1、Page1细胞工程细胞工程第七章第七章 细胞融合与体细胞杂交细胞融合与体细胞杂交Page2细胞工程细胞工程 远缘杂交：远缘杂交：不同种属之间，或是地理上远缘的种内亚种之间个不同种属之间，或是地理上远缘的种内亚种之间个体的交配。种属间存在着隔离机制，致使远缘杂交常表现不亲体的交配。种属间存在着隔离机制，致使远缘杂交常表现不亲和或获得的远缘杂种表现不育。和或获得的远缘杂种表现不育。不亲和性：在有性生殖过程中，由于生物个体的细胞或组织水不亲和性：在有性生殖过程中，由于生物个体的细胞或组织水平上的不协调而使受精或接合不能正常进行，或是受精后不能平上的不协调而使受精或接合不能正常进行，或是受精后不能产生
2、后代的现象。一般表现为产生后代的现象。一般表现为生殖细胞不能融合，或受精卵不生殖细胞不能融合，或受精卵不能发育，或子代无繁殖能力能发育，或子代无繁殖能力等。不亲和性是稳定物种的重要机等。不亲和性是稳定物种的重要机理之一。理之一。第一节第一节 细胞融合细胞融合Page3细胞工程细胞工程杂交斑马：由斑马和马科动物杂交斑马：由斑马和马科动物杂交的产物。杂交的产物。狮虎：狮子和老虎的杂交产物。狮虎：狮子和老虎的杂交产物。豹狮：美洲豹与狮子的杂交产豹狮：美洲豹与狮子的杂交产物。物。Page4细胞工程细胞工程 细胞融合（细胞融合（Cell fusionCell fusion）是指使用人工方法使两个是指使用
3、人工方法使两个或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术。或两个以上的细胞合并形成一个细胞的技术。对于植物也叫原生质体融合，亲本细胞是体细胞，也对于植物也叫原生质体融合，亲本细胞是体细胞，也叫体细胞杂交（叫体细胞杂交（somatic cell hybridizationsomatic cell hybridization）。）。Page5细胞工程细胞工程uMuller于于1838年观察到脊椎动的肿瘤细胞能在体内自发地融合年观察到脊椎动的肿瘤细胞能在体内自发地融合产生多核的肿瘤细胞。产生多核的肿瘤细胞。uVirchow于于1858年描述了正常组织、发炎组织以及肿瘤组织中年描述了正常组织、发炎组织以及
4、肿瘤组织中的多核细胞现象。的多核细胞现象。uLuginbuhl于于1873年观察到天花病人的血液中也有多核的血细年观察到天花病人的血液中也有多核的血细胞存在。胞存在。uLange于于1875年第一个观察到脊椎动物（蛙类）的血液细胞发年第一个观察到脊椎动物（蛙类）的血液细胞发生融合的过程。生融合的过程。uCienkawski(1876)、Buck(1877)、Geddes(1880)在无脊椎动中在无脊椎动中发现了细胞合并现象。发现了细胞合并现象。细胞融合研究历史细胞融合研究历史Page6细胞工程细胞工程u1958年日本学者冈田（年日本学者冈田（Okada）发现）发现仙台病毒仙台病毒具有触发动物细
5、具有触发动物细胞融合的效应。胞融合的效应。u1974年华裔加拿大学者高国楠创立了聚乙二醇（年华裔加拿大学者高国楠创立了聚乙二醇（PEG）化学）化学融合法。融合法。u1975年年Kohler和和Milstein成功地融合了小鼠成功地融合了小鼠B-淋巴细胞和骨髓淋巴细胞和骨髓瘤细胞而产生能分泌预定单克隆抗体的杂交瘤细胞。瘤细胞而产生能分泌预定单克隆抗体的杂交瘤细胞。u20世纪世纪80年代出现了电融合技术。年代出现了电融合技术。Page7细胞工程细胞工程细胞融合的分类细胞融合的分类1.1.材料：材料：原生质体（去除了细胞壁的裸露的细胞）、动物细胞原生质体（去除了细胞壁的裸露的细胞）、动物细胞2.2.
