1、医医 用用 化化 学学 实实 验验生物化学教研室生物化学教研室张丽娜张丽娜实验课注意事项：实验课注意事项：不迟到，不早退，做好课前预习工作不迟到，不早退，做好课前预习工作 穿好白大褂穿好白大褂 使用煤气时注意安全使用煤气时注意安全 试剂用后及时归位试剂用后及时归位保持严肃认真的实验态度保持严肃认真的实验态度 及时记录实验结果，按时完成实验报告及时记录实验结果，按时完成实验报告实验报告格式：实验报告格式：1 1、实验目的、实验目的2 2、实验原理、实验原理3 3、实验操作、实验操作4 4、实验结果（真实、客观）、实验结果（真实、客观）5 5、讨论（实验报告的核心）、讨论（实验报告的核心）6 6、
2、意见与建议（可选择）、意见与建议（可选择）实验一实验一 医化实验基本操作医化实验基本操作玻璃仪器的洗涤玻璃仪器的洗涤吸量管的使用吸量管的使用 注意：右手注意：右手食指食指按住吸量管口按住吸量管口溶液的混匀溶液的混匀 指弹混匀、搅拌混匀、倒转混匀、旋涡混指弹混匀、搅拌混匀、倒转混匀、旋涡混合器混匀等合器混匀等实验二实验二 电离平衡与缓冲溶液电离平衡与缓冲溶液q实验目的实验目的 1、掌握同离子效应的原理、掌握同离子效应的原理 2、学习通过韩、学习通过韩-哈方程式配制缓冲溶液哈方程式配制缓冲溶液 3、观察稀释对缓冲溶液、观察稀释对缓冲溶液pH值的影响值的影响 4、学习吸量管及、学习吸量管及pH计的使
3、用计的使用 1、同离子效应、同离子效应q实验原理实验原理HAc HHAc H+Ac+Ac-NaAc NaNaAc Na+AcAc-例：例：同离子效应使得同离子效应使得HAc的电离度降低，溶液的的电离度降低，溶液的pH升高升高 酸碱指示剂：酸碱指示剂：红红橙橙黄黄红红淡红淡红黄黄无色无色绿绿蓝蓝3.14.481067.6甲基橙甲基橙酚酞酚酞溴麝香草酚蓝溴麝香草酚蓝pH=pKa+lgpH=pKa+lg 盐盐 酸酸 韩韩-哈方程式哈方程式也可表示为：也可表示为：（盐的摩尔数）（盐的摩尔数）（酸的摩尔数）（酸的摩尔数）n盐盐/V溶液溶液n酸酸/V溶液溶液当当酸酸与与盐盐混合前的浓度相等时：混合前的浓度
4、相等时：=pKa+lgpKa+lg V盐盐 V酸酸pHpH=pKa+lgpKa+lg n盐盐 n酸酸pHpH2、缓冲溶液、缓冲溶液 缓冲溶液加水缓冲溶液加水稀释稀释时，盐浓度与酸浓度作相同时，盐浓度与酸浓度作相同 比例稀释，因此，缓冲溶液的比例稀释，因此，缓冲溶液的pHpH几乎不因稀释几乎不因稀释 而改变。而改变。缓冲溶液的缓冲能力有一定限度，超过该限度缓冲溶液的缓冲能力有一定限度，超过该限度 缓冲溶液的缓冲溶液的pH也会发生较大改变也会发生较大改变q实验操作实验操作1、同离子效应、同离子效应（1）各各1支支+NH3.H2O 2ml+1滴酚酞滴酚酞 1滴滴NH4Cl 1滴滴H2O摇匀摇匀观察结
5、果观察结果1ml=15滴滴（2）各各1支支+醋酸醋酸 2ml+1滴甲基橙滴甲基橙 1滴滴NaAc 1滴滴H2O摇匀摇匀观察结果观察结果2、缓冲溶液、缓冲溶液（1）0.1mol/L KH2PO40.1mol/L Na2HPO4 8 ml 2 ml 5 ml 5 ml 2 ml 8 ml精密精密pH试纸检测试纸检测pH计检测计检测韩韩-哈方程式计算哈方程式计算测完测完pH值值后后2管保留管保留用吸量用吸量管进行管进行操作操作大大试管试管3支支另取另取2支小试管，以上面试管支小试管，以上面试管2里的缓冲液进行实验里的缓冲液进行实验2号缓冲液号缓冲液2 ml1 ml蒸馏水蒸馏水0 ml1 ml溴麝香草
