1、疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移1 前前 言言 白血病和肿瘤细胞骨髓转移的诊断主要靠骨髓白血病和肿瘤细胞骨髓转移的诊断主要靠骨髓细胞病理学诊断。骨髓细胞病理学诊断的方法细胞病理学诊断。骨髓细胞病理学诊断的方法主要有细胞形态学、细胞化学染色、免疫细胞主要有细胞形态学、细胞化学染色、免疫细胞化学染色、化学染色、细胞遗传学以及分子生物学。根据细胞遗传学以及分子生物学。根据文献报道，根据细胞形态对白血病进行分型的文献报道，根据细胞形态对白血病进行分型的准确性是准确性是64%77%。细胞形态学和细胞化学。细胞形态学和细胞化学结合可使准确性达结合可使准确性达86%2，但对于，但对于AML-
2、M0、M7、M5a、MAL 鉴定有一定的困难。而免疫鉴定有一定的困难。而免疫细胞化学染色在一定程度上可以解决此类问题。细胞化学染色在一定程度上可以解决此类问题。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移2 骨髓转移性癌（骨髓转移性癌（BMT）原发于非造血组织的恶性肿）原发于非造血组织的恶性肿瘤转移至骨髓的总称，骨髓不仅是造血组织恶性肿瘤瘤转移至骨髓的总称，骨髓不仅是造血组织恶性肿瘤的好发部位，同时又是其它恶性肿瘤常转移的部位。的好发部位，同时又是其它恶性肿瘤常转移的部位。肿瘤经血行或淋巴管转移到骨髓，有的能找到原发灶，肿瘤经血行或淋巴管转移到骨髓，有的能找到原发灶，而有的找不到原发灶，这
3、就需要在骨髓内直接鉴定肿而有的找不到原发灶，这就需要在骨髓内直接鉴定肿瘤细胞。转移到骨髓内的癌细胞同血液系统的恶性肿瘤细胞。转移到骨髓内的癌细胞同血液系统的恶性肿瘤细胞及转移癌细胞之间，在形态上有一定的区别，瘤细胞及转移癌细胞之间，在形态上有一定的区别，而对于分化较差的癌细胞其形态较难辨认，易同急性而对于分化较差的癌细胞其形态较难辨认，易同急性淋巴细胞性白血病、淋巴瘤细胞以及其它的肿瘤细胞淋巴细胞性白血病、淋巴瘤细胞以及其它的肿瘤细胞如神经母细胞瘤、肾上腺母细胞瘤等相混淆不易鉴别。如神经母细胞瘤、肾上腺母细胞瘤等相混淆不易鉴别。转移到骨髓中的肿瘤细胞无组织结构特点，加之肿瘤转移到骨髓中的肿瘤细
4、胞无组织结构特点，加之肿瘤细胞化学染色缺乏一定的特异性，使转移性肿瘤细胞细胞化学染色缺乏一定的特异性，使转移性肿瘤细胞的鉴定具有一定的困难，也需要用免疫细胞化学染色的鉴定具有一定的困难，也需要用免疫细胞化学染色来解决。来解决。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移3l 免疫细胞化学或称免疫组织化学是指用免免疫细胞化学或称免疫组织化学是指用免疫学原理，通过特异的抗原、抗体反应标记上疫学原理，通过特异的抗原、抗体反应标记上可见的显示物系统来检查细胞及组织上原位抗可见的显示物系统来检查细胞及组织上原位抗原或抗体成份的方法。此法可以识别定位各种原或抗体成份的方法。此法可以识别定位各种细胞组织
5、成份。如蛋白质、多肽、核酸、部分细胞组织成份。如蛋白质、多肽、核酸、部分类酯、多糖、肿瘤的标记物等。在光学显微镜、类酯、多糖、肿瘤的标记物等。在光学显微镜、荧光显微镜下观察其特定定位。荧光显微镜下观察其特定定位。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移4（一）白血病免疫分型一）白血病免疫分型 各种血细胞来源于多能干细胞，经过分化各种血细胞来源于多能干细胞，经过分化发育而成为成熟的血细胞。这些血细胞在分化发育而成为成熟的血细胞。这些血细胞在分化发育过程中，在其表面出现不同阶段的特异性发育过程中，在其表面出现不同阶段的特异性分化抗原，利用各种特异性单克隆抗体和酶联分化抗原，利用各种特异性单
6、克隆抗体和酶联免疫方法测定这些抗原，从而精确测定细胞类免疫方法测定这些抗原，从而精确测定细胞类型及不同的分化阶段。白血病细胞具有与其对型及不同的分化阶段。白血病细胞具有与其对应的分化抗原应的分化抗原,因此利用分化抗原可对白血病进因此利用分化抗原可对白血病进行免疫学分型。行免疫学分型。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移5（二）肿瘤细胞鉴定（二）肿瘤细胞鉴定 肿瘤是由正常细胞恶变所致，故细肿瘤是由正常细胞恶变所致，故细胞膜表面、细胞质内和细胞核内可能存胞膜表面、细胞质内和细胞核内可能存在着与正常相比在质或量上明显异常的在着与正常相比在质或量上明显异常的物质，这些物质可以成为抗原，因而
