：将细菌产生的外毒素经将细菌产生的外毒素经0.30.4的甲醛处的甲醛处 理后，使其失去毒性仍保留抗原性而制成的免疫理后，使其失去毒性仍保留抗原性而制成的免疫制剂。制剂。 免疫
24、原理：免疫原理：接种后，能诱导机体产生特异性抗毒素抗接种后，能诱导机体产生特异性抗毒素抗体，抗毒素可中和相应的外毒素的毒性，以预防相应体，抗毒素可中和相应的外毒素的毒性，以预防相应的特异性疾病。的特异性疾病。常用的类毒素：常用的类毒素：百日咳、白喉、破伤风三联疫苗等。百日咳、白喉、破伤风三联疫苗等。3.2 新型疫苗新型疫苗 定定 义义 例例 子子亚单亚单位疫位疫苗苗将病原微生物体内与抗原无关将病原微生物体内与抗原无关甚至有害的成分去除，保留有甚至有害的成分去除，保留有效的抗原成分制成的免疫制剂效的抗原成分制成的免疫制剂如：从乙型肝炎病毒表面抗原阳性者血浆中提如：从乙型肝炎病毒表面抗原阳性者血浆
25、中提取表面抗原制成的乙型肝炎亚单位疫苗、流感取表面抗原制成的乙型肝炎亚单位疫苗、流感病毒亚单位疫苗等。病毒亚单位疫苗等。结合结合疫苗疫苗将某种抗原成分和载体通过化将某种抗原成分和载体通过化学连接，使抗原成分得以更好学连接，使抗原成分得以更好的表达而制成的免疫制剂的表达而制成的免疫制剂将细菌荚膜多糖抗原和白喉类毒素化学连接制将细菌荚膜多糖抗原和白喉类毒素化学连接制成的结合疫苗，获得了良好的免疫效果。目前成的结合疫苗，获得了良好的免疫效果。目前使用的结合疫苗有使用的结合疫苗有b型流感菌疫苗、脑膜炎球型流感菌疫苗、脑膜炎球菌疫苗和肺炎球菌疫苗等。菌疫苗和肺炎球菌疫苗等。重组重组抗原抗原疫苗疫苗利用利
26、用DNA重组技术制备的只含重组技术制备的只含抗原的纯化免疫制剂抗原的纯化免疫制剂此类疫苗由于不含活的病原微生物，所以更加此类疫苗由于不含活的病原微生物，所以更加安全，并且成本低廉。目前使用的有乙型肝炎安全，并且成本低廉。目前使用的有乙型肝炎表面抗原重组疫苗、口蹄疫重组疫苗等。表面抗原重组疫苗、口蹄疫重组疫苗等。重组重组载体载体疫苗疫苗将病原微生物编码抗原的基因将病原微生物编码抗原的基因通过基因工程手段插入载体通过基因工程手段插入载体（减毒的病毒或细菌疫苗株）（减毒的病毒或细菌疫苗株）基因组中制成的疫苗。基因组中制成的疫苗。目前应用或研制的有以痘状病毒疫苗为载体的目前应用或研制的有以痘状病毒疫苗
27、为载体的甲型和乙型肝炎、麻疹、单纯疱疹病毒载体疫甲型和乙型肝炎、麻疹、单纯疱疹病毒载体疫苗；以脊髓灰质炎疫苗为载体的霍乱弧菌载体苗；以脊髓灰质炎疫苗为载体的霍乱弧菌载体疫苗、痢疾杆菌载体疫苗等。疫苗、痢疾杆菌载体疫苗等。第二节第二节 血清学试验血清学试验 血清学试验：血清学试验：抗原、抗体在体外发生特异结合反应，用已抗原、抗体在体外发生特异结合反应，用已知抗原检测未知抗体，或用已知抗体检测未知抗原。知抗原检测未知抗体，或用已知抗体检测未知抗原。 血清学试验可用于疾病的诊断和药品的检测等。血清学试验可用于疾病的诊断和药品的检测等。 凝集反应：凝集反应：将颗粒性或细胞性抗原（细菌、红细将颗粒性或细
28、胞性抗原（细菌、红细 胞）与相应抗体混合，在电解质作用胞）与相应抗体混合，在电解质作用 下出现肉眼可见的凝集团块的反应下出现肉眼可见的凝集团块的反应直接凝集反应直接凝集反应间接凝集反应间接凝集反应沉淀反应沉淀反应：指将可溶性抗原（细菌浸出液、外毒指将可溶性抗原（细菌浸出液、外毒 素、血清等）与相应抗体混合，在电解素、血清等）与相应抗体混合，在电解 质存在下出现肉眼可见的沉淀物的反应质存在下出现肉眼可见的沉淀物的反应 环状沉淀法环状沉淀法琼脂扩散法琼脂扩散法免疫标记技术免疫标记技术：用荧光素、酶、放射性同位素等标记用荧光素、酶、放射性同位素等标记 抗原或抗体，使抗原抗体反应后易于抗原或抗体，使抗
