1、番茄番茄-马铃薯马铃薯 理想图理想图2010-3-261番番茄茄马马铃铃薯薯植植株株融合融合的原的原生质生质体体ABAB再再生生壁壁脱脱分分化化愈愈伤伤组组织织再再分分化化植物原生质体的融合植物原生质体的融合植物组织培养植物组织培养番茄细胞番茄细胞A A原生质体原生质体B B原生质体原生质体A A杂种杂种细胞细胞 ABAB去壁去壁去壁去壁人人工工诱诱导导马铃薯细胞马铃薯细胞B B知识回顾：植物体细胞杂交技术知识回顾：植物体细胞杂交技术2010-3-2622010-3-263一、动物细胞融合一、动物细胞融合1 1、概念：、概念：指两个或多个动物细胞结合形成一个细胞的过程。指两个或多个动物细胞结合
2、形成一个细胞的过程。2 2、结果：、结果：形成单核的杂交细胞形成单核的杂交细胞3 3、原理：、原理：细胞膜的流动性细胞膜的流动性4 4、过程：、过程：5 5、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种、意义：突破了有性杂交方法的局限，使远缘杂交（种间、属间、科间、动植物之间）成为可能。间、属间、科间、动植物之间）成为可能。6 6、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物、应用：成为研究细胞遗传、细胞免疫、肿瘤和生物新品种培育等的重要手段。特别是利用杂交瘤技术制造新品种培育等的重要手段。特别是利用杂交瘤技术制造单克隆抗体单克隆抗体2010-3-2644、过程：动物细胞A 动物细胞B诱导，
3、融合2个完整的杂交细胞AB有丝分裂（膜融合、诱导方法质融合、核融合）单核细胞2010-3-265二、单克隆抗体二、单克隆抗体回顾回顾主要分布在血清中。主要分布在血清中。自主阅读自主阅读P52P52：抗体的传统生产方：抗体的传统生产方法及缺陷是什么？法及缺陷是什么？2010-3-268B B淋巴细胞特点淋巴细胞特点每一个每一个B B淋巴细胞只能产生一种抗体。淋巴细胞只能产生一种抗体。B B淋巴细胞受抗原刺激后，可以淋巴细胞受抗原刺激后，可以产生抗体。产生抗体。动物体内的动物体内的B B淋巴细胞可以产生淋巴细胞可以产生百万种以上的抗体，每种抗体对特定百万种以上的抗体，每种抗体对特定的抗原具有特异性
4、免疫作用。的抗原具有特异性免疫作用。2010-3-269二、单克隆抗体二、单克隆抗体 由单个由单个B B淋巴淋巴细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相细胞经过无性繁殖（克隆），形成基因型相同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质同的细胞群，这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体单一、特异性强的抗体 称为单克隆抗体。称为单克隆抗体。1 1、概念、概念:单：单：克隆：克隆：抗体特点：抗体特点：单个细胞单个细胞无性繁殖（复制）无性繁殖（复制）化学性质单一，特异性强化学性质单一，特异性强2010-3-2610怎样才能大量生产单克隆抗体？怎样才能大量生产单克隆抗体？提示提示1 1：仅用细胞培养技术
5、可行吗？：仅用细胞培养技术可行吗？提示提示2 2：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？：我们所学的哪种细胞是可以无限增殖的？提示提示3 3：有什么方法能使：有什么方法能使B B细胞产生抗体的能细胞产生抗体的能 力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？力和肿瘤细胞无限增殖能力同时具备呢？2010-3-2611大量生产单克隆抗体思路大量生产单克隆抗体思路 B淋巴细胞具产生抗体的功能淋巴细胞具产生抗体的功能 骨髓瘤细胞具无限增殖的特性骨髓瘤细胞具无限增殖的特性 利用细胞融合的技术将两种细胞融利用细胞融合的技术将两种细胞融合获得具有淋巴细胞和骨髓瘤细胞合获得具有淋巴细胞和骨髓瘤细胞特性的杂交瘤细胞特性的杂
