1、 药物分析教研室药物分析教研室 孙立新孙立新 副教授副教授性质性质分析方法分析方法l第一节概述第一节概述一、分类羧基直接与苯环相连接的药物。根据结构分为:水杨酸类 苯甲酸类 其它芳酸l1、水杨酸类水杨酸类l代表药物有COOHOCOCH3COONaOHC O O N aO HN H2阿斯匹林 水杨酸（钠）对氨基水杨酸（钠）l2、苯甲酸类苯甲酸类l代表药物C O O N aC O O HC H2N H2COOHIIINH COCH3CH3COH N苯甲酸（钠）氨甲苯酸 泛影酸l3、其它芳酸其它芳酸l代表药物OHSO3H.NHC2H5C2H5OHCH2CHCH3CH3COOHCH3CH止血敏 布洛酚
2、l二、性质二、性质l1、性状：l大多数是结晶性固体 少数为液体（水杨酸甲酯、苯甲酸苄酯）l2、溶解性：l游离芳酸类药物，几乎不溶于水，易溶于有机溶剂l芳酸碱金属盐易溶于水l3、酸性：芳酸类药物分子中具有COOH，所以显弱酸性 药用芳酸pKa在36之间。具有酸性，可以与碱成盐。l4、紫外吸收：具有苯环，所以具有紫外吸收。l一、呈色反应一、呈色反应l1、FeCl3反应OHCOOH弱酸性中性orFeCl3COO-O-2Fe3Fe 紫堇色第二节鉴别反应第二节鉴别反应OCOCH3COOHH2OCOOHOHCH3COOH+苯甲酸的碱性或中性溶液与三氯化 铁试液生成碱式苯甲酸铁盐的赭色 沉淀。l2、茚三酮反
3、应茚三酮反应l具有类似-氨基酸结构如氨甲苯酸，可与茚三酮反应，产生蓝紫色的缩合物COOHCH2NH2CCCOOOHOH+C N COOOOH二、阿斯匹林水解产物的反应二、阿斯匹林水解产物的反应COOHOCOCH3+Na2CO3COONaOH+CH3COONa+CO22COONaOH+H2SO42 COOHOH+Na2SO42CH3COONa+H2SO42 CH3COOH+Na2SO4l三、重氮化三、重氮化-偶合反应偶合反应 对氨基水杨酸钠具有芳伯氨基结构，在盐酸酸性溶液中，与亚硝酸钠试液发生重氮化反应，生成重氮盐，与碱性萘酚偶合产生橙红色沉淀。l四、溴代反应四、溴代反应l酚羟基邻位、对位的氢比
4、较活泼，很容易被溴取代。l五、紫外光谱法五、紫外光谱法l六、红外光谱法六、红外光谱法一、特殊杂质检查一、特殊杂质检查(一一)、阿斯匹林中的杂质检查、阿斯匹林中的杂质检查1、炽灼残渣2、重金属3、易碳化物4、溶液的澄清度检查：、溶液的澄清度检查：检查碳酸钠试液中不溶物酚类（如苯酚）醋酸苯酯水杨酸苯酯乙酰水杨酸苯酯杂质碳酸钠试液中不溶，而阿斯匹林溶于碳酸钠试液。5、水杨酸、水杨酸 来源：生产过程中乙酰化不完全或贮藏过程中水解产生。原理：阿斯匹林无酚羟基，不与高铁反应。水扬酸有酚羟基，与高铁反应生成紫堇色(二二)、对氨基水杨酸中的杂质检查、对氨基水杨酸中的杂质检查 杂质来源:未反应完全的原料间氨基酚
5、 遇热受潮生成间氨基酚,再 被氧化成二苯醌型化合物检查方法:双相滴定法(ChP2000)HPLC(USP23)二、含量测定二、含量测定(一一)、阿斯匹林含量测定阿斯匹林含量测定酸碱滴定法酸碱滴定法1 直接滴定法 原理：阿司匹林具有游离羧基，具有酸 性，以标准碱滴定液直接滴定。方法:取本品0.4g,精密称定,加中性乙醇(对酚酞指示液显中性)20ml,溶解后,加酚酞指示液3滴,用氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)滴定.每1ml的氢氧化钠滴定液(0.1mol/L)相当于18.02的C9H8O4。中性乙醇：溶解供试品 防止酯水解。目的：扣除乙醇中酸的影响。l2.水解后剩余滴定法水解后剩余滴定法l原理:
6、阿斯匹林酯结构在碱性溶液中易于水解,加入定量过量的氢氧化钠滴定液,加热使酯水解,剩余的碱用酸回滴.l需做空白试验校正.l目的：NaOH在加热时易吸收CO2,l用酸回滴定会消耗酸，影响结果l3.两步滴定法两步滴定法 适用于阿斯匹林片剂片剂稳定剂:酒石酸或枸橼酸分解产物:水杨酸和醋酸第一步:中和第二步:水解和测定(二)、对氨基水杨酸钠含量测定对氨基水杨酸钠含量测定 亚硝酸钠滴定法亚硝酸钠滴定法 对氨基水杨酸钠具有芳伯氨基,能在盐酸存在下与亚硝酸钠定量地发生重氮化,生成重氮盐.一、苯甲酸钠的含量测定双相滴定法原理：苯钾酸钠溶于H2O 苯甲酸 不溶于H2O，溶于乙醚滴定前：苯甲酸钠 甲基橙指示剂，呈黄