6、酚溴麝香草酚 蓝各蓝各1滴滴（2）（3）另取）另取3支小试管，以上面试管支小试管，以上面试管2里的缓冲液进行实验里的缓冲液进行实验2号缓冲液号缓冲液2 ml2 ml2 ml溴麝香草酚蓝溴麝香草酚蓝各各2滴，混匀滴，混匀NaOH 3滴，滴，摇匀，观察结果摇匀，观察结果继续滴加，记录变色时继续滴加，记录变色时所加所加NaOH滴数滴数HCl 3滴，滴，摇匀，观察结果摇匀，观察结果继续滴加，记录变色时所继续滴加，记录变色时所加加HCl滴数滴数2号管缓冲液测好号管缓冲液测好pH后切勿立即倒去后切勿立即倒去吸量管的使用吸量管的使用pH计的使用计的使用 注意事项：注意事项：1、看清刻度，选择适当容量的吸量管
7、、看清刻度，选择适当容量的吸量管2、左手洗耳球，右手吸量管；食指按住管、左手洗耳球，右手吸量管；食指按住管 口，稳住液面口，稳住液面3、拿吸量管的时候，刻度面向自己、拿吸量管的时候，刻度面向自己4、读刻度时，眼睛与刻度线同一水平，以、读刻度时，眼睛与刻度线同一水平，以 下凹面为准下凹面为准5、吸取另外一种试剂时，要润洗、吸取另外一种试剂时，要润洗q 吸量管的使用吸量管的使用实验三实验三 功能基反应功能基反应q实验目的实验目的1、掌握几功能基的主要化学性质、掌握几功能基的主要化学性质2、了解乙酰乙酸乙酯的酮、了解乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互变异构现象烯醇互变异构现象1、双键与卤素的加成反应、双键与卤
8、素的加成反应q实验原理实验原理C=C +Br2 -CH-CH-BrBr 红棕色的溴褪色，可用于鉴定有机物中红棕色的溴褪色，可用于鉴定有机物中 是否存在不饱和键是否存在不饱和键2、酚性羟基的反应、酚性羟基的反应OHONaNaOH+混 浊澄 清（1）苯酚的弱酸性）苯酚的弱酸性（2）酚性羟基与）酚性羟基与FeCl3的显色反应的显色反应苯酚苯酚FeCl3紫色络合物紫色络合物 可用于鉴别酚和醇可用于鉴别酚和醇3、醛基的反应、醛基的反应 O|R-C-H +2Cu（OH）2 O|R-C-OH +Cu2O +2H2O砖红色沉淀砖红色沉淀（班氏试剂）（班氏试剂）酮无此反应，故可用于鉴别醛和酮酮无此反应，故可用于
9、鉴别醛和酮OCH2OHHHOHHOHHOHHOCHOHO-C-HCH2OHHOHCH2OHHOH-C-OH H-C-OHH-C-OHCH-C-OHH-C-HO-C-HCH2OHH-COHOHOHHHHHOHOH123456OHHHOHOHHOHOHCH2OHOCH2OHHOHHHOHOHCH2OHHO-C-HCH2OHOHCH2OHH-C-OH H-C-OHCH-C-OHHO-C-HH-CO123456*CH2OHHOHCH-C-OHHO-C-HOCH2OHH-C-OHCH2C=OCH2OH4、乙酰乙酸乙酯的酮、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互变异构现象烯醇互变异构现象 使三氯化铁溶液呈使三氯化铁溶液
10、呈紫红色紫红色反应反应具有烯醇式结构具有烯醇式结构 与苯肼反应生成苯腙，颜色？与苯肼反应生成苯腙，颜色？使使红棕色红棕色溴的四氯化碳溶液褪色溴的四氯化碳溶液褪色具有双键结构具有双键结构 O O|CH3-C-CH2-C-O-C2H5说明乙酰乙酸乙酯是酮式和烯醇式两种异构体的说明乙酰乙酸乙酯是酮式和烯醇式两种异构体的混合物，两者之间相互转变，处于混合物，两者之间相互转变，处于动态平衡动态平衡。O O|CH3-C-CH2-C-O-C2H5 OH O|CH3-C=CH-C-O-C2H5室温时室温时 酮型（酮型（93%）烯醇型（烯醇型（7%）凡两种或两种以上的异构体能互相转变，并以凡两种或两种以上的异构
