1、第十章第十章 感染免疫和疫苗感染免疫和疫苗 抗感染免疫：抗感染免疫：机体抵御病原体及其有害产物，以维持机体抵御病原体及其有害产物，以维持生理稳定的功能。生理稳定的功能。感染：感染：指一定种类的指一定种类的病原体病原体在一定条件下侵入机在一定条件下侵入机 体，在一定部位生长繁殖，并与机体防御机体，在一定部位生长繁殖，并与机体防御机 能相互作用，引起不同程度的病理过程。能相互作用，引起不同程度的病理过程。病原体微生物寄生虫细菌真菌放线菌螺旋体支原体衣原体立克次体病毒本章将讲述 抗细菌感染抗细菌感染 抗病毒感染抗病毒感染 抗真菌感染免疫抗真菌感染免疫 抗寄生虫感染免疫抗寄生虫感染免疫 预防性疫苗预防
2、性疫苗 治疗性疫苗治疗性疫苗第一节第一节 细菌的感染免疫细菌的感染免疫非特异性免疫非特异性免疫指机体抵御细菌感染的能力。指机体抵御细菌感染的能力。特异性免疫特异性免疫先天具有后天获得机体的屏障结构机体的屏障结构吞噬细胞的吞噬功能吞噬细胞的吞噬功能正常组织及体液中的抗菌物质正常组织及体液中的抗菌物质 以抗体作用为中心的体液免疫以抗体作用为中心的体液免疫以以T T细胞及淋巴因子为中心的细胞及淋巴因子为中心的细胞免疫。细胞免疫。病原菌侵入机体后，由于其生物学特性的不同、致病物质的不同。机体对它们的免疫反应也各有差别。一、细菌抗原一、细菌抗原荚膜抗原荚膜抗原核区核区1、胞壁抗原（菌体抗原）、胞壁抗原（
3、菌体抗原）2、菌毛、菌毛抗原抗原鞭毛抗原鞭毛抗原Vi抗原抗原 K抗原抗原3、表面抗原、表面抗原4.细菌毒素细菌毒素 5.细菌保护性抗原细菌保护性抗原二、宿主的非特异性防御二、宿主的非特异性防御1 1、皮肤和粘膜屏障、皮肤和粘膜屏障皮肤与粘膜的阻挡 呼吸道的纤毛颤动 肠道的蠕动 尿液的冲刷清除 2、分泌液中化学物质的局部抗菌作用 汗腺分泌的乳酸、皮脂腺分泌的脂肪酸泪液、唾液、乳汗和呼吸道分泌物中的溶菌酶；胃酸前列腺分泌的精素是精液中的抑菌物3、正常菌群的拮抗作用 4、内部屏障 5、吞噬作用 吞噬细胞 小吞噬细胞：主要是血中的中性粒细胞。大吞噬细胞，包括血液中的单核细胞，各种组织中的巨噬细胞，胞外
4、菌：胞外菌：胞内菌：胞内菌：结核杆菌、麻风杆菌、结核杆菌、麻风杆菌、三、特异性抗菌免疫三、特异性抗菌免疫细菌侵染机体后，由于其生物学特征的不同细菌侵染机体后，由于其生物学特征的不同可分为两类可分为两类葡萄球菌、链球菌、葡萄球菌、链球菌、机体对这两类感染的免疫反应是有差别的。机体对这两类感染的免疫反应是有差别的。1、胞外菌感染的免疫、胞外菌感染的免疫 （1）抗体对细菌繁殖的抑制作用）抗体对细菌繁殖的抑制作用：抗体可阻止细菌对机体抗体可阻止细菌对机体细胞的接触及并形成凝细胞的接触及并形成凝集；但对细菌的活力影集；但对细菌的活力影响微弱。响微弱。如果抗体能抑制细菌的如果抗体能抑制细菌的重要酶系统或代
5、谢途径，重要酶系统或代谢途径，则可能抑制细菌的生长。则可能抑制细菌的生长。（2）抗体对细菌吸附作用的抑制）抗体对细菌吸附作用的抑制：病原菌吸附是感染的先决条件。病原菌吸附是感染的先决条件。粘膜表面的分泌型粘膜表面的分泌型IgAIgA，是局部免疫的主要因素，是局部免疫的主要因素，（3）抗体和补体对细菌的溶解作用）抗体和补体对细菌的溶解作用：（4）抗体对吞噬作用的调理）抗体对吞噬作用的调理：促进吞噬，强化杀菌促进吞噬，强化杀菌2.胞内菌感染的免疫胞内菌感染的免疫（1 1）对胞内感染的防御功能主要靠细胞免疫）对胞内感染的防御功能主要靠细胞免疫 抗体不能进入细胞内，体液免疫对这类细菌感染的作用受到限制