7、色（pH3.14.4）红 黄滴定中：苯甲酸钠+盐酸 苯甲酸滴定终点：过量HCl，使指示剂变橙红色水相乙醚相 一、糖类 1、医学上的糖类 葡萄糖,乳糖（半乳糖-葡萄糖）,蔗糖（葡萄糖-果糖）2、分类：糖类就其化学结构来看，属于多羟基醚或羟基酮以及它们的多缩聚体.依其是否能水解及水解产生简单糖分 子多少，可分为：（1）单糖类：a、戊糖：5个C原子 b、己糖：6个C原子 c、醛糖 d、酮糖（2）双糖类：乳糖，蔗糖（3）多糖类：淀粉，纤维素 3、性质（1）单糖、双糖为无色固体（无色结晶或结晶性粉末）或糖浆状液体，易溶于水、不溶于乙醚及其它有机溶剂，微溶于乙醇。（2）多糖：一般不溶于水。4、鉴别（1）灼
8、烧试验：糖类直火燃烧并产生焦糖臭味（一般用于蔗糖的鉴别）（2）Molish试验 糖类浓H2SO4（脱水）糠醛或糠醛衍生物+-萘酚呈色（3）游离醛基或酮基的还原反应：单糖或含半缩醛基的双糖均具有还原性。(4).比旋度蔗糖：不得少于+66（10%水溶液）乳糖：+52.052.6（10%水溶液，并100ml中加氨试液0.2ml）无水葡萄糖：+52.653.2葡萄糖：+52.553（10%水溶液，并100ml中加氨试液0.2ml）5、含量测定(1)旋光法（Polarimetry）旋光度：直线偏振光通过光学活性化合物液体或溶液时，能引起旋光现象，使偏振光平面向左或右旋转，旋转的度数称旋光度。比旋度：偏振
9、光透过1dm且1ml中含旋光物质1g的溶液，在一定波长一定温度下测得的旋光度称比旋度。=CL：旋光度；：比旋度ChP2000采用钠光谱的D线（589.3nm）CLD20测定旋光度，除另有规定外，测定温度20，测定管长度2dm，物质浓度以C（g/ml）表示，则：若物质浓度用%浓度（g/100ml）表示，C以C/100代入，则：CLD20即 20100DLC如果已知被测物质的比旋度,根据测量得到的比旋度,由上式即可计算出被测物质的百分浓度。(2)折光率法（Refractometry）折光率与溶液浓度（W/V）的关系 用下式表示：FnnP0n：折光率n0：同温度时水的折光率（20为1.3330）F：
10、经反复试验测得的折光因数P：溶液的百分浓度（%，W/V）n=n0+FPrinsinsin sini：光线入射角的正弦 sinr：光线折射角的正弦只要求得折射因数F，从溶液的折光率和水溶液的折光率即可计算出溶液的浓度.本法可用于葡萄糖的快速测定，但测定结果较旋光法偏高。折光仪:阿培氏折光计测定前用棱镜或水进行校正。20时水的折光率为1.3330 25时水的折光率为1.3325 40时水的折光率为1.3305药物名称VE1.4941.499VK11.5251.528苯甲醇1.5171.522二甲硅油1.4001.410月桂氮卓酮1.4701.473Chp2000未见用于含量测定，但用于纯度检查。二
11、、苷类 1、含义：糖类和有羟基的非糖有机化合物缩合成环状缩醛结构的化合物，其水解产生糖+非糖类化合物（苷元或称配基）2、分类：按苷元的结构分为：（1）氰苷类（如苦杏仁苷）（2）恩苷类（如大黄酚）（3）黄酮苷类（如芦丁）（4）甾体强心苷类（如洋地黄毒苷）（5）皂苷类（如甘草皂苷）3、构成天然苷类的糖 (1)葡萄糖；(2)其他的五碳糖、六碳糖；(3)特殊的去氧糖类（洋地黄毒糖）4、性质 （1）味苦，中性（有的呈酸性，也有呈碱性，称生物碱苷）（2）多为白色结晶，易溶于水，不溶于甲醇、乙醇，难溶于非极性溶剂中。强心苷类难溶于水，可溶于乙醇及氯仿。5、鉴别（1）天然产的苷类:均呈左旋性,无还原性.但当苷
12、在碱性或酸性下水解后,生成苷元和糖类,后者多为右旋且具有还原性。鉴别方法：天然苷：左旋性，无还原性 已水解苷：右旋，有还原性 （2）Keller-kiliani反应后显靛蓝色置显蓝色或蓝绿色醋酸层交界面显棕色使成两层如洋地黄毒糖去氧糖类沿管壁缓缓加入滴hamlSOHFeClmlgHAC1,)(211%921423(3)Kedde反应红紫色溶解苷元的不饱和内酯侧链滴滴，醇制氢氧化钾二硝基苯甲酸试液乙醇 1010 6、含量测定含量测定 ChP2000对洋地黄毒苷采用比色法、荧光法或色谱法测定。（1）比色法：地高辛原料、地高辛注射液采用碱性三硝基苯酚显色后，于485nm处比色测定。（2）荧光法：地高