6、从基因型来看从基因型来看：（1 1）同核体：基因型相同的细胞融合成的融合细胞。）同核体：基因型相同的细胞融合成的融合细胞。（2 2）异核体：来自不同基因型的融合细胞。）异核体：来自不同基因型的融合细胞。3.3.从融合效果从融合效果：（1 1）对称融合（）对称融合（Symmetric fusionSymmetric fusion）：两个完整的细胞间的融合。）：两个完整的细胞间的融合。（2 2）不对称融合（）不对称融合（Asymmetric fusionAsymmetric fusion）：利用物理或化学方法）：利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再与另外一个完整细胞进行融合。使某亲本的核
7、或细胞质失活后再与另外一个完整细胞进行融合。Page8细胞工程细胞工程根据融合时细胞的完整程度根据融合时细胞的完整程度 1)1)对称融合对称融合 Page9细胞工程细胞工程 2)2)非对称融合非对称融合 利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后利用物理或化学方法使某亲本的核或细胞质失活后再进行融合，它可以分为三种情况：再进行融合，它可以分为三种情况：融合细胞融合细胞=A=A细胞核细胞核+B+B细胞质细胞质融合细胞融合细胞=A=A细胞细胞(核核+质质)+B)+B细胞质细胞质融合细胞融合细胞=A=A细胞细胞(核核+质质)+B)+B细胞细胞(部分核部分核+质质)Page10细胞工程细胞工程 非对
8、称融合非对称融合Page11细胞工程细胞工程 2.2.根据原生质体的融合方式根据原生质体的融合方式1 1）自发融合）自发融合2 2）诱导融合）诱导融合Page12细胞工程细胞工程1 1）自发融合）自发融合 用酶法分解细胞壁后自发的进行融合。这类融合是用酶法分解细胞壁后自发的进行融合。这类融合是种内融合，与胞间连丝有关，融合的个体一般不能种内融合，与胞间连丝有关，融合的个体一般不能进一步发育。进一步发育。Page13细胞工程细胞工程2 2）诱导融合）诱导融合 是指制备出原生质体后，加入诱导剂或用其他方法是指制备出原生质体后，加入诱导剂或用其他方法促使两个亲本原生质体融合，诱导融合可以是种内促使两
9、个亲本原生质体融合，诱导融合可以是种内的，也可以是种间的，甚至是属间、科间的融合。的，也可以是种间的，甚至是属间、科间的融合。Page14细胞工程细胞工程显显微微镜镜下下细细胞胞融融合合过过程程Page15细胞工程细胞工程植物融合细胞成长状态对比植物融合细胞成长状态对比,左瓶中为太空微重力环境下左瓶中为太空微重力环境下融合的细胞，右瓶为地面融融合的细胞，右瓶为地面融合的细胞。合的细胞。Page16细胞工程细胞工程融合的过程，原理与关键融合的过程，原理与关键Page17细胞工程细胞工程细胞融合的主要步骤细胞融合的主要步骤 原生质体靠近 形成细胞桥 胞质渗透 细胞核融合 显微镜下的细胞融合过程显微
10、镜下的细胞融合过程 Page18细胞工程细胞工程细胞融合的原理细胞融合的原理 细胞融合的基础是细胞膜的流动性，细胞融合的基础是细胞膜的流动性，细胞膜磷脂分子细胞膜磷脂分子扰动出现通道扰动出现通道 细胞桥。细胞桥。生物膜的流动镶嵌模型(fluid mosaic model)Page19细胞工程细胞工程融合过程中两个细胞融合过程中两个细胞膜从彼此接触到破裂膜从彼此接触到破裂形成细胞桥的变化过形成细胞桥的变化过程图解。程图解。Page20细胞工程细胞工程关键：细胞核的融合关键：细胞核的融合 若是没发生细胞核的融合，仅发生了细胞质若是没发生细胞核的融合，仅发生了细胞质的融合，则可能成为的融合，则可能成