6、。（2 2）例如）例如:机体初次感染结核杆菌，吞噬细胞虽机体初次感染结核杆菌，吞噬细胞虽可吞噬，但不能有效地消化杀灭；细胞免疫建立可吞噬，但不能有效地消化杀灭；细胞免疫建立后，通过各种淋巴因子，激活吞噬细胞，增强其后，通过各种淋巴因子，激活吞噬细胞，增强其吞噬消化能力，抑制病原菌在吞噬细胞内生存。吞噬消化能力，抑制病原菌在吞噬细胞内生存。1、许多病原菌以外毒素致病、许多病原菌以外毒素致病四、机体抗毒素免疫2、抗毒素免疫是一种以体液抗体为主的免疫应答。3、可应用抗毒素血清进行早期治疗与紧急预防 抗细菌感染的结局抗细菌感染的结局 不感染不感染 隐性感染隐性感染inapparent infectio
7、ninapparent infection 当宿主体的抗感染当宿主体的抗感染免疫力较强，或侵入的病菌数量不多、毒力较弱，感免疫力较强，或侵入的病菌数量不多、毒力较弱，感染后对机体损害较轻，不出现或出现不明显的临床症染后对机体损害较轻，不出现或出现不明显的临床症状，或称亚临床感染。状，或称亚临床感染。特点：机体获得足够的特异免疫力；传染源特点：机体获得足够的特异免疫力；传染源 潜伏感染潜伏感染latent infectionlatent infection 当宿主体与致病菌在相当宿主体与致病菌在相互作用过程中暂时处于平衡状态时，病菌潜伏在病灶互作用过程中暂时处于平衡状态时，病菌潜伏在病灶内或某些
8、特殊组织中，一般不出现在血液、分泌物或内或某些特殊组织中，一般不出现在血液、分泌物或排泄物中。一旦机体免疫力下降，则潜伏的致病菌大排泄物中。一旦机体免疫力下降，则潜伏的致病菌大量繁殖，使病复发。量繁殖，使病复发。显性感染显性感染apparent infection(apparent infection(传染病传染病)宿主细胞受到不同程度的损害，生理功能发生宿主细胞受到不同程度的损害，生理功能发生改变，并出现一系列的临床症状和体征改变，并出现一系列的临床症状和体征 毒血症（毒血症（toxemiatoxemia）：）：致病菌侵入宿主体后，只在机体局部生长繁殖，致病菌侵入宿主体后，只在机体局部生长繁
9、殖，病菌不进入血循环，但其产生的外毒素入血病菌不进入血循环，但其产生的外毒素入血。外。外毒素经血到达易感的组织和细胞，引起特殊的毒毒素经血到达易感的组织和细胞，引起特殊的毒性症状。例如白喉、破伤风等。性症状。例如白喉、破伤风等。内毒素血症（内毒素血症（endotoxemiaendotoxemia）:革兰阴性菌革兰阴性菌侵入侵入血流血流，并在其中大量繁殖、崩解，并在其中大量繁殖、崩解后释放出大量后释放出大量内毒素内毒素；也可由病灶内大量革兰阴；也可由病灶内大量革兰阴性菌死亡、释放的性菌死亡、释放的内毒素入血内毒素入血所致。所致。菌血症（菌血症（bacteremia）：）：致病菌由局部侵入血流，致
10、病菌由局部侵入血流，但未在血流中生长繁殖，只是但未在血流中生长繁殖，只是短暂的一过性通过血短暂的一过性通过血循环循环到达体内适宜部位后再进行繁殖而致病。例如到达体内适宜部位后再进行繁殖而致病。例如伤寒早期。伤寒早期。败血症（败血症（septicemia）：）：致病菌致病菌侵入侵入血流血流后，在其后，在其中中大量繁殖大量繁殖并产生毒性产物，引起全身性中毒症状。并产生毒性产物，引起全身性中毒症状。鼠疫耶氏菌、炭疽芽胞杆菌等。鼠疫耶氏菌、炭疽芽胞杆菌等。脓毒血症（脓毒血症（pyemia）：）：化脓性病菌化脓性病菌侵入侵入血流血流后，在后，在其中其中大量繁殖大量繁殖，并通过，并通过血流扩散血流扩散至宿