13、辛片剂含量测定、含量均匀度检查、溶出度采用荧光法测定。是利用洋地黄毒苷+VC+H2O2+HCl产生荧光（激发波长360nm，发射波长485nm）。一、醇 1、代表药物及特点：CH3CH2OH CHOHCH2OHCH2OHCCH3CCl3CH3OHCHCH2CH2SHSHOHCH2OHCCCCCH2HHOH HOHOH HOH OH乙醇 甘油二巯丙醇三氯叔丁醇 三梨醇 结构分析：含-OH（醇羟基），可与酸成酯。活泼H（乙醇、三氯叔丁醇）反应（在碱性下与碘反应生成碘仿）；丙烯醛反应（甘油、二巯丙醇，碱性下加热生成丙烯醛）；三氯叔丁醇碱性下加热回流生成氯化钠，可加入定过量硝酸银，过量硝酸银用硫氢酸铵
14、滴定，以硫酸铁铵为指示剂，可以定量测定；本类药物具有还原性，可采用碘量法或高碘酸法测定。2、鉴别反应 (1)碘仿反应（-活泼H）：乙醇在OH-下可被碘氧化生成甲酸盐，并生成碘仿臭气或黄色 CH3CH2OH+4I2+6NaOHCHI3+5NaI+HCOONa+5H2O 三氯叔丁醇 同上，碘仿（-活泼H）(2)丙烯醛反应：甘油、二巯丙醇在碱性下加热，即产生丙烯醛的刺激性臭气。CHOHCH2OHCH2OH加热/4KHSOCHOCHCH2+2H2O (3)沉淀反应：CHSHCH2SHCH2OH+PbAC2CHSCH2SCH2OHPb+2HAC 3、含量测定 (1)碘量法：基于巯基的强还原性 原理：CH
15、SHCH2SHCH2OH+I2CHCH2CH2OHSS+2HI(2)方法：滴定至持续的微黄色乙醇中本品2/1.0101.0LImolmlg同时做空白实验。(2)高碘酸法：凡含有邻位二元或多元羟基的化合物均能被高碘酸氧化生成相应的小分子酸和醛，反应时n个相邻羟基，消耗n-1个高碘酸。生成的HCOOH用NaOH标准液滴定;或生成的HIO3+KI I2用Na2S2O3滴定。C6H14O6+5HIO42HCHO+4HCOOH +5HIO3+H2O(3)GC法乙醇的测定，可采用GC法 （顶空GC法）二、醚 1、代表药物：C2H5-O-C2H5麻醉乙醚 2、杂质检查：（1）酸度（2）醛类（3）过氧化物，（
16、4）异臭（5）不挥发物 三、醛 1、代表药物：HCHO CCl3CH(OH)2 CH2NNCH2 CH2NCH2NCH2CH2甲醛乌洛托品水合氯醛 2、鉴别：(1)醛基的还原反应：碱性酒石酸酮（Fehling）Cu2O红色 氨制AgNO3液（Tollen)Ag 银镜 (2)甲醛的反应：甲醛+H2SO4+变色酸 紫色（专属反应）(3)水合氯醛的反应：水合氯醛+NaOH CHCl3+HCOONa+H2O （形成二液层）(4)乌洛托品反应：乌洛托品加稀酸，加热即分解生成甲醛和铵盐。生成的甲醛具有特臭味，并和氨制硝酸银反应生成银镜。铵盐加碱放出氨气。加热NH4HSO4+2NaOHNH3+Na2SO4+
17、2H2OHCHO+2Ag(NH3)OHHCOONH4 +2Ag+3NH3+H2O6HCHO+4NH4HSO4C6H12N4+4H2SO4+6H2O 3、含量测定：(1)碘量法：醛+I2（定、过量）醛基在OH-下被I2氧化成相应的酸，剩余碘在酸性下以Na2S2O3滴定。(2)中和法（氧化后剩余滴定法）HCHO+NaOH+H2OHCOONa+H2O 2NaOH+H2SO4Na2SO4+2H2O(3)剩余碱水解法水合氯醛+NaOHCHCl3+HCOONa2NaOH+H2SO4Na2SO4+2H2O水解生成CHCl3在碱性下会有少量分解消耗碱 CHCl3+4NaOHHCOONa+3NaCl+2H2O生
18、成的NaCl可采用银量法测定后折算成NaOH的体积,自酸碱滴定中扣除。(4)酸水解后剩余滴定法乌洛托品+H2SO4（NH4）2SO4+6HCHO H2SO4（过量）用碱测定。三、酮 1、代表药物 NHNC2H5OOHNNCONSOCH3HO O CCHCHCO O H富马酸酮替酚吡喹酮扑米酮 扑米酮酸性下分解，生成甲醛，可利用甲醛的专属反应鉴别。扑米酮碱性下加热灼烧分解生成氨气，可利用红色石蕊试纸鉴别。富马酸酮替酚环上氮显碱性，可采用非水滴定法测定含量，富马酸不干扰；富马酸酮替酚环上酮可与二硝基苯肼反应，生成红色絮状沉淀。芳胺类药物指氨基直接与苯环相连。芳胺类*:酰胺类、对氨基苯甲酸酯类 苯乙
19、胺类 氨基醚衍生物芳烃胺类药物指氨基在烃基侧链上。1.结构特点：NHR1R3R4CR2O苯胺酰基衍生物，酰胺基邻位或对位有取代基。第一节第一节 芳胺类药物的分析芳胺类药物的分析一、酰胺类一、酰胺类l代表药物有：NHCOCH3OHNHCOCH2N(C2H5)2CH3CH3.HCl对乙酰氨基酚盐酸利多卡因l2性质性质：利多卡因，酰胺基邻位上有两个甲基，有很大空间位阻，水解较为困难。（利多卡因在80%的硫酸溶液中加热才能水解）l 水解后可发生重氮化反应l具有酰胺结构共性。l水解成芳伯氨基，发生重氮化偶合反应。l 碱性l利多卡因侧链中具有叔氨N原子，显弱碱性，能与酸成盐，且能与生物碱沉淀试剂或重金属离