11、为嵌合细胞。嵌合细胞。细胞核的合细胞核的合并发生在有丝分裂过程中。但是这种有丝分并发生在有丝分裂过程中。但是这种有丝分裂只有当两个核的裂只有当两个核的DNADNA合成基本同步时才能发合成基本同步时才能发生：两个核同时进行有丝分裂，形成一个纺生：两个核同时进行有丝分裂，形成一个纺锤体，全部染色体都排列在一个赤道板上，锤体，全部染色体都排列在一个赤道板上，结果伴随着细胞分裂就形成了单核的子细胞，结果伴随着细胞分裂就形成了单核的子细胞，其细胞核中含有双亲细胞的染色体。其细胞核中含有双亲细胞的染色体。Page21细胞工程细胞工程细胞融合的意义细胞融合的意义u理论上说理论上说任何细胞任何细胞，都有可能通
12、过体细胞杂交而成为新的，都有可能通过体细胞杂交而成为新的生物资源。这对于种质资源的开发和利用具有深远的意义。生物资源。这对于种质资源的开发和利用具有深远的意义。u融合过程融合过程不存在有性杂交过程中的生殖隔离机制不存在有性杂交过程中的生殖隔离机制的限制，的限制，为为远缘物种间的遗传物质交换远缘物种间的遗传物质交换提供了有效途径。提供了有效途径。u体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自体细胞杂交产生的杂种细胞含有来自双亲的核外遗传系统双亲的核外遗传系统，在杂种的分裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体在杂种的分裂和增殖过程中双亲的叶绿体、线粒体DNADNA亦可发亦可发生重组，从而产生新的核外遗传系统。生重
13、组，从而产生新的核外遗传系统。u淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体的制备。淋巴细胞杂交瘤和单克隆抗体的制备。Page22细胞工程细胞工程pomato 绵山羊 Page23细胞工程细胞工程 细胞融合的常用方法细胞融合的常用方法物理法：显微操作，电场刺激等物理法：显微操作，电场刺激等化学法：硝酸钠诱导、化学法：硝酸钠诱导、PEGPEG法，高钙离子结合高法，高钙离子结合高pHpH法法生物法：仙台病毒法生物法：仙台病毒法Page24细胞工程细胞工程病毒法的主要步骤病毒法的主要步骤1.两个原生质体或细胞在病毒两个原生质体或细胞在病毒黏结黏结作用下彼此靠近；作用下彼此靠近；2.通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两
14、个细胞膜间互相渗通过病毒与原生质体或细胞膜的作用使两个细胞膜间互相渗透，胞质互相渗透；透，胞质互相渗透；3.两个原生质体的细胞核互相融合，两个细胞融为一体；两个原生质体的细胞核互相融合，两个细胞融为一体；4.进入正常的细胞分裂途径，分裂成含有两种染色体的杂种细进入正常的细胞分裂途径，分裂成含有两种染色体的杂种细胞。胞。基本原理：是利用病毒具有凝集细胞的能力基本原理：是利用病毒具有凝集细胞的能力生物法：仙台病毒法生物法：仙台病毒法Page25细胞工程细胞工程用用灭活的病毒灭活的病毒诱导的诱导的动物细胞融合过程示动物细胞融合过程示意图意图 Page26细胞工程细胞工程化学诱导融合方法化学诱导融合方