11、主体的其他组至宿主体的其他组织或器官，产生织或器官，产生新的化脓性病灶新的化脓性病灶。例如金黄色葡萄。例如金黄色葡萄球菌的脓毒血症，常导致多发性肝脓肿、皮下脓肿球菌的脓毒血症，常导致多发性肝脓肿、皮下脓肿和肾脓肿等。和肾脓肿等。机体抗病毒感染免疫应答包括：机体抗病毒感染免疫应答包括：非特异性免疫：非特异性免疫：指特异性免疫产生之前，机体对病毒初次感染的指特异性免疫产生之前，机体对病毒初次感染的 天然抵抗力；主要为单核吞噬细胞、天然抵抗力；主要为单核吞噬细胞、NKNK及及INFINF等等 的作用。的作用。特异性免疫：特异性免疫：指抗体介导以及细胞介导的抗病毒作用。指抗体介导以及细胞介导的抗病毒作
12、用。第二节第二节 病毒的感染免疫病毒的感染免疫一、一、病毒抗原病毒抗原脂蛋白脂蛋白RNA蛋白内膜蛋白内膜棘突蛋白棘突蛋白图图26 流感病毒结构流感病毒结构狂犬病病毒狂犬病病毒腺腺病病毒毒口口蹄蹄疫疫病病毒毒流感病毒流感病毒（viruses）病毒的致病性病毒的致病性（1 1）病毒在敏感宿主细胞内的繁殖，可分为）病毒在敏感宿主细胞内的繁殖，可分为6 6个个 时期分比为：时期分比为：附着期；侵入期；潜伏期；复制期；附着期；侵入期；潜伏期；复制期；成熟期；释放期。成熟期；释放期。（2 2）病毒感染机体有以下几个特性：）病毒感染机体有以下几个特性：a a 引起细胞损伤或破坏；引起细胞损伤或破坏；b b
13、稳定感染；稳定感染；c c 改变细胞膜；改变细胞膜；d d 形成包涵体。形成包涵体。二、病毒的非特异性免疫二、病毒的非特异性免疫1.吞噬细胞吞噬细胞2.NK细胞细胞NK：非特异性杀伤病毒感染的靶细胞非特异性杀伤病毒感染的靶细胞特点：不受特点：不受MHC限制、不依赖限制、不依赖Ab；可通过多种途径活化；可通过多种途径活化；杀伤机制：杀伤机制：NK接触靶接触靶C释放穿孔素、释放穿孔素、TNF破坏受染破坏受染C 3.干扰素干扰素(Interferon,IFN)定义定义：病毒或干扰素诱生剂刺激机体的多种细胞：病毒或干扰素诱生剂刺激机体的多种细胞 (巨噬细胞、淋巴细胞、体细胞等巨噬细胞、淋巴细胞、体细胞
14、等)，产生，产生 的抑制病毒增殖的糖蛋白。的抑制病毒增殖的糖蛋白。分类分类:IFN类型类型主要来源主要来源 特点特点 I型型IFN 人人WBC抑制病毒作抑制病毒作用用III IFN 人成纤维人成纤维C II型型 IFN TC 免疫调节作免疫调节作用用III 作用机理作用机理:诱导合成酶而活化核酸内切酶来降解病毒的诱导合成酶而活化核酸内切酶来降解病毒的mRNA;诱导蛋白激酶的表达，使蛋白质复制的起始因诱导蛋白激酶的表达，使蛋白质复制的起始因子磷酸化失火，抑制蛋白质的合成；子磷酸化失火，抑制蛋白质的合成；间接活化机体的免疫应答能力；间接活化机体的免疫应答能力；IFNIFN作用特点作用特点:产生早；