20、子反应。l 与FeCl3反应l具有酚羟基或水解后能产生酚羟基（对 乙酰氨基酚），可与FeCl3作用呈色。l 紫外吸收l具有苯环结构，有紫外吸收。l二、对氨基苯甲酸酯类二、对氨基苯甲酸酯类CH2NOORl具有对氨基苯甲酸酯基本结构。l具有游离的芳伯氨基。1结构特点：l代表药物有：NH2COOCH2CH2N(C2H5)2.HClNH2COOCH2CH3COOCH2CH2N(CH3)2NH(CH2)3CH3.HCl盐酸普鲁卡因苯佐卡因盐酸丁卡因l2性质：性质：具有芳伯氨基，发生重氮化或重氮化-偶合反应 碱性具有脂烃胺侧链碱性，能与生物碱沉淀试剂发生反应。具有酯的结构，容易水解。紫外吸收具有苯环结构，
21、有紫外吸收。三三、鉴别反应鉴别反应l1、重氮化-偶合反应l具有芳伯氨基药物，如盐酸普鲁卡因等，在酸性溶液中与NaNO2TS发生重氮化反应，再与碱性-萘酚偶合产生红色偶氮化合物。l具有潜在芳伯氨基，如对乙酰氨基酚，水解后可得芳伯氨基，能发生类似反应。盐酸丁卡因（芳香第二胺结构）与NaNO2作用生成乳白色N-亚硝基化合物沉淀。COOCH2CH2N(CH3)2NH(CH2)3CH3NaNO2H+COOCH2CH2N(CH3)2N(CH2)3CH3NOl2、三氯化铁反应、三氯化铁反应l具有酚羟基（如对乙酰氨基酚），可 与FeCl3TS作用显蓝紫色。l3、与生物碱沉淀试剂反应、与生物碱沉淀试剂反应l具有
22、烃胺侧链，与生物碱沉淀试剂反应.l根据沉淀颜色或测定沉淀熔点进行鉴别。l常用生物碱沉淀试剂：氯化金试液,碘试液,碘化汞钾试液,苦味酸试液等。l4、与重金属离子反应、与重金属离子反应 CHCl TSCONaCuSO3324黄色转溶于蓝紫色中利多卡因 细小的亮绿色利多卡因HCoCl2l(1)与铜离子的反应l(2)与钴盐反应5羟肟酸铁的反应羟肟酸铁的反应NH2CONHCH2CH2N(C2H5)2NH2CON(OH)CH2CH2N(C2H5)2H2O2FeCl3NH2CONOCH2CH2N(C2H5)23Fel具有酰胺结构，被H2O2氧化成羟肟酸，羟肟 酸与FeCl3反应生成紫红色羟肟酸铁，随即 变为
23、暗棕色至棕黑色。如盐酸普鲁卡因胺。具有酰胺结构的药物羟肟酸羟肟酸铁l6、水解产物的反应、水解产物的反应l(1)苯佐卡因的鉴别试验N H2CO O C2H5+N aO HN H2CO O N a+C2H5O H C 2 H 5 O H +I 2 +N a O H C H 3 I +H C O O N a +H 2 O 黄色 l(2).盐酸普鲁卡因的鉴别试验盐酸普鲁卡因的鉴别试验 NH2COOCH2CH2N(C2H5)2.HClNH2COOCH2CH2N(C2H5)2NaOH N a O H N H 2 C O O N a+H O C H 2 C H 2 N(C 2 H 5)2 可 使 湿 润 的
24、 红 色 石 蕊 试 纸 变 蓝 H C l N H 2 C O O H H C l 白色 N H 2 C O O H.H C l 三杂质检查三杂质检查l1、对乙酰氨基酚杂质检查 对乙酰氨基酚中除检查酸度、氯化物、硫酸盐、重金属、水分、炽灼残渣等一般杂质外，还需要检查：乙醇溶液的澄清度与颜色、有关物质（对氯乙酰苯胺）、对氨基酚等特殊杂质。对乙酰氨基酚以对硝基氯苯为原料合成。C lN O2水解NO2OH还原NH2OH乙酰化NHCOCH3OHl(1)乙醇溶液的澄清度与颜色l对乙酰氨基酚易溶于乙醇中，如乙醇液不澄清或有颜色，则说明有杂质存在。l生产工艺用铁粉作还原剂，如带入成品，则导致对乙酰氨基酚乙
25、醇溶液产生浑浊。l中间体对氨基酚有色氧化物在乙醇中显橙红色或棕色。（2）有关物质（对氯乙酰苯胺）ClNO2水解NO2OH还原NH2OH乙酰化NHCOCH3OH副反应副副反应还原乙酰化ClNHCOCH3对硝基氯苯为原料合成对乙酰氨基酚时，如发生这样的副反应就能够引入对氯乙酰苯胺。副反应ClNH2lTLC法l 样品液上清液离心溶解乙醚样品（对乙酰氨基酚）ml5g1l 对照液l对氯乙酰苯胺乙醚溶液（50g/ml）l 分离系统l硅胶GF254l氯仿-丙酮-甲苯（13 5 2）l 限量:%005.0%1005000,000,12005040l 点样量l样品液：200ll 点于硅胶GF254薄层板上l对照