7、可物质，这些物质可以成为抗原，因而可以用特异性抗体通过免疫细胞化学染色以用特异性抗体通过免疫细胞化学染色检测。由于来源于不同组织的肿瘤细胞检测。由于来源于不同组织的肿瘤细胞因为其所含的蛋白质和酶的不同，利用因为其所含的蛋白质和酶的不同，利用针对这些蛋白质和酶的各种特异性单克针对这些蛋白质和酶的各种特异性单克隆抗体对肿瘤细胞种类鉴别。隆抗体对肿瘤细胞种类鉴别。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移6（一）仪器法：流式细胞仪、自动免疫染色仪（二）手工法（玻片法）1 根据二抗标记物不同：碱性磷酸酶法、辣根过氧化物酶法、荧光法、抗生物素 -生物素法等。2 根据实验原理：二步法、三步法等。疫细
8、胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移7 将一抗滴加在玻片上，如果被标记的细胞将一抗滴加在玻片上，如果被标记的细胞含有特异性抗原，则一抗抗体被结合，在洗涤含有特异性抗原，则一抗抗体被结合，在洗涤过程中不被洗掉，再加入二抗酶聚合物与一抗过程中不被洗掉，再加入二抗酶聚合物与一抗结合。加入底物后，在酶的催化下细胞显棕黄结合。加入底物后，在酶的催化下细胞显棕黄色。如果细胞不含特异性抗原，就不能与一抗色。如果细胞不含特异性抗原，就不能与一抗结合，一抗就被洗掉，整个反应就不能进行，结合，一抗就被洗掉，整个反应就不能进行，细胞不显棕黄色。细胞不显棕黄色。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移
9、8 疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移91.选择厚薄均匀的骨髓涂片选择厚薄均匀的骨髓涂片56张，根据需张，根据需要用免疫组化圈笔在涂片上画直径要用免疫组化圈笔在涂片上画直径1.5cm左右的圆圈数个。然后将玻片置于左右的圆圈数个。然后将玻片置于95%酒酒精溶液中固定精溶液中固定510分钟或分钟或4丙酮丙酮10分钟。分钟。2.取出玻片用流水冲洗，再用取出玻片用流水冲洗，再用PBS缓冲液冲缓冲液冲洗，滴加洗，滴加3%H2O250l，阻断内源性过氧，阻断内源性过氧化物酶，室温孵育化物酶，室温孵育10分钟。分钟。3.PBS冲洗，冲洗，5分钟分钟3。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨
10、髓转移104.滴加非免疫动物血清滴加非免疫动物血清50l，室温孵育，室温孵育10 分钟。分钟。5.根据形态学初检选择需要标记的第一抗根据形态学初检选择需要标记的第一抗体滴在圆圈内并做好记号，然后将玻片体滴在圆圈内并做好记号，然后将玻片置于湿盒内室温下置于湿盒内室温下1.5小时或小时或4 过夜。过夜。6.PBS冲洗，冲洗，5分钟分钟3疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移117.每个圆圈内滴加二抗与辣根过氧化物酶聚每个圆圈内滴加二抗与辣根过氧化物酶聚合物，置于湿盒内室温下合物，置于湿盒内室温下0.5小时。小时。8.取出玻片用取出玻片用PBS缓冲液洗缓冲液洗5分钟分钟3。在每。在每个圆圈
11、内滴加个圆圈内滴加DAB显色液，置于湿盒内室显色液，置于湿盒内室温下温下5-15分钟。分钟。9.取出玻片用取出玻片用PBS缓冲液冲洗，再用苏木精复缓冲液冲洗，再用苏木精复染染3分钟，流水冲洗晾干。分钟，流水冲洗晾干。10.在显微镜油镜下观察所要标记的细胞。在显微镜油镜下观察所要标记的细胞。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移12 细胞膜、细胞浆或细胞核上出现棕细胞膜、细胞浆或细胞核上出现棕黄色或棕黄色颗粒则为阳性，说明此细黄色或棕黄色颗粒则为阳性，说明此细胞含有针对所标记的单克隆抗体的抗原，胞含有针对所标记的单克隆抗体的抗原，如果不显棕黄色或棕黄色颗粒则为阴性。如果不显棕黄色或棕黄
