1、食品中维生素C的检测方法维生素C是机体正常生命活动所必需的有机化合物,作为一种理想的保健食品功能因子,被添加于各种保健食品及饮料中,因此对维生素C含量测定方法的研究也较多。目前常规的维生素C含量测定方法有紫外分光光度法、碘量法等,但是维生素C具有较强的还原性,在中性和碱性环境下不稳定,遇热迅速分解,检测方法操作步骤复杂,具有试剂和试样溶液不稳定、灵敏度低、费时等缺点,尤其是有颜色的试样,其溶液颜色背景干扰大,对最终数据有影响。高效液相色谱法具有高效、快速、稳定、灵敏度高的特点,能在较短时间内完成测定。一、实验目的和要求1、学习高效液相色谱外标法定量定性分析方法;2、熟悉高效液相色谱的分析操作规
2、程;3、学习高效液相色谱检测食品中的维生素C的方法。二、实验原理在以维生素C标准品保留时间定性,采用外标法定量维生素C含量。X=(A2C)/A1(X为样品中维生素C的含量单位为ug/mL,单位;A1为标样维生素C的峰面积;A2为样品中维生素C峰面积;C为维生素C标准液质量浓度。)三、仪器、试剂1、仪器:岛津高效液相色谱仪、超声波清洗仪、超纯水制备仪、千分之一天平、离心机2、试剂:维生素C标准品、醋酸、超纯水、橙汁四、实验步骤1、标准液的制备:维生素C标准溶液配制:准确称取0.1219g维生素C,用0.1%醋酸溶液溶解,超声波振荡5min,再用0.1%醋酸定容至50mL,为标准溶液。分别吸取标准
3、溶液0.05,0.10,0.50,1.00,2.00,3.00mL于10mL容量瓶中,用0.1%醋酸溶液定容,进样测定。2、样品的前处理:试样处理试样为液体时,吸取适量体积试样原液用20mL0.5%醋酸溶液作为稀释液,再用水定容至100mL;试样为固体时,称取试样1g用0.1%醋酸溶液溶解(按照试样液中维生素C含量0.5700mg/L换算),超声波振荡5min,再用0.1%醋酸定容至100mL,过滤,用0.45m滤膜过滤,进样。3、实验条件的选择(1)色谱柱C18(250mm*4.6mm)(2)流动相含甲醇:含0.1%醋酸的水(10:90),流量1mLmin-1(3)检测器紫外检测器,262nm(4)进样量20L4、测定(1)将配制好的流动相甲醇、0.1%醋酸的水置于超声波发生器上脱气20min。(2)根据实验条件,将高效液相色谱仪按照操作步骤调节至进样状态,待仪器液路和电路系统达到平衡时即可进样。(3)依次分别吸取20L的标准混合使用液和未知试液进样,记录各色谱图。五数据处理及分析(1)定性分析(2)定量分析及计算回收率