26、液：40ll 判断l在254nm波长紫外灯下观察，供试品与对照品主斑点Rf值相同的斑点比较,不得超过其大小与颜色。l(3)对氨基酚对氨基酚l制备中乙酰化不完全或贮存不当发生水解都能引入对氨基酚l检查原理：l对氨基酚在碱性条件下，与亚硝基铁氰化钠作用，生成蓝色络合物，与对照液比较判断对氨基酚的限量。OHNa2Fe(CN)5NO+H2NNa2Fe(CN)5H2NOH+H2OOH-l检查方法：样品(1.0g)甲醇(12)碱性 Na2Fe(CN)5NO 放置 30 对照(对乙酰氨基酚对照品1.0g+对氨基酚50g)操作同样品 比较 l限量：0.005%l四、含量测定四、含量测定l1亚硝酸钠滴定法亚硝酸
27、钠滴定法l 原理l具有芳伯氨基药物，在酸性条件下与NaNO2反应生成重氮盐，根据消耗NaNO2量，计算出含量。l潜在芳伯氨基药物，如芳酰氨基、硝基等，可先水解或还原，得芳伯氨基后，再进行测定。RCOOHNHArHOHNHCORAr22 OH2NHArH 6NOAr22HClZn2OH2NaClClNArHCl2NaNONHAr2222l 操作中的主要条件操作中的主要条件重氮化反应属于分子反应滴定液NaNO2及反应生成的重氮 盐都不稳定反应速度受多种因素影响第一步反应速度比较慢，而后两步反应速度则比较快。Ar-NH2 NOCl（慢）N|Ar-N-NO （快）Ar-N=N-OH Ar-N2+Cl-
28、重氮盐 （快）l反应速度与药物结构的关系反应速度与药物结构的关系NaClHNOHClNaNO22OHNOClHClHNO22氯化亚硝酰重氮化反应机制：la.当苯环上特别是氨基邻位或对位上有吸电基时,如HSO3COOH2NOX N H 2.X l吸电基通过诱导效应使氨基 上电子云密度降低，从而碱 性降低，游离芳伯胺浓度增 大，所以反应速度就快。等可使氨基的碱性降低，重氮化反应速度加快。lb.当在苯环上有供电基时，则使反应速度降低。如 等。RORl供电基能使氨基碱性增强，这样氨 基成盐的机会就增大，游离芳伯胺 的浓度就减小，所以反应速度就慢。l反应速度与酸及酸度的关系反应速度与酸及酸度的关系la.
29、酸的种类l重氮化反应在HBr、HCl、H2SO4中反应速度是 HBrHClH2SO4 OHNOBrKHBrHNO212溴化亚硝酰OHNOClKHClHNO222 K1比K2大300倍 l用HBr时，生成NOBr量大，反应速度快。l但HBr价格贵，用盐酸代替，为加快反应速度，需加入KBr（催化剂）。KClHBrKBrHCll产生HBr与HNO2反应，可生成大 量NOBr，加快反应速度。lb.盐酸的用量l理论上:芳胺 盐酸1 1mol l实际上:芳胺 盐酸1 2.56moll原因：强酸性可加速反应重氮盐在酸性下稳定酸性下避免副反应发生。l如盐酸量增加，则反应向左进行。l如盐酸浓度太大，反到会使游离
30、芳伯氨的量减小（成盐），而影响重氮化反应速度，使反应速度减慢。A r N+N C l+H 2 N A r A r N N N H A r +H C l 如酸度不足则没反应的芳胺与生成的重氮盐产生偶氮氨基化合物，而影响测定结果。l反应速度与滴定时温度的关系反应速度与滴定时温度的关系l一般，温度升高反应速度加快。l但重氮化反应所生成的重氮盐不稳定，温度升高重氮盐分解速度也加快。l另外，温度高时，滴定液亚硝酸钠也容易分解逸失，而影响测定结果。l所以，重氮化反应应在低温条件下进行。l中国药典规定：在30C以下，把滴定管尖端插入液面下 处进行滴定。在滴定时一边搅拌一边加入大部分标准溶液。32到近终点时把
31、滴定管提出液面，用水冲洗后再继续滴定至终点。标准溶液在液面下加入，可避免NaNO2挥发。l反应速度与滴定速度的关系反应速度与滴定速度的关系l重氮化反应属分子反应，反应速度比较慢，滴定速度不能过快。l尤其是近终点时，更要慢慢地滴定。近终点时，游离芳伯胺浓度非常低，反应速度就更慢了。l所以，每加一滴标准液后，要搅拌15分钟后再判断终点。l 指示终点的方法指示终点的方法l重氮化滴定法指示终点的方法有:永停法 电位法 外指示剂法 内指示剂法l我国药典主要采用永停滴定法指示终点 l永停法永停法l原理：l在被测溶液中插入两个相同铂电 极，在 两 个 电 极 间 加10200mV电压，并且在回路中串联一个灵