11、体能互相转变，并以 动态平衡存在的现象动态平衡存在的现象互变异构现象互变异构现象5、尿素的化学性质、尿素的化学性质H2N-C-NH2H2N-C-NH-C-NH2+NH3CuSO4OOOH2N-C-NH2O+OCH2N-C-NH-C-NH2OO150160紫红色缩二脲（缩二脲反应）碱性OH-紫红色物质紫红色物质缩二脲反应：缩二脲反应：缩二脲缩二脲 +CuSO4（少量）（少量）1、烯基的反应、烯基的反应q实验操作实验操作+硬脂酸硬脂酸10滴滴+油酸油酸10滴滴+植物油植物油10滴滴逐滴加入逐滴加入5%Br2的的CCl4溶溶液，不断振荡试管，记录液，不断振荡试管，记录结果结果 不是溴水不是溴水2、酚
12、性羟基的反应、酚性羟基的反应（1）+液体苯酚液体苯酚2滴滴 水水5滴，摇匀滴，摇匀+10%NaOH 2 滴滴 摇匀，观察摇匀，观察（2）+0.5%苯酚溶液苯酚溶液10滴滴+0.5%水杨酸溶液水杨酸溶液10滴滴+苯甲醇苯甲醇10滴滴各加入各加入1%FeCl31滴，观察结果滴，观察结果3、醛基反应、醛基反应（大试管（大试管6支）支）试剂（滴）试剂（滴）1 2 3 4 5 640%乙醛液乙醛液 5 10%NaOH 5 丙酮液丙酮液 4 1%葡萄糖葡萄糖 4 1%果糖果糖 4 1%蔗糖蔗糖 4 42mol/L盐酸盐酸 10班氏试剂班氏试剂 10 10 10 10 10 1-5管于沸水中加热管于沸水中加
13、热3分钟，观察结果；分钟，观察结果；6号管加蒸馏水号管加蒸馏水10滴，于沸滴，于沸水中加热水中加热10分钟，不时振荡，再加分钟，不时振荡，再加10%NaOH10滴滴，班氏试剂，班氏试剂10滴滴混匀，于沸水中再加热混匀，于沸水中再加热3分钟，与分钟，与5号管比较，记录结果号管比较，记录结果4、乙酰乙酸乙酯的酮、乙酰乙酸乙酯的酮-烯醇互变异构现象烯醇互变异构现象（1）+10%乙酰乙酸乙酰乙酸 乙酯乙酯2滴滴+2，4-二硝基苯肼二硝基苯肼10 滴，振荡，观察结滴，振荡，观察结 果，写出反应式果，写出反应式（2）+10%乙酰乙酸乙酰乙酸 乙酯乙酯10滴滴+1%FeCl31滴，观察结果滴，观察结果再加溴
14、水再加溴水1滴，观察变化，滴，观察变化，并加以解释并加以解释5、尿素的化学性质、尿素的化学性质+尿素尿素1匙匙小火加热，待尿素熔化小火加热，待尿素熔化红色石蕊试纸放置管口，观察变化红色石蕊试纸放置管口，观察变化继续加热继续加热待管内物质凝固后待管内物质凝固后冷却冷却试管，加水试管，加水2ml玻棒搅动促溶，吸取上层溶液于另一试管中玻棒搅动促溶，吸取上层溶液于另一试管中再加入再加入10%NaOH、1%CuSO4各各1滴，观察变化滴，观察变化q注意事项注意事项1、注意区分以下试剂：、注意区分以下试剂：液体苯酚液体苯酚5%苯酚溶液苯酚溶液 5%Br2的的CCl4溶液溶液溴水溴水2、液体苯酚预先加热，盛
15、放其的试管也要预热、液体苯酚预先加热，盛放其的试管也要预热3、缩二脲反应中试管冷却后再加水，并用玻棒、缩二脲反应中试管冷却后再加水，并用玻棒 轻轻搅动轻轻搅动 4、挥发性试剂全部摆放在边台上，用后及时归位挥发性试剂全部摆放在边台上，用后及时归位 实验三 动物组织中核酸的提取与鉴定 实验目的：1、掌握组织中的核酸的提取与鉴定 2、掌握离心机的使用 3、熟悉加样器的使用 实验原理 1、提取原理：a:DNA和RNA大部分与Pro结合成核蛋白。b:核蛋白可被三氯醋酸沉淀下来。c:10%NaCl溶液从沉淀中提取核酸，生成核酸 的钠盐 d:乙醇把核酸钠沉淀下来 核苷核苷B-R）磷酸（磷酸（P）2、鉴定原理
16、核酸核酸核苷酸核苷酸基碱（基碱（B）戊糖（戊糖（R）核酸的基本组成单位核酸的基本组成单位嘌呤（嘌呤（A G）嘧啶嘧啶核糖（核糖（C U）脱氧核糖（脱氧核糖（C T）a:磷酸磷酸+钼酸铵钼酸铵 磷钼酸磷钼酸 钼蓝钼蓝 b:嘌呤嘌呤+AgNO3 絮状嘌呤银絮状嘌呤银 c:核糖核糖 糠醛糠醛 绿色化合物绿色化合物 d:脱氧核糖脱氧核糖 -羟基羟基-酮基戊醛酮基戊醛 蓝色化合物蓝色化合物氨基萘酚磺酸氨基萘酚磺酸H+3，5-二羟基甲苯H+二苯铵操作步骤 1、提取步骤 制备肝组织匀浆：脱臼处死或断头处死 剖腹取全部肝组织 生理盐水冲洗血污，吸干净 三氯醋酸2ml 分散匀浆机匀浆 分离提取于全部匀浆内加入生