12、色颗粒则为阴性。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移131.标本应新鲜，彻底干燥后方能检测。通常标本应新鲜，彻底干燥后方能检测。通常放置放置24小时后检测小时后检测,但标本采集后应在但标本采集后应在3-4天天内测定完毕。若标本采集后不能及时测定，内测定完毕。若标本采集后不能及时测定，勿预先固定和冰箱内保存。勿预先固定和冰箱内保存。2.滴加单克隆一抗时，格外小心避免混淆。滴加单克隆一抗时，格外小心避免混淆。3.滴加二抗、显色剂时无需分开。滴加二抗、显色剂时无需分开。4.整个检测过程中自固定后标本均应保持湿整个检测过程中自固定后标本均应保持湿润，不能干燥，直至复染后方能使其干燥。润，不
13、能干燥，直至复染后方能使其干燥。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移14（一）白血病免疫分型常用单克隆抗体（一）白血病免疫分型常用单克隆抗体T林巴细胞：林巴细胞：CD2 CD3 CD5 CD7 CD8 CDl TCR-TCR-B林巴细胞：林巴细胞：CD10 CD19 CD20 CD24 CD22 CD79 CyIgM 髓髓 系系 细细 胞：胞：MPO CD13 CD14 CD15 CD64 CD65 CD68 CD118 血型糖蛋白血型糖蛋白A巨核细胞巨核细胞：PPO CD41 CD42 CD61 HLA-DR非系列特异性非系列特异性：TdT HLA-DR CD34疫细胞化学染色在
14、白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移15分值 B系 T系 髓系 2 CD79 CD3 MPO CyCD22 TCR-Cy IgM TCR-1 CD19 CD2 CD117 CD20 CD5 CD13 CD10 CD8 CD33 CD10 CD65 0.5 CD14 CD24 CD7 CD15 CDla CD64 疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移16(二二)根据白血病免疫学积分系统，将根据白血病免疫学积分系统，将AL分为四型分为四型1.急性未分化型白血病（急性未分化型白血病（AUL）髓系和髓系和T或或B系抗原积分均系抗原积分均2。2.急性混合细胞白血病急性混合细胞白血病 有三种类型：
15、双表型、双克隆型和双有三种类型：双表型、双克隆型和双 系列型。髓系和系列型。髓系和 B或或T淋巴系积分均淋巴系积分均2。3.伴有髓系抗原表达的伴有髓系抗原表达的ALL（My+ALL）T或或B淋巴系积分淋巴系积分2同时粒同时粒-单系抗原表达，但积分单系抗原表达，但积分2。伴有淋巴系抗原表达的伴有淋巴系抗原表达的AML（Ly+AML)髓系积分髓系积分2同时淋巴系抗原表达，但积分同时淋巴系抗原表达，但积分2。4.单表型单表型 表达淋巴系（表达淋巴系（T或或B）者髓系积分为）者髓系积分为0，表达髓系者淋巴，表达髓系者淋巴 系积分为系积分为0 5。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移17(三
16、三)急性髓细胞白血病微分化型急性髓细胞白血病微分化型(M0)特点及免疫特点及免疫 表型表型特点特点:M0为形态学不能分型为形态学不能分型;常规细胞化学常规细胞化学 染色阴染色阴 性性;无无Auer小体。小体。免疫表型：髓系分化抗原免疫表型：髓系分化抗原CD13、CD33、CD14、CD15、CD11b中至少有一种阳性。不表达中至少有一种阳性。不表达B系特异性抗原（系特异性抗原（CD10、CD19、CD22、CD24）和）和T系特异性抗原（系特异性抗原（CD2、CD3、CD5）。）。可表达无系列特异性未成熟标志可表达无系列特异性未成熟标志CD34、TdT、HLA-DR。疫细胞化学染色在白血病免疫
