1、临床微生物标本采集及相关质量控制微生物样本采样基本原则1、及时采集微生物标本作病原学检查2、在抗菌药物使用前采集标本3、采样时严格执行无菌操作4、选择准确的解剖部位、合适的时间、适当的设备采集标本;5、采集足够量的标本,以保证检测的阳性率;6、采样后马上送检或床旁接种,尤其是厌氧培养7、棉拭子标本宜用运送培养基8、混有正常菌群污染标本,不可置肉汤培养9、标本容器须灭菌处理,但不得使用消毒剂10、送检标本应注明来源和检验目的一、血液、静脉导管标本1、采集指征发热(38 C)或低温(36 C),寒战白细胞增多,特别有“核左移”,粒细胞减少,血小板减少皮肤粘膜出血,昏迷,多器官衰竭,血压降低,及呼吸
2、加快CRP升高2 2、采集时间v患者出现寒战、体温升高前;v使用抗菌药物前;v患者已使用抗菌药物的情况下,若出现明显的发热前期症状,可在寒战前或寒战后1h内采血;若无明显的寒战时期,应在第二次服抗菌药物前采血;v关于无明显感染病灶或未找到发热原因的发热患者,先在不同部位采集2-3份血标本,间隔大于或等于1h,24h-36h后再次采集2份以上;v 疑似沙门菌感染的患者在病程第1-2周采集静脉血;3、采集部位 从两侧上肢静脉采血,“双瓶双侧”采血培养。至少做到“双侧双瓶”。必要时从下肢静脉采血做第三套血培养。一次静脉采血注入到多个培养瓶中应视为单个血培养。4 4、采集次数 对怀疑菌血症、真菌血症的
3、成人患者,推荐同时采集23套(不同部位)血培养标本。(即双瓶双臂同时采集血培养标本。)婴幼儿患者,推荐同时采集2次(不同部位)血培养标本。在采血后的2-5天无需重复采血培养;为什么要求多次采血？v(1)菌血症有“持续性”和“暂时性”之分,多次采血可提高阳性检出率,减少漏检;多次培养出“共生菌”,则能够确定为感染的病原菌;出现多种细菌在排除污染估计后,可考虑“复数菌”败血症的诊断。v(2)血液感染有原发性和继发性之分,多次采血培养有助于循环外感染部位的诊断;v(3)菌血症患者多数为间歇性,病原菌周期性出现在血液中,在无菌时期不管临床症状经历的严重程度,患者血液中的病原菌浓度水平相当低,因此要求多
4、次采血,但24h内一般不超过3次。5 5、采血量要求:成年患者推荐的采血量为每套不少于10ml,每瓶不少于5ml。婴幼儿患者推荐的采血量为每瓶不少于2ml。说明:血标本采集的量是影响检出率的最重要的因素。成人血培养采血量在230ml之间,病原菌检出率与采血量成正比例增长。每增加1ml的血液,病原菌的检出率增加3、2%。儿童患者因为血液中病原菌浓度较高,血培养量无需等同于成人。对血液病患者或者血容量相对较低的患者建议使用儿童瓶来减少血液的采集量增加病原菌的检出率。(二)、导管相关性血流感染的标本采集导管相关性血流感染:v最常见的为血管内导管相关性血流感染(CRBSI),发生率与导管种类、导管相关
5、医疗操作的频率、患者病情等因素有关。v短期留置的血管内导管,皮肤定值菌通过皮下隧道移植到导管尖端,随后引发感染;v长期留置的血管内导管,导管头被细菌污染,导管腔发生细菌定植,引发感染;v血行传播的细菌可定值在血管内导管中,引发新的病灶。v标本采集:v1、导管采集:用75%酒精消毒导管周围皮肤;移动导管,无菌剪刀剪取尖端末端5cm,直截了当置入无菌试管中;马上送检,防止干燥,常规培养不超过15min,4保存不超过2h。v不推荐使用增菌肉汤培养,因为增菌扩大了污染的几率,导致结果不可靠。v2、采集至少2份血培养,至少1份经外周静脉血穿刺采血,至少1份从导管中心或静脉留置口隔膜取血,两者之间采血时间
