1、研究生实验技能培训研究生实验技能培训分子生物学实验常用仪器介绍分子生物学实验常用仪器介绍实验中心实验中心 Biometra梯度PCR仪工作原理工作原理 多次重复多次重复“变性解链变性解链退火退火合合成延伸成延伸”的循环的循环 主要用途主要用途 用于用于DNA的扩增的扩增 梯度梯度PCR仪特别适用于最适反应仪特别适用于最适反应条件的摸索，在一次条件的摸索，在一次PCR反应中反应中可检验多至可检验多至12个反应温度，从而个反应温度，从而轻松得出最适反应温度。轻松得出最适反应温度。Mullis开车的时候开车的时候,瞬间感觉两排路灯就是瞬间感觉两排路灯就是DNA的两条链，自己的车和对面的两条链，自己的
2、车和对面开来的车象是开来的车象是DNA聚合酶，面对面地合成着聚合酶，面对面地合成着DNA，基因、基因、DNA片段的克隆片段的克隆 人工基因构建人工基因构建 DNA序列测定序列测定 基因定点突变基因定点突变 基因型（突变）检测，基因型（突变）检测，SNP分析，遗传背景分析分析，遗传背景分析 生物物种鉴定，系统进化研究生物物种鉴定，系统进化研究 基因表达量研究基因表达量研究（real-time PCR）/基因表达谱研究基因表达谱研究（DNA chip,SAGE）疾病基因检测疾病基因检测/遗传病的产前诊断遗传病的产前诊断 致病病原体的检测致病病原体的检测 肿瘤治疗中癌基因的检测肿瘤治疗中癌基因的检测
3、 DNA指纹、个体识别、亲子关系鉴别、指纹、个体识别、亲子关系鉴别、法医物证法医物证 样品样品正对照正对照 负对照负对照标准分子量标准分子量污染是污染是PCRPCR实验的常见问题。只要实验室里曾经扩增过某个实验的常见问题。只要实验室里曾经扩增过某个片段，就有可能以后的实验中发生污染。片段，就有可能以后的实验中发生污染。三个水浴锅，三个水浴锅，用手移动用手移动 （Mullis等人当时用的）等人当时用的）电加热块电加热块 自来水冷却自来水冷却 （PE，1988）电加热块电加热块 内置循环液冷却内置循环液冷却 （PE，1989）三个加热块三个加热块 机械手机械手 （Stratagene，1994）半
4、导体制冷和加热半导体制冷和加热 （MJ,PE,BioMetra,Eppendrof）温度梯度温度梯度,荧光检测荧光检测(如如 Roche的的Lightcycler)风加热风加热 Lab-on-chip式的式的PCR仪仪(所谓的芯片所谓的芯片PCR)1991年出现三个水浴锅年出现三个水浴锅+机械手的原始机械手的原始PCR仪（华美，复日等）仪（华美，复日等）现在以半导体（现在以半导体（Peltier板）制冷式为主（杭州博日板）制冷式为主（杭州博日,上海天呈上海天呈,厦门厦门安普利等）安普利等）PCR仪的种类 总体来说可以分为两大类：总体来说可以分为两大类：PCR扩增仪和实时荧光定量扩增仪和实时荧光
5、定量PCR仪仪 普通的普通的PCR扩增仪又衍生出带梯度扩增仪又衍生出带梯度PCR功功能的梯度能的梯度PCR仪、和带原位扩增功能的原仪、和带原位扩增功能的原位位PCR仪等。仪等。2019年由年由ABI公司首先推出将扩增和检测公司首先推出将扩增和检测融为一体的实时荧光定量融为一体的实时荧光定量PCR仪，此后很仪，此后很多公司如多公司如Eppendorf、ROCHE、Corbett、MJ等等都先后推出不同款式的定量等等都先后推出不同款式的定量PCR仪，仪，PCR仪的主要参数仪的主要参数 温度控制要精确度温度控制要精确度 升降温的速度升降温的速度 更快的升降温速度，可以缩短反应进行的更快的升降温速度，