29、原抗体反应后易于 观察，敏感性和特异性明显提高，能观察，敏感性和特异性明显提高，能 较快速的测出少量抗原或抗体较快速的测出少量抗原或抗体荧光素标记荧光素标记技术间接法技术间接法免疫电泳免疫电泳常常用用血血清清学学试试验验2.1 凝集反应凝集反应-直接凝集反应直接凝集反应直接凝集反应直接凝集反应：将颗粒性抗原与相应抗体直接混合，观察将颗粒性抗原与相应抗体直接混合，观察 有无肉眼可见的凝集块的反应。有无肉眼可见的凝集块的反应。 玻片凝集试验玻片凝集试验：定性法，适于用已知抗原（抗体）定性的鉴定性法，适于用已知抗原（抗体）定性的鉴 定未知抗体（抗原）。常用于鉴定血型和菌种等。如定未知抗体（抗原）。常
30、用于鉴定血型和菌种等。如沙门菌的沙门菌的AF多价反应。多价反应。试管凝集实验试管凝集实验：定量法，在试管内用已知抗原检测病人血清中相定量法，在试管内用已知抗原检测病人血清中相 副伤寒的副伤寒的应的未知抗体及其含量。如用于诊断伤寒和应的未知抗体及其含量。如用于诊断伤寒和 肥达反应，诊断斑疹伤寒和恙虫热的外斐氏反应。肥达反应，诊断斑疹伤寒和恙虫热的外斐氏反应。凝凝集集反反应应原原理理结果判断：结果判断：形成凝集块抗原形成凝集块抗原抗体结合，待检物中含有相应的抗抗体结合，待检物中含有相应的抗原或抗体原或抗体 不形成凝集块抗原抗不形成凝集块抗原抗体未结合，待检物中不含有相应的体未结合，待检物中不含有相
31、应的抗原或抗原或 抗体抗体直接凝集反应示意图直接凝集反应示意图1.抗原（凝集原）抗原（凝集原）2.抗体（凝集素）抗体（凝集素）3.凝集现象凝集现象凝集反应结果判断凝集反应结果判断试分析玻片凝集试验结果试分析玻片凝集试验结果抗抗A血清血清+被检者红细胞被检者红细胞 抗抗B血清血清+被检者红细胞被检者红细胞 被检者血型被检者血型未凝集未凝集 未凝集未凝集 ？未凝集未凝集 未凝集未凝集 ？凝集凝集 未凝集未凝集 ？凝集凝集 凝集凝集 ？未凝集未凝集 凝集凝集 ？试管凝集实验结果判断试管凝集实验结果判断凝集效价的确定：凝集效价的确定：出现出现“+”判定结果的血清最高稀释度为该血清判定结果的血清最高稀释
32、度为该血清 的凝集效价。的凝集效价。 血清稀释度应以加入抗原后的最后血清稀释度计算。血清稀释度应以加入抗原后的最后血清稀释度计算。 如第如第1管管1 10稀释的血清稀释的血清0.5mL，加入抗原，加入抗原0.5mL，则最后，则最后 的血清稀释度为的血清稀释度为1 20。注意结果观察时，应有良好的光源和黑暗背景注意结果观察时，应有良好的光源和黑暗背景液体液体管底管底判定判定清晰透明清晰透明较清晰，有轻度混较清晰，有轻度混浊浊中等混浊中等混浊较混浊较混浊同对照管同对照管有棉絮状或颗粒状凝集块，轻摇可见大凝集有棉絮状或颗粒状凝集块，轻摇可见大凝集块飘起块飘起凝集块较上稍小，轻摇可见大凝集块飘起凝集块
33、较上稍小，轻摇可见大凝集块飘起凝集块较轻度混浊的小凝集块较轻度混浊的小有少量小凝集块有少量小凝集块无凝集块，可能有少许细菌沉淀，轻摇即飘无凝集块，可能有少许细菌沉淀，轻摇即飘起起+-2.1 凝集反应凝集反应-间接凝集反应间接凝集反应间接凝集反应间接凝集反应：将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关的载体颗粒：将可溶性抗原吸附于一种与免疫无关的载体颗粒（如聚苯乙烯乳胶颗粒，人（如聚苯乙烯乳胶颗粒，人O型红细胞）表面，成为致敏颗粒。型红细胞）表面，成为致敏颗粒。致敏颗粒与相应抗体相遇，在电解质存在下即发生凝集现象。致敏颗粒与相应抗体相遇，在电解质存在下即发生凝集现象。用途：主要用于测细菌抗体、病毒抗体、某