6、应5min。二 、呼吸道标本(一)采集指征v凡是发热、咳嗽和咳痰,痰呈脓性、粘稠或血性,并伴有胸痛、气急,肺部闻及湿罗音,外周白细胞总数及中性粒细胞比例明显增高,X线检查提示肺部有炎性浸润或胸腔积液,甚至出现感染性休克和呼吸衰竭等患者,应采集痰液或下呼吸道标本。v对可疑烈性呼吸道传染病(如SARS、肺炭疽、肺鼠疫等)患者采集检验标本时必须注意生物安全防护。(二)采集时间v在抗生素应用前采集痰标本;v咳痰标本应用最早且广泛,但也是最受争议的标本;v取标本前应摘去牙托,清洁口腔如刷牙和漱口;v深咳,采集标本过程中要有专业的医务人员指导;v关于细菌性肺炎,痰标本送检每天1次,连续23天;不建议24h
7、内多次采集,除非痰液外观性状改变;v怀疑分枝杆菌感染者,应连续收集3天清晨痰液送检。(三)采集方法 以晨痰为佳。用清水反复漱口,用力咳出呼吸道深部的痰,痰液直截了当吐入无菌容器中,尽快送检。否则有的细菌(如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌)在外界估计死亡。不能及时送检的标本,室温保存2h。要求采到肺深部的痰液,不要唾液。三、尿培养标本(一)采集指征v1、有典型的尿路感染症状;v2、有肉眼脓尿或血尿;v3、尿常规检查白细胞或亚硝酸盐阳性;v4、有不明原因的发热,无其他局部症状;v5、留置导尿管的患者出现发热;v6、膀胱排空功能受损;v7、泌尿系统疾病手术前;v8、有尿路感染症状者,前次培养结果阴性或抗菌
8、治疗48h后仍持续发热。v9、抗生素停药后,感染症状再次出现。(二)采集时间v1、应选择在抗菌药物应用前或停用抗菌药物5天后采集尿液。v2、通常采集清晨第1次尿液送检。v3、怀疑沙门菌感染时应在发病2周左右采集尿液培养。v4、对无症状的患者应连续采集3天晨尿送检。v5、怀疑结核分枝杆菌感染时,患者应停药1-2天后采集晨尿或24h尿的沉渣部分10-15ml送检。(三)采集方法 清洁中段尿 留取清晨清洁中段尿标本,先用肥皂水认真清洗会阴部,再用清水冲洗尿道口周围;将前段尿排去,留取中段尿10ml左右于无菌容器内,马上加盖送检,2h内接种。该方法简单、易行,是最常用的尿标本收集方法,然而容易受到会阴
9、部细菌污染。下列因素可使尿液中细菌数量减少,判断结果时应注意使用抗生素治疗,细菌生长受到抑制;尿液稀释,尿比重1 1、003003,营养成分减少,细菌生长迟缓;尿PHPH5 5、0 0或8 8、5 5,细菌生长受阻;尿频时,膀胱内细菌停留时间短,菌落数减少;尿道口消毒液混入标本中,影响细菌繁殖,菌落数减少;不同种类的细菌生长速度不同、营养要求不同,菌落计数有所不同。四、大便培养标本(一)采集指征:粪便涂片镜检白细胞5个/HP;重症腹泻,体温大于38、5;血便或便中有脓液;未经抗菌药物治疗的持续性腹泻患者;秋冬季儿童腹泻及住院抗感染治疗后腹泻,进行培养意义不大。(一)采集时间 腹泻患者应在急性期