6、可以缩短反应进行的时间，而且缩短了可能的非特异性结合、时间，而且缩短了可能的非特异性结合、反应的时间，能提高反应的时间，能提高PCR反应特异性。反应特异性。ABI早就有升降温速度高达早就有升降温速度高达5C eppendorf也推出了升降温速度可达到也推出了升降温速度可达到6/秒和秒和4.5/秒秒 现在的现在的PCR仪如仪如ABI，Eppendorf的一的一般具有两种温控模式，即模块温控模般具有两种温控模式，即模块温控模式（式（Block-control）和反应管温控模式）和反应管温控模式）（tube-control）。）。模块温控模式适用于长时间的静态孵模块温控模式适用于长时间的静态孵育（如
7、连接、酶切、去磷酸化等）。育（如连接、酶切、去磷酸化等）。试管温控更为准确试管温控更为准确 梯度梯度PCR仪仪 “摸条件摸条件”一度是让人很头疼的问题。一度是让人很头疼的问题。梯度梯度PCR的出现部分解决了一些问的出现部分解决了一些问题题在反应过程中在反应过程中每个孔每个孔的温度的温度控制条件可以在指定范围内按照梯控制条件可以在指定范围内按照梯度变化，根据结果，一步就可以摸度变化，根据结果，一步就可以摸索出最适合的反应条件。索出最适合的反应条件。原位原位PCR扩增扩增 在在PCR仪上增加原位仪上增加原位PCR模块就模块就可以在玻片上进行原位可以在玻片上进行原位PCR扩增，扩增，多槽式高通量多槽
8、式高通量PCR仪仪 随着基因组高通量研究的需求的提高随着基因组高通量研究的需求的提高 MJ有一种一拖四，就是有一种一拖四，就是1个主机带个主机带4个扩增槽，个扩增槽，每个槽可以独立控温，一次可以作每个槽可以独立控温，一次可以作96x4个样品的个样品的PCR，不过一旦出现问题，不过一旦出现问题4个都不能用了。个都不能用了。ABI则在原来的则在原来的9700的基础上推出了双的基础上推出了双384孔的孔的基座，一次完成基座，一次完成384x2个样品，使得个样品，使得9700的功能的功能又扩展到高通量领域而无需购买新的机器，可惜又扩展到高通量领域而无需购买新的机器，可惜两个两个384槽不能独立控温。槽
9、不能独立控温。eppendorf则有一个控制面板，可以控制则有一个控制面板，可以控制5个独立个独立的的PCR仪，每台机器可以联合，而且互不影响，仪，每台机器可以联合，而且互不影响，但是比较浪费空间。但是比较浪费空间。仪器的功能性和人性化设计仪器的功能性和人性化设计 热盖热盖现在的现在的PCR仪一般均配备仪一般均配备热盖，热盖温度设为热盖，热盖温度设为105，使样品，使样品管顶部的温度达到管顶部的温度达到105左右，蒸发左右，蒸发的反应液就不会产生凝集在管盖上的反应液就不会产生凝集在管盖上而改变反应体积，这样用户就无需而改变反应体积，这样用户就无需再向反应管内加石蜡油，直接减少再向反应管内加石蜡
10、油，直接减少后继反应的麻烦。后继反应的麻烦。过松过松 过紧过紧 样品基座样品基座PCR反应多在反应多在0.2或者或者0.5的的管子中进行，多数管子中进行，多数PCR仪也配备了不同的仪也配备了不同的可更换样品槽适配不同的样品管。可更换样品槽适配不同的样品管。eppendorf有一个有趣的设计，一个槽内有一个有趣的设计，一个槽内带有带有0.2和和0.5两种不同样品孔，不需更换两种不同样品孔，不需更换基座就可以分别使用两种不同的反应管基座就可以分别使用两种不同的反应管 ABI的的9700就可以更换不同的样品槽就可以更换不同的样品槽 软件软件新的新的PCR仪都比较注仪都比较注重程序编写的简易性。大屏幕
11、，重程序编写的简易性。大屏幕，显示实时信息，倒计时，记忆显示实时信息，倒计时，记忆存储多个程序、自动断电保护存储多个程序、自动断电保护等都有助于实验室中的复杂环等都有助于实验室中的复杂环境使用。境使用。Biophotometer生物分光光度计生物分光光度计技术参数技术参数 光学系统：吸收单光束分光光度计，配有光学系统：吸收单光束分光光度计，配有基准光束基准光束 光源：氙灯光源：氙灯 波长：氙波长：氙230 nm;260 nm;280 nm;320 nm;562 nm;595 nm 光谱带宽：光谱带宽：5 nm：230 nm320 nm，7 nm：562 nm 595 nm 光度计测定范围：光度
