1、超级耐药菌超级耐药菌NDM-1研究进展与对策研究进展与对策解放军总医院解放军总医院王睿王睿超级细菌（超级细菌（Superbugs）PDRSuperbugs:are super-bacteria that are resistant to almost all antibiotics。MRSA、VRE、VRSA碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌碳青霉烯耐药铜绿假单胞菌碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯耐药鲍曼不动杆菌碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌（KPC、IMP、NDM-1)碳青霉烯耐药其它肠杆菌科细菌碳青霉烯耐药其它肠杆菌科细菌。（是指对其治疗药物几乎均耐药的细菌）（是指对其治疗药物几乎
2、均耐药的细菌）主要超级细菌菌种：主要超级细菌菌种：IDSAs 2004 Report:“Bad Bugs,No Drugs(BBND):As Antibiotic Discovery Stagnates,A Public Health Crisis Brews”当前关注的耐药问题当前关注的耐药问题革兰阳性菌革兰阳性菌：MRSA，MRSE,MRCNS VRSA VRE PRSP革兰阴性菌：革兰阴性菌：多重耐药的铜绿假单胞菌多重耐药的铜绿假单胞菌 泛耐药不动杆菌属泛耐药不动杆菌属 嗜麦芽窄食单胞菌嗜麦芽窄食单胞菌 产产ESBL、AmpC酶的肠杆菌科细菌酶的肠杆菌科细菌 产产NDM1酶的肠杆菌科细菌
3、酶的肠杆菌科细菌感染性疾病严重危害人类健康感染性疾病严重危害人类健康Peleg A,Hooper D.New Engl J Med.2010;362:1804-13Loss of PorinsAntibiotic Modifying EnzymesLactamasesTarget Site ModificationTransmembrane Efflux PumpsRibosomal MutationsMetabolic bypass MechanismsMutations of the lipopolysaccharideG-菌耐药机制菌耐药机制我国我国1010年前的碳青霉烯类耐药年前的碳青
4、霉烯类耐药 主要机制主要机制次要次要绿脓杆菌，少见绿脓杆菌，少见膜蛋白缺失膜蛋白缺失泵出，金属酶泵出，金属酶鲍曼不动杆菌，鲍曼不动杆菌，少见少见膜蛋白缺失膜蛋白缺失泵出泵出肺克菌，偶见肺克菌，偶见AmpC+ESBLs+膜蛋白，偶见膜蛋白，偶见不传播，不爆发不传播，不爆发到目前为止产碳青霉烯酶的菌株的发生率排序：到目前为止产碳青霉烯酶的菌株的发生率排序：-不动杆菌不动杆菌铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌肠杆菌科菌（肠杆菌科菌（1%-2%）-lactamases碳青霉烯酶 ESBL B类金属酶A类酶丝氨酸D类GIMVIM*KHM AmpC超广谱-内酰胺酶OXAKPCIMIGESNMCSMEB类金属酶A类酶
5、丝氨酸IMPVIMSPMNDM-1SIMAIMDIM目前备受关注的NDM-1 2008年，第一例，瑞典，年，第一例，瑞典，由印度归国者由印度归国者从印巴传出？从印巴传出？检出检出NDM-1的国家的国家最早报道第一例最早报道第一例产NDM-1细菌u最早报道的产最早报道的产NDM-1NDM-1细菌为肺炎克雷伯菌，细菌为肺炎克雷伯菌，于于20082008年在一位印度裔瑞典尿路感染患者中年在一位印度裔瑞典尿路感染患者中发现。发现。u对所有对所有-内酰胺类抗菌药物耐药，对环丙沙内酰胺类抗菌药物耐药，对环丙沙星也不敏感，仅对粘菌素敏感。星也不敏感，仅对粘菌素敏感。u深入研究发现这株细菌携带一种新型金属深入