32、敏的检流计（10A9/格）。l当用NaNO2滴定时，在终点前回路中没有电流，电流计指针指零。l当到达滴定终点时，由于溶液中有微过量的NaNO2，使得在两个电极上发生氧化还原反应 阳 极：OHNO2eHHNO2eHHNO2OHNO2l导致在两电极间有电子流动，从而回 路中有电流产生，使得电流计指针发 生偏转并且不再返回零点。阴 极：l电位法电位法l在被测溶液中插入甘汞-铂电极，l到达滴定终点时，溶液中稍过量的NaNO2使电位产生突跃，从而指示终点。lUSP采用这个方法指示终点。l外指示剂法外指示剂法l淀粉-KI糊剂或试纸OH2NaCl2KCl2INOHCl4KI2NaNO22 22遇淀粉显蓝色l
33、原理：当达到滴定终点时，溶液中稍过量 的NaNO2在酸性条件下氧化KI析出I2，I2遇淀粉显蓝色。l使用方法：使用方法：l滴定时，把淀粉-KI试液滴在白磁板上，用玻璃棒蘸取少量被滴定的溶液，在白磁板上划，如果立即出现蓝色即已到滴定终点。l外指示剂法的缺点外指示剂法的缺点：由于滴定的溶液是强酸性，KI遇光能被空气氧化析出碘，所以，在没有达到终点时，就有可能呈现蓝色，而造成误判。由于经常蘸取溶液进行试验，可造成滴定液的损失而带来误差。方法难掌握。l内指示剂法内指示剂法l内指示剂法指示终点，操作简便，但生成重氮盐一般都带有颜色，干扰指示剂颜色变化的观察，尤其是颜色很深时，更是这样。l在重氮化滴定法中
34、，内指示剂法应用不是很广泛。第二节第二节 苯乙胺类药物分析苯乙胺类药物分析l一结构特点HOHOCHOHCH2NHRl具有烃胺侧链，属于芳烃胺类药物。l多数在苯环上有12个羟基取代基。l如在苯环3、4位上有羟基取代，则为儿茶 酚胺类药物。l代表药物 H OH OCH CH2NH CH3OHH OH OCHOHCH2NH2肾上腺素去甲肾上腺素l二二性质性质：l1.易被氧化l邻苯二酚或苯酚结构，易被氧化呈色。l3.具有旋光性 具有手性碳原子，具有光学活性。l2.显碱性 具有烃胺侧链，显弱碱性。能与酸成盐。l三鉴别试验 1.氧化反应)(222OIor OH棕色聚合聚合物放置肾上腺素红肾上腺素 极微红色
35、无色同样条件下去甲肾上腺素反应速度极慢or 区别肾上腺素和去甲肾上腺素。2.三氯化铁反应：在0.1mol/L盐酸中与Fe3+显翠绿色，加氨试液后，显紫色或紫红色四、肾上腺素中肾上腺酮的检查（讲过）五、含量测定（一）非水溶液滴定法（二）溴量法第三节第三节 氨基醚衍生物类药物的分析氨基醚衍生物类药物的分析 CHOCH2CH2N(CH3)2HCl盐酸苯海拉明一.代表药物1.结构l2.性质l白色结晶性粉末l水中极易溶解,醇或氯仿中易溶,乙醚或苯中极微溶.l见光分解l酸性溶液中易分解.l紫外吸收二、鉴别1、与硫酸反应：显色2、水解反应：3、与硝酸银反应形成白色凝乳状沉淀4、紫外、红外特征吸收三、含量测定
36、三、含量测定 （一）非水溶液滴定法 （原料）（二）酸性染料比色法 （片剂，见生物碱章）（三）阴离子表面活性剂滴定法 （其注射液）（四）HPLC （片剂）l杂环:环状有机化合物的碳环中夹杂有其他非碳原子的环状结构叫做杂环.l非碳原子,又称杂原子,如N,S,O.l共性:(1)杂环类药物是合成药物中所占比例最多 的 一大类药物.(2)多为五元环或六元环,单环或并合环.(3)杂环结构较稳定,不易开环,其性质受杂 原子种类、数目、位置影响.(4)杂环上取代基性质较活泼,常用于分析.(5)含氮杂环,其碱性的强弱往往用于分析.本章重点介绍l吡啶类l吩噻嗪类l苯并二氮杂卓类.第二节第二节 吡啶类药物分析吡啶类
37、药物分析一、结构分析l1.结构：本类药物均有吡啶环NNCONHNH2NCONC2H5C2H5吡啶 异烟肼 尼可刹米 l2.性质：性质：（1）母核能与金属盐反应生成有色沉淀（2）碱性:吡啶环上氮原子具有叔胺性质，pKb=8.8（水中），非水滴定；（3）异烟肼:酰肼基有强还原性,且能与 羰基缩合,氧化还原滴定或比色测定；（4）尼可刹米:酰胺基碱性下可水解,放 出NH(C2H5)2,用于鉴别或凯氏定N 直接蒸馏测定。二、鉴别：二、鉴别：1.母核反应：（1）与金属离子反应生成有色沉淀 a.异烟肼,尼可刹米+HgCl2 白色沉淀 b.异烟肼+CuSO4 红棕色（Cu2O）尼可刹米+CuSO4+硫氰酸钾