15、法 NaNONaNO3 3法法 高高pH-pH-高高CaCa2+2+法法 PEGPEG诱导融合法诱导融合法Page27细胞工程细胞工程（一）（一）NaNO3法法 NaNO3的作用：中和质膜的负电荷，使原生质体不的作用：中和质膜的负电荷，使原生质体不再相互排斥，而紧密结合在一起。不足：诱导频率再相互排斥，而紧密结合在一起。不足：诱导频率不高。不高。Page28细胞工程细胞工程（二）高（二）高pH-高高CaCa2+2+法法 用用pH10.5的的50 mMCaCl2溶液在溶液在37时，诱发原生时，诱发原生质体融合。质体融合。优点：杂种产量高。优点：杂种产量高。不足：高不足：高pH值对细胞有毒害作用。
16、值对细胞有毒害作用。Page29细胞工程细胞工程u聚乙二醇聚乙二醇(PEG)结构为：结构为：HOH2C（CH20CH2）nCH2OH，分，分子量大于子量大于 200小于小于6000者均可用作细胞融合剂。者均可用作细胞融合剂。u通常用分子量低于通常用分子量低于1000的的PEG作融合剂最好，作融合剂最好，50PEG溶液溶液能产生能产生 最多杂交细胞。最多杂交细胞。uPEG溶液在溶液在pH6.0时细胞融合率最高。时细胞融合率最高。u优点是易得，用法简单，融合效果稳定。优点是易得，用法简单，融合效果稳定。（三）（三）聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）法）法Page30细胞工程细胞工程聚聚乙乙二二醇醇
17、法法细细胞胞融融合合过过程程Page31细胞工程细胞工程PEGPEG诱导融合的特点：诱导融合的特点：其优点是融合成本低其优点是融合成本低，无需，无需特殊设备；特殊设备；融合产生融合产生的异核率较高；融合过程不受物种限制。其缺点是融的异核率较高；融合过程不受物种限制。其缺点是融合过程繁琐，合过程繁琐，PEGPEG可能对细胞有毒害。可能对细胞有毒害。PEGPEG的作用机理：的作用机理：KaoKao等认为，由于等认为，由于PEGPEG分子具有轻微的负极分子具有轻微的负极性，故可以与具有正极性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形性，故可以与具有正极性基团的水、蛋白质和碳水化合物等形成成H H键，从而在质膜
18、之间形成分子桥，其结果是使细胞质膜发生键，从而在质膜之间形成分子桥，其结果是使细胞质膜发生粘连进而促使质膜的融合；另外，粘连进而促使质膜的融合；另外，PEGPEG能增加脂膜的流动性，也能增加脂膜的流动性，也使细胞的核、细胞器发生融合成为可能。使细胞的核、细胞器发生融合成为可能。Page32细胞工程细胞工程（1 1）将两种不同亲本细胞各）将两种不同亲本细胞各5 5l0l06 6混匀；混匀；（2 2）离心沉淀，吸去上清液；）离心沉淀，吸去上清液；（3 3）加）加1ml 501ml 50PEGPEG溶液，用吸管吹打，使之与细胞接触溶液，用吸管吹打，使之与细胞接触1 1分钟分钟（4 4）加）加9ml
19、9ml 培养液，离心沉淀，吸去上清液；培养液，离心沉淀，吸去上清液；（5 5）加）加5ml 5ml 培养液，分别接种培养液，分别接种5 5个直径个直径60mm60mm平皿，每个平皿加培平皿，每个平皿加培养液至养液至 5ml5ml，3737的的COCO2 2培养箱中培养。培养箱中培养。（6 6）624624小时后，换成选择培养液筛选杂交细胞。小时后，换成选择培养液筛选杂交细胞。聚乙二醇（聚乙二醇（PEGPEG）法细胞融合步骤）法细胞融合步骤Page33细胞工程细胞工程PEGPEG诱导的细胞融合过程示意图诱导的细胞融合过程示意图 Page34细胞工程细胞工程PEG 诱导鸡血细胞体外融合 Page3
