1、 掌握制药卫生的重要性；物理灭菌法 熟悉制药卫生基本要求和染菌途径及其除菌方法；熟悉洁净室净化标准及适用范围 了解中药制剂的卫生标准；无菌操作等第一节第一节 概概 述述制药卫生制药卫生的的重要性重要性中药制剂的卫生标准与检验方法中药制剂的卫生标准与检验方法微生物污染的途径及预防措施微生物污染的途径及预防措施微生物污染导致微生物污染导致药剂变质、腐败药剂变质、腐败疗效降低、丧失疗效降低、丧失产生有害物质引起机体感染、发热、产生有害物质引起机体感染、发热、中毒、致癌中毒、致癌制药卫生制药卫生的重要性的重要性 涉及制药全过程的卫生管理涉及制药全过程的卫生管理 药品生产管理的重要内容药品生产管理的重要
2、内容 确保制药卫生的重要手段确保制药卫生的重要手段 必须符合必须符合GMP的要求的要求 制药卫生主要论述制药卫生主要论述药剂微生药剂微生物方面的要求物方面的要求及达到要求及达到要求所采取所采取的措施和方法的措施和方法。研究主要内容：研究主要内容： 如何除去或杀灭微生物的措施；如何除去或杀灭微生物的措施； 如何防止被微生物污染；如何防止被微生物污染； 如何抑制微生物生长繁殖（防腐）的措如何抑制微生物生长繁殖（防腐）的措施。施。中药制剂的卫生标准与检验方法中药制剂的卫生标准与检验方法检查方法检查方法热原检查法热原检查法无菌检查法无菌检查法微生物限度检查微生物限度检查细菌内毒素检查细菌内毒素检查热原
3、检查热原检查将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内观察家兔体温升高情内，在规定时间内观察家兔体温升高情况。况。热原是微生物产生的能引起人及恒温动热原是微生物产生的能引起人及恒温动物体温异常升高的物质。物体温异常升高的物质。注射液注射液无菌检查无菌检查 检查中国药典要求无菌的药品、原料、辅检查中国药典要求无菌的药品、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。料及其他品种是否无菌的一种方法。 薄膜过滤法或直接接种法。薄膜过滤法或直接接种法。 无菌无菌条件下条件下进行进行，环境达到无菌要求，环境达到无菌要求 手术、严重烧伤、严重创伤的局部给药制手术、严重烧
4、伤、严重创伤的局部给药制剂应符合无菌检查法规定。剂应符合无菌检查法规定。微生物限度检查微生物限度检查检查非无菌制剂及其原料、辅料受微生物检查非无菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。污染程度的方法。需氧菌总数、霉菌、酵母菌总数和控制菌需氧菌总数、霉菌、酵母菌总数和控制菌药品生产流通各环节均有微生物限度要求。药品生产流通各环节均有微生物限度要求。细菌内毒素检查细菌内毒素检查 鲎试剂检测鲎试剂检测 量化由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素量化由革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素 凝胶法和光度测定法凝胶法和光度测定法微生物污染的途径及预防措施 （一）生产物料的选择与处理（一）生产物料的选择与处理 饮片、辅
