1、课题1 微生物的实验室培养1.第1页，共65页。微生物的类群微生物的类群原生生物：原生生物：原核生物原核生物:真菌真菌:病毒病毒:如酵母菌、霉菌如酵母菌、霉菌单细胞的动植物单细胞的动植物如草履虫、单细胞藻类等如草履虫、单细胞藻类等无细胞结构无细胞结构真核细胞真核细胞细菌、蓝藻等细菌、蓝藻等原核细胞原核细胞2.第2页，共65页。一、微生物的培养基一、微生物的培养基 培养基（培养液）是为人工培养微生物而制备的，提供适合微生物生长、繁殖或积累代谢产物的营养基质。3.第3页，共65页。1 1、培养基的类型培养基的类型（1 1）按物理状态分）按物理状态分：固体培养基 液体培养基 半固体培养基区别：加入区
2、别：加入琼脂的量琼脂的量决定培养基的物理状态。决定培养基的物理状态。琼脂：多糖琼脂：多糖，实验室最常用的，实验室最常用的凝固剂凝固剂。熔点熔点：9898度；度；凝固点：凝固点：4444度度注意：注意：一般细菌不能利用琼脂。一般细菌不能利用琼脂。4.第4页，共65页。固体培养基用途：固体培养基用途：用于微生物用于微生物纯化、计数、鉴定纯化、计数、鉴定5.第5页，共65页。6.第6页，共65页。菌落菌落细菌的菌落特细菌的菌落特征因种而异征因种而异。菌落菌落特征是微特征是微生物鉴定的重要生物鉴定的重要依据。依据。菌苔：菌落连菌苔：菌落连成片成片 7.第7页，共65页。液体培养基：工业生产液体培养基：
3、工业生产表面生长表面生长均匀混浊生长均匀混浊生长沉淀生长沉淀生长8.第8页，共65页。半固体培养基：观察运动半固体培养基：观察运动无动力无动力 有动力有动力(弥散弥散)9.第9页，共65页。（2 2）按成分分）按成分分：天然培养基 合成培养基 半合成培养基10.第10页，共65页。（3 3）按功能分：）按功能分：基础培养基基础培养基 选择选择培养基培养基 鉴别培养基鉴别培养基基础培养基基础培养基：含有微生物生长所需的基本物质。：含有微生物生长所需的基本物质。11.第11页，共65页。选择培养基和鉴别培养基的比较选择培养基和鉴别培养基的比较选择培选择培养基养基鉴别培鉴别培养基养基培养基加入某种物
4、质或缺少某种营养物质，而抑制不需要的微生物生长，促进需要的微生物生长。12.第12页，共65页。几种选择培养基：加入青霉素的培养基加入青霉素的培养基:分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌加入高浓度食盐的培养基加入高浓度食盐的培养基:分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌不加氮源的无氮培养基不加氮源的无氮培养基:分离固氮菌分离固氮菌不加含碳有机物的无碳培养基不加含碳有机物的无碳培养基:分离自养型微生物分离自养型微生物13.第13页，共65页。二、培养基的营养物质二、培养基的营养物质主要营养物质：主要营养物质：水、碳源、水、碳源、氮源、无机物氮源、无机物特殊物质：特殊物质：生长因子生长因子（
5、微生物生长不可缺少的微量有机物。（微生物生长不可缺少的微量有机物。如维生素、含氮碱基）如维生素、含氮碱基）14.第14页，共65页。碳源碳源可作为碳源的物质有可作为碳源的物质有:含碳无机物含碳无机物:含碳有机物：含碳有机物：蛋白质蛋白质脂肪酸脂肪酸不同微生物所利用的碳源不同不同微生物所利用的碳源不同 异养型微生物异养型微生物的碳源为的碳源为 自养型微生物自养型微生物的碳源为的碳源为碳酸盐碳酸盐碳酸氢盐碳酸氢盐二氧化碳二氧化碳糖类（主要）糖类（主要）含碳有机物（有机碳）含碳有机物（有机碳）含碳无机物（无机碳）含碳无机物（无机碳）15.第15页，共65页。氮源氮源可作为氮源的物质有可作为氮源的物质
6、有:含氮无机物：含氮无机物：b.b.含氮有机物：含氮有机物：蛋白胨蛋白胨牛肉膏牛肉膏尿素尿素氮气氮气氨气氨气硝酸盐硝酸盐铵盐铵盐注意：蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、麦芽汁等天然营注意：蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、麦芽汁等天然营养物质中养物质中既含有碳源又同时含有氮源既含有碳源又同时含有氮源、生长因子等营养、生长因子等营养要素要素!16.第16页，共65页。1 1、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是、下列细菌中，能利用含碳无机物作碳源的是 A A 光合细菌光合细菌 B B 根瘤菌根瘤菌 C C 硝化细菌硝化细菌 D D 乳酸菌乳酸菌2 2、培养大肠杆菌的培养基中，必需含有的碳源和氮源分别、培养大肠杆菌
7、的培养基中，必需含有的碳源和氮源分别是是 A A 糖、有机酸等糖、有机酸等 B B 二氧化碳、碳酸盐二氧化碳、碳酸盐 C C 蛋白质蛋白质 D D 无机氮化物无机氮化物A.CA.C17.第17页，共65页。下表关于四种生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢的类型，下表关于四种生物的能源、碳源、氮源、新陈代谢的类型，描述正确的是描述正确的是硝化细菌硝化细菌乳酸细菌乳酸细菌根瘤菌根瘤菌衣藻衣藻能源（能源（了解）了解）NH3乳糖固定N2光能碳源碳源CO2糖类糖类CO2氮源氮源NH3N2N2NO2-新陈代谢新陈代谢 类型类型自养需氧型异养厌氧性 异养厌氧性 自养需氧型18.第18页，共65页。三、培养基配制