17、分型和肿瘤细胞骨髓转移181.Cytokertin(Pan)细胞角蛋白（广谱）：广谱细胞角蛋细胞角蛋白（广谱）：广谱细胞角蛋白白CK（AE1/AE3）主要标记角化上皮、复层鳞状上皮、）主要标记角化上皮、复层鳞状上皮、复层上皮、增生的角化细胞和单层上皮，用于鳞癌、复层上皮、增生的角化细胞和单层上皮，用于鳞癌、各种腺癌、移行细胞癌、小细胞癌等。各种腺癌、移行细胞癌、小细胞癌等。2.Cytokeratin(High MW)细胞角蛋白（高分子量）：简细胞角蛋白（高分子量）：简称称CK高分子。细胞角蛋白高分子。细胞角蛋白34E12为高分子量的细胞角为高分子量的细胞角蛋白，主要用于鳞癌的诊断。蛋白，主要用
18、于鳞癌的诊断。3.Cytokeratin(low MW)细胞角蛋白（低分量）：简称细胞角蛋白（低分量）：简称CK低分子。细胞角蛋白低分子。细胞角蛋白35H11为低分子量的细胞角为低分子量的细胞角蛋白，主要用于腺癌的诊断。蛋白，主要用于腺癌的诊断。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移194.CD45（LCA）白细胞共同抗原：）白细胞共同抗原：CD45（LCA）是造血）是造血细胞的特异性标记，主要分布在细胞的特异性标记，主要分布在T、B细胞、单核细胞、细胞、单核细胞、粒细胞和前体细胞表面，一般不存在于非造血组织中，粒细胞和前体细胞表面，一般不存在于非造血组织中，是区别淋巴瘤、白血病和非
19、造血组织肿瘤的一个良好标是区别淋巴瘤、白血病和非造血组织肿瘤的一个良好标记物。记物。5.Vimentin 波形蛋白：波形蛋白：波形蛋白主要分布于间叶细胞及其波形蛋白主要分布于间叶细胞及其起源的肿瘤组织。上皮细胞及其肿瘤一般不含此蛋白，起源的肿瘤组织。上皮细胞及其肿瘤一般不含此蛋白，主要用于间叶来源的恶性肿瘤等诊断。主要用于间叶来源的恶性肿瘤等诊断。6.CD3：T细胞分化抗原，对早期细胞分化抗原，对早期T细胞有较高的特异性，细胞有较高的特异性，对对B细胞不表达，主要用于细胞不表达，主要用于T细胞淋巴瘤。细胞淋巴瘤。7.CD7：在绝大多数成熟与不成熟在绝大多数成熟与不成熟T细胞和细胞和T细胞白血病
20、中细胞白血病中表达。表达。8.CD19：表达于前表达于前B细胞和成熟的细胞和成熟的B细胞膜表面，主要用细胞膜表面，主要用于标记正常于标记正常B细胞及肿瘤性细胞及肿瘤性B细胞。细胞。9.CD20：主要分布在主要分布在B细胞、前细胞、前B细胞后期和浆细胞之前细胞后期和浆细胞之前的的B细胞，一般不与细胞，一般不与T细胞呈交叉反应，在恶性淋巴瘤尤细胞呈交叉反应，在恶性淋巴瘤尤其是其是T或或B细胞淋巴瘤的分类上，细胞淋巴瘤的分类上，CD20是最常用的是最常用的B细胞细胞标记。标记。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移2010.神经元特异性烯醇化酶神经元特异性烯醇化酶(NSE)主要分布于神经元
21、和一些神经内分泌细主要分布于神经元和一些神经内分泌细胞中胞中,用于神经内分泌肿瘤的辅助诊断。用于神经内分泌肿瘤的辅助诊断。11.S-100 Protein 用于室管膜瘤、神经母细胞瘤、神经鞘用于室管膜瘤、神经母细胞瘤、神经鞘瘤等的诊断与鉴别诊断。瘤等的诊断与鉴别诊断。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移21l李晓燕，女，李晓燕，女，2929岁岁l住院号：住院号：159299159299l肺科肺科3 3床床l20042004年年9 9月月1515日骨髓片日骨髓片疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移22疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移23疫细胞化学染色在白血
22、病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移24l崔单雨，女，崔单雨，女，9 9岁岁l住院号：住院号：144061144061l小儿科小儿科1515床床l20042004年年4 4月月5 5日骨髓片日骨髓片疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移25疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移26疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移27l杨飞祥，男，杨飞祥，男，2 2岁岁l住院号：住院号：158737158737l小儿科小儿科1313床床l20042004年年9 9月月4 4日骨髓片日骨髓片疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移28肾上腺母细胞瘤?神经母细胞瘤？神经母细胞瘤？
