1、专题2 微生物的培养与应用第1页，共40页。微生物原核:真核非细胞类：细菌、放线菌、支原体、蓝藻等酵母菌、霉菌等真菌：原生生物病毒、类病毒、朊病毒等显微藻类：衣藻、小球藻等原生动物：草履虫、变形虫等第2页，共40页。（一）球菌（二）杆菌（三）螺旋菌肺炎双球菌金黄色葡萄球菌乳酸链球菌大肠杆菌苏云金芽孢杆菌枯草芽孢杆菌霍乱弧菌幽门螺旋菌齿垢密螺旋体第3页，共40页。有些细菌在一定的条件下，细胞里面形成一个椭圆形的休眠体（不是繁殖体），叫做芽孢。芽孢的壁很厚，含水量极低，抗逆性极强（对干旱、低温、高温等恶劣的环境有很强的抵抗力）。细菌芽孢的结构模式图 环境适宜时，芽孢可以萌发，形成一个细菌。第4页，
2、共40页。菌落具有大小、形状、光泽度、颜色、透明度等基本特征。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落由单个细菌（或其他微生物）细胞或少数同种细胞在适宜固体培养基表面或内部生长繁殖到一定程度，形成肉眼可见的子细胞群落。第5页，共40页。噬菌斑即噬菌体侵染细菌细胞，导致寄主细胞溶解死亡，因而在琼脂培养基表面形成的肉眼可见的透明小圆斑（“负菌落”）。在适当条件下，一个噬菌体形成一个噬菌斑。第6页，共40页。课题1 微生物的实验室培养第7页，共40页。1.接种工具：接种针：直线状，多用于固体培养基穿刺接种。接种环：环状，常用于细菌和酵母菌的斜面、平板接种。斜面平板接种针、钩、环 接种钩：直角状，多用于霉菌和放
3、线菌的接种。第8页，共40页。2.涂布器：多用于菌种的分离或微生物平板活菌计数时涂布。3.吸管：0.1、0.2、0.5、1、5、10mL等移液管，常用于液体接种及菌悬液系列稀释。4.试管、培养皿、锥形瓶等5.消毒、灭菌设备：酒精灯、干热灭菌箱、高压蒸汽灭菌锅等。6.无菌实验室、超净工作台等第9页，共40页。一、概念 泛指在分离、接种和培养微生物的操作中，所有防止其他微生物污染的方法。是成功地培养微生物的关键。二、范围1.对实验操作空间、操作者衣着和手进行清洁和消毒。2.对培养器皿、接种用具、培养基等进行灭菌。3.在酒精灯旁操作4.已灭菌的材料与周围的物品分开。第10页，共40页。2.煮沸消毒法
4、在100煮沸5 6min可以杀死微生物细胞和部分芽孢。3.化学药物消毒法酒精消毒：使细胞脱水、蛋白质变性。氯气消毒：氯气溶于水形成盐酸和次氯酸，次氯酸可放出新生态的氧，从而杀死细胞。三、消毒、灭菌（一）消毒：较为温和理化方法，杀死部分有害菌体（不包括芽孢、孢子）1.巴氏消毒法 7075煮30min或在85煮15min；杀灭非芽孢致病菌，不破坏物料原风味；适用于对牛奶、啤酒等消毒。其他：升汞、高锰酸钾、臭氧、甲酚皂、醋酸等等。第11页，共40页。干热灭菌箱内160170 12小时，适用于耐高温、需保持干燥的物品（吸管、培养皿）和金属用具等。在酒精灯火焰（200以上）上灼烧，灭菌简捷可靠。适用于接
5、种环、接种针、接种钩等金属用具以及试管口、三角瓶口灭菌1.灼烧灭菌2.干热灭菌（二）灭菌：强烈的理化方法，杀死所有微生物（包括芽孢、孢子）4.紫外线（260nm）消毒法 抑制DNA的复制；产生臭氧，辅助杀菌。适用于空气及物体表面消毒或灭菌。第12页，共40页。4.其他灭菌方法：紫外线、超声波、微波、化学药物灭菌等。3.高压蒸汽灭菌 100KPa、121、1530min；加压是为了提高温度，达到灭菌的目的。因此必须当灭菌锅内的冷空气完全排尽后，再将锅关闭，继续加热。适用于培养基灭菌。附：实验室的消毒与灭菌 对接种室、接种箱、超净工作台喷洒适量的石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液后，用紫外线照射30min
6、。第13页，共40页。第14页，共40页。第15页，共40页。二、基本成分（一）碳源无机碳源：有机碳源：CO2、HCO3-等，适于自养生物。葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等，适于异养生物。（二）氮源无机氮源：有机氮源：N2、NH4、NH3、NO3-等牛肉膏、蛋白胨、酵母膏、尿素等一、概念：人们按照微生物对_的不同需求，配制出供其 的营养基质叫培养基（三）无机盐1.种类：KH2PO4、K2HPO4、（NH4）2SO4、MgSO4、CaCl2、Ca(NO3)2、NaCl、FeSO4等。营养物质生长繁殖第16页，共40页。2.功能（1）参与酶的组成；（2）调节并维持细胞的渗透压；（3）调节PH的平衡。（四）