5、料饮片、辅料 包装材料包装材料 （二）生产过程与贮藏过程的控制（二）生产过程与贮藏过程的控制 环境条件环境条件 制药器械制药器械 操作人员操作人员 运输贮藏运输贮藏第二节第二节 制药环境的卫生管理制药环境的卫生管理中药制药环境的基本要求空气洁净技术与应用洁净室的净化标准 厂区环境 选址自然环境好、无污染地区选址自然环境好、无污染地区 厂区绿化等厂区绿化等 厂区布局 根据气候、工艺等进行科学规划根据气候、工艺等进行科学规划 厂房设计和设施要求 按工艺流程及洁净级别要求按工艺流程及洁净级别要求 人流、物流分开人流、物流分开厂区规划：总体设计厂房设计：工艺流程物料人员净化厂房设施： 空气洁净技术空气
6、洁净技术 创造洁净空气环境的技术创造洁净空气环境的技术 空气洁净度空气洁净度 洁净环境中空气的含尘（微粒）的程度洁净环境中空气的含尘（微粒）的程度 空气洁净级别空气洁净级别 以单位体积空气中含粒径以单位体积空气中含粒径0.5m的微粒的最大的微粒的最大允许粒数来确定允许粒数来确定空气洁净技术发展简史空气洁净技术发展简史 19世纪中叶 洁净室概念洁净室概念 手术室喷洒石碳酸（苯酚）溶液控制感染手术室喷洒石碳酸（苯酚）溶液控制感染 19世纪末，显微技术发展，细菌发现，重视手术室消毒 20世纪初，美国航空仪表生产中，“控制装配区”，过滤空气 1940，美国创建第一座洁净室“洁白的工作室” 1950，高
7、效空气粒子过滤器问世，里程碑 1961，世界最早的洁净室标准，美国空军技术条令203 1963，洁净室第一个军用部分的联邦标准FS209世界最通行、最著名世界最通行、最著名基于层流概念基于层流概念奠定了各种洁净室标准的基础奠定了各种洁净室标准的基础 发展过程发展过程 20世纪世纪40-50年代，大量电子仪器失灵年代，大量电子仪器失灵 60年代，宇航技术对电子元件的要求年代，宇航技术对电子元件的要求 70年代，集成电路大生产年代，集成电路大生产 80年代，超大规模集成电路发展年代，超大规模集成电路发展空气洁净技术空气洁净技术层流洁净技术层流洁净技术非层流洁净技术非层流洁净技术层流洁净技术 高度净
8、化的气流作为载体，将操作室内的尘粒以平行层流的状态排出的空气净化方式。 挤压原理 气体流动形式：单向流 垂直层流，水平层流非层流技术非层流技术用高度净化的空气将操作室内的尘用高度净化的空气将操作室内的尘粒加以稀释的空气净化方式，粒加以稀释的空气净化方式，稀释原理稀释原理气体运功形式：乱流、非单向流、气体运功形式：乱流、非单向流、紊流紊流洁净室的净化标准洁净室的净化标准 静态、动态静态、动态 洁净区分级：洁净区分级： A级级 高风险操作区高风险操作区 B级级 无菌配制和灌装等高风险操作无菌配制和灌装等高风险操作A级的背景区域级的背景区域 C级级 生产无菌药品过程中重要程度较低的生产无菌药品过程中
9、重要程度较低的 D级级 含含C及非无菌制剂生产的暴露工序区域及直接及非无菌制剂生产的暴露工序区域及直接接触药品包装材料最终处理暴露工序区域接触药品包装材料最终处理暴露工序区域洁净度级别 悬浮粒子最大允许数/立方米（静态） 悬浮粒子最大允许数/立方米（动态）0.5m5m0.5m5mA3,520203,50020B3,52029352,0002,900C352,0002,9003,520,00029,000D3,520,00029,000不作规定不作规定洁净度级别 浮游菌cfu/m3沉降菌（90mm）cfu/4h表面微生物接触碟（55mm）cfu/碟手套5指手套 cfu/手套A1111B10555