12、计测定范围：0000 到到 3000 ABiophotometer 生物分光光度计使用常见问答生物分光光度计使用常见问答 答：答：DNA 的在的在Biophotometer 上能测定的最高浓度并上能测定的最高浓度并 没有一个绝对的值，这是因为这个浓度跟使用的比色没有一个绝对的值，这是因为这个浓度跟使用的比色皿光程和样品的稀释比例有关的。皿光程和样品的稀释比例有关的。Biophotometer 测定的最大吸光度是测定的最大吸光度是3.0。当测定的当测定的DNA 样品吸光度大于样品吸光度大于2.5时，建议采用时，建议采用2 mm 的比色皿光程替代的比色皿光程替代10 mm。10 mm光程下测定的光
13、程下测定的A260=2.5 时，相当于时，相当于125 g/ml 浓浓度的双链度的双链DNA，1.25 g/ml 的的1:10 稀释。稀释。如果是在如果是在2 mm 光程光程6.25 g/ml 的的1:10 稀释。稀释。答：答：Biophotometer 在在260 nm 下能够测定的最下能够测定的最小吸光度是小吸光度是0.05，这个吸光度值相当于浓度为，这个吸光度值相当于浓度为2.5 g/ml 的双链的双链DNA 的吸光度（约的吸光度（约125 ng 双双链链DNA 溶解在溶解在50 l 溶液中），请确保核酸样溶液中），请确保核酸样品的吸光度必需大于品的吸光度必需大于0.1，其值才有效和可靠
14、，其值才有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收，其值常会对光有一定吸收，其值0.1。答：答：Biophotometer 在在260 nm 下能够测定的最下能够测定的最小吸光度是小吸光度是0.05，这个吸光度值相当于浓度为，这个吸光度值相当于浓度为2 g/ml 的的RNA的吸光度（约的吸光度（约100 ng 双链双链DNA 溶溶解在解在50 l 溶液中），请确保核酸样品的吸光溶液中），请确保核酸样品的吸光度必需大于度必需大于0.1，其值才有效和可靠，因为样品，其值才有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光
15、中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收，其值有一定吸收，其值0.1。请注意，这。请注意，这个值跟仪器无关，核酸的吸光度必需大于个值跟仪器无关，核酸的吸光度必需大于0.1，其值才，其值才有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的有效和可靠，因为样品中的杂质和颗粒这些不纯物的干扰通常会对光有一定吸收，其值干扰通常会对光有一定吸收，其值3.0A，请检查，请检查 1 比色皿是否被完全压入比色皿槽内，出现加比色皿是否被完全压入比色皿槽内，出现加号有可能是比色皿的基座挡住了光线的通路。号有可能是比色皿的基座挡住了光线的通路。2 您使用的比色皿的中心高度是否在您使用的比色皿的中心高度是否在8