8、的原则三、培养基配制的原则1：目的要明确目的要明确 配制培养基要根据配制培养基要根据 培养的微生物、培养的微生物、培养的目的、培养基的用途培养的目的、培养基的用途 来确定培养基来确定培养基的化学成分、物理状态。的化学成分、物理状态。2：营养要协调营养要协调3：PH要适宜要适宜19.第19页，共65页。四、培养基的配制过程四、培养基的配制过程1.1.计算计算:100ml:100ml蒸馏水中各物质的量。蒸馏水中各物质的量。2.2.称量称量：注意牛肉膏的粘稠度大。：注意牛肉膏的粘稠度大。3.3.溶化溶化：牛肉膏连同称量纸一同放入：牛肉膏连同称量纸一同放入 不断搅拌不断搅拌4.4.调节调节PH:PH:
9、7.07.27.07.2思考：判断该培养基的作用是什么？思考：判断该培养基的作用是什么？以牛肉膏蛋白胨固体培养基为例20.第20页，共65页。加热、溶化21.第21页，共65页。22.第22页，共65页。5.5.分装：分装：（试管）培养（试管）培养基高度基高度1/51/5；不要污染试不要污染试管口；管口；棉塞塞紧棉塞塞紧23.第23页，共65页。6 6、包扎、包扎 3-5 3-5支试管支试管扎成一捆，外扎成一捆，外包一层牛皮纸，包一层牛皮纸，用线扎好。用线扎好。24.第24页，共65页。7 7、灭菌、灭菌 培养基：高压蒸汽灭菌培养基：高压蒸汽灭菌 培养皿：干热灭菌培养皿：干热灭菌25.第25页
10、，共65页。8.8.搁置斜面搁置斜面/倒平板倒平板（斜面的长度不超过试管的（斜面的长度不超过试管的1/2)1/2)26.第26页，共65页。图中哪些措施是防止杂菌污染的？图中哪些措施是防止杂菌污染的？27.第27页，共65页。培养基灭菌后，需要冷却到培养基灭菌后，需要冷却到5050度左右时，才能用来倒平度左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？板。你用什么办法来估计培养基的温度？刚刚不烫手。刚刚不烫手。为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？防止瓶口附近的微生物污染培养基防止瓶口附近的微生物污染培养基28.第28页，共65页。平板冷凝后，为什么要将平
11、板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？使培养基表面的水更好的挥发，防止皿盖上水珠落使培养基表面的水更好的挥发，防止皿盖上水珠落入培养基入培养基 在倒平板的过程中，不小心将培养基溅在皿盖与皿底在倒平板的过程中，不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？空气中的微生物会在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，最空气中的微生物会在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，最好不要用该培养基培养微生物。好不要用该培养基培养微生物。29.第29页，共65页。六、无菌操作六、无菌操作1 1、获得纯净培养物的关键：、获得纯净培养物的关键：2
12、 2、无菌操作、无菌操作 避免杂菌感染操作对象的操作过程避免杂菌感染操作对象的操作过程3 3、哪些地方有菌可能导致菌体感染？、哪些地方有菌可能导致菌体感染？操作者、操作操作者、操作空间空间 培养基、接种工具、器皿培养基、接种工具、器皿 防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵30.第30页，共65页。4 4、灭菌和消毒、灭菌和消毒 消毒：消毒：温和的因素杀死一部分对人体有害的微生温和的因素杀死一部分对人体有害的微生物。物。举例：煮沸，举例：煮沸，70%70%酒精溶液酒精溶液不包括芽孢和孢子不包括芽孢和孢子 灭菌灭菌：强烈的因素杀死所有微生物，强烈的因素杀死所有微生物，包括芽孢和包括芽孢和孢子。孢子
13、。思考：哪些因素可以灭菌、消毒？思考：哪些因素可以灭菌、消毒？物理物理高温、紫外线高温、紫外线 化学化学酒精、氯气、石碳酸酒精、氯气、石碳酸31.第31页，共65页。灼烧灭菌灼烧灭菌 微生物的微生物的接种工具接种工具 (接种环、接种环、接种针、试管口接种针、试管口)或其他金属或其他金属用具直接在火焰的充分燃烧用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧层灼烧32.第32页，共65页。干热灭菌干热灭菌 160160170 170；1 12h2h能耐高温的需要保持干能耐高温的需要保持干燥的物品燥的物品(玻璃器皿玻璃器皿)高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌 100kPa 121 100kPa 121 15-30min15-