10、C1005025 -D 200100 50 -人员净化人员净化洁净区的卫生管理洁净区的卫生管理物流净化等物流净化等第三节第三节 灭菌方法与灭菌操作灭菌方法与灭菌操作基本概念基本概念灭菌工艺有关参数及相关性灭菌工艺有关参数及相关性物理灭菌法物理灭菌法化学灭菌法化学灭菌法无菌生产工艺无菌生产工艺基本概念基本概念灭菌灭菌 采用物理或化学等方法将所有致病和非致病的微生物、繁殖体和采用物理或化学等方法将所有致病和非致病的微生物、繁殖体和芽孢全部杀灭的技术。芽孢全部杀灭的技术。除菌除菌 是利用过滤介质或静电法将杂菌予以捕集、截留的技术。是利用过滤介质或静电法将杂菌予以捕集、截留的技术。消毒消毒 以物理或化
11、学方法杀死或除去病原微生物的技术以物理或化学方法杀死或除去病原微生物的技术防腐或抑菌防腐或抑菌 用低温或化学药品方法防止和抑制微生物的生长与繁殖的技术，用低温或化学药品方法防止和抑制微生物的生长与繁殖的技术，灭菌法灭菌法 指用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物杀灭或除去，从指用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物杀灭或除去，从而使物品残存活微生物的概率下降至预期的无菌保证水平（而使物品残存活微生物的概率下降至预期的无菌保证水平（SAL）的方法。的方法。 SAL10-6无菌操作法无菌操作法 将制备过程控制在无菌环境下进行操作的一种技术。将制备过程控制在无菌环境下进行操作的一种技术。无菌法无
12、菌法物理灭菌法物理灭菌法热灭菌法热灭菌法干热灭菌法干热灭菌法湿热灭菌法湿热灭菌法射线灭菌法射线灭菌法滤过灭菌法滤过灭菌法化学灭菌法化学灭菌法气体灭菌法气体灭菌法化学药剂杀菌法化学药剂杀菌法灭菌工艺有关参数及相关性灭菌工艺有关参数及相关性D值Z值F值F0值无菌保证水平D：微生物的耐热参数微生物的耐热参数 微生物的死亡为一级动力学过程 D值：一定灭菌温度下被灭菌物品中微生物减少90%（即下降一个对数单位）所需时间(min) 0 t2.303t(lgN - lgN )kt0ktlgN = lgN 2.30302.3032.3032.303Dt(lgNlgN )(lg100lg10)kkkt z：灭菌
13、温度系数灭菌温度系数Z值值: 降低一个降低一个logD值所需升高的温度数。值所需升高的温度数。单位单位：度：度Z值也可以看作灭菌时间减少到原来的值也可以看作灭菌时间减少到原来的1/10所需所需升高的温度值。上式重排：升高的温度值。上式重排： 上式的意义为，上式的意义为，Z值一定时，以温度值一定时，以温度T1灭菌所灭菌所产生的灭菌效果与温度产生的灭菌效果与温度T2灭菌效果相同，所灭菌效果相同，所相当温度相当温度T2灭菌的时间。灭菌的时间。1221TTZlgDlgDZTTDD211012 F F值值: :在一定温度下，给定在一定温度下，给定Z Z值所产生的灭菌值所产生的灭菌效果，与设计的参比温度效
14、果，与设计的参比温度T T0 0给定给定Z Z值所产生值所产生的灭菌效果相同时所相当的时间（的灭菌效果相同时所相当的时间（minmin）. .0T TZFt 10 F F0 0值值: : 为一定灭菌温度（为一定灭菌温度（T T）、）、 Z Z值为值为1010产生的灭菌效果与产生的灭菌效果与121 Z121 Z值值10 10 产生的产生的灭菌效力相同时所相当的时间灭菌效力相同时所相当的时间. .T 121100Ft 10 举例举例1 1： 灭菌过程中不同时间的温度灭菌过程中不同时间的温度 F F0 0值表示上述灭菌效果等于值表示上述灭菌效果等于121121热压灭菌热压灭菌8.508.50分钟产生