16、.5 mm？3 比色皿中是否加入了足够量的空白对照溶液？比色皿中是否加入了足够量的空白对照溶液？答：答：A230 产生负值主要是由于在很低产生负值主要是由于在很低DNA 浓浓度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。度的溶液中的一些其他成分的干扰所导致的。在下一个测定中，需要降低样品的稀释度，在下一个测定中，需要降低样品的稀释度，A230 的负值会被校正。的负值会被校正。同时需要注意的是同时需要注意的是A260 的读数也必需大于的读数也必需大于0.1 才能保证可靠的结果。才能保证可靠的结果。答：答：Bradford 方法中使用的试剂在和塑料长期方法中使用的试剂在和塑料长期接触后会使塑料发生损伤，
17、这种试剂不可以在接触后会使塑料发生损伤，这种试剂不可以在塑料比色皿中放置超过塑料比色皿中放置超过5 分钟，测定值的波动分钟，测定值的波动是由于试剂与塑料表面发生反应后，导致吸光是由于试剂与塑料表面发生反应后，导致吸光度发生变化而产生的，在使用这个方法时，建度发生变化而产生的，在使用这个方法时，建议使用玻璃比色皿。议使用玻璃比色皿。核酸与蛋白的电泳分析核酸与蛋白的电泳分析琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶电泳分离效果比琼脂糖好，条带比较集中分离效果比琼脂糖好，条带比较集中可用于科研及检测分析可用于科研及检测分析电泳槽电泳槽 水平平板水平平板 垂直平板垂直平板垂直电泳系
18、统垂直电泳系统凝胶浓度选择凝胶浓度选择琼脂糖浓度琼脂糖浓度(%)线型线型DNA分子的分离范围分子的分离范围(Kb)0.35600.61200.70.8100.90.571.20.961.50.2312.00.12琼脂糖凝胶的浓度与琼脂糖凝胶的浓度与DNA分离范围分离范围电泳缓冲液电泳缓冲液 常用三种缓冲液常用三种缓冲液 Tris-硼酸（硼酸（TBE）Tris-乙酸（乙酸（TAE）Tris-磷酸（磷酸（TPE）TBE与与TPE：缓冲容量高，：缓冲容量高，DNA分离分离效果好，但效果好，但TPE在在DNA片段回收时含片段回收时含磷酸盐浓度高，容易使磷酸盐浓度高，容易使DNA沉淀沉淀 TAE：缓冲容
19、量低，但价格较便宜，：缓冲容量低，但价格较便宜，因而推荐选用因而推荐选用TAE。缓冲液中的。缓冲液中的 EDTA 可螯合二价阳离子，从而抑制可螯合二价阳离子，从而抑制DNA酶的活性，防止酶的活性，防止PCR扩增产物降扩增产物降解解核酸电泳的指示剂核酸电泳的指示剂 指示剂：指示剂：溴酚兰溴酚兰 二甲苯青二甲苯青 溴酚兰：在碱性液体中呈紫兰色溴酚兰：在碱性液体中呈紫兰色 二甲苯青：水溶液呈兰色二甲苯青：水溶液呈兰色 电泳时，其迁移速率与双链线性电泳时，其迁移速率与双链线性DNA大致相当大致相当载样缓冲液载样缓冲液 指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖指示剂一般与蔗糖、甘油或聚蔗糖400组成组成载样缓冲液
20、载样缓冲液 作用：作用：增加样品密度，使其比重增加，以确保增加样品密度，使其比重增加，以确保DNA均匀沉入加样孔内均匀沉入加样孔内 在电泳中形成肉眼可见的指在电泳中形成肉眼可见的指示带，可预测核酸电泳的速度和位置示带，可预测核酸电泳的速度和位置 使样品呈色，使加样操作更方便使样品呈色，使加样操作更方便核酸电泳的染色剂核酸电泳的染色剂 最常用的染色剂最常用的染色剂溴化乙锭溴化乙锭银染色银染色蛋白电泳的染色剂蛋白电泳的染色剂 最常用的染色剂最常用的染色剂考马斯亮蓝考马斯亮蓝G 考马斯亮蓝考马斯亮蓝 R 溴化乙锭（溴化乙锭（ethidium bromide，EB）是一种荧光染料，是一种荧光染料，EB