14、30min通常用于培养基的灭菌通常用于培养基的灭菌33.第33页，共65页。思考：以下应当用何种方法灭菌、消毒？思考：以下应当用何种方法灭菌、消毒？操作者的双手操作者的双手 培养基培养基 接种工具接种工具 器皿器皿 空间空间 牛奶牛奶酒精消毒酒精消毒高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌干热灭菌紫外线紫外线巴氏消毒巴氏消毒 34.第34页，共65页。总结：无菌技术总结：无菌技术 1 1、实验操作空间、操作者、衣着和手要、实验操作空间、操作者、衣着和手要 和和 。2 2、将用于微生物培养的器皿、接种工具和培养基等进、将用于微生物培养的器皿、接种工具和培养基等进行行 。3 3、为了避免周
15、围环境中微生物污染，实验操作应在、为了避免周围环境中微生物污染，实验操作应在 附近进行。附近进行。4 4、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品、实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围物品相接触。相接触。清洁清洁灭菌灭菌酒精灯酒精灯消毒消毒35.第35页，共65页。无菌无菌条件下将微生物条件下将微生物接入培养基接入培养基的操作过程称为接的操作过程称为接种。种。1 1、接种接种 工具工具七、接种技术七、接种技术36.第36页，共65页。2、常用的接种方法、常用的接种方法37.第37页，共65页。做什么准备做什么准备？点燃酒精灯；斜面点燃酒精灯；斜面向上向上斜面划线接种的操作过程斜
16、面划线接种的操作过程斜面用什么接种斜面用什么接种？接种环如何灭菌？接种环如何灭菌？38.第38页，共65页。取棉取棉塞（塞（不放到桌面？不放到桌面？）试管口灭菌试管口灭菌挑取少量菌体挑取少量菌体39.第39页，共65页。从里到外轻轻从里到外轻轻划划“S S”型型曲线曲线，注意不要划破培养基。，注意不要划破培养基。试管口通过火焰试管口通过火焰，塞紧试管口。，塞紧试管口。放在放在3737恒温箱恒温箱中培养中培养24h24h。40.第40页，共65页。微生物的纯培养微生物的纯培养41.第41页，共65页。平板划线分离微生物的原理：平板划线分离微生物的原理：连续划线连续划线。由于由于划线后，线条末端的
17、细菌的数目比线条起始处要划线后，线条末端的细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的少，每次从上一次划线的末端末端开始，能开始，能使细菌的数目随着划使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少线次数的增加而逐步减少，最终能得到，最终能得到由单个细菌繁殖由单个细菌繁殖而来而来的菌落。的菌落。分离提纯微生物常用的方法：平板划线法、稀释涂布平板法42.第42页，共65页。平板划线的几种方法43.第43页，共65页。44.第44页，共65页。45.第45页，共65页。A.A.从试管中取菌从试管中取菌平板划线的平板划线的操作操作过程过程 P1846.第46页，共65页。47.第47页，共65页。48.第
18、48页，共65页。每次划线后要灼烧接种环，每次划线后要灼烧接种环，目的是什么？目的是什么？每次每次划线的起点有什么划线的起点有什么特点？特点？49.第49页，共65页。注意事项注意事项：第一第一步以及每一次划线之前和划线结束后步以及每一次划线之前和划线结束后都要都要灼灼烧烧接种环。灼烧接种环要冷却后再划线。接种环。灼烧接种环要冷却后再划线。每次每次划线之间灼烧接种环的目的是划线之间灼烧接种环的目的是杀死上一次划线残杀死上一次划线残留的菌种留的菌种，使下一次划线的菌种直接来至于上一次，使下一次划线的菌种直接来至于上一次划线的末端划线的末端，从而使从而使细菌的数目随着划线次数的增加细菌的数目随着划
19、线次数的增加而逐步减少而逐步减少。50.第50页，共65页。51.第51页，共65页。52.第52页，共65页。问题：上述结果反应了什么情况？问题：上述结果反应了什么情况？问题：可对菌液如何处理？问题：可对菌液如何处理？53.第53页，共65页。稀释涂布平板法分离微生物的原理稀释涂布平板法分离微生物的原理：将将菌液进行一系列的菌液进行一系列的梯度稀释梯度稀释，然后，然后将不同稀释度将不同稀释度的菌液分别涂布到琼脂平板表面的菌液分别涂布到琼脂平板表面，经过培养，在稀释度，经过培养，在稀释度足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成单个细胞，足够高的菌液里，聚集在一起的微生物将分散成单个细胞，在培养皿表面形成在培养皿表面形成单个菌落单个菌落。54.第54页，共65页。55.第55页，共65页。56.第56页，共65页。57.第57页，共65页。58.第58页，共65页。59.第59页，共65页。60.第60页，共65页。61.第61页，共65页。62.第62页，共65页。63.第63页，共65页。64.第64页，共65页。65.第65页，共65页。
