1、1风湿性疾病相关自身抗体浅析2Bacteria, Fungi, Parasites, Viruses FUNGUS -Epidermophyton floccosum(causes athletes foot)VIRUS- PolioBACTERIA -Clostridium difficile (causes antibiotic-associated colitis & antibiotic-associated diarrhea)PARASITE -Tapeworm3n免疫的原始概念免疫的原始概念：指机体对病原生物有抵抗能力，即免除传染病或瘟疫：指机体对病原生物有抵抗能力，即免除传染病或
2、瘟疫n免疫的现代概念：免疫的现代概念： a 机体对机体对抗原性异物抗原性异物进行识别与清除进行识别与清除 b 对自身成分免疫耐受对自身成分免疫耐受 c 维持机体内环境稳定的能力维持机体内环境稳定的能力免除税赋，免除差役免除税赋，免除差役 immunitas免免于于疫疫患，患，免免除瘟除瘟疫疫 immunity免疫的概念免疫的概念中文中文“免疫免疫”最早见于明最早见于明免疫类方免疫类方4“自己成分自己成分”与与“非己成分非己成分”n自身的自身的 & 外界的外界的 ？n免疫系统将免疫系统将免疫细胞发育过程中免疫细胞发育过程中接触过的物质视为自己，接触过的物质视为自己，未接触过的物质视为非己未接触过
3、的物质视为非己 举例：交感性眼炎（晶状体蛋白）举例：交感性眼炎（晶状体蛋白）5表位扩展表位扩展n是自身免疫性疾病发生发展的一种机制n机体的免疫系统可不断扩大所识别的自身抗原表位的范围，对自身抗原不断发动新的免疫攻击，使疾病迁延不愈并不断加重n在SLE的发生过程可观察到表位扩展现象，患者体内可先发生对组蛋白H1的免疫应答，继而出现对DNA的免疫应答n在类风湿关节炎、多发性硬化和胰岛素依赖性糖尿病患者也观察到了表位扩展的现象6自身免疫自身免疫n 机体免疫系统受某种因素作用使自身免疫耐受削弱或破坏n 免疫系统会对自身成份包括正常或变性的组织、器官、 细胞、蛋白质或酶类等自身抗原产生免疫应答反应n 出
4、现自身抗体或致敏淋巴细胞的这种现象称为自身免疫n 自身免疫可以是正常生理性的 例如： 针对衰老或死亡的自体细胞n 自身免疫也可以是病理性的，引起自身免疫病7自身免疫性疾病（AID)特点特点：（1）多数是自发或特发性的，感染、药物等外因可能有一定的影响（2）患者血清中存在有高水平的 球蛋白（3）患者血清中有高效价的自身抗体或出现与自身抗原反应的致敏 淋巴细胞（4）病损部位有变性的Ig沉积，呈现以大量淋巴细胞和浆细胞浸润为主的慢性炎症8自身免疫性疾病（AID)特点特点：（5）病程一般较长，发作与缓解交替出现，仅有少数为自限性（6）女性多于男性（7）部分有遗传倾向（8）糖皮质激素等免疫抑制剂有效（9
5、）常有其它自身免疫病同时存在（10）可复制出相似的动物疾病模型 9临床角度-自身免疫性疾病诊断的复杂性n多脏器、多系统受累不同时出现n同一疾病的疾病谱广泛n不同AID的病理损害之间有交叉、重叠n在同一时间段不同病变对治疗的反应不一n由于疾病本身的免疫紊乱和治疗因素而继发感染n当患者出现感染时表现不典型n随时间的延续可能出现的分化和进展10自身抗体自身抗体 【概念概念】 n由各种原因造成的机体B细胞产生针对自身组织 成分的抗体，称为自身抗体n自身抗体是自身免疫性疾病的重要标志n每种自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱11 抗体的结构抗体的结构12自身抗体与疾病的关系自身抗体与疾病的关系n 某些