38、淡绿色絮 状沉淀（2）开环反应：适用于,未取代，,为烷基或羧基取代的。CONHNH2NKMnO4或Br2COONaNCNBr溴化氰CNBrCOOHNCHOHCHOCOOHArArNNHCHCHCOOH2Ar-NH2a.戊烯二醛反应（knig反应）b.2，4-二硝基氯苯反应 （Vongerichten反应）CONHNH2NNaOHCOONaNNO2NO2ClNO2NO2COONaNCHOHNO2NO2COONaNNaOH2.酰肼基团的反应 CONHNH2NCOOHN4e+N2常用的氧化剂：I2、Br2、KBrO3、AgNO3（1）还原反应：（2）缩合反应：与芳醛缩合形成腙，如香草醛、水杨醛、二甲
39、氨基苯甲醛CONHNH2N+OHOCH3CHONCONHNOHOCH3CH黄色max=380nml3.与酸碱共热，以降解产物鉴别吡啶臭味尼可刹米异烟肼加热或钠石灰无水/32,CONa25232)HNH(C/加热或钠石灰无水尼可刹米CONa用红色石蕊试纸检查 1.氧化还原滴定法：l常用氧化剂有：碘、溴、溴酸钾、高锰酸钾、重铬酸钾、NaNO2、硫酸铈等。其中碘量法，溴量法，溴酸钾法最常用。滴定异烟肼（定、过量）弱碱性溶液中322/2OSNaI（1）剩余碘量法：三、含量测定：以异烟肼为例三、含量测定：以异烟肼为例。操作：原理：CONHNH2N+2I2 +5NaHCO330min38-40度 COON
40、aN+N2+4NaI+5CO2+4H2OI2（过）+2Na2S2O32NaI+Na2S4O6讨论：a.本法简便,但因碘氧化力较弱,反应不 易完全。常因反应时间、温度不同有 所差异；b.用于制剂分析时,含有还原性赋形剂时 有干扰；c.化学计量关系：(1:4)0.1mol/L I23.429mg C6H7N3(2)剩余溴量法：滴定异烟肼（定，过量）中稀322/2OSNaKIBrHCl 原理：0.1mol/LBr2 （溴酸钾3g+溴化钾15g水1000ml）在稀HCl反应条件下：KBrO3+5KBr+6HCl Br2+6KCl+3H2O操作：Br2（过）+KI I2+2KBrI2+Na2S2O3 2
41、NaI+Na2S4O6CONHNH2NCOOHN+N2+4KBr+2Br2 +H2O讨论：ChP63版曾用本法测定异烟肼 a.酸度0.700.86mol/L，所测结果一致，高、低都会使结果偏低；b.放置时间1530min；c.滴定温度30；d.测定应在25min内完成l(3)溴酸钾法：甲基橙指示终点异烟肼强酸中滴定/3KBrO操作：原理：CONHNH2N3+2KBrO3COOHN3+3N2+3H2O+2KBr等当点:稍过量的Br2)()(2不可逆指示剂无色红色甲基橙破坏指示剂Brl讨论：a.缓缓滴定并充分振摇,防止局部浓度过高终点提前；b.到终点后,补加一滴指示剂,如颜色褪去即可,否则未到终点
42、；c.ChP77、85、90、95、2000均采用本法测定异烟肼（片）；d.化学计量关系：3/2T=0.016673/2137.14=3.429l2.比色测定：利用开环反应或酰肼基团与试 剂呈色测定l3.非水滴定法：利用吡啶环的碱性，进行非水 滴定l第三节第三节 吩噻嗪类药物分析吩噻嗪类药物分析一、结构分析SNRR12345678910共同点：（1）硫氮杂蒽母核；（2）含两个杂原子多环共轭体系，有UV吸收；（3）S被氧化生成砜或亚砜；（4）与金属离子络合，生成有色物，可比色测定l不同点：R，R取代基不同RR盐类药名-(CH2)3N(CH3)2-HHCl盐酸丙嗪-(CH2)3N(CH3)2-Cl
43、HCl盐酸氯丙嗪-CH2CH(CH3)N(CH3)2-HHCl盐酸异丙嗪l二、鉴别 1、特征的紫外吸收：具有三个峰值205nm、254nm和300nm附近，两个谷220nm和280nm附近；若被氧化则有四个吸收峰，可用于判断样品中有无氧化物。l2.显色反应：)(红色樱红呈色母核氧化剂(1)氧化剂：H2SO4、溴水、FeCl3、H2O2(2)呈色环上的或23PdClFeClS（可用于比色测定）三、含量测定三、含量测定 1、非水碱量法：吩噻嗪类药物母核上氮原子碱性极弱,不能进行滴定,10位取代基上N原子为碱性,可在非水介质中以高氯酸标准液，以CV为指示剂。2、铈量法：原理:适当pH下,用硫酸铈氧化
44、吩噻嗪进 行测定开始时,吩噻嗪失去一个电子 游离基 （红色）等电点吩噻嗪失去2个电子 无色，终点：红色无色条件：在硫酸性下 优点：（1）赋形剂不干扰,复方制剂中咖啡因、苯丙胺、可待因、巴比妥类药物等不干扰；（2）反应为一价还原（Ce4+Ce3+）,对环上取代基无作用；（3）用于原料药，也可用于制剂分析。3、钯离子比色法：、钯离子比色法：原理：吩噻嗪类药物可与一些金属离子（如Pd2+）在适当pH值的溶液中形成有色的络合物，借以进行比色测定。Pd2+SS2Cl-NSRRPdCl2pH2讨论：讨论：（1）钯离子试剂：PdCl2和十二烷基硫酸酯钯盐.用PdCl2时，形成的有色络合物水中溶 解度小,样品