6、研究发现这株细菌携带一种新型金属-内酰胺酶，并根据患者可能感染地点命名这内酰胺酶，并根据患者可能感染地点命名这种酶为种酶为NDM-1NDM-1，其后还在这名患者粪便中分，其后还在这名患者粪便中分离到产离到产NDM-1NDM-1的大肠埃希菌。的大肠埃希菌。D Yong,M Toleman,C G iske,H Cho,K Sundman,K,Lee,and T Walsh*Walsh T研究组宣布研究组宣布:第一例瑞典患者从印度携带第一例瑞典患者从印度携带NDM-1金属酶金属酶-泛耐药泛耐药-肺炎克雷伯菌的遗传特征肺炎克雷伯菌的遗传特征Antimicrob.Agents Chemother.20
7、09 Dec,53:5046Characterization of a New Metallo-Lactamase Gene,bla NDM-1,and a Novel Erythromycin Esterase Gene Carried on a Unique Genetic Structure in Klebsiella pneumoniae Sequence Type 14 from IndiaNDM-1已有报道的国家已有报道的国家英国英国United KingdomE.coli,K.pneumoniae美国美国United StatesE.coli,K.pneumoniae,E.clo
8、acae印度印度India,New DelhiE.coli,K.pneumoniae,A.baumannii巴基斯坦巴基斯坦PakistanE.coli,K.pneumoniae孟加拉国孟加拉国BangladeshE.coli,K.pneumoniae加拿大加拿大CanadaE.coli瑞典瑞典Sweden奥地利奥地利Austria比利时比利时Belgium法国法国FranceK.pneumoniae荷兰荷兰Netherlands德国德国Germany日本日本Japan阿曼阿曼Oman肯尼亚肯尼亚KenyaK.pneumoniae澳大利亚澳大利亚AustraliaE.coliEmergence
9、 of a new antibiotic resistance mechanism in India,Pakistan,and the UK:a molecular,biological,and epidemiological studyKarthikeyan K Kumarasamy,Mark A Toleman,Timothy R Walsh,Jay Bagaria,Fah ana Butt,Ravikumar Balakrishnan,Uma Chaudhary,Michel Doumith,Christian G Giske,Seema Irfan,Padma Krishnan,Ani
10、l V Kumar,Sunil Maharjan,Shazad Mushtaq,Tabassum Noorie,David L Paterson,Andrew Pearson,Claire Perry,Rachel Pike,Bhargavi Rao,Ujjwayini Ray,Jayanta B Sarma,Madhu Sharma,Elizabeth Sheridan,Mandayam A Thirunarayan,Jane Turton,Supriya Upadhyay,Marina Warner,William Welfare,David M Livermore,Neil Woodfo
11、rd31名专家（英，印，巴，荷兰，瑞典，澳）多国联合发表文章-产NDM-1菌株Lancet Infect Dis 2010;10:597602NDM-1NDM-1流行现状流行现状u英国、印度等国研究人员在印度、巴基斯坦、英国等开展英国、印度等国研究人员在印度、巴基斯坦、英国等开展了较大范围的流行病学调查，产了较大范围的流行病学调查，产NDM-1NDM-1肠杆菌科细菌占所肠杆菌科细菌占所检测细菌的检测细菌的1.2%-13%1.2%-13%u主要菌种为大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，其它细菌还有阴主要菌种为大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌，其它细菌还有阴沟肠杆菌、变形杆菌、弗劳地枸橼酸菌、产酸克雷伯菌、沟肠杆菌