15、的分钟产生的灭菌效果。灭菌效果。F F0 08.0时间时间0123.41424344温度温度100102104106.108106102100T 121100(100 121)/10(102 121)/10(104 121)/10(100 121 )/100Ft 10F1101010.108.5(min) F F0 0值：可看作相当于值：可看作相当于121121热压灭菌时，杀热压灭菌时，杀灭物品中全部微生物所需时间。灭物品中全部微生物所需时间。6 0 0121 F = D( lgNlg10) F0值对验证灭菌效果有重要意义 对温度的变化敏感对温度的变化敏感 将将T T与与t t统一在一个参数中
16、统一在一个参数中 将不同灭菌将不同灭菌T T计算到相当于计算到相当于121湿热灭菌时的湿热灭菌时的效力效力, ,可作灭菌过程的比较参数可作灭菌过程的比较参数 USP/Ch.PUSP/Ch.P 输液剂灭菌输液剂灭菌F08，为确保灭菌效果，实际操作应将计为确保灭菌效果，实际操作应将计算的算的F0增加增加50% 6 0 0121600 F = D( lgNlg10)F2.4 (lg200lg10 )F19.92(min)举例举例1 1： 含有含有200200个嗜热脂肪芽孢杆菌的个嗜热脂肪芽孢杆菌的5 5葡萄糖水葡萄糖水溶液蒸汽灭菌，以溶液蒸汽灭菌，以121 121 热压灭菌时，热压灭菌时，D D值值
17、为为2.42.4分钟，求分钟，求 F F0 0值值灭灭 菌菌 参参 数数 意意 义义D D值值微生物杀死微生物杀死90%90%所需的时间所需的时间Z Z值值衡量温度对衡量温度对D D值影响值影响F F值值比较不同灭菌温度的灭菌效果比较不同灭菌温度的灭菌效果F F0 0值值1.F1.F0 0值是值是F F值的特定值值的特定值2.F2.F0 0值是最重要的灭菌参数值是最重要的灭菌参数无菌保证水平无菌保证水平Sterility Assurance Level 一项灭菌工艺赋予产品无菌保证的程度。一项灭菌工艺赋予产品无菌保证的程度。 一项灭菌工艺的无菌保证水平用该灭菌批中非一项灭菌工艺的无菌保证水平用
18、该灭菌批中非无菌品的概率来表示。无菌品的概率来表示。 SAL为为10-6物理灭菌法物理灭菌法指采用加热、指采用加热、射线和过滤方法杀灭或除射线和过滤方法杀灭或除去微生物的技术。去微生物的技术。热灭菌法热灭菌法干热灭菌法干热灭菌法火焰火焰灭菌灭菌法法干热干热空气空气灭菌灭菌法法湿热灭菌法湿热灭菌法热压热压灭菌灭菌法法流通流通蒸汽蒸汽灭菌灭菌法法煮沸煮沸灭菌灭菌法法低温低温间歇间歇灭菌灭菌法法射线灭菌法射线灭菌法辐射辐射灭菌灭菌法法紫外紫外线灭线灭菌法菌法微波微波灭菌灭菌法法滤过滤过除菌除菌法法 干热灭菌法干热灭菌法 火焰灭菌火焰灭菌 置于火焰上直接灼烧置于火焰上直接灼烧 简便、可靠简便、可靠 干