6、交瘤细胞 利用动物细胞培养技术大量培养杂利用动物细胞培养技术大量培养杂交瘤细胞交瘤细胞2010-3-2612B B淋巴细胞淋巴细胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合融合（只考虑两两融合）（只考虑两两融合）培养液中细胞有几培养液中细胞有几种类型？融合细胞种类型？融合细胞几种类型？几种类型？骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞-B-B淋巴细胞淋巴细胞B B淋巴细胞淋巴细胞-骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞多种杂交细胞多种杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞克
7、隆上述杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞检验阳性细胞单克隆抗体单克隆抗体注射到小鼠体内注射到小鼠体内体外培养体外培养 该细胞继承双亲细胞该细胞继承双亲细胞的遗传特性，既能产生专的遗传特性，既能产生专一抗体又能无限增殖。一抗体又能无限增殖。杂交瘤细胞有何特点？杂交瘤细胞有何特点？特异性强，灵敏度高特异性强，灵敏度高多孔细胞板多孔细胞板2010-3-2614免疫小鼠免疫小鼠培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合融合骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞B B淋巴细胞淋巴细胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白选择培养基上培养选择培养基上培养专一抗体专一抗体检验阳性检验阳性专一
8、抗体专一抗体检验阳性检验阳性注射到小鼠体内注射到小鼠体内体外培养体外培养单克隆抗体单克隆抗体克隆杂交细胞克隆杂交细胞分开不同杂交细胞，克隆分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞专一抗体，检验阳性细胞多种杂交细胞多种杂交细胞杂交瘤细胞有何特点？杂交瘤细胞有何特点？本过程利用的那些技术？本过程利用的那些技术？动物细胞融合技术动物细胞融合技术动物细胞培养技术动物细胞培养技术是否注射抗原是否注射抗原（只考虑两两融合）培养（只考虑两两融合）培养液中细胞有几种类型？几液中细胞有几种类型？几种融合细胞？种融合细胞？2 2、单克隆抗体制备过程、单克隆抗体制备过程与传统制备的抗体相与传统制备的抗体相比具有
9、什么特点？比具有什么特点？2010-3-26154.4.单克隆抗体的应用：单克隆抗体的应用：作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与作为诊断试剂：准确识别各种抗原物质，并与特异性结合特异性结合 优点：准确、高效、简易、快速优点：准确、高效、简易、快速用于用于运载药物：制成运载药物：制成“生物导弹生物导弹”治疗疾病：主要用于癌症治疗治疗疾病：主要用于癌症治疗2010-3-2616两个过程两个过程动物细胞融合过程动物细胞融合过程单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程三个三个“一一”一个诱导细胞融合的新方法一个诱导细胞融合的新方法一个新细胞一个新细胞一个优势一个优势课堂小结课堂小结灭活的病毒灭活的病毒
10、杂交瘤细胞杂交瘤细胞单克隆抗体特异性单克隆抗体特异性 强、灵敏度高的优势强、灵敏度高的优势2010-3-2617形成杂种细胞形成杂种细胞获得杂种植株获得杂种植株结果结果物理、化学方法物理、化学方法（同左）（同左）灭活的病毒灭活的病毒物理（离心、振物理（离心、振荡、电刺激）荡、电刺激）化学（聚乙二醇）化学（聚乙二醇）诱导方法诱导方法细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、植物细胞全能性植物细胞全能性原原 理理动物细胞融合动物细胞融合植物体细胞杂交植物体细胞杂交比较项目比较项目1 1、植物、动物细胞融合的比较、植物、动物细胞融合的比较课堂小结课堂小结融合前处理融合前处理用纤维素