12、、变形杆菌、弗劳地枸橼酸菌、产酸克雷伯菌、摩根摩根菌、普罗威登菌等摩根摩根菌、普罗威登菌等u这些细菌主要引起尿路、血流、伤口、肺部和导管相关感这些细菌主要引起尿路、血流、伤口、肺部和导管相关感染等。染等。u在美国、加拿大、日本、韩国、澳大利亚、比利时以及我在美国、加拿大、日本、韩国、澳大利亚、比利时以及我国香港地区等都已经有感染病例报道。国香港地区等都已经有感染病例报道。u产产NDM-1NDM-1细菌感染的易感人群：疾病危重、入住细菌感染的易感人群：疾病危重、入住重症监护室、长期使用抗菌药物、插管、机械通重症监护室、长期使用抗菌药物、插管、机械通气等。气等。u产产NDM-1NDM-1细菌感染患
13、者临床表现与敏感菌感染没细菌感染患者临床表现与敏感菌感染没有差别。有差别。u主要感染类型包括泌尿道感染、伤口感染、医院主要感染类型包括泌尿道感染、伤口感染、医院获得性肺炎、呼吸机相关肺炎、血流感染、导管获得性肺炎、呼吸机相关肺炎、血流感染、导管相关感染等。相关感染等。u感染患者碳青霉烯类治疗无效，需要考虑产感染患者碳青霉烯类治疗无效，需要考虑产NDM-NDM-1 1细菌感染可能，及时采集临床样本进行细菌检测细菌感染可能，及时采集临床样本进行细菌检测调查菌数调查菌数-180-印度南方，印度南方，44，为克隆株，质粒结合，为克隆株，质粒结合-印度北方，印度北方，26，散发，不能质粒结合，散发，不能
14、质粒结合-英国，英国，37，散发，质粒结合，散发，质粒结合-印度、印度、孟买孟买 73，调查细菌调查细菌-大肠杆菌大肠杆菌 36，-肺炎克雷伯菌克肺炎克雷伯菌克 111，-其他菌其他菌特点特点-泛耐药，有泛耐药，有NDM-1金属酶金属酶-英国的英国的17人去过南亚，多为医疗旅行人去过南亚，多为医疗旅行Kumarasamy KK,et al.Lancet Infect Dis,2010;10:597602Kumarasamy KK,et al.Lancet Infect Dis,2010;10:597602Kumarasamy KK,et al.Lancet Infect Dis,2010;10
15、:597602Kumarasamy KK,et al.Lancet Infect Dis,2010;10:597602Kumarasamy KK,et al.Lancet Infect Dis,2010;10:597602NDN1NDN1文献分类文献分类u5757篇文献，其中综述篇文献，其中综述5 5篇，会议文章篇，会议文章9 9篇篇u病例报告类文章病例报告类文章2222篇，论著篇，论著2121篇。篇。u研究方法均为临床病例分析和相应的实验室研究，研究方法均为临床病例分析和相应的实验室研究，u体外研究包括细菌敏感性、体外研究包括细菌敏感性、NDM-1NDM-1酶功能的检测、酶功能的检测、分子生
16、物学及分子生物学及DNADNA测序测序u临床研究包括病例报告与分析。临床研究包括病例报告与分析。NDM1NDM1文献发表年份文献发表年份 Figure 1Distribution of published time of NDM-1 literaturesNDM1文献发表杂志文献发表杂志 期刊名称期刊名称文献数文献数（篇）（篇）影响因子影响因子Antimicrob agents and chemother74.802Clinical Microbiology and Infection74.014The lancet infectious diseases 415.583Emerging in
