1、l免疫胶体金技术 是以胶体金作为示踪标志物应用于抗原抗 体的一种新型的免疫标记技术。l胶体金标记 实质上是蛋白质等高分子被吸附到胶体金颗粒表面的包被过程。不足:金免疫测定中应用的是单份试剂,难于进行质量控制。即使是同一批生产的试剂,也很难保证每个试剂的同一性。因此金免疫测定一般只能用于定性试验。其定量检测和灵敏度的提高还有赖于新原料和新材料的开发与应用。H2O,100OCH2AuCl4Cit-Cit-Cit-Cit-Turkevich,et.al.Discussions Faraday Soc.1951,No.11 55-75.OOOOHOOOAdd 100 mL of 1.0%HAuCl4
2、to a 200 mL Erlenmeyer flask on a stirring hot plate.Add a magnetic stir bar and bring the solution to a boil To the boiling solution,add 1.5 mL of a 1%solution of trisodium citrate dihydrate,Na3C6H5O7.2H2O Stop heating when a deep red color is obtained.Good gold colloids and bad(unstable)gold collo
3、ids.劣质金外形不均一,且非球形,有凝集现象,颗粒间变异系数较大 Strongest binding suggested to be the sulfur hinge joining the the two Fc regions胶体金颗粒带电情况 抗体和金颗粒的耦联(图出处:IVD Technology)样本垫可使用化学物质进行浸渍处理,从而减少样本差异,提高试验的灵敏度。通常可以将洗涤剂、粘性增强剂、阻滞剂及盐渗入样本垫然后加以干燥,该工艺可避免使用复杂辨识剂/追迹缓冲液的麻烦,使检测一步完成。u结合垫(Conjugate pad):玻璃纤维、聚酯膜、纤维素滤纸、无纺布等多种材质,多种规格
4、,批间稳定。结合垫的作用主要为:-吸附一定量的金标结合物颗粒;-吸附并持续不断的将样品转移到NC膜上;-保持金标结合物颗粒的稳定性;-保证金标结合物颗粒定量完全释放等。u硝酸纤维素膜(Nitrocellulose):推荐使用Millipore,MDI,S&S,whatman 等国外公司的硝酸纤维素膜。NC膜的作用:-在检测线和对照线条带区域固定抗体;-样品在NC膜上流动并与试剂混合发生免疫反应;-反应在NC膜上显色,读检测结果 NC膜的重要参数:孔径、对称性、层析速度、表面活性剂、蛋白结合力、强度、表面质量、厚度、批间均一性等。u片材:不干胶塑料衬底,片材的质量很大程度上影响了产品的货架期。u吸收垫(Absorbent Pad):提供高吸收率、高容量以及相对稳定吸收率的吸收纸;吸收纸的作用:主要表现在控制样品的流速,促进虹吸作用以及使试剂跨过膜而不仅仅移到膜上。胶体金法检测胶体金法检测TB-Ab(双抗原夹心法双抗原夹心法)