20、5细胞工程细胞工程物理诱导融合方法物理诱导融合方法电融合法电融合法1.1.电融合法原理电融合法原理2.2.电融合优点电融合优点Page36细胞工程细胞工程电融合法电融合法 电融合法是电融合法是80年代出现的细胞融合技术，在直流电脉冲的年代出现的细胞融合技术，在直流电脉冲的诱导下，细胞膜表面的诱导下，细胞膜表面的氧化还原电位氧化还原电位发生改变，使异种细胞粘发生改变，使异种细胞粘合并发生质膜瞬间破裂，进而质膜开始连接，直到闭和成完整合并发生质膜瞬间破裂，进而质膜开始连接，直到闭和成完整的膜，形成融合体。的膜，形成融合体。电融合法的优点：电融合法的优点：u融合率高、重复性强、对细胞伤害小；融合率高
21、、重复性强、对细胞伤害小；u装置精巧、方法简单、可在显微镜下观察或录像融合过程；装置精巧、方法简单、可在显微镜下观察或录像融合过程；u免去免去PEG诱导后的洗涤过程、诱导过程可控性强。诱导后的洗涤过程、诱导过程可控性强。Page37细胞工程细胞工程细胞膜的接触：细胞膜的接触：当原生质体置于电导率很低的溶液中时，电当原生质体置于电导率很低的溶液中时，电场通电后，场通电后，电流即通过原生质体而不是通过溶液电流即通过原生质体而不是通过溶液，其结果是，其结果是原生质体在电场作用下极化而产生偶极子，从而使原生质体原生质体在电场作用下极化而产生偶极子，从而使原生质体紧密接触排列成串；紧密接触排列成串；膜的
22、击穿：膜的击穿：原生质体成串排列后，立即给予原生质体成串排列后，立即给予高频直流脉冲高频直流脉冲就就可以使原生质膜击穿，从而导致两个紧密接触的细胞融合在可以使原生质膜击穿，从而导致两个紧密接触的细胞融合在一起。一起。电融合法的基本过程电融合法的基本过程Page38细胞工程细胞工程电融合诱导法原电融合诱导法原理示意图理示意图Page39细胞工程细胞工程Page40细胞工程细胞工程穿孔 融合 排队 融合 燕麦原生质体的融合燕麦原生质体的融合 Page41细胞工程细胞工程第二节第二节 植物体细胞杂交植物体细胞杂交 体细胞杂交体细胞杂交 两种异源（种、属间）两种异源（种、属间）原生质体，在人工控制条件
23、下，相原生质体，在人工控制条件下，相互接触发生细胞融合并使之分化再互接触发生细胞融合并使之分化再生形成新品种的过程。生形成新品种的过程。Page42细胞工程细胞工程Page43细胞工程细胞工程体细胞杂交的意义体细胞杂交的意义u实现远缘杂交，形成新的物种实现远缘杂交，形成新的物种u创造创造细胞质杂种细胞质杂种核外遗传系统核外遗传系统u培育作物新种质和新品种培育作物新种质和新品种Page44细胞工程细胞工程植物体细胞杂交的过程植物体细胞杂交的过程1.1.亲本选择亲本选择2.2.原生质体的制备原生质体的制备3.3.原生质体融合原生质体融合4.4.融合（杂种）细胞筛选（关键）融合（杂种）细胞筛选（关键
24、）5.5.细胞壁再生细胞壁再生6.6.分裂形成细胞团分裂形成细胞团-愈伤组织愈伤组织7.7.杂种植株的再生与鉴定杂种植株的再生与鉴定Page45细胞工程细胞工程杂种细胞筛选方式杂种细胞筛选方式 1.1.抗药性筛选法抗药性筛选法 2.2.营养互补筛选法营养互补筛选法 3.3.物理特性筛选法物理特性筛选法 4.4.荧光标记法荧光标记法Page46细胞工程细胞工程1.1.抗药性筛选法抗药性筛选法 利用细胞对药物敏感性的差异筛选融合细胞利用细胞对药物敏感性的差异筛选融合细胞，教教材材P71。Page47细胞工程细胞工程2.2.营养互补筛选法营养互补筛选法 根据双亲原生质体对营养的要求不同而建立的方法。