17、fectious diseases36.794The journal of antimicrobial chemotherapy34.352Journal of the Chinese Medical Association 3NAJournal of clinical microbiology34.162Canadian Medical Association journal27.271Indian journal of medical microbiology2NAClinical infectious diseases28.195Journal of the Formosan Medic
18、al Association 20.661Expert review of anti-infective therapy22.857 国家或地区国家或地区文献数（篇）文献数（篇）UK10France8USA7India6China6Germany5Canada5Netherlands4发文发文NDM12NDM12篇以上的国家篇以上的国家 国家或地区国家或地区 病例数病例数检出细菌检出细菌奥地利奥地利3大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌比利时比利时3大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、摩氏摩根菌大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、摩氏摩根菌丹麦丹麦1肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌芬兰芬兰1肺炎克雷伯菌肺炎克
19、雷伯菌法国法国4弗氏柠檬细菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、奇异弗氏柠檬细菌、肺炎克雷伯菌、大肠埃希菌、奇异变形杆菌变形杆菌德国德国3大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌意大利意大利2大肠埃希菌大肠埃希菌荷兰荷兰2肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌挪威挪威2大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌斯洛文尼亚斯洛文尼亚2肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌西班牙西班牙1肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌相关国家或地区文献报告病例数及检出细菌种类相关国家或地区文献报告病例数及检出细菌种类 国家或地区国家或地区病例数病例数检出细菌检出细菌瑞典瑞典2大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌大肠埃希菌、肺炎
20、克雷伯菌英国英国51弗氏柠檬细菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、摩氏弗氏柠檬细菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、摩氏摩根菌摩根菌中国台湾中国台湾1肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌中国香港中国香港1大肠埃希菌大肠埃希菌中国大陆中国大陆1*鲍曼不动杆菌鲍曼不动杆菌加拿大加拿大1大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌肯尼亚肯尼亚7肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌美国美国3大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、阴沟肠杆菌苏丹苏丹2肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌印度印度143大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、肠杆菌属、摩氏摩根大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、肠杆菌属、摩氏摩根菌菌日本日本1大肠埃希菌大肠埃希菌澳大