34、些变态反应患者的抗用途：主要用于测细菌抗体、病毒抗体、某些变态反应患者的抗体等。体等。凝集反应示意图凝集反应示意图2.2 沉淀反应沉淀反应 沉淀反应沉淀反应：指将指将可溶性抗原可溶性抗原（细菌浸出液、（细菌浸出液、外毒素、血清等）与相应抗体混合，在电解外毒素、血清等）与相应抗体混合，在电解质存在下出现肉眼可见的沉淀物的反应。反质存在下出现肉眼可见的沉淀物的反应。反应中的抗原称为沉淀原，抗体称为沉淀素。应中的抗原称为沉淀原，抗体称为沉淀素。 抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等，做定量试抗原可以是多糖、蛋白质、类脂等，做定量试验时，应稀释抗原，并以抗原的稀释度作为沉淀验时，应稀释抗原，并以抗原的稀释度
35、作为沉淀反应的效价。反应的效价。常常用用的的沉沉淀淀实实验验免疫电泳免疫电泳(可不讲可不讲)双向扩散：将抗原、抗体置于不同的琼脂孔内，同时向四周双向扩散：将抗原、抗体置于不同的琼脂孔内，同时向四周 扩散，二者相遇时如果相对应即可形成白色沉淀扩散，二者相遇时如果相对应即可形成白色沉淀 线，为阳性反应。线，为阳性反应。单向扩散单向扩散可溶性抗原和抗体均在琼脂中扩散，如果两者互可溶性抗原和抗体均在琼脂中扩散，如果两者互相对应且浓度合适，即可在相遇处形成白色沉淀，相对应且浓度合适，即可在相遇处形成白色沉淀，称称 为阳性反应，否者称为阴性反为阳性反应，否者称为阴性反应应.（二）（二）琼脂琼脂 扩散法扩散
36、法 ：原原理：理：a. 操作：在小试管内加入适量高浓度已知抗体血清，然后将操作：在小试管内加入适量高浓度已知抗体血清，然后将待检的等量可溶性抗原沿管壁缓慢叠加于抗体血清之上，使待检的等量可溶性抗原沿管壁缓慢叠加于抗体血清之上，使成为界限分明的两层，静置后，观察交界处有无乳白色沉淀成为界限分明的两层，静置后，观察交界处有无乳白色沉淀环出现。环出现。 b. 结果判断：有者为阳性，否者为阴性。结果判断：有者为阳性，否者为阴性。 c. 用途：主要用于检测及鉴定可溶性抗原，如法医鉴定血迹。用途：主要用于检测及鉴定可溶性抗原，如法医鉴定血迹。（一）（一）环状环状 沉淀法沉淀法 ：2、实验方法、实验方法（1
37、）制备琼脂板）制备琼脂板将熔化并冷却到约将熔化并冷却到约50的的1.2的生理盐水琼脂的生理盐水琼脂3mL，浇注，浇注于载玻片上，使冷却制成琼脂厚约于载玻片上，使冷却制成琼脂厚约2mm的平板。制备时玻片要放平，使琼脂厚的平板。制备时玻片要放平，使琼脂厚薄均匀。薄均匀。（2）打孔）打孔按图所示在琼脂板上用打孔按图所示在琼脂板上用打孔器打孔，吸净孔中琼脂，注意不能损坏器打孔，吸净孔中琼脂，注意不能损坏孔的边缘。孔的边缘。（3）加注抗原、抗体）加注抗原、抗体在中心孔内加在中心孔内加羊抗兔抗体血清，第孔加标准抗原羊抗兔抗体血清，第孔加标准抗原（兔抗体）作为阳性对照，第孔加生（兔抗体）作为阳性对照，第孔加
38、生理盐水作为阴性对照，第孔加被理盐水作为阴性对照，第孔加被检者血清（兔血清）。注意加样高度应检者血清（兔血清）。注意加样高度应与孔的上缘相平，且不能溢出。与孔的上缘相平，且不能溢出。（4）将玻片置于湿盒内，于）将玻片置于湿盒内，于37培养箱培养箱内放置内放置68h后，再在室温中放置后，再在室温中放置1824h，观察结果。，观察结果。3、结果、结果（1）待检血清孔和中心孔之间出现白色）待检血清孔和中心孔之间出现白色沉淀线，并与阳性血清（第孔）的沉沉淀线，并与阳性血清（第孔）的沉淀线对照，相同者为阳性。淀线对照，相同者为阳性。（2）96h后仍没有沉淀线，与生理盐水后仍没有沉淀线，与生理盐水（第孔）