21、分子可嵌入核酸双分子可嵌入核酸双链的碱基对之间，在紫外线激发下，发出链的碱基对之间，在紫外线激发下，发出红色荧光红色荧光 可在凝胶电泳液中加入终浓度为可在凝胶电泳液中加入终浓度为0.5ug/ml的的EB，有时亦可在电泳后，将凝胶浸入，有时亦可在电泳后，将凝胶浸入该浓度的溶液中染色该浓度的溶液中染色1015min 琼脂糖凝胶琼脂糖凝胶EB染色，肉眼可见核酸电泳染色，肉眼可见核酸电泳带，其带，其DNA量一般量一般5ng 溴化乙锭太多，凝胶染色过深，核酸电泳溴化乙锭太多，凝胶染色过深，核酸电泳带看不清时，可将凝胶放入蒸馏水浸泡带看不清时，可将凝胶放入蒸馏水浸泡30min后再观察后再观察 银染色：银染
22、色液中的银离子银染色：银染色液中的银离子(Ag+)可与核酸形成稳定的复合物，可与核酸形成稳定的复合物，然后用还原剂如甲醛使然后用还原剂如甲醛使Ag+还原成还原成银颗粒，可把核酸电泳带染色黑银颗粒，可把核酸电泳带染色黑褐色褐色 主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染主要用于聚丙烯酰胺凝胶电泳染色，也用于琼脂糖凝胶染色色，也用于琼脂糖凝胶染色 灵敏度比灵敏度比EB高高200倍，但银染色倍，但银染色后，后，DNA不宜回收不宜回收BIO-PROFIL凝胶成像分析系统凝胶成像分析系统主要用途主要用途 琼脂糖电泳，聚丙烯酰胺电泳，琼脂糖电泳，聚丙烯酰胺电泳，DNA、RNA和蛋白质和蛋白质1D2D电泳凝胶，电泳凝胶，
23、Southern Northern和和Western印迹膜；印迹膜；点杂交膜；薄层层析板、点杂交膜；薄层层析板、TCL放射自放射自显影胶片、菌落等样品的图像采集和显影胶片、菌落等样品的图像采集和分析，可对核酸、蛋白质的凝胶电泳分析，可对核酸、蛋白质的凝胶电泳条带进行分子量大小及含量分析。条带进行分子量大小及含量分析。基本组成基本组成 密闭型机箱：密闭型机箱：一体化全封闭暗箱，设计精巧；最大程度上避一体化全封闭暗箱，设计精巧；最大程度上避免紫外线对人体的伤害。免紫外线对人体的伤害。紫外透射台：紫外透射台：紫外光源波长紫外光源波长254/306/365nm，紫外透射面积，紫外透射面积20 x25c
24、m。白光板（可选）：白光板（可选）：透射面积透射面积20 x25cm 相机：相机：带积分功能高清晰黑白摄像头；高分辨率数码带积分功能高清晰黑白摄像头；高分辨率数码相机；高分辨率专业数字黑白相机；高分辨率专业数字黑白CCD摄像头。摄像头。镜头：镜头：电动电动/自动镜头。自动镜头。主要用途（主要用途（1）图像获取图像获取 图像获取容易图像获取容易 可以以多种格式存储可以以多种格式存储 获取粘贴板上的图像、与其它软获取粘贴板上的图像、与其它软件交换图像资源件交换图像资源 图像复制功能，对所获取的原始图像复制功能，对所获取的原始图像进行剪切、复制图像进行剪切、复制 主要用途（主要用途（2）图像处理图像
25、处理 彩色图像转换为黑白灰度图像彩色图像转换为黑白灰度图像 图像的镜像和旋转图像的镜像和旋转 图像反色、即负片效果图像反色、即负片效果 图像的对比度亮度调整图像的对比度亮度调整 图像的均匀化、平整区域、背景校正图像的均匀化、平整区域、背景校正 图像的锐化、柔化、羽化、强化物体图像的锐化、柔化、羽化、强化物体边缘边缘主要用途（主要用途（3）图像分析图像分析 条带定位：提取图象中的条带信息，确定泳道中条带定位：提取图象中的条带信息，确定泳道中是否有条带存在并定位是否有条带存在并定位 分子量计算：在输入分子量计算：在输入Mark泳道中各条带的已知分泳道中各条带的已知分子量后，由计算机求出指定未知条带
26、的分子量和子量后，由计算机求出指定未知条带的分子量和bp值（碱基对数）。值（碱基对数）。密度扫描：对指定泳道进行扫描，绘出扫描曲线，密度扫描：对指定泳道进行扫描，绘出扫描曲线，并计算出该泳道中各条带的密度积分和峰高并计算出该泳道中各条带的密度积分和峰高 背景去除：多种去背景的方法，并可对扫描曲线背景去除：多种去背景的方法，并可对扫描曲线进行去背景后矫正进行去背景后矫正 离心机离心机Avanti J-301高速冷冻离心机主要附件：主要附件：8*50ml角转（角转（Max 30000rpm）10*100 ml角转（角转（Max 18000rpm）6*38.5 ml水平转头（水平转头（Max 240