21、利亚澳大利亚1大肠埃希菌大肠埃希菌.相关国家或地区文献病例数及检出细菌种类相关国家或地区文献病例数及检出细菌种类NDM-1超级病菌-个例uNDM-1,NDM-1,法国、英国、美国、加拿大、比利时、澳法国、英国、美国、加拿大、比利时、澳大利亚、荷兰、日本、香港都有大利亚、荷兰、日本、香港都有u目前目前170170人被感染人被感染u香港去年十月，香港去年十月，-66-66岁的印度男患者的尿液测出岁的印度男患者的尿液测出NDM1NDM1大肠杆菌，痊愈出院大肠杆菌，痊愈出院u法新社，比利时布鲁塞尔一个医生说，一男子曾法新社，比利时布鲁塞尔一个医生说，一男子曾在巴基斯坦出车祸，又回比接受短暂粘菌素治疗，
22、在巴基斯坦出车祸，又回比接受短暂粘菌素治疗，今年今年6 6月死亡。按法新社说法，他是月死亡。按法新社说法，他是NDM1NDM1致死致死第一人？第一人？日本第一例产日本第一例产NDM1NDM1大肠埃希菌大肠埃希菌u 日本独协医大医院的一名男性日本独协医大医院的一名男性患者身上分离出的大肠埃希菌患者身上分离出的大肠埃希菌被确认是日本国内首例被确认是日本国内首例NDM1超级细菌。超级细菌。u 日本新潟大学研究生院教授山日本新潟大学研究生院教授山本达男日前通过电子显微镜成本达男日前通过电子显微镜成功拍摄到了功拍摄到了“超级超级”大肠埃希大肠埃希菌的照片。该细菌拥有菌的照片。该细菌拥有“NDM1”基因，
23、对大多数抗基因，对大多数抗生素具有耐药性。山本表示，生素具有耐药性。山本表示，这应该是全球首次成功拍摄到这应该是全球首次成功拍摄到NDM1超级细菌照片超级细菌照片u 该细菌长约该细菌长约2微米。超级细菌微米。超级细菌的鞭毛更多，更具灵活性，感的鞭毛更多，更具灵活性，感染能力也更强。表面覆有一层染能力也更强。表面覆有一层可抵御白血球攻击的膜，可抵御白血球攻击的膜，Antimicrop.Agents Chemother.published ahead of print on 7 September 2010,doi:10.1128/AAc.00878-10 Emergence of metallo
24、-lactamase NDM-1-producing-multidrug resistant Escherichia coli in Australia(澳洲)u多重耐药大肠埃希菌多重耐药大肠埃希菌u水解碳青霉烯水解碳青霉烯u含含NDM-1基因金属酶基因金属酶u还具有还具有ESBL-CTX-M-15基因基因u两个两个16S RNA 甲基化酶（甲基化酶（ArmA、RmtB）高耐氨基糖苷类）高耐氨基糖苷类澳大利亚第一株澳大利亚第一株NDM-1NDM-1大肠埃希菌大肠埃希菌NDM-1NDM-1很有可能传播很有可能传播uNDM-1为质粒介导，很容易传到其他细菌，已经证实。为质粒介导，很容易传到其他细菌
25、，已经证实。u“医疗旅行医疗旅行”及商务旅行，旅游可加速耐药基因的传播。及商务旅行，旅游可加速耐药基因的传播。uNDM-1存在于大肠埃希菌、肺克中。存在于大肠埃希菌、肺克中。u下列情况促使耐药基因传播：下列情况促使耐药基因传播：-卫生条件低下卫生条件低下 -人口过多人口过多 -湿热气候湿热气候 -抗菌药物的广泛，和过量使用抗菌药物的广泛，和过量使用NDM-1NDM-1的检定的检定 碳青霉烯类不敏感菌碳青霉烯类不敏感菌 纸片法纸片法 PCR 改良改良HODGE 荧光荧光PCR EDTA E Ttest条条 分子流行病学分子流行病学 EDTA 纸片协同法纸片协同法 耐药机制和感控耐药机制和感控 N