15、产生早；中断受染细胞的病毒感染，限制病毒扩散；中断受染细胞的病毒感染，限制病毒扩散；IFN诱导的抗病毒蛋白，只对病毒起作用，诱导的抗病毒蛋白，只对病毒起作用，不影响宿主细胞蛋白质合成。不影响宿主细胞蛋白质合成。三、病毒特异性免疫：三、病毒特异性免疫：体液免疫体液免疫：特异性特异性Ab -中和中和Ab、非中和、非中和Ab；-IgM、IgG、IgA；中和中和Ab作用机制作用机制：i.改变病毒表面构型，阻止吸附细胞；改变病毒表面构型，阻止吸附细胞；ii.病毒病毒+中和中和AbIC易被巨噬细胞吞噬、清易被巨噬细胞吞噬、清除；除；iii.包膜病毒包膜病毒+中和中和AbIC激活补体，溶解病激活补体，溶解病
16、毒毒；IgM、IgG、IgA特点比较：特点比较：IgG：MW小，可通过胎盘；小，可通过胎盘；出现较晚，维持时间长；出现较晚，维持时间长；中和能力比中和能力比IgM强；强；IgM：MW大，不能通过胎盘。大，不能通过胎盘。出现最早；出现最早；中和能力不如中和能力不如IgG强，固定补体能力强。强，固定补体能力强。IgA：分泌型：分泌型IgA（SIgA），粘膜固有层浆细胞），粘膜固有层浆细胞 产生，在局部中和病毒，阻止病毒从局部产生，在局部中和病毒，阻止病毒从局部 粘膜侵入，局部免疫起主要作用。粘膜侵入，局部免疫起主要作用。细胞免疫：细胞免疫：1、主要靠、主要靠CTL、致敏、致敏TC释放的多种淋巴因子
17、发挥作用释放的多种淋巴因子发挥作用 CTL作用机制：作用机制：分泌穿孔素（溶分泌穿孔素（溶C素）素）在受感染的靶在受感染的靶C膜上形膜上形 成小孔成小孔/通道通道 C受损。受损。分泌细胞毒素分泌细胞毒素CTL杀伤病毒感染的靶细胞杀伤病毒感染的靶细胞C裂解或凋亡裂解或凋亡 2、细胞内、细胞内RNA干扰是最近干扰是最近发现的具有特异性重要的抗发现的具有特异性重要的抗病毒机制病毒机制四、病毒免疫逃逸和免疫耐受的机制四、病毒免疫逃逸和免疫耐受的机制 1.抗原漂移 2.病毒潜伏 3.分子拟态 4.干扰抗原递呈 5.干扰免疫效应机制的关键过程 6.免疫耐受的形成五病毒性疾病的免疫预防和免疫治疗：五病毒性疾
18、病的免疫预防和免疫治疗：（一）免疫预防：（一）免疫预防：1.人工主动免疫：接种疫苗人工主动免疫：接种疫苗 灭活疫苗、减毒活疫苗、基因工程疫苗、灭活疫苗、减毒活疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗；合成肽疫苗、抗独特型疫苗；核酸疫苗；合成肽疫苗、抗独特型疫苗；2.人工被动免疫：如，免疫血清，胎盘球蛋白，人工被动免疫：如，免疫血清，胎盘球蛋白，转转移因子等。移因子等。（二）药物防治：（二）药物防治：抗病毒治疗原则抗病毒治疗原则：-抑制病毒复制；抑制病毒复制；-增强机体免疫应答能力，促进增强机体免疫应答能力，促进消灭病毒感染的细胞；消灭病毒感染的细胞；抗病毒药作用机理：抗病毒药作用机理：与病毒竞争细胞表面的
19、受体，阻止病毒与病毒竞争细胞表面的受体，阻止病毒的吸附；的吸附；阻碍病毒穿入或脱壳；阻碍病毒穿入或脱壳；阻碍病毒生物合成；阻碍病毒生物合成；增强宿主抗病能力的物质；增强宿主抗病能力的物质；中草药具有清热解毒功效，有抗病毒作中草药具有清热解毒功效，有抗病毒作用；用；如大青叶、板蓝根如大青叶、板蓝根 核苷类药物核苷类药物 无环鸟苷无环鸟苷(ACV)，叠氮胸苷叠氮胸苷(AZT)，碘苷碘苷(IDU，疱疹净，疱疹净)，病毒唑，病毒唑(三氮唑核苷三氮唑核苷)病毒蛋白酶抑制物病毒蛋白酶抑制物 沙喹那韦沙喹那韦(saquinavir)，利托那韦，利托那韦(ritonavir)吲哚那韦吲哚那韦(indinavi