10、,并尽估计在使用抗生素之前采集新鲜粪便;伤寒患者在发病2周以后。(二)采集方法1、自然排便采集法 自然排便后,挑取有脓血或黏液部位的粪便2-3g,液状粪便取絮状物盛于无菌的容器内或置于保存液或增菌液中送检。2、直肠拭子采集法 对不易获得粪便或排便困难的患者及婴幼儿,可采纳直肠拭子法采集标本,其方法是将拭子前端用甘油湿润。然后插入肛门约45cm(幼儿约23cm)处,轻轻在直肠内旋转,擦取直肠表面粘液后取出,盛入无菌试管或保存液中送检。五、生殖道标本(一)送检指征1 1、男性尿急、尿频、尿痛尿道分泌物增多会阴部疼痛及阴囊疼痛性功能障碍泌尿生殖器畸形和缺损2 2、女性分泌物增多及性状异常尿道口搔痒及
11、有脓性分泌物下腹疼痛月经失调阴道出血外阴搔痒外阴或阴道疼痛性功能障碍(二)标本采集v尿道分泌物1、女性尿道:患者排尿1小时后采集,首先拭去尿道口的渗出物;再用拭子通过阴道,靠着耻骨联合,按摩尿道,采集分泌物;如未获得分泌物,清洗外尿道,用灭菌纱布或棉球擦拭,用泌尿生殖道拭子插入尿道24cm,旋转拭子2秒。2、男性尿道:用泌尿生殖道拭子插入尿道腔24cm,旋转拭子,至少停留20秒,而使之容易吸收。v阴道分泌物 擦除过多的分泌物和排出液,用无菌棉拭子采取阴道口内4厘米内侧壁或后穹窿处分泌物,假如需要涂片,需再用一个拭子。v男性前列腺:用前列腺按摩法采集前列腺液。清洗尿道口,冲洗尿道膀胱,从肛门用手
12、指按摩前列腺,使前列腺液溢出,用无菌容器收集。无肉眼可见脓液时,可用灭菌拭子轻轻伸入前尿道内,旋转拭子采集标本。六、化脓和创伤标本1、开放性感染和已溃破的化脓灶 标本采集前先用灭菌生理盐水拭去表面渗出物,尽估计用抽吸或将拭子深入伤口,紧贴伤口前沿取样,从脓肿底部或脓肿壁取样,效果最好。慢性感染,污染严重,特别难分离到致病菌,可取感染部位下的组织,研磨成组织匀浆接种于适宜的培养基。2、封闭性脓肿 局部消毒后用针及注射器抽吸脓肿壁,将所有物质置于无菌试管内送检,疑为厌氧菌感染时马上作床边接种或置于厌氧转运装置送检(针头插一橡皮塞隔绝空气)。但取样时,估计会带入与感染过程无关的定植细菌。3、大面积创
13、伤感染:可取感染组织块或沾有脓汁的内层敷料送检。七、穿刺液标本 采集指征v脑脊液:v 症状指征:发热等感染性全身症状、颅内压升高、脑膜刺激症状、神经麻痹症状、脑脊液常规及生化变化;怀疑脑膜炎时。v胸水:v 多伴有胸痛、发热、胸腔积液;疑似胸膜炎、胸腔积水;v腹水:v 有积液伴腹痛、呕吐、肌紧张、肠鸣音弱或消失等。疑似原发或继发性腹膜炎;v胆汁:v 腹痛、黄疸、右上腹压痛、肌紧张、胆囊区深吸气时有触痛;疑似胆石症、胆囊炎、肝胆系统感染等。v心包液:v 发冷、发热、心悸、出汗、乏力及精神症状;心前区疼痛、心包摩擦音、心音明显减弱、心电图改变等。疑似心包炎;v关节液:v 关节肿胀,关节周围肌肉发生保
14、护性痉挛;疑似化脓性关节炎。(一)脑脊液1、采集时间:怀疑为脑膜炎的病人,应马上采集脑脊液,最好在使用抗菌药物往常采集标本。2、采集方法:用腰穿方法采集脑脊液35ml,分装到3个无菌试管中,每个试管12ml。第一管用于细菌培养!也可将抽取液直截了当注入血培养瓶,用血培养仪培养。(二)其它穿刺液 1、采集时间 怀疑感染存在,应尽早采集标本,一般在患者使用抗菌药物之前或停止用药后2-3天采集。2、采集方法 无菌操作穿刺抽取标本或外科手术采集标本。标本采集量应1ml;胸腔积液、腹水可抽取10ml;心包液、关节液等可抽取25ml。标本采集后注入无菌小瓶或无菌试管中送检也可将抽取液直截了当注入血培养瓶,用血培养仪培养。感谢您的聆听！