26、DM-1 NDM-1 的检测方法的检测方法p NDM-1NDM-1，即新德里金属，即新德里金属-内酰胺酶内酰胺酶-1-1型，是由细菌质粒上携型，是由细菌质粒上携带的带的blablaNDM-1NDM-1基因编码的。目前，国际上已有五十余篇关于基因编码的。目前，国际上已有五十余篇关于NDM-1NDM-1的研究性文章或相关部门报告发表。的研究性文章或相关部门报告发表。p 由由blablaNDM-1NDM-1编码产生的碳青霉烯酶及因此产生的对编码产生的碳青霉烯酶及因此产生的对碳青霉烯碳青霉烯类耐药性类耐药性可以通过现有推荐使用的表型鉴定方法准确、可可以通过现有推荐使用的表型鉴定方法准确、可靠的鉴定出来
27、靠的鉴定出来1 US CDC.MMWR Morb Mortal Wkly Rep.2010 Jun 25;59(24):750.2 Yong D et al.Antimicrob Agents Chemother.2009 Dec;53(12):5046-54.CLSI M100-S20及及CLSI M100-S20-U碳青霉烯类折点碳青霉烯类折点2010年年 抗菌药物抗菌药物多利培南多利培南厄他培南厄他培南亚胺培南亚胺培南美罗培南美罗培南纸片扩散法纸片扩散法(mm)M100-S20S R-19 1516 1316 13M100-S20-US R23 1923 1923 1923 19稀释法稀
28、释法(mg/L)M100-S20S R-2 84 16 4 16 M100-S20-US R1 40.25 11 41 4表型筛查试验表型筛查试验 纸片扩散法：纸片扩散法：美罗培南（美罗培南（10ug10ug）或亚胺培南（）或亚胺培南（10ug10ug）：）：抑菌圈直径抑菌圈直径22mm22mm 肉汤稀释法或肉汤稀释法或EtestEtest法法美罗培南或亚胺培南美罗培南或亚胺培南:MIC2ug/ml:MIC2ug/ml亚胺培南适合于大肠埃希菌，克雷伯菌属，沙门菌属，亚胺培南适合于大肠埃希菌，克雷伯菌属，沙门菌属，肠杆菌属肠杆菌属 变形杆菌属、普罗威登斯菌属和摩根菌属对亚胺培南敏感变形杆菌属、普
29、罗威登斯菌属和摩根菌属对亚胺培南敏感性下降是由产碳青霉烯酶外的其他机制引起，因此对这些性下降是由产碳青霉烯酶外的其他机制引起，因此对这些菌株尚未建立用亚胺培南菌株尚未建立用亚胺培南MICMIC法进行筛选和确认碳青霉烯法进行筛选和确认碳青霉烯酶，并且亚胺培南纸片法对所有肠杆菌科碳青霉烯酶的筛酶，并且亚胺培南纸片法对所有肠杆菌科碳青霉烯酶的筛查效果都不好查效果都不好 1 Yong D et al.Antimicrob Agents Chemother.2009 Dec;53(12):5046-54.2 Kumarasamy KK et al.Lancet Infect Dis.2010 Sep;1
30、0(9):597-602.表型确认实验表型确认实验u双纸片协同试验双纸片协同试验:采用亚胺培南采用亚胺培南(10g)(10g)、EDTAEDTA（1500g1500g）两种纸片进行两种纸片进行K-BK-B法，两纸片距离法，两纸片距离10-10-15mm15mm，在含，在含EDTAEDTA纸片方向处，亚胺培南抑菌圈纸片方向处，亚胺培南抑菌圈扩大，即可判定产金属酶。扩大，即可判定产金属酶。u采用亚胺培南（美罗培南）采用亚胺培南（美罗培南）/EDTA/EDTA复合纸片进行复合纸片进行K-BK-B法药敏试验，复合纸片比单药纸片的抑菌圈直法药敏试验，复合纸片比单药纸片的抑菌圈直径增大值径增大值5mm5m
31、mu亚胺培南（美罗培南）亚胺培南（美罗培南）/EDTA/EDTA复合复合E E试条协同试试条协同试验测定验测定MICMIC，单药与复合制剂的，单药与复合制剂的MICMIC比值比值88，即，即可判定产金属酶。可判定产金属酶。表型确证试验表型确证试验u纸片扩散法：纸片扩散法：uEtest法：法：u双纸片协同法：双纸片协同法：u改良霍奇试验改良霍奇试验(modified Hodge test)(modified Hodge test)u自动化鉴定与药敏仪器自动化鉴定与药敏仪器1 Yong D et al.Antimicrob Agents Chemother.2009 Dec;53(12):5046