25、根据双亲原生质体对营养的要求不同而建立的方法。例如，例如，GlimeliusGlimelius等用突变位点不同的烟草硝酸还原酶缺失培等用突变位点不同的烟草硝酸还原酶缺失培养基进行选择。养基进行选择。突变体由于缺乏正常的硝酸还原酶而不能在该培养基上生长；突变体由于缺乏正常的硝酸还原酶而不能在该培养基上生长；而杂种细胞由于两个突变体的互补作用，产生的体细胞杂种而杂种细胞由于两个突变体的互补作用，产生的体细胞杂种恢复了正常硝酸还原酶活性，因此只在有硝酸盐的培养基上恢复了正常硝酸还原酶活性，因此只在有硝酸盐的培养基上正常生长。正常生长。Page48细胞工程细胞工程3.3.根据物理特性筛选根据物理特性筛
26、选 利用细胞在形态、大小、颜色上的差别可以在倒置显微镜下利用细胞在形态、大小、颜色上的差别可以在倒置显微镜下用微管将融合细胞吸取挑选出来。用微管将融合细胞吸取挑选出来。Page49细胞工程细胞工程形态形态/大小大小/颜色等性质颜色等性质 拟南芥 薄荷 亲本 杂交 亲本 Page50细胞工程细胞工程4.4.荧光标记法荧光标记法亲本亲本1 1：异硫氰酸荧光素标记：异硫氰酸荧光素标记-绿色绿色亲本亲本2 2：异硫氰酸罗丹明标记：异硫氰酸罗丹明标记-红色红色在荧光显微镜下，亲本在荧光显微镜下，亲本1 1为绿色，亲本为绿色，亲本2 2为红色，杂种细为红色，杂种细胞存在两种荧光标记。胞存在两种荧光标记。P
27、age51细胞工程细胞工程Page52细胞工程细胞工程其它杂种细胞筛选方式其它杂种细胞筛选方式突变互补筛选突变互补筛选1 1）隐性突变互补筛选）隐性突变互补筛选2 2）显性抗性互补筛选）显性抗性互补筛选3 3）隐性突变和野生型互补筛选）隐性突变和野生型互补筛选4 4）显）显-隐性双隐性双突变体筛选突变体筛选Page53细胞工程细胞工程1 1）隐性突变互补筛选）隐性突变互补筛选亲本亲本1 1：叶绿体缺陷型：叶绿体缺陷型亲本亲本2 2：光致死型：光致死型 两亲本在光照下一种死亡，另一种呈白色，融合细两亲本在光照下一种死亡，另一种呈白色，融合细胞长成植株呈绿色，能正常生长。胞长成植株呈绿色，能正常生
28、长。Page54细胞工程细胞工程2 2）显性抗性互补筛选）显性抗性互补筛选亲本亲本1 1：抗：抗5 5MTMT（5 5甲基色氨酸）甲基色氨酸）亲本亲本2 2：抗：抗S S氨乙基半胱氨酸氨乙基半胱氨酸 杂种细胞能在含有杂种细胞能在含有5 5MTMT和和S S氨乙基半胱氨酸培养氨乙基半胱氨酸培养基上生长，而亲本和其它细胞死亡。基上生长，而亲本和其它细胞死亡。Page55细胞工程细胞工程六、体细胞杂种植物的鉴定六、体细胞杂种植物的鉴定1.1.形态鉴定形态鉴定 2.2.细胞学鉴定细胞学鉴定3.3.生化鉴定生化鉴定4.4.分子鉴定分子鉴定Page56细胞工程细胞工程1.形态鉴定形态鉴定 比较再生植株与融
29、合亲本在形态上的异同，比较再生植株与融合亲本在形态上的异同，在同一形状上同时带有双亲的特点，但可能在同一形状上同时带有双亲的特点，但可能杂种植物的形态倾向某一亲本。杂种植物的形态倾向某一亲本。Page57细胞工程细胞工程2.2.细胞学鉴定细胞学鉴定Page58细胞工程细胞工程3.3.生化鉴定生化鉴定 同工酶同工酶图谱鉴定：图谱鉴定：杂种细胞图谱有三种情况：杂种细胞图谱有三种情况：a.a.双亲酶带的总和；双亲酶带的总和；b.b.双亲的部分酶带；双亲的部分酶带；c.c.出现新的杂种带。出现新的杂种带。Page59细胞工程细胞工程4.DNA分子标记鉴定分子标记鉴定 RFLP（限制性片段长度多态性）鉴