23、神经母细胞瘤？神经母细胞瘤？CD45疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移29l史夕琴，女，史夕琴，女，3030岁岁l住院号：住院号：161136161136l血液科血液科8 8床床l20042004年年1010月月6 6日骨髓片日骨髓片疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移30疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移31疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移32l邵乐，男，邵乐，男，6 6岁岁l住院号：住院号：160462160462l小儿科小儿科1919床床l20042004年年9 9月月2121日骨髓片日骨髓片疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞
24、骨髓转移33疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移34l韩茂芬，女，韩茂芬，女，5757岁岁l住院号：住院号：165004165004l感染科感染科2727床床l20042004年年1010月月6 6日骨髓片日骨髓片疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移35CD7疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移36疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移37l攀胜甫，男，攀胜甫，男，4242岁岁l住院号：住院号：166298166298l消化科消化科4 4床床l20042004年年1111月月2727日骨髓片日骨髓片疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移3
25、8疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移39疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移40疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移41l杨雨甜，女，杨雨甜，女，1 1岁岁3 3个月个月l住院号：住院号：167108167108l小儿科小儿科1313床床l20042004年年1111月月2929日骨髓片日骨髓片疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移42疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移43疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移44 表表1 FAB分型分型25例例AML中，形态学和免疫组化中，形态学和免疫组化均符合髓系白血病均符合髓系白血病
26、16例（占例（占64%）；）；4例（例（16%）既有）既有髓系又有髓系又有T系抗原表达；系抗原表达；5例（例（20%）既有髓系又有）既有髓系又有B系抗原表达，与文献系抗原表达，与文献3报道较一致。表报道较一致。表1显示，髓系抗显示，髓系抗原原CD13和和CD33，在，在AML中表达较高（分别为中表达较高（分别为80%和和76）。）。表表1 25例例AML CD抗原阳性表达情况抗原阳性表达情况 疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移45 表表2 11例例ALL患者患者8种种CD抗原表达显抗原表达显示，淋系抗原（示，淋系抗原（CD3，CD7，CD19，CD20）在）在 ALL呈高表达，而