32、-54.2 Kumarasamy KK et al.Lancet Infect Dis.2010 Sep;10(9):597-602.表型确证试验表型确证试验 纸片扩散法：纸片扩散法：亚胺培南亚胺培南(10ug)/(10ug)/亚胺培南亚胺培南(10ug)+(10ug)+EDTA(1500mM 10ul)EDTA(1500mM 10ul)复合纸片复合纸片结果判读：复合纸片比单药纸片抑菌环直径增大结果判读：复合纸片比单药纸片抑菌环直径增大5mm5mm图：复合纸片法判定金属图：复合纸片法判定金属-内酰胺酶示意图内酰胺酶示意图 (左纸片：亚胺培南左纸片：亚胺培南/EDTA,/EDTA,右纸片：亚胺培
33、南右纸片：亚胺培南)1 Yong D et al.J Clin Microbiol.2002 Oct;40(10):3798-801.表型确证试验表型确证试验Etest法：法：Etest MBL(IP/IPI、MP/MPI)结果判读：单药与复合制剂的结果判读：单药与复合制剂的MIC比值比值8图图：Etest MBL(IP/IPI)1 http:/www.biomerieux- MBL 试验示意图(亚胺培南/亚胺培南+抑制剂EDTA)1 Lee K et al.J Clin Microbiol.2005 Feb;43(2):942-4.表型确证试验表型确证试验 双纸片协同法：双纸片协同法：亚胺培
34、南亚胺培南(10ug)、EDTA(0.5M x 10 l约约0.5mg/片片)，间距间距10mm(0.5McF）图：图：亚胺培南-EDTA双纸片协同试验示意图(图中菌种为铜绿假单胞菌)1 Lee K et al.J Clin Microbiol.J Clin Microbiol.2003 Oct;41(10):4623-9.表型确证试验表型确证试验 改良霍奇试验改良霍奇试验(modified Hodge test)blaNDM-1blaNDM-1基因检测（荧光定量基因检测（荧光定量PCRPCR法）法）（该方法待标准菌以确认）（该方法待标准菌以确认）提取质粒提取质粒DNA及基因组及基因组DNA
35、配制配制PCR反应液（含特异反应液（含特异性引物及探针）性引物及探针）加入步骤加入步骤3提取的模板提取的模板DNA进行扩增进行扩增 测定样本测定样本DNA的扩增的扩增Ct值，值，小于特定小于特定Ct值的判为阳性。值的判为阳性。阴性、阳性对照品进行阴性、阳性对照品进行DNA提取提取 配制配制PCR反应液（含特异反应液（含特异性引物及探针）性引物及探针）阴性、阳性对照品阴性、阳性对照品DNA进进行扩增行扩增 阴性及阳性对照品检测结阴性及阳性对照品检测结果应符合质量标准果应符合质量标准PCRPCR测测NDM-1NDM-1的引物的引物第一对引物：第一对引物：5-CAGCACACTTCCTATCTC-3
36、5-CCGCAACCATCCCCTCTT-3第二对引物：第二对引物：5-GGCGGAATGGCTCATCACGA-35-CGCAACACAGCCTGACTTTC-3也可以自己设计引物，还可以实际金属酶的通用引物也可以自己设计引物，还可以实际金属酶的通用引物Bla NDM-1Bla NDM-1基因检测（荧光定量基因检测（荧光定量PCRPCR法）法）u提取质粒提取质粒DNA及基因组及基因组DNA（包括阴性、阳性对照品）（包括阴性、阳性对照品）u配制配制PCR反应液（含特异性引物及探针）反应液（含特异性引物及探针）u加入提取的模板加入提取的模板DNA进行扩增（包括阴性、阳性对照品）进行扩增（包括阴性
37、、阳性对照品）u测定样本测定样本DNA的扩增的扩增Ct值，小于特定值，小于特定Ct值的判为阳性。值的判为阳性。u阴性及阳性对照品检测结果应符合质量标准阴性及阳性对照品检测结果应符合质量标准NDM1NDM1有效药物有效药物1.1.替加环素（替加环素（tigecyclinetigecycline）:四环素类衍生物，超广谱抗菌药物，对产四环素类衍生物，超广谱抗菌药物，对产NDM-1NDM-1细菌细菌MIC90MIC90值为值为2-8mg/L2-8mg/L，敏感率，敏感率56%-67%56%-67%。治疗产碳青霉。治疗产碳青霉烯酶细菌感染有一定疗效。烯酶细菌感染有一定疗效。2.2.多粘菌素（多粘菌素（