20、r)，奈非那韦，奈非那韦(nelfinavir)IFN、IFN诱生剂、细胞因子、中草药诱生剂、细胞因子、中草药 六、朊病毒 没有DNA、RNA的生命物质，以细胞蛋白质形式存在，且具有很强的传染性。引发多种致死性神经系统疾病。如：疯牛病、老年痴呆病、克-雅氏病、库鲁病、致死性家族失眠症。体液免疫有效 细胞免疫效果很差-机体对朊病毒的耐受性。关键：打破免疫细胞对朊病毒的耐受性。第三节第三节 真菌的感染免疫真菌的感染免疫1.真菌的形态和构造真菌的形态和构造2.真菌的致病性真菌的致病性 真菌引起的疾病大多数是慢性病；按其侵害部位不真菌引起的疾病大多数是慢性病；按其侵害部位不 同，可分为浅部侵害性真菌与
21、深部侵害性真菌两类。同，可分为浅部侵害性真菌与深部侵害性真菌两类。（1）浅部真菌：浅部真菌：侵害人体的皮肤、毛发、指甲，引侵害人体的皮肤、毛发、指甲，引 起癣病，如皮肤丝状菌。起癣病，如皮肤丝状菌。（2）深部真菌：深部真菌：侵害组织及内脏。大多数引起慢性侵害组织及内脏。大多数引起慢性 肉芽肿性炎症和组织坏死，如隐球菌、念珠菌。肉芽肿性炎症和组织坏死，如隐球菌、念珠菌。3.真菌的免疫性真菌的免疫性 第四节 低等生物 血吸虫、疟原虫 和其他寄生虫的感染免疫 1 1、皮肤、粘膜和胎盘的屏障作用、皮肤、粘膜和胎盘的屏障作用 2 2、吞噬细胞的吞噬作用、吞噬细胞的吞噬作用 一方面表现为对寄生虫的吞噬、消
22、化、杀伤作用；另一方面在处理寄生虫抗原过程中参与特异性免疫的致敏。3 3、体液因素对寄生虫的杀伤作用、体液因素对寄生虫的杀伤作用 例如：补体系统活化后，可参与机体的防御功能；人体血清中高密度脂蛋白(HDL)对虫有毒性作用。一、先天性免疫一、先天性免疫先天性免疫包括有：先天性免疫包括有：二、获得性免疫二、获得性免疫 寄生虫侵入宿主后，抗原物质刺激宿主免疫系统，常出现免疫应答，产生获得性免疫，对寄生虫可发挥清除或杀伤效应，对同种寄生虫的再感染也具有一定抵抗力。1、寄生虫的抗原、寄生虫的抗原 （1）寄生虫抗原的特点）寄生虫抗原的特点 复杂性、多样性：多数寄生虫是多细胞结构的个体，且都有一个复杂的生活
23、史，因此寄生虫抗原比较复杂，种类繁多；就来源而言(来自虫体、虫体表膜、虫体排泄分泌物或虫体蜕皮液、囊液等)可概括为体抗原和代谢抗原。具有属、种、株、期的特异：寄生虫不同发育阶段既具有共同抗原，又具有各发育阶段的特异性抗原，即期特异性抗原。（2）寄生虫的循环抗原）寄生虫的循环抗原CAg 是指生活虫体排放到宿主体液内的大分子微粒，主要是排泄分泌物或脱落物中，具有抗原特性，能被血清学试验所检出。一般认为检测CAg能提示有活虫存在。2、免疫应答、免疫应答（1）体液免疫体液免疫：寄生虫感染早期，血中IgM水平上升，随着时间的延长IgG上升。在蠕虫感染，一般IgE水平升高，肠道寄生虫感染则分泌IgA上升。
24、抗体可单独作用于寄生虫，使其丧失侵入细胞的能力。有的抗体，在补体参与下，通过经典途径激活补体系统，使寄生虫溶解。抗体还可结合寄生虫表面抗原，介导吞噬。（2）细胞免疫）细胞免疫：是淋巴细胞和巨噬细胞或其他炎症细胞介导的免疫效应，当致敏T细胞再次接触相应抗原后，释放多种淋巴因子；例如：巨噬细胞趋化因子(MCF)，巨噬细胞活化因子(MAF)，。（3）体液和细胞协同作用）体液和细胞协同作用：ADCC对寄生虫的作用需要特异性抗体如IgG或IgE；通过协同作用发挥对虫体的杀伤作用。在组织、血管或淋巴系统寄生的蠕虫中，ADCC可能是宿主杀伤蠕虫(如血吸虫童虫、微丝蚴)的重要效应机制。疟原虫寄生于人体红细胞和