30、定、（限制性片段长度多态性）鉴定、RAPD（随机扩（随机扩增多态性增多态性DNA）标记鉴定。即可用于对称杂种鉴定，又）标记鉴定。即可用于对称杂种鉴定，又可鉴定非对称杂种。其中可鉴定非对称杂种。其中RAPD特别适合杂种细胞的鉴定。特别适合杂种细胞的鉴定。Page60细胞工程细胞工程RAPDRAPD带型带型Page61细胞工程细胞工程1.1.细胞分裂与染色体丢失细胞分裂与染色体丢失2.2.基因转移与性状表达基因转移与性状表达3.3.体细胞杂种遗传上的不稳定性体细胞杂种遗传上的不稳定性Page62细胞工程细胞工程八、体细胞杂交面临的困难八、体细胞杂交面临的困难1.1.融合特性的高效性。融合特性的高效
31、性。2.2.杂种细胞的培养和选择。杂种细胞的培养和选择。3.3.杂种的遗传稳定性控制杂种的遗传稳定性控制Page63细胞工程细胞工程九、体细胞杂交研究的发展趋势九、体细胞杂交研究的发展趋势1.诱导融合及杂种细胞的各种生理、生化、遗传机理诱导融合及杂种细胞的各种生理、生化、遗传机理的研究。的研究。2.电融合的程序化控制研究电融合的程序化控制研究3.各种类型原生质体（胞质体、核质体、细胞器）的各种类型原生质体（胞质体、核质体、细胞器）的制备技术研究。制备技术研究。4.杂种细胞培养技术的程序化研究杂种细胞培养技术的程序化研究Page64细胞工程细胞工程比较植物细胞杂交和动物细胞融合过程比较植物细胞杂
32、交和动物细胞融合过程 比较项目比较项目 植物体细胞杂交植物体细胞杂交 动物细胞融合（单克隆抗体制备）动物细胞融合（单克隆抗体制备）原理原理 细胞膜的流动性、细胞的全能性细胞膜的流动性、细胞的全能性 细胞膜的流动性、细胞增殖细胞膜的流动性、细胞增殖 酶解法除细胞壁酶解法除细胞壁 注射特定抗原免疫处理正常小鼠注射特定抗原免疫处理正常小鼠 融合前处理融合前处理(纤维素酶和果胶酶纤维素酶和果胶酶)物理法：离心、振动、电刺激等物理法：离心、振动、电刺激等 物理法、化学法与植物原生质体融合促融方物理法、化学法与植物原生质体融合促融方 促融方法促融方法 化学法：聚乙二醇（化学法：聚乙二醇（PEG）法相同法相
33、同 生物法：灭活的病毒生物法：灭活的病毒 第一步：用酶解法制备原生质体第一步：用酶解法制备原生质体 第一步：正常小鼠免疫处理第一步：正常小鼠免疫处理 第二步：用物理法或化学法促使原第二步：用物理法或化学法促使原 第二步：用物理法、化学法或生物法促使动第二步：用物理法、化学法或生物法促使动 过程过程 生质体融合生质体融合 物细胞融合物细胞融合 第三步：杂种细胞的筛选与培养第三步：杂种细胞的筛选与培养 第三步：杂交瘤细胞筛选与培养第三步：杂交瘤细胞筛选与培养 第四步：杂种植株诱导和鉴定第四步：杂种植株诱导和鉴定 第四步：单克隆抗体的提纯第四步：单克隆抗体的提纯 克服远源杂交不亲合的障碍，大大克服远源杂交不亲合的障碍，大大 制备单克隆抗体制备单克隆抗体 扩展杂交的亲本组合范围扩展杂交的亲本组合范围 诊断、治疗、预防疾病。例如：诊断、治疗、预防疾病。例如：意义和用途意义和用途 a.肿瘤定位诊断，放射性抗体肿瘤定位诊断，放射性抗体肿瘤肿瘤 b.生物导弹治疗，抗体生物导弹治疗，抗体 抗癌药物抗癌药物肿瘤肿瘤 Page65细胞工程细胞工程Page66细胞工程细胞工程谢谢谢谢