11、酶、用纤维素酶、果胶酶去壁果胶酶去壁用胰蛋白酶用胰蛋白酶使细胞分散使细胞分散2010-3-26182 2、单克隆抗体制备过程、单克隆抗体制备过程B B淋巴细胞淋巴细胞骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞诱导诱导融合融合B-BB-B细胞细胞B-B-瘤细胞瘤细胞瘤瘤-瘤细胞瘤细胞选择培养选择培养杂交瘤细胞杂交瘤细胞（B-B-瘤细胞）瘤细胞）克隆化培养克隆化培养抗体检测抗体检测产生所需产生所需抗体的杂抗体的杂交瘤细胞交瘤细胞体外培养体外培养小鼠腹腔内增殖小鼠腹腔内增殖单克隆抗体单克隆抗体课堂小结课堂小结2010-3-2619B B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞
12、群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔A AC C 1.1.右图为某同学根据杂交瘤技术右图为某同学根据杂交瘤技术的方法，设计的生产破伤风杆菌的方法，设计的生产破伤风杆菌抗体的实验方案抗体的实验方案制备单克隆抗体制备单克隆抗体不能，没有将抗原注入小鼠体内，不能，没有将抗原注入小鼠体内，无法获得产生单一抗体的无法获得产生单一抗体的B B淋巴淋巴细胞。细胞。(1).(1).该实验方案的目的是：该实验方案的目的是：_(2).(2).该方案能达到预期效果该方案能达到预期效果吗？为什么？吗？为什么？2010-3-2620B B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群
13、注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔A AC C (3).A(3).A是从小鼠的脾脏中取是从小鼠的脾脏中取得得_ _ 该细胞能够该细胞能够产生产生_ _。(4).(4).图中图中B B为为_过程，过程，常用常用_作作为诱导剂，该细胞继承为诱导剂，该细胞继承_的遗传特性，的遗传特性，既能既能_ ,_ ,又能又能_。B B淋巴细胞淋巴细胞抗体抗体细胞融合细胞融合灭活的病毒灭活的病毒双亲细胞双亲细胞产生专一抗体产生专一抗体无限增殖无限增殖2010-3-2621B B体外培养体外培养骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞杂交瘤细胞杂交瘤细胞足够数量的细胞群足够数量的细胞群注射到注射到小鼠腹腔小鼠腹腔A AC C (5)._ (
14、5)._ 技术是单克隆抗体的技术技术是单克隆抗体的技术支持。支持。动物细胞培养动物细胞培养（6 6）单克隆抗体的特点）单克隆抗体的特点 _，并，并可大量制备。可大量制备。特异性强，灵敏度高特异性强，灵敏度高2010-3-26223 3、用、用a a表示骨髓瘤细胞，用表示骨髓瘤细胞，用b b表示表示B B淋巴细胞，淋巴细胞，则细胞融合过程中两次筛选的目的分别是（则细胞融合过程中两次筛选的目的分别是（）A.aA.a、aaaa、abab、bb bb、b ab a、aaaa、ab ab ababB.aB.a、aaaa、abab、bb bb、b abb ab、bb bb、b b ababC.aC.a、a
15、aaa、abab、bb bb、b ab b ab 产生特定抗产生特定抗体的体的ababD.aD.a、aaaa、abab、bb bb、b aa b aa 能无限增殖能无限增殖的的aaaaC C2 2、动物细胞融合和植物细胞杂交的比较中，正、动物细胞融合和植物细胞杂交的比较中，正确的是（确的是（）A.A.诱导融合的方法完全相同诱导融合的方法完全相同 B.B.所用的技术手段完全相同所用的技术手段完全相同 C.C.所采用的原理完全相同所采用的原理完全相同 D.D.都能形成杂种细胞都能形成杂种细胞D D2010-3-2623已成功的动物细胞融合实例还有哪些？已成功的动物细胞融合实例还有哪些？生物种类生物种类 成功年代成功年代 酵母菌酵母菌鸡鸡 1975年年人人胡萝卜胡萝卜 1976年年人人小鼠小鼠 1978年年要知道更多的实例，需经常查阅更多科研报道。要知道更多的实例，需经常查阅更多科研报道。2010-3-2624