25、肝细胞疟原虫寄生于人体红细胞和肝细胞 中，可引起疟疾中，可引起疟疾(malaria)(malaria)。疟原虫感染疟原虫感染血吸虫血吸虫感染感染v 血吸虫病是指血吸虫寄生在静脉系统引起的疾病血吸虫病是指血吸虫寄生在静脉系统引起的疾病v 血吸虫病是一种免疫性疾病血吸虫病是一种免疫性疾病v 宿主感染血吸虫后一般发生宿主感染血吸虫后一般发生两类免疫反应两类免疫反应 一是对沉着于组织中的虫卵的反应一是对沉着于组织中的虫卵的反应 另一是对幼虫或成虫诱导的感染具有保护性的抵抗反另一是对幼虫或成虫诱导的感染具有保护性的抵抗反应应 血吸虫病（大肚子病）血吸虫病（大肚子病）血吸虫血吸虫 疫苗的本质是利用疫苗（包
26、括减毒的或杀疫苗的本质是利用疫苗（包括减毒的或杀死的病原物，甚至抗原表位的肽段）的免疫原死的病原物，甚至抗原表位的肽段）的免疫原性刺激机体的免疫系统产生抗体或激活免疫细性刺激机体的免疫系统产生抗体或激活免疫细胞以抵御强毒性的病原物的侵袭。胞以抵御强毒性的病原物的侵袭。第五节第五节 预防性疫苗预防性疫苗一、常规疫苗一、常规疫苗1.活疫苗活疫苗 活疫苗活疫苗是指人工定向变异或从自然界筛选获得毒是指人工定向变异或从自然界筛选获得毒力减弱或基本无毒的病原微生物制成的预防制品，又力减弱或基本无毒的病原微生物制成的预防制品，又称为称为减毒疫苗减毒疫苗。常用的活疫苗有卡介苗、麻疹疫苗、脊髓灰质炎常用的活疫苗
27、有卡介苗、麻疹疫苗、脊髓灰质炎疫苗。疫苗。优点：免疫效果持久、可靠。优点：免疫效果持久、可靠。2.死疫苗死疫苗 用物理或化学方法将标准微生物株杀死或灭活而用物理或化学方法将标准微生物株杀死或灭活而制成的预防制剂称为制成的预防制剂称为死疫苗死疫苗。常用的死疫苗有伤寒、霍乱、乙型脑炎等。常用的死疫苗有伤寒、霍乱、乙型脑炎等。优点：安全，易于保存。优点：安全，易于保存。3.多联多价疫苗多联多价疫苗 将多种疫苗混合在一起，成为多联多价疫苗。将多种疫苗混合在一起，成为多联多价疫苗。例如：百日咳死疫苗、白喉类毒素、破伤风类例如：百日咳死疫苗、白喉类毒素、破伤风类毒素三联制剂，麻疹、腮腺炎、风疹、脊髓灰质炎
28、毒素三联制剂，麻疹、腮腺炎、风疹、脊髓灰质炎四联制剂。四联制剂。优点：节省人力、物力和时间优点：节省人力、物力和时间1.重组活疫苗的理论基础重组活疫苗的理论基础 将外源目的基因插入已有的病毒或细菌疫苗将外源目的基因插入已有的病毒或细菌疫苗株株DNA的某些部位，使之高效表达但不影响该疫的某些部位，使之高效表达但不影响该疫苗株的生存与繁殖。基因工程活疫苗包括苗株的生存与繁殖。基因工程活疫苗包括基因缺基因缺失疫苗失疫苗和和载体疫苗载体疫苗两类。两类。二、重组活疫苗二、重组活疫苗制备基因工程疫苗的基本程序，大致包括以下五个步骤：制备基因工程疫苗的基本程序，大致包括以下五个步骤：第一步是分离目的基因；第
29、一步是分离目的基因；第二步是将第二步是将DNA片断和载体在体外连接重组，成为重组片断和载体在体外连接重组，成为重组 DNA分子；分子；第三步是基因克隆；第三步是基因克隆；第四步是目的基因克隆的筛选与鉴定；第四步是目的基因克隆的筛选与鉴定；第五步是基因表达、第五步是基因表达、构建疫苗病毒活疫苗，要求下列必须条件：构建疫苗病毒活疫苗，要求下列必须条件：外源基因是连续的；外源基因是连续的；外源基因必须在痘苗病毒基因组的外源基因必须在痘苗病毒基因组的“安全安全”位点处插入；位点处插入；必须在上述安全位点的基因片段内组建表达载体；必须在上述安全位点的基因片段内组建表达载体；具有细胞内同源重组的适宜条件；