27、髓系抗原呈高表达，而髓系抗原（CD13 CD14 CD33）表达率低，其中有）表达率低，其中有2例既表达淋系又表达髓系抗原。例既表达淋系又表达髓系抗原。表表2 11例例ALL CD抗原阳性表达情况抗原阳性表达情况 疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移46 表表3 3例例FAB难分型的白血病，难分型的白血病，2例例髓系表达并且髓系表达并且CD14阳性确诊为阳性确诊为M5b，一，一例既有例既有T系表系表 达又有髓系表达，确诊为达又有髓系表达，确诊为M+ALL（急性淋巴细胞性白血病髓系表（急性淋巴细胞性白血病髓系表达）。达）。表表3 3例例FAB不能定型的不能定型的CD抗原阳性表达情况抗
28、原阳性表达情况%疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移47 表表4 10例肿瘤细胞例肿瘤细胞BM转移，其中转移，其中 5例癌细胞例癌细胞BM转移，转移，4例例CK低分子阳性，确诊为腺癌。低分子阳性，确诊为腺癌。1例例CK高分子阳性确诊为鳞癌。高分子阳性确诊为鳞癌。4例似诊为淋巴瘤例似诊为淋巴瘤BM浸润？恶性组织细胞病（恶组）待排，浸润？恶性组织细胞病（恶组）待排，2例例T系表达，系表达，2例例B系表达，确诊为淋巴瘤系表达，确诊为淋巴瘤BM浸润。浸润。1例形态上难以确定是癌还是瘤的，因例形态上难以确定是癌还是瘤的，因CK低分子低分子阳性，确诊为腺癌细胞。阳性，确诊为腺癌细胞。表表4 1
29、0例肿瘤细胞例肿瘤细胞BM转移转移CD和和CK阳性表达情况阳性表达情况 疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移48lFAB对急性白血病分型，可将大部分白血病分型，对急性白血病分型，可将大部分白血病分型，仍有小部分很难定型，尤其是仍有小部分很难定型，尤其是POX染色阴性染色阴性M0、M5a、L2及及MAL。由于白血病细胞形态多变性及。由于白血病细胞形态多变性及形态学的主观性，加上有些化学染色由于试剂质量形态学的主观性，加上有些化学染色由于试剂质量方法等因素也缺乏一定特异性，所以有小部分急方法等因素也缺乏一定特异性，所以有小部分急性白血病根据形态及化学染色很难定型，特别是性白血病根据形态
30、及化学染色很难定型，特别是M0只能用免疫组化定型。表只能用免疫组化定型。表3 3例例FAB难以定型白难以定型白血病，其中血病，其中1例形态上象例形态上象M5b，细胞核明显扭曲折，细胞核明显扭曲折叠，染色质细致，浆量丰富。叠，染色质细致，浆量丰富。M5bPOX染色阳性率染色阳性率3%，但其，但其POX染色染色100%阴性，阴性，PAS染色呈细小染色呈细小颗粒弱阳性，非特异性脂酶染色阴性，而颗粒弱阳性，非特异性脂酶染色阴性，而M5b应该应该是阳性。所以此例病例是是阳性。所以此例病例是M5b？还是？还是L2？很难定型。？很难定型。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移49l但其免疫组化显示
31、但其免疫组化显示CD14、CD33、CD13阳性，阳性，不表达淋系抗原。所以此病例确诊为不表达淋系抗原。所以此病例确诊为M5b。其。其它两例也同此例类似。由于它两例也同此例类似。由于CD单抗直接测定细单抗直接测定细胞的分化抗原，且特异性强，所以可以弥补胞的分化抗原，且特异性强，所以可以弥补FAB分型的不足。分型的不足。l表表1和表和表2 25例例AML和和11例例ALL免疫表型结果分免疫表型结果分析可以看出，急性白血病免疫分型与析可以看出，急性白血病免疫分型与FAB形态形态学分型有较好的一致性。学分型有较好的一致性。AML免疫分型与形态免疫分型与形态学分型完全符合者（单纯表达髓系抗原）占学分型
