高效液相色谱法课件.ppt

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1、西北大学基础化学实验西北大学基础化学实验西北大学基础化学实验西北大学基础化学实验实验目的实验目的 了解了解HPLC仪器基本结构仪器基本结构,掌握实验仪器的一般使掌握实验仪器的一般使用方法;用方法;加深对色谱分离原理的理解,掌握主要实验条件加深对色谱分离原理的理解,掌握主要实验条件的选择;的选择;掌握液相色谱定性定量分析技术。掌握液相色谱定性定量分析技术。实验内容实验内容反相高效液相色谱法分离测定烷基苯系物反相高效液相色谱法分离测定烷基苯系物 西北大学基础化学实验西北大学基础化学实验实验讲解要点实验讲解要点 一一、色谱分离原理色谱分离原理 二二、色谱分析技术色谱分析技术 三三、HPLC仪器和使用

2、方法仪器和使用方法 四四、HPLC和和GC的比较的比较 五五、RP-HPLC测定烷基苯化合物原理测定烷基苯化合物原理 西北大学基础化学实验西北大学基础化学实验一、色谱分离原理一、色谱分离原理色谱法是一类高效分离方法。色谱法是一类高效分离方法。色谱分离原理是什么?色谱分离原理是什么?HPLCHPLC和和GCGC仪器的分离部件是什么?仪器的分离部件是什么?它们有什么不同?它们有什么不同?HPLCHPLC和和GCGC的主要差别?的主要差别?西北大学基础化学实验西北大学基础化学实验二、色谱分析技术二、色谱分析技术 色谱分析是一类重要的仪器分析方法,其色谱分析是一类重要的仪器分析方法,其特点是分离能力强

3、、定量准确,适合于复杂特点是分离能力强、定量准确,适合于复杂样品或多组分样品分析。样品或多组分样品分析。常见的色谱定性方法?常见的色谱定性方法?色谱定量分析的依据?色谱定量分析的依据?气相色谱实验采用那种定量分析方法?有气相色谱实验采用那种定量分析方法?有何特点?何特点?HPLCHPLC和和GCGC的应用特点的应用特点 西北大学基础化学实验西北大学基础化学实验三、三、HPLC仪器和实验技术仪器和实验技术 HPLC HPLC仪器的基本组分?仪器的基本组分?主要部件的工作原理?主要部件的工作原理?HPLCHPLC和和GCGC仪器的比较仪器的比较 HPLCHPLC和和GCGC实验技术的比较实验技术的

4、比较 有人认为色谱分析实验很简单,就是打一有人认为色谱分析实验很简单,就是打一针样品而已,你是怎么认为的?你是否给病针样品而已,你是怎么认为的?你是否给病人打过针?为什么没有?人打过针?为什么没有?西北大学基础化学实验西北大学基础化学实验四、高效液相色谱仪的基本组成四、高效液相色谱仪的基本组成分几个系统?分几个系统?和和GCGC有何不同?有何不同?高压泵工作原理?高压泵工作原理?GCGC是如何进样的?是如何进样的?记录系统和记录系统和GCGC一样一样吗?吗?西北大学基础化学实验西北大学基础化学实验高压泵工作原理(单向阀)高压泵工作原理(单向阀)高压液体有危险吗?高压液体有危险吗?高压泵如何改变

5、流速?高压泵如何改变流速?西北大学基础化学实验西北大学基础化学实验高压泵工作原理(单向阀)高压泵工作原理(单向阀)HPLC HPLC进样针与进样针与GCGC有何不同?有何不同?为什么为什么HPLCHPLC与与GCGC进样要求不同?进样要求不同?六通阀工作原理(流路切换)六通阀工作原理(流路切换)西北大学基础化学实验西北大学基础化学实验五、五、RP-HPLC测定烷基苯化合物测定烷基苯化合物原理原理 什么是正相色谱?什么是反相色谱?什么是正相色谱?什么是反相色谱?什么是键合固定相?什么是键合固定相?预测一下苯和甲苯在预测一下苯和甲苯在C18C18反相柱上的保留反相柱上的保留顺序?顺序?什么是反相色

6、谱疏水机理?什么是反相色谱疏水机理?本实验的主要色谱分析条件有那些?本实验的主要色谱分析条件有那些?流动相组成对保留时间有何影响?举例说流动相组成对保留时间有何影响?举例说明?明?改变检测波长对色谱图有何影响?改变检测波长对色谱图有何影响?西北大学基础化学实验西北大学基础化学实验HPLC的溶剂选择的溶剂选择 本实验采用什么流动相?本实验采用什么流动相?什么是什么是HPLCHPLC级甲醇、乙腈溶剂?级甲醇、乙腈溶剂?如何获得超纯水?如何获得超纯水?本实验所用的流动相如何配制?本实验所用的流动相如何配制?流动相为什么要除气?如何除气?流动相为什么要除气?如何除气?西北大学基础化学实验西北大学基础化

7、学实验六、实验部分六、实验部分 一、溶液配制一、溶液配制1 1 配制标准系列溶液配制标准系列溶液 三组分混标液:每三组分混标液:每mLmL溶液分别含溶液分别含1.00mg1.00mg苯、甲苯和苯、甲苯和乙苯。乙苯。分别准确移取分别准确移取0.400.40、0.800.80、1.201.20、1.601.60和和2.00mL2.00mL三三组分混标液于组分混标液于10mL10mL容量瓶中,用流动相溶剂定容。容量瓶中,用流动相溶剂定容。2 2 流动相的配制、过滤和除气。流动相的配制、过滤和除气。五组分混标液:含适量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁五组分混标液:含适量苯、甲苯、乙苯、丙苯和丁苯。苯。标准苯测

8、试液。标准苯测试液。未知样品未知样品1 1号、号、2 2号和号和3 3号。号。西北大学基础化学实验西北大学基础化学实验二、色谱实验条件二、色谱实验条件 A A组:组:Waters HPLCWaters HPLC仪仪色谱柱:色谱柱:Nova Pak C18(3.9Nova Pak C18(3.9150mm,4m)150mm,4m)流动相:流动相:CH3OH-H2O(70/30,v/vCH3OH-H2O(70/30,v/v)流速:流速:0.8 mL0.8 mL/min/min检测波长:检测波长:254nm254nm进样体积:进样体积:20L20LB B组:组:TSP HPLCTSP HPLC仪仪色

9、谱柱:色谱柱:HypersilHypersil BDS C18(4.0 BDS C18(4.0200mm,5m)200mm,5m)流动相:流动相:CH3OH-H2O(80/20,v/vCH3OH-H2O(80/20,v/v)流速:流速:0.8 mL0.8 mL/min/min检测波长:检测波长:254nm254nm进样体积:进样体积:20L20L 西北大学基础化学实验西北大学基础化学实验三、实验内容与主要步骤三、实验内容与主要步骤1 1 更换流动相。更换流动相。2 2 开动仪器,让色谱柱平衡。开动仪器,让色谱柱平衡。3 3 设置色谱工作站参数。设置色谱工作站参数。4 4 进样、采集色谱图。进样、采集色谱图。1 1)五组分混标液)五组分混标液2 2)标准溶液系列)标准溶液系列3 3)未知样品)未知样品5 5 色谱数据分析,打印色谱图及分析报告。色谱数据分析,打印色谱图及分析报告。6 6 更换甲醇流动相,清洗色谱柱。更换甲醇流动相,清洗色谱柱。7 7 关闭仪器。关闭仪器。

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