39、对照，相同者为阴性。（第孔）对照，相同者为阴性。.抗体；分别为抗原抗体；分别为抗原2.3 免疫标记技术免疫标记技术-间接法间接法采用两对抗原抗体系统采用两对抗原抗体系统。如果测定组织内抗原，第一对是待检抗原与如果测定组织内抗原，第一对是待检抗原与相应抗体（第一抗体）；第二对是第一抗体及相应荧光素标记的抗抗体。相应抗体（第一抗体）；第二对是第一抗体及相应荧光素标记的抗抗体。如果测定血清抗体效价，第一对是已知抗原及待检血清（第一抗体），如果测定血清抗体效价，第一对是已知抗原及待检血清（第一抗体），第二对是待检血清及相应荧光标记抗抗体。第二对是待检血清及相应荧光标记抗抗体。实验时先将待测的抗原（抗体
40、）与未标记的已知抗体（抗原）作用，经实验时先将待测的抗原（抗体）与未标记的已知抗体（抗原）作用，经洗涤除去游离抗原（抗体）后，再滴加荧光标记的抗抗体，充分洗涤，洗涤除去游离抗原（抗体）后，再滴加荧光标记的抗抗体，充分洗涤，除去未结合的荧光抗抗体，置荧光显微镜下观察，若见到荧光，表示有除去未结合的荧光抗抗体，置荧光显微镜下观察，若见到荧光，表示有抗原抗体抗抗体复合物存在，即抗原抗体相对应。抗原抗体抗抗体复合物存在，即抗原抗体相对应。荧光标记图荧光标记图总结：总结： 1、基础知识（疫苗、基础知识（疫苗、血清学试验、血清学试验、凝集反应、沉淀反应、凝集反应、沉淀反应、变态反应的概念发生机制）变态反应
41、的概念发生机制）2、死疫苗和活疫苗的区别、死疫苗和活疫苗的区别3、常用的沉淀实验、常用的沉淀实验布置作业：布置作业：1、解词：疫苗、凝集反应、沉淀反应、解词：疫苗、凝集反应、沉淀反应、变态反应 2、比较死疫苗和活疫苗的区别。、比较死疫苗和活疫苗的区别。 7、试管凝集实验的结果如何判断？、试管凝集实验的结果如何判断？ 8、如何根据免疫荧光实验判断结果？、如何根据免疫荧光实验判断结果？一、填空题（将合适的答案填在空格内）一、填空题（将合适的答案填在空格内）1、可检测抗原的凝集反应试验方法包括、可检测抗原的凝集反应试验方法包括_、_和和_。2 、变态反应包括、变态反应包括_、_和和_ 、_类型二、选
42、择题（在下列备选答案中选取正确答案，二、选择题（在下列备选答案中选取正确答案，将其序号填在括号里）将其序号填在括号里） 1、活疫苗的优点不包括（、活疫苗的优点不包括（ ） A接种量小接种量小 B接种次数少接种次数少 C易保存易保存 D类似隐性感染类似隐性感染 E免疫维持时间长免疫维持时间长 2 、 型变态反应特点包括（型变态反应特点包括（ ） 反应发生快，消失也快；反应发生快，消失也快； 反应过程有明反应过程有明显的组织损伤；显的组织损伤； 参与的抗体为参与的抗体为IgE； 有补有补体、巨噬细胞及体、巨噬细胞及K细胞的参与细胞的参与 3、 血清中含量最高的抗体类型是血清中含量最高的抗体类型是(
43、 ) A. IgA B. IgG C. IgM D. IgD E. IgE4、 再次应答时抗体产生的主要类别是再次应答时抗体产生的主要类别是( )A. IgM B. IgGC. IgE D. IgDE. IgA 5、属于属于I型超敏反应的疾病是型超敏反应的疾病是( )A. 过敏性休克过敏性休克 B. 接触性皮炎接触性皮炎C. 类风湿性关节炎类风湿性关节炎 D. 新生儿溶血症新生儿溶血症E. 肾小球肾炎肾小球肾炎6、属于、属于型超敏反应性疾病的是（型超敏反应性疾病的是（ ）A 血清过敏性休克血清过敏性休克B 接触性皮炎接触性皮炎C类风湿性关节炎类风湿性关节炎D新生儿溶血症新生儿溶血症E急性急性麻疹麻疹