6、自身抗体对某种疾病的诊断具有高度特异性，已经成为 该病的血清标记抗体或特异性抗体 n 某些自身抗体与疾病的活动性有相关性，少数自身抗体参与了免疫病病理性损伤 13特异性较强的自身抗体特异性较强的自身抗体n抗Sm抗体系统性红斑狼疮n抗Scl-70抗体 系统性硬化症n抗SSA/SSB抗体干燥综合征n抗CCP抗体类风湿关节炎14抗体滴度的高低可判断疾病的活动性抗体滴度的高低可判断疾病的活动性n抗双链DNASLEnaCLSLE、磷脂抗体综合征nRF 类风湿关节炎15预测疾病的预后及临床亚型预测疾病的预后及临床亚型n抗抗Jo-1皮肌炎合并肺间质病变皮肌炎合并肺间质病变n抗抗Scl-70 弥漫性系统性硬化
7、弥漫性系统性硬化n抗抗rRNP 狼疮脑病狼疮脑病16自身抗体的意义自身抗体的意义 n 自身免疫性疾病的诊断自身免疫性疾病的诊断n 疾病活动性的判断疾病活动性的判断n 疗效的观察及预后疗效的观察及预后n 指导临床用药等指导临床用药等n 进行不同疾病的鉴别诊断进行不同疾病的鉴别诊断17自身抗体常用检测方法自身抗体常用检测方法18项目项目检验方法检验方法SLE四项四项ANA间接免疫荧光抗DSDNA抗体间接免疫荧光抗组蛋白抗体ELISA抗核小体抗体ELISAENA系列系列抗RNP免疫印迹、 ELISA抗SM免疫印迹、 ELISA抗SSA免疫印迹、 ELISA抗SSB免疫印迹、 ELISA抗JO-1免疫
8、印迹、 ELISA抗SCL-70免疫印迹、 ELISA抗核糖体P蛋白免疫印迹、 ELISARA三项三项AKA（抗角质蛋白抗体）间接免疫荧光抗RA33ELISA抗CCP（抗环瓜氨酸肽抗体）ELISAANCA四项四项P-ANCA（荧光模型为核周模型）间接免疫荧光C-ANCA（荧光模型为细胞质模型）间接免疫荧光MPO-ANCA（髓过氧化酶抗体）ELISAPR3-ANCA（抗蛋白酶3抗体）ELISA常常见见的的自自身身抗抗体体及及其其检检测测方方法法(1)19(2)自身免疫肝炎七项自身免疫肝炎七项检验方法检验方法ANA间接免疫荧光抗LMA抗（肝细胞膜抗体）间接免疫荧光ASMA（抗平滑肌抗体）间接免疫荧
9、光抗LKM（抗肝肾微粒体抗体）间接免疫荧光抗SLA（抗可溶性肝抗原抗体）间接免疫荧光AMA（线粒体抗体）间接免疫荧光抗LSP（抗肝脏特异性蛋白抗体）间接免疫荧光RF三项三项RF-IgGELISARF-IgAELISARF-IgMELISA抗磷脂综合征三项（抗磷脂综合征三项（ASP）ELISAPT-IgG（凝血素抗体）ELISAPT-IgMELISA抗2-糖蛋白1抗体ELISA常常见见的的自自身身抗抗体体及及其其检检测测方方法法20抗核抗体抗核抗体(ANA)均质型均质型与与AHA（抗组蛋白抗体）（抗组蛋白抗体）、抗、抗DNA有关，有关，引起引起LE形成主要见于形成主要见于SLE、药物性狼疮、药物