7、水（1）良好溶剂，参与物质运输；（2）参与细胞内一系列化学反应；（3）酶催化的介质。（五）生长因子1.概念：微生物生长所必需的、微量的、自身不能合成或合成很少的有机物。酶和核酸的组成成分第17页，共40页。维生素、氨基酸、嘌呤及嘧啶三大类酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等注一：自养微生物和某些异养微生物（如大肠杆菌）不需要外源生长因子也能生长。注二：对微生物生长所需生长因子的本质不了解时，通常在培养基中加入酵母浸膏、牛肉膏及动植物组织提取液等天然物质。注三：最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖。注四：最常用的氮源是铵盐、硝酸盐。注五：含C、H、O、N的有机物是异养型微生物的 碳源、氮源、能源第18
8、页，共40页。三、种类种类种类是否含凝固剂是否含凝固剂用途用途固体培养基固体培养基半固体培养基半固体培养基液体培养基液体培养基（一）按物理性质分1.5%-2.5%0.2%-0.7%否分离、计数、鉴定观察运动、鉴定菌种工业生产固体培养基：菌落半固体培养基：运动液体培养基：生长第19页，共40页。（二）按化学成分种类种类化学成分化学成分用途用途天然培养基天然培养基合成培养基合成培养基不明确明确工业大规模生产分类、鉴定（三）按培养基的功能（用途）1.基础培养基（1）成分：一般微生物生长繁殖所需要的基本物质（2）常用类型：牛肉膏蛋白胨培养基（20.0g琼脂）第20页，共40页。第21页，共40页。种类
9、种类制备方法制备方法原理原理用途用途举例举例2.选选择培择培养基养基3.鉴鉴别培别培养基养基加入相应特殊营养物质或化学物质加入某种特殊的化学物质依据某些微生物的特殊营养需求或对某些物质的敏感性依据微生物的代谢产物与特殊化学物质发生特定的反应，产生明显的特征变化。从众多微生物中分离所需的微生物鉴别不同种类微生物加入青霉素分离酵母菌和霉菌缺氮培养基分离固氮菌高浓度食盐的培养基分离金黄色葡萄球菌无碳培养基分离自养型微生物伊红和美蓝培养基鉴别大肠杆菌刚果红培养基鉴别纤维素分解菌第22页，共40页。四、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基1.计算：依配方计算100mL培养基所需各成分的用量。2.称量：玻璃棒挑取牛
10、肉膏于称量纸上称取。3.溶化：注：牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖。牛肉膏、称量纸、少量水加入烧杯加热溶解取纸蛋白胨、NaCl搅拌溶解冷却调pH琼脂搅拌熔化补水至100mL第23页，共40页。4.灭菌：培养基装入锥形瓶，加棉塞，包牛皮纸扎紧，高压蒸汽灭菌；培养皿58套作一包，放于干热灭菌箱内灭菌。5.倒平板 培养基冷却至约50左右时灼烧灭菌左手拔出棉塞倒入培养基盖盖冷却倒置6.无菌检查：37倒置培养2448h，观察是否有微生物生长。第24页，共40页。溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热溶化时为什么要将牛肉膏连同称量纸一起加热?加琼脂的目的是什么加琼脂的目的是什么?为什么要用玻璃棒搅拌？为
11、什么要用玻璃棒搅拌？在灭菌前在灭菌前,用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的用牛皮纸、旧报纸包紧盛有培养基的 锥形瓶的目的是什么？锥形瓶的目的是什么？培养皿能否用高压蒸汽灭菌？培养皿能否用高压蒸汽灭菌？问题讨论第25页，共40页。答：用手触摸锥形瓶，感觉刚刚不烫手时。2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答：灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。问题讨论1.培养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答：既可以防止培养基表面的水分过快挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，影响微生物的生长。4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答：最好不要用。因为空气中的微生物可能在此滋生。第26页，共40页。第27页，共40页。第28页，共40页。第29页，共40页。问题讨论第30页，共40页。问题讨论第31页，共40页。第32页，共40页。第33页，共40页。第34页，共40页。第35页，共40页。第36页，共40页。第37页，共40页。问题讨论第38页，共40页。第39页，共40页。第40页，共40页。