38、polymyxinspolymyxins）:属多肽类抗菌药物，包括多粘菌素属多肽类抗菌药物，包括多粘菌素B B和粘菌和粘菌素两种。粘菌素对产素两种。粘菌素对产NDM-1NDM-1细菌细菌MIC90MIC90为为2-32mg/L2-32mg/L，敏感率，敏感率89%-89%-100%100%。小样本研究提示单用治疗效果差，需和其它药物联用，要。小样本研究提示单用治疗效果差，需和其它药物联用，要静脉注射给药，肾毒性明显。静脉注射给药，肾毒性明显。3.3.碳青霉烯类：碳青霉烯类：产产NDM-1NDM-1细菌对碳青霉烯类耐药，体外细菌对碳青霉烯类耐药，体外MICMIC值差异较值差异较大，对大，对MIC
39、MIC值低（值低（4mg/L4mg/L）的菌株感染有一定疗效，需和其它药）的菌株感染有一定疗效，需和其它药物联用物联用4.4.氨基糖苷类：氨基糖苷类：不同药物间呈部分交叉耐药，我国临床分离的产金属不同药物间呈部分交叉耐药，我国临床分离的产金属-内酰胺酶肠杆菌科细菌对阿米卡星、异帕米星具有一定敏感性。内酰胺酶肠杆菌科细菌对阿米卡星、异帕米星具有一定敏感性。对轻、中度感染可以单用，重度感染需要与其它药物联合应用。用对轻、中度感染可以单用，重度感染需要与其它药物联合应用。用药期间注意药物耳肾毒性。药期间注意药物耳肾毒性。NDM1NDM1有效药物有效药物5.5.氟喹诺酮类：氟喹诺酮类：需要根据药物敏感
40、性测定结果选择药物。需要根据药物敏感性测定结果选择药物。6.6.磷霉素：磷霉素：体外研究表明对部分耐药菌有效，但缺乏临床体外研究表明对部分耐药菌有效，但缺乏临床研究数据。研究数据。7 7、联合方案：、联合方案：如替加环素联合多粘菌素如替加环素联合多粘菌素 替加环素联合磷霉素替加环素联合磷霉素 替加环素联合氨基糖苷类替加环素联合氨基糖苷类 碳青霉烯类联合氨基糖苷类碳青霉烯类联合氨基糖苷类 碳青霉烯类联合多粘菌素碳青霉烯类联合多粘菌素 喹诺酮类联合碳青霉烯类等喹诺酮类联合碳青霉烯类等产NDM-1细菌感染预防1.1.在进行各种侵袭性操作中，严格执行无菌操作。在进行各种侵袭性操作中，严格执行无菌操作。
41、2.2.严格执行严格执行医务人员手卫生规范医务人员手卫生规范（WS/T313-2009WS/T313-2009）：医疗机）：医疗机构必须提供充足的手卫生设施。医务人员在接触病人前后、构必须提供充足的手卫生设施。医务人员在接触病人前后、进行侵入性操作前、接触病人使用的物品或处理其分泌物、进行侵入性操作前、接触病人使用的物品或处理其分泌物、排泄物后，必须洗手或用含醇类速干手消毒剂擦手。排泄物后，必须洗手或用含醇类速干手消毒剂擦手。3.3.加强对重点部门尤其是加强对重点部门尤其是ICUICU物体表面的清洁、消毒。对生命监物体表面的清洁、消毒。对生命监护仪、微量输液泵、呼吸机等医疗器械的面板或旋钮表面
42、、护仪、微量输液泵、呼吸机等医疗器械的面板或旋钮表面、计算机键盘和鼠标、电话机、病人床栏杆和床头桌等，采用计算机键盘和鼠标、电话机、病人床栏杆和床头桌等，采用适宜的消毒剂，每天必须仔细擦拭、消毒，疑似或确认有产适宜的消毒剂，每天必须仔细擦拭、消毒，疑似或确认有产NDM-1NDM-1细菌感染或带菌者，所处病室需增加消毒次数。细菌感染或带菌者，所处病室需增加消毒次数。4.4.隔离确诊产隔离确诊产NDM-1NDM-1细菌感染或定植者，预防耐药菌传播。将病细菌感染或定植者，预防耐药菌传播。将病人安置单独房间，接触患者时需要穿隔离衣、戴手套，相关人安置单独房间，接触患者时需要穿隔离衣、戴手套，相关医疗器械或物品如听诊器、血压计等专用，不能专用需用后医疗器械或物品如听诊器、血压计等专用，不能专用需用后严格消毒。隔离期间需要定期检测耐药菌情况。严格消毒。隔离期间需要定期检测耐药菌情况。