10、性狼疮核膜型核膜型 与抗与抗ds-DNA有关，有关， 多见于多见于SLE，特别是有肾炎者，特别是有肾炎者21抗核抗体抗核抗体(ANA)斑点型斑点型与抗与抗ENA有关，应进一步查特异性抗有关，应进一步查特异性抗体体核仁型核仁型多见于系统性硬皮病多见于系统性硬皮病22类风湿因子（类风湿因子（RF）的检测及应用）的检测及应用n RF是一种抗IgG分子Fc片段抗原决定簇的抗体n是以变性IgG为靶抗原的自身抗体n可与人或动物的变性IgG结合，而不与正常IgG发生凝集n最多见于类风湿关节炎患者n有IgM、IgG、IgA和IgE型nIgM型为主要类型23类风湿因子（类风湿因子（RF）检测方法检测方法：a.胶
11、乳凝集试验：只能定性或定量，灵敏度及特异性不变，只能检测IgM型RFb.速率散射比浊法：定量检测，准确、快速，准确性和敏感性高于胶乳凝集试验，也只能检测IgM型RF。c.ELISA法：可检出不同Ig类型的RF24类风湿因子（类风湿因子（RF）临床应用临床应用n RF在RA中的阳性率为70左右n 是诊断RA的重要标准之一n RF定量与病情的活动性和严重性成正比n 持续高滴度的RF常提示RA病情活动，骨侵蚀发生率高，常可伴有皮下结节或血管炎等关节外表现，提示预后不良25类风湿因子（类风湿因子（RF）RF并非RA独有的特异性抗体，对RA的诊断不具特异性SLE 30% SS 70%90%SSc 20%
12、30% MCTD 50%60%5%以下的正常人RF(+)一定是一定是RA RF(-)一定就不是一定就不是RA26RA自身抗体谱及临床意义自身抗体谱及临床意义nRF 60-70RA中出现，量与中出现，量与RA活动性及严重性呈正相关活动性及严重性呈正相关。 亦在其它亦在其它CTD出现出现 n 抗抗CCP在在50RA中出现中出现（抗环瓜氨酸肽抗体）抗环瓜氨酸肽抗体） 特异特异性较高性较高nAKA（抗角蛋白抗体）抗角蛋白抗体）在在40RA阳性阳性nAPF（抗核周因子）抗核周因子） 在在52RA阳性阳性n抗抗RA33RA阳性率为阳性率为35n抗抗Sa在部分在部分RA阳性阳性以上抗体阳性有助于早期以上抗体
13、阳性有助于早期RA及不典型及不典型RA的诊断和早期开展治疗，改善预后的诊断和早期开展治疗，改善预后27 是以核内可提取核抗原为靶抗原的自身抗体的总称 它主要包括抗Sm、抗RNP、抗SSA、抗SSB、抗Jo-1、抗Scl-70、抗组蛋白抗体、抗核小体抗体、抗核糖体P-蛋白抗体、抗着丝点抗体,抗dsDNA。 不同的自身免疫性疾病可以产生不同的抗ENA抗体，ENA抗体的检测对自身免疫性疾病的诊断和鉴别具有重要意义28检测方法检测方法 免疫印迹法（IBT）、ELISA法、双扩散法、对流免疫电流、金标法等。 免疫印迹技术不需要纯化抗原，灵敏度高、特异性强、操作简单，是广泛采用检测抗ENA抗体的技术29n
14、nRNPnSmnSS-AnSS-BnScl-70nJo-1nCENP BndsDNAn核小体核小体n组蛋白组蛋白n核糖体核糖体P蛋白蛋白30n高滴度的抗U1-nRNP抗体是混合性结缔组织病（MCTD）的标志n阳性率为95-100n滴度与疾病活动性相关n在30-40的系统性红斑狼疮患者中也可检出抗U1-nRNP抗体，但几乎总伴有抗Sm抗体31n抗Sm抗体是系统性红斑狼疮的特异性标志，与抗dsDNA抗体一起，是系统性红斑狼疮的诊断指标，但阳性率仅为5-10n抗Sm抗体的检测对早期,不典型的SLE或治疗后的回顾性诊断具有很大帮助32n抗SS-A抗体与各类自身免疫性疾病相关n最常见于干燥综合征（40-