27、00rpm）冷冻超速离心机 主要附件：主要附件：10*2ml角转（角转（Max 130000rpm）8*8 ml角转（角转（Max 80000rpm）工作原理工作原理离心机离心机:利用惯性离心力分离液态非均相混合物的机械。利用惯性离心力分离液态非均相混合物的机械。根据分离方式可分为：根据分离方式可分为：过滤式过滤式 分离式分离式沉降式。沉降式。若被处理的物料为悬浮液就称为离心沉降；若被处理的物料为悬浮液就称为离心沉降；若被处理的物料为乳浊液称为离心分离。若被处理的物料为乳浊液称为离心分离。主要用途主要用途 主要用于各种生物大分子的分离、纯主要用于各种生物大分子的分离、纯化、浓缩（如对病毒、生物
28、大分子、化、浓缩（如对病毒、生物大分子、高聚化合物沉降等）高聚化合物沉降等）同时还可进行相对分子量的测定等。同时还可进行相对分子量的测定等。转子转子 固定角转子固定角转子 水平转子水平转子 离心力公式：离心力公式：G(xg)=11.18(rpm/1000)2 x R R:radius rpm:round per minute离心机的分类离心机的分类分离因数分离因数KC：离心力与重力之比（即离心力与重力之比（即U2T/Rg）根据根据KC 分为分为常速常速 KC 50000 （90000rpm)离心机使用注意事项离心机使用注意事项 挥发性或腐蚀性液体离心时，应挥发性或腐蚀性液体离心时，应使用带盖的
29、离心管，并确保液体使用带盖的离心管，并确保液体不外漏以免腐蚀机腔或造成事故不外漏以免腐蚀机腔或造成事故 要等到转速为零时才能打开离心要等到转速为零时才能打开离心机盖机盖,取出样品。取出样品。离心机的正确操作方法离心机的正确操作方法 离心管的安放：平衡离心管的安放：平衡离心速度的设定离心速度的设定 离心力与离心率离心力与离心率 离心速度必需根据离心样品的平均离心速度必需根据离心样品的平均密度确定密度确定 For Angle Rotor For Swing Rotor使用后的维护与保养 注意腔底的周边清洁注意腔底的周边清洁O O圈的作用圈的作用 密闭真空，防止样品飞溅密闭真空，防止样品飞溅 生物安
30、全防护，阻止有害生物样生物安全防护，阻止有害生物样品外泄品外泄 增加盖子与转子体的阻尼，防止增加盖子与转子体的阻尼，防止盖子松脱盖子松脱Thermo Forma高温灭菌二氧化碳培养箱高温灭菌二氧化碳培养箱工作原理工作原理 通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细通过在培养箱箱体内模拟形成一个类似细胞胞/组织在生物体内的生长环境如：组织在生物体内的生长环境如：恒定的酸碱度（恒定的酸碱度（pH值：值：7.2-7.4）稳定的温度（稳定的温度（37C）较高的相对湿度（较高的相对湿度（95%）稳定的稳定的CO2水平（水平（5%）来对细胞来对细胞/组织进行体外培养的一种装置。组织进行体外培养的一种装置。二氧化
31、碳培养箱的基本的要求二氧化碳培养箱的基本的要求 一是能够对温度、二氧化碳浓度一是能够对温度、二氧化碳浓度和湿度提供最精确稳定的控制和湿度提供最精确稳定的控制 二是能够对培养箱内的微生物污二是能够对培养箱内的微生物污染进行有效的防范，并且能够定染进行有效的防范，并且能够定期消除污染期消除污染 温控系统温控系统 温度控制温度控制 根据加热方式分为气套式和水套式根据加热方式分为气套式和水套式 具备相互独立三重温度控制功能的二氧具备相互独立三重温度控制功能的二氧化碳培养箱，即箱内温度控制、超温报化碳培养箱，即箱内温度控制、超温报警控制和环境温度监控。警控制和环境温度监控。二氧化碳浓度控制二氧化碳浓度控