32、完全符合者（单纯表达髓系抗原）占64%，ALL免疫分型与形态学分型完全符合者免疫分型与形态学分型完全符合者（单纯表达淋系抗原）占（单纯表达淋系抗原）占81%，与文献报道，与文献报道4基基本一致。约本一致。约36%AML表达淋系抗原（表达淋系抗原（Ly+M）和和18%ALL表达髓系抗原表达髓系抗原(M+ALL)。这是因为。这是因为正常造血干细胞存在髓系和淋系抗原在其分化正常造血干细胞存在髓系和淋系抗原在其分化过程中逐渐形成系列专一抗原表达，而白血病过程中逐渐形成系列专一抗原表达，而白血病细胞不能遵循正常造血干细胞的发育细胞不能遵循正常造血干细胞的发育分化规分化规律。律。疫细胞化学染色在白血病免疫
33、分型和肿瘤细胞骨髓转移50l因而出现抗原表达的紊乱，表现出免疫标志的因而出现抗原表达的紊乱，表现出免疫标志的异质性异质性4。Ly+AML和和ly-AML及及M+ALL和和M-ALL患者在对化疗的反应，预后等方面有很大患者在对化疗的反应，预后等方面有很大差别。根据文献报道差别。根据文献报道Ly+AML患者较之患者较之ly-AML患者对化疗反应差，预后不佳，但患者对化疗反应差，预后不佳，但M+ALL则无则无此特征此特征4，因此免疫分型可为临床制定化疗方案，因此免疫分型可为临床制定化疗方案和判断疾病预后提供实验室依据。和判断疾病预后提供实验室依据。l临床上有些病人肿瘤细胞临床上有些病人肿瘤细胞BM已
34、经转移，但原发已经转移，但原发灶有时很难找到。那么灶有时很难找到。那么BM转移的肿瘤细胞的鉴转移的肿瘤细胞的鉴定则成为重要和必须。但从形态上有时只能确定则成为重要和必须。但从形态上有时只能确定是癌或是肉瘤，当形态不典型时，有时也不定是癌或是肉瘤，当形态不典型时，有时也不能区别。而用能区别。而用CK高分子单抗与高分子单抗与CK低分子单抗，低分子单抗，不仅能区分鳞癌和腺癌，同时将腺癌与肉瘤区不仅能区分鳞癌和腺癌，同时将腺癌与肉瘤区分。分。CK高分子阳性是鳞癌，高分子阳性是鳞癌，CK低分子阳性是低分子阳性是腺癌，肉瘤细胞腺癌，肉瘤细胞CK高分子和高分子和CK低分子都是阴低分子都是阴性。性。疫细胞化学
35、染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移51l淋巴瘤淋巴瘤BM浸润和早期恶组，由于细胞少，从形浸润和早期恶组，由于细胞少，从形态和化学染色上很难鉴定，特别易将组织细胞态和化学染色上很难鉴定，特别易将组织细胞样淋巴瘤诊断为恶组。随着免疫组化和分子生样淋巴瘤诊断为恶组。随着免疫组化和分子生物学技术的发展及应用，对以前诊断的恶组重物学技术的发展及应用，对以前诊断的恶组重新进行研究，发现许多所谓的新进行研究，发现许多所谓的“恶组恶组”病例瘤病例瘤细胞并不是组织细胞源性，而是来源于其它细细胞并不是组织细胞源性，而是来源于其它细胞，如胞，如T细胞、细胞、B细胞、细胞、NK细胞等。第四军医细胞等。第四军医大学
36、病理教研室对大学病理教研室对13例恶性组织细胞增生症免例恶性组织细胞增生症免疫组织化学研究结果疫组织化学研究结果,9 例例T 细胞性淋细胞性淋(CD45RO阳性阳性),2例组织细胞肿瘤例组织细胞肿瘤(CD68阳性阳性),1例杂合表例杂合表达达(CD45RO和和CD68 同时阳性同时阳性),1例例T细胞源性间细胞源性间变性大细胞淋巴瘤变性大细胞淋巴瘤(CD45RO,EMA和和CD30阳性阳性),无一例无一例B 细胞或细胞或NK细胞肿瘤细胞肿瘤(CD20和和CD56 全全部阴性部阴性).疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移52lWHO（2000）分类中，为避免混淆，未再提）分类中，为避
37、免混淆，未再提真正的恶性组织细胞增生症，而将组织细胞肉真正的恶性组织细胞增生症，而将组织细胞肉瘤作为单独一类列出，并提出组织细胞肉瘤的瘤作为单独一类列出，并提出组织细胞肉瘤的诊断标准：诊断标准：（1）表达）表达2种或种或2种以上单核细胞种以上单核细胞/巨噬细胞起源的相关抗原，而不表达巨噬细胞起源的相关抗原，而不表达T和和B细细胞相关抗原；（胞相关抗原；（2）无）无B细胞免役球蛋白和细胞免役球蛋白和T细细胞受体基因重排。胞受体基因重排。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移53l应用免疫组化可将两者明显区分。恶组细胞单抗应用免疫组化可将两者明显区分。恶组细胞单抗标记为标记为CD14CD
38、68La LeuM3 63D3淋巴