15、80）、也见于系统性红斑狼疮（30-40）和原发性胆汁性肝硬化（20）中，偶见于慢性活动性肝炎n在100的新生儿红斑狼疮中可出现抗SS-A抗体。该抗体可经胎盘传给胎儿引起炎症反应和新生儿先天性心脏传导阻滞33n抗SS-B抗体几乎仅见于干燥综合征（40-80） 和SLE（10-20）的患者中n男女比例约为29:1n在干燥综合征中抗SS-A抗体和抗SS-B抗体常同时出现34n见于25-75的进行性系统性硬化症（弥散型）患者n因实验方法和疾病活动性而异n在局限型硬化症中不出现3536n诊断疾病-IFTn判断疾病活动性-ELISAn对系统性红斑狼疮具有很高的特异性n除抗Sm抗体外，抗dsDNA抗体也可
16、作为该病的一个血清学指标n阳性率为40-90%37自身抗体检测结果正确解读自身抗体检测结果正确解读检测方法局限性：假阳性，假阴性检测方法局限性：假阳性，假阴性临床意义局限性：非特异性，生理性，疾病前期临床意义局限性：非特异性，生理性，疾病前期临床表现阳性，实验室检查阴性临床表现阳性，实验室检查阴性实验室检查阳性，临床表现阴性实验室检查阳性，临床表现阴性38自身免疫病自身抗体非常复杂自身免疫病自身抗体非常复杂SLE患者中存在患者中存在100多种自身抗体多种自身抗体Semin Arthritis Rheum. 2004 Oct;34(2):501-37.39自身免疫病自身抗体非常复杂自身免疫病自身
17、抗体非常复杂APS患者中存在患者中存在30种自身抗体种自身抗体J Autoimmun, 2008. 30(1-2): p. 74-83.40N Engl J Med 2003;349:1526-33.疾病预警疾病预警自身抗体在自身抗体在SLE发病前发病前9.4年出现年出现41疾病预警疾病预警AMA在在PBC发病前发病前10年出现年出现42临床复杂性临床复杂性急性肝衰患者出现急性肝衰患者出现2和和PBC特异性抗体特异性抗体43临床复杂性临床复杂性抗抗CCP抗体在丙肝中抗体在丙肝中8.544n指标阴性是否意味着疾病的排除？指标阴性是否意味着疾病的排除？n指标阳性意味着什么？指标阳性意味着什么？矛和
18、盾？矛和盾？45特异性的局限特异性的局限n各指标与对应疾病之间： 如 SLE 抗Sm抗体特异性99% 敏感性仅为25%nRA RF阳性可出现在SLE, pSS, SSc, 慢性肺结核， 高球蛋白血症等，5%正常人可出现低滴度的RF 46“自相矛盾自相矛盾”的结果的结果ANA (间接免疫荧光法)阳性，靶抗原阴性ANA (间接免疫荧光法)阴性，靶抗原阳性（膜条法）， 占10%，为客观存在ANCA：荧光法阴性，但靶抗原阳性（5%）47特异性指标阳性，人无相应症状特异性指标阳性，人无相应症状n健康人 - 一过性阳性（感染、焦虑、疲劳等），2月后复查可能转阴或者下降n貌似健康人- 检测自身抗体（微观） 影像-组织 表现-器官（最晚）n 患者 - 但不是自身免疫性疾病，如传染病，观察滴度变化，一般会下降n自身免疫性疾病-但不是指标对应的疾病 48自身抗体检测结果的解释自身抗体检测结果的解释疾病标记（志）性自身抗体疾病标记（志）性自身抗体疾病特异性自身抗体疾病特异性自身抗体疾病相关性自身抗体疾病相关性自身抗体疾病非特异性自身抗体疾病非特异性自身抗体生理性自身抗体生理性自身抗体疾病前期存在疾病前期存在检测方法及检测程序局限性检测方法及检测程序局限性检测质量检测质量:假阴性假阴性假阳性假阳性解读困难解读困难49