19、热空气灭菌干热空气灭菌 长时间高热作用长时间高热作用 160170 /2h以上以上 170180/1h以上以上 250/45min以上以上 杀热原杀热原 适于耐高温的玻璃适于耐高温的玻璃、金属制品金属制品、油脂类（某些软膏基质、油）油脂类（某些软膏基质、油）湿热灭菌无效的非水性物质（甘油、液体石蜡等）、耐高温的湿热灭菌无效的非水性物质（甘油、液体石蜡等）、耐高温的粉末化学药品粉末化学药品等等湿热灭菌法湿热灭菌法 利用蒸汽利用蒸汽/沸水沸水 效果可靠、操作简便效果可靠、操作简便 应用最广泛应用最广泛 蒸气比热大，穿透力强，蒸气比热大，穿透力强， 所以灭菌效力所以灭菌效力 高于干热灭高于干热灭菌法
20、。菌法。 包括包括 热压灭菌热压灭菌 流通蒸汽灭菌流通蒸汽灭菌 煮沸灭菌煮沸灭菌 低温间歇灭菌低温间歇灭菌热压灭菌热压灭菌高压容器+高压水蒸气最可靠/能杀灭所有增殖体和芽孢适于耐热/压的药物制剂热压灭菌常用参数热压灭菌常用参数温度温度 表压表压(kPa)时间时间(min)11568.630121.598.020126.5137.215热压灭菌容器操作注意热压灭菌容器操作注意 使用前认真检查设备的完好性 灭菌时须先将灭菌器中冷空气排出，以保证最佳灭菌效果应从待灭菌物品到达预定温度时算起 灭菌完毕后停止加热，待压力表降至0，放汽、开启灭菌器，物品温度降至80 以下时才能将灭菌器门全部开启流通蒸汽灭
21、菌流通蒸汽灭菌/煮沸灭菌煮沸灭菌不密闭的容器不密闭的容器+100 蒸汽蒸汽/水水不能保证杀灭所有细菌的芽孢不能保证杀灭所有细菌的芽孢灭菌操作时间灭菌操作时间30min/60min适用于消毒及不耐热的无菌产品的辅助灭适用于消毒及不耐热的无菌产品的辅助灭菌菌低温间歇灭菌低温间歇灭菌 操作操作 60-80，加热加热1h + 室温室温24h放置放置 重复操作重复操作3次以上次以上 适于必须加热灭菌而又不耐高温者适于必须加热灭菌而又不耐高温者 时间长，效果不理想时间长，效果不理想 须加抑菌剂须加抑菌剂 影响湿热灭菌的因素影响湿热灭菌的因素微生物种类和数量微生物种类和数量药物与介质药物与介质药物药物介质：
22、中性、碱性、酸性介质：中性、碱性、酸性蒸汽的性质蒸汽的性质饱和蒸汽饱和蒸汽 热含量高热含量高 ，潜热大潜热大， 穿透力强穿透力强湿饱和蒸汽湿饱和蒸汽 低低过热蒸汽过热蒸汽 穿透力差穿透力差灭菌灭菌温度和温度和时间时间被灭菌的物品种类、大小、灭菌载量及装载方式等被灭菌的物品种类、大小、灭菌载量及装载方式等辐射灭菌法辐射灭菌法60Co或或Cs放射的放射的射线射线 穿透力强穿透力强不升高温度不升高温度设备费用高设备费用高辐射能引起一些药物辐射能引起一些药物pH值、含量、活性值、含量、活性等改变，某些制品不宜选用等改变，某些制品不宜选用对其灭菌物品进行吸收辐射剂量监控对其灭菌物品进行吸收辐射剂量监控紫
23、外线灭菌法紫外线灭菌法 UV200-300nm, 254-257nm最强 原理 促使核酸蛋白变性促使核酸蛋白变性 使产生臭氧，共同杀菌使产生臭氧，共同杀菌 用于空气灭菌和表面灭菌； 效果与微生物敏感性有关，对酵母或霉菌力弱 注意防护皮肤和眼睛微波灭菌法微波灭菌法 频率范围频率范围300MHz-300kMHz 灭菌时间灭菌时间3-6min 原理原理 强烈热效应；强烈热效应；“体加热体加热” 强电场破坏作用强电场破坏作用 快速、高效、均匀快速、高效、均匀、保质期长、保质期长 被灭菌物体必须含水被灭菌物体必须含水隧道式微波微波干燥灭菌灭菌机微波微波液体灭菌机液体灭菌机微波微波药丸药丸干燥灭菌灭菌机滤