32、制 红外传感器（红外传感器（IR）或热导传感器）或热导传感器（TCD）带有带有CO2测量系统自动校准功能测量系统自动校准功能防污染设计和消毒灭菌系统防污染设计和消毒灭菌系统 紫外消毒紫外消毒 HEPA过滤器过滤器 高温消毒高温消毒 高温干热和高温湿热高温干热和高温湿热 高压消毒锅高压消毒锅相关概念介绍相关概念介绍 灭菌（灭菌（sterilization）是指杀灭是指杀灭一切一切活的微生物。活的微生物。消毒（消毒（disinfection）是指杀灭是指杀灭病原病原微生物和其他有害微生微生物和其他有害微生 物，并不要求清除或杀灭所有微生物。物，并不要求清除或杀灭所有微生物。方法方法 灭菌方法可分为
33、四种：物理、机灭菌方法可分为四种：物理、机械、化学和生物灭菌。械、化学和生物灭菌。一般多采用物理方法，如高温热一般多采用物理方法，如高温热力、滤过、超声波、紫外线和电力、滤过、超声波、紫外线和电离辐射等。离辐射等。消毒多应用化学药物。消毒多应用化学药物。高温热力灭菌高温热力灭菌：干热灭菌干热灭菌 适用于玻璃仪器，将物品放入烘箱，适用于玻璃仪器，将物品放入烘箱，160170oC，12小时。小时。火焰灭菌火焰灭菌 适用于常用用具，如接种环、镊子等。灭菌适用于常用用具，如接种环、镊子等。灭菌方法是放在火焰上直接灼烧。方法是放在火焰上直接灼烧。湿热灭菌湿热灭菌 (1)高压蒸汽灭菌：适用于培养基、衣物等
34、高压蒸汽灭菌：适用于培养基、衣物等的灭菌。的灭菌。（2）间歇蒸汽灭菌：适用于不耐高温的培）间歇蒸汽灭菌：适用于不耐高温的培养基或无高压蒸汽灭菌锅时。养基或无高压蒸汽灭菌锅时。（3）巴斯德灭菌：适用于牛乳类等不耐高）巴斯德灭菌：适用于牛乳类等不耐高温的物体。温的物体。湿热灭菌法与干热灭菌法效果比较湿热灭菌法与干热灭菌法效果比较结论：结论：同样温度下，湿热比干热灭菌效果好同样温度下，湿热比干热灭菌效果好原因：原因：蛋白含水量多时易凝固变性蛋白含水量多时易凝固变性 湿热穿透力比干热大湿热穿透力比干热大 湿热的蒸汽具有潜热湿热的蒸汽具有潜热 高压蒸汽灭菌操作注意事项（高压蒸汽灭菌操作注意事项（1）查看
35、排水桶查看排水桶 加水至加水至Low水平线上。当水线超过水平线上。当水线超过High时，将时，将水排出至水排出至Low线上。线上。查看仓内水查看仓内水 水不足时加水不足时加蒸馏水蒸馏水使水面与三角搁架相平为宜。使水面与三角搁架相平为宜。待灭菌物品待灭菌物品 注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响注意不要装得太挤，以免防碍蒸汽流通而影响灭菌效果。灭菌效果。三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免三角烧瓶与试管口端均不要与桶壁接触，以免冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。冷凝水淋湿包口的纸而透入棉塞。高压蒸汽灭菌操作注意事项（高压蒸汽灭菌操作注意事项（2）121.3 （15磅磅/时时2），1520 min灭菌灭菌 如果压力未降到如果压力未降到0时，打开排气阀，就会时，打开排气阀，就会因锅内压力突然下降，使容器内的培养基因锅内压力突然下降，使容器内的培养基由于内外压力不平衡而冲出瓶口，造成棉由于内外压力不平衡而冲出瓶口，造成棉塞沾染培养基而发生污染。塞沾染培养基而发生污染。取物品时戴手套，防烫伤。取物品时戴手套，防烫伤。THANK YOU!