30、具有细胞内同源重组的适宜条件；必须有一种简便易行的重组痘苗的选择方法；必须有一种简便易行的重组痘苗的选择方法；插入外源基因的容量在插入外源基因的容量在2540kb。2.重组活疫苗的应用重组活疫苗的应用 目前应用痘苗病毒表达的活疫苗有：异型肝炎表目前应用痘苗病毒表达的活疫苗有：异型肝炎表面抗原重组痘苗病毒活疫苗，狂犬病毒糖蛋白重组痘面抗原重组痘苗病毒活疫苗，狂犬病毒糖蛋白重组痘苗病毒活疫苗，疟原虫孢子表面抗原重组痘苗病毒活苗病毒活疫苗，疟原虫孢子表面抗原重组痘苗病毒活疫苗。疫苗。优点：能够表达多种不同的抗原。优点：能够表达多种不同的抗原。体液免疫和细胞免疫都是针对病原体特定区域的体液免疫和细胞免
31、疫都是针对病原体特定区域的识别和反应，因而疫苗设计可根据病原体的亚单位，识别和反应，因而疫苗设计可根据病原体的亚单位，尤其是抗原表位，设计相应的天然或合成的免疫活性尤其是抗原表位，设计相应的天然或合成的免疫活性多肽。多肽。生产免疫活性多肽有两种主要方法：生产免疫活性多肽有两种主要方法：1.基因工程表达活性多肽基因工程表达活性多肽2.化学合成多肽化学合成多肽三、多肽疫苗三、多肽疫苗优点：安全稳定，易于大量生产，针对性强。优点：安全稳定，易于大量生产，针对性强。缺点：所含抗原表位少，免疫原性差。缺点：所含抗原表位少，免疫原性差。为弥补缺陷可采取以下措施：为弥补缺陷可采取以下措施：设计多肽疫苗时必须
32、考虑到设计多肽疫苗时必须考虑到T细胞表位；细胞表位；充分重视载体的作用；充分重视载体的作用；将多肽人工组合成较大颗粒；将多肽人工组合成较大颗粒；利用淋巴因子达到增强免疫的目的。利用淋巴因子达到增强免疫的目的。肽库肽库：应用化学合成的方法，将：应用化学合成的方法，将2020种氨基酸随机组合成种氨基酸随机组合成5 5肽或肽或6 6肽的短肽文库。肽的短肽文库。1.DNA疫苗的发现疫苗的发现2.基因免疫的机制基因免疫的机制 DNA疫苗的实质是基因免疫。基因免疫的主要原理疫苗的实质是基因免疫。基因免疫的主要原理是将抗原编码基因插入带有强启动子的质粒载体，然后是将抗原编码基因插入带有强启动子的质粒载体，然
33、后用物理方法将重组质粒导入体内细胞，抗原编码基因即用物理方法将重组质粒导入体内细胞，抗原编码基因即在细胞内报导合成抗原蛋白，诱发机体产生保护性免疫在细胞内报导合成抗原蛋白，诱发机体产生保护性免疫反应。反应。3.操作方式操作方式DNA疫苗的组成：编码基因疫苗的组成：编码基因 载体载体接种方式：直接接种，基因枪接种方式：直接接种，基因枪四、四、DNA疫苗疫苗4.影响基因转染和表达的因素影响基因转染和表达的因素 年龄：年轻的年龄：年轻的 年老的年老的 性别：雄性的性别：雄性的 雌性的雌性的 DNA剂量及保存液对表达的影响：以实验动物种剂量及保存液对表达的影响：以实验动物种 类而异。类而异。表达载体的选择表达载体的选择 不同组织细胞对不同组织细胞对DNA表达表达的影响：肌肉组织的影响：肌肉组织 其他组织其他组织 接种途径接种途径6.基因免疫的特点基因免疫的特点7.免疫效果的评价免疫效果的评价8.DNA疫苗的优点疫苗的优点9.存在问题存在问题10.应用前景应用前景