45、量大时,产生沉淀.十二烷基硫酸酯钯盐,其络合物溶解度 大,吸收强度增大（约2倍）.（2）本法优点：氧化产物不干扰。l4、UV法：法：l(1)直接分光光度法：l(2)萃取后分光光度法：l(3)二阶导数分光光度法：l(4)萃取-双波长分光光度法：直接分光光度法：直接分光光度法：操作：取10片，除去糖衣后，精称，研细称取粉末适量加水、盐酸溶解过滤，取滤液于249nm处测定。已知：盐酸异丙嗪=910，即可计算优点：不需标准品缺点：仪器精密度要求高测定中注意问题：避光、防止氧化。l萃取-双波长分光光度法：-用于校正样品中氧化产物对测定影响l氯丙嗪的最大吸收波长为254nm,其氧化产物在此波长也有吸收,同
46、时在277nm处氧化产物也有吸收,且其吸收度与在254nm处吸收度相等,而氯丙嗪在此波长处无吸收.A=A254-A277l第四章第四章 苯骈二氮杂卓类药物的分析苯骈二氮杂卓类药物的分析 一.结构分析CClNCNNHCH3OCH2123456789CClNCNCH2CH3O987654321 氯氮卓（1955年合成）地西泮（1959年合成）l共同点：共同点：（1）二氮杂卓环为七元环，环上氮原子具有强碱性，苯基的取代使碱性降低，可进行非水滴定法测定；（2）UV吸收，用于含量测定；（3）环比较稳定，在强酸性下水解，形成相应的二苯甲酮衍生物，可用于鉴别和比色测定。（氯氮卓水解生成芳伯胺基；地西泮水解生
47、成芳仲胺基和甘氨酸）；（4）本品多为游离碱，不溶于水，而溶于甲醇、乙醇和氯仿中。l二、鉴别二、鉴别 1、芳伯胺基反应：氯氮卓水解生成芳伯胺基(重氮化偶合反应)2、茚三酮反应：地西泮水解生成甘氨酸（茚三酮反应）3、硫酸荧光反应：本类药物加硫酸，在紫外灯下，呈荧光。l第一节概述第一节概述l一、特点一、特点l1含氮碱性化合物l2没有共同母核l3多数具有含氮杂环结构，少数氮在侧链上（如麻黄碱）l4.绝大部分存在于植物体内；少数存在于动物体内（如蟾蜍碱）l二、碱性与结构的关系l碱性氮原子结合状态和所处化学环境l电子效应:诱导效应和共轭效应l立体效应与质子结合能力大，碱性强与质子结合能力小，碱性弱lN连接
48、供电基团，如-OR、-R时，碱性就强。lN连接吸电基团，如-NO2、-COOH 等时，碱性就弱。电子效应:l1季铵类生物碱季铵类生物碱l以季铵形式存在，可以离子化，有类似金属的性质，碱性最强。l如：小蘗碱（pKa=11.53）OONO C H3O C H3+O H-l2.脂肪胺l碱性：仲胺伯胺叔胺 脂肪胺碱性比NH3强l3芳胺类芳胺类lN与芳环相连，N未共享电子对与苯环的电子形成p-共轭，使N原子上的电子云向苯环方向移动，这样就使N原子周围的电子云密度降低，接受质子的能力减小，所以碱性就弱。l芳胺类药物碱性比NH3碱性弱。NH2.l碱性强弱取决于芳环上取代基的性质。供电子取代基（如-CH3等）
49、碱性强 吸电子取代基（如-NO2等）碱性弱芳胺类碱性：伯胺仲胺 叔胺l4酰胺类酰胺类l呈酰胺结构，碱性非常弱l如：咖啡因Kb=0.710-14（19C）NNNNOOC H3C H3C H3立体效应立体效应NNO11 6如：苦参碱 两个N原子N16为酰胺结构，几乎没有碱性N1为叔胺结构，它的立体结构便于接 受质子，消弱了立体效应的影响，碱 性较强。l再如：东莨菪碱和莨菪碱 OCOCHCH2OHN CH3 OOCOCHCH2OHN CH3l三元氧环的存在，N上孤电子产生显著立体效应（增强了空间位阻），使N原子不易给出电子，碱性较弱（与莨菪碱比）。（东莨菪碱）（莨菪碱）l生物碱碱性强弱一般规律是：l
50、季铵碱类脂肪胺类NH3芳胺、N-芳杂环酰胺类l例外：l含-COOH、酚-OH的生物碱，属于两 性生物碱。l如：吗啡OH OH ONC H3l三、生物碱类药物的溶解性三、生物碱类药物的溶解性l一般情况下 游离生物碱不溶或难溶于水，易溶于 有机溶剂 生物碱盐易溶于水，不溶于有机溶剂 游离生物碱，可在稀酸水溶液中成 盐而溶解。l例外：有的生物碱能溶于水，如麻黄碱、烟碱等 具有酸碱两性的生物碱，可在碱的 水溶液中成盐而溶解，如吗啡、茶 碱等 碱性较弱的生物碱不能与酸形成稳 定的盐，如咖啡因、利血平等四、生物碱类药物的分类四、生物碱类药物的分类：1、苯烃胺类：氮原子不在环状结构内 麻黄碱、伪麻黄碱、秋水