17、理盐水2ml，玻棒混匀静置3min，3000rpm 3min,弃上清沉淀加入10%NaCl 2ml，沸水浴3min,玻棒搅拌取出冷却，3000rpm 3min取上清，逐滴95%酒精2管，混匀静置5min，3000rpm 5min弃上清，得白色核酸钠 核酸的水解：短试管内加入5%H2SO4 3.5ml 玻棒搅匀 沸水浴中10min 成分的鉴定管号水解液5%H2SO4浓氨水5%AgNO3测定管 20d 23d 10d对照管 20d23d 10d沸水浴35min，观察结果，静置15min,观察结果嘌呤的鉴定嘌呤的鉴定 磷酸的鉴定磷酸的鉴定管号水解液5%H2SO4钼酸铵试剂氨基萘酚磺酸测定管 10d
18、5d 20d对照管 10d5d 20d放置3min，沸水浴35min，观察颜色差异 核糖的鉴定核糖的鉴定管号水解液5%H2SO43，5-二羟基甲苯测定管 4d 6d对照管 4d6d沸水浴510min，观察颜色差异 脱氧核糖的鉴定脱氧核糖的鉴定管号水解液5%H2SO4二苯胺试剂测定管 20d 30d对照管 20d30d沸水浴510min，观察颜色差异注意事项 1、做鉴定部分时尽量用大试管，所有标 号朝试管上方 2、玻璃棒搅拌要轻柔 3、胶头滴管使用要注意顺序，避免污染 移液枪的使用移液枪的使用1、看清最大刻度，选择适当容量的移液枪、看清最大刻度，选择适当容量的移液枪（最大刻度和读数的关系）（最大
19、刻度和读数的关系）2、先调好刻度、先调好刻度3、打至第一档吸入试剂、打至第一档吸入试剂4、打出试剂时要按至第二档、打出试剂时要按至第二档5、使用加样器时要慢、稳，不要有气泡出、使用加样器时要慢、稳，不要有气泡出 现现 离心机的使用离心机的使用 台秤平衡台秤平衡 对称插入对称插入 定时定速定时定速实验四 蛋白质呈色反应、沉淀反应及等电点的测定 实验目的：1、掌握双缩脲法、茚三酮法、Folin法定性检查蛋白质的方法 2、验证几种蛋白质沉淀反应的现象及酸碱性环境的影响 3、了解蛋白质等电点测定 一、蛋白质的呈色反应 实验原理：双缩脲反应：含有CONH 、CSNH、CH2NH等基团的化合物在浓碱液中与
20、硫酸铜生成紫红色复合物。茚三酮反应：含有自由氨基的化合物与茚三酮共热，生成紫色化合物。Folin法：酚性羟基在碱性环境中，与酚试剂生成钼蓝钼蓝操作步骤操作步骤（1）+1：10鸡蛋白鸡蛋白2滴滴1%CuSO4 1滴滴 +10%NaOH 5 滴滴 混匀，观察颜色混匀，观察颜色（2）+1：10鸡蛋白鸡蛋白4滴滴+蒸馏水蒸馏水10滴滴+0.1%茚三酮乙醇茚三酮乙醇8滴，混匀，观察颜色滴，混匀，观察颜色 蒸馏水蒸馏水6滴滴+10%NaOH3 滴，滴，酚试剂酚试剂1滴，混匀，观察颜色滴，混匀，观察颜色+1：10鸡蛋白鸡蛋白2滴滴+0.25%白明胶白明胶 0.25%酚溶液酚溶液 0.25%酪氨酸酪氨酸二、蛋
21、白质的沉淀反应 实验原理：实验原理：1、盐析：破坏水化膜，中和电荷、盐析：破坏水化膜，中和电荷 常用中性盐：（常用中性盐：（NH4）2SO4、Na2SO4、NaCl2、重金属盐类沉淀：、重金属盐类沉淀：条件：条件：PH PI，蛋白质带蛋白质带负电荷负电荷 重金属离子：重金属离子：Cu2+、Hg2+、Pb2+、Ag+3、生物碱试剂沉淀：、生物碱试剂沉淀：条件：条件：PH PI，蛋白质带蛋白质带正电荷正电荷 生物碱试剂：钨酸、苦味酸、鞣酸生物碱试剂：钨酸、苦味酸、鞣酸操作见讲义操作见讲义三 蛋白质等电点的测定 在某一PH下，蛋白质带正电荷和负电荷数相等，容易彼此结合形成沉淀，此PH值称为等电点。操作见讲义注意事项 1、酪氨酸和酪蛋白，酚溶液和酚试剂勿混淆 2、等电点测定时用大试管 3、先做第二个盐析实验