24、过除菌法滤过除菌法 致密具孔滤材致密具孔滤材 繁殖型微生物繁殖型微生物1um，芽孢约芽孢约0.5um或以下或以下 0.45um可滤去大多数细菌，可滤去大多数细菌，0.15um可滤去热原可滤去热原 适于不耐热溶液，须进行无菌操作，加防腐剂适于不耐热溶液，须进行无菌操作，加防腐剂 滤材：滤材：G6垂熔玻璃漏斗，微孔薄膜滤器，白陶垂熔玻璃漏斗，微孔薄膜滤器，白陶土滤柱土滤柱化学灭菌法化学灭菌法化学药品直接杀灭微生物不能杀死芽孢，只杀死繁殖体分类气体灭菌法消毒剂消毒法环氧乙烷环氧乙烷无色醚样臭味气体，沸点10.8，沸点以下为无色透明液体，比重0.882，溶于水。(CH2)2O:CO2(10:90);
25、(CH2)2O:Freon(12:88)扩散穿透能力强，属广谱杀菌剂；用于对热敏感的药物等的灭菌；时间长，费用贵。过氧乙酸过氧乙酸0.5%溶液用于空气（喷雾30ml/m3）等消毒，临用前配制本品广谱、高效、速效，毒性低，苯酚苯酚（石炭酸）（石炭酸） 35% 地面、墙壁喷撒甲酚皂溶液甲酚皂溶液（来苏尔）（来苏尔） 5100% 地面、墙壁喷撒40%甲醛溶液甲醛溶液（福尔马林）（福尔马林）20ml/m3加热蒸发,612h粘膜强烈刺激乳乳 酸酸1ml/m3加热蒸发0.51h无毒苯扎溴铵苯扎溴铵1/10001/2000溶液喷撒丙二醇丙二醇1ml/m3加热蒸发不挥发，不易燃无菌操作工艺无菌操作工艺整个过程
26、控制在无菌条件下进行用具、材料、环境均须灭菌适于不宜采用加热灭菌或其他方法灭菌者须在无菌操作室、柜内进行无菌操作室的灭菌无菌操作室的灭菌空气空气气体灭菌气体灭菌 + 除菌除菌用具、墙面等用具、墙面等3%酚、酚、2%煤酚皂、煤酚皂、0.2%新洁尔灭、新洁尔灭、75%乙醇乙醇工作前：工作前：UV 1h超净工作台超净工作台工作原理工作原理 利用鼓风机驱动空气遁过高利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化粒，使空气得到净化 净化空气徐徐通过工作台面，净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境使工作台内构成无菌环境 第四节第四节 防防 腐腐 防腐
27、防止微生物污染防止微生物污染 预防措施预防措施 选用防腐剂选用防腐剂 防腐 防止微生物污染防止微生物污染 预防措施预防措施 选用防腐剂选用防腐剂 防虫 防止害虫危害防止害虫危害 杜绝虫源杜绝虫源 物理防虫物理防虫 化学防虫化学防虫常用防腐剂常用防腐剂1名称名称性质性质常用浓度常用浓度(%)(%)应用特点应用特点抑菌效力抑菌效力苯甲酸苯甲酸/钠钠Benzoic Acid白色，无臭或微臭0.1-0.25抑菌力与pH值关系很大，酸性时抑菌力较好，pH超过4.4时，效果显著下降对霉菌作用强山梨酸山梨酸Sorbic Acid白色或微黄色结晶性粉末，有特臭，易溶于乙醇，极微溶于水0.05-0.2酸性溶液好（pH4.5，分子型）；与Tween类络合同时对霉菌和酵母菌效力好常用防腐剂常用防腐剂2名称名称性质性质常用浓度常用浓度(%)(%)应用特点应用特点抑菌效力抑菌效力对羟基苯对羟基苯甲酸酯类甲酸酯类/尼泊金类尼泊金类(Nipagin)甲、乙、丙三种;为白色或微黄色结晶性粉末，无毒，无臭，不挥发，性质稳定0.01 -0.25酸，中，碱性溶液中均有效；适用于弱酸和中 性溶液，最适条件pH20(V/V)其他： 30%甘油， 植物挥发油：0.01%桂皮醛，0.01%0.05%桉叶油，0.5%薄荷油等 0.25%氯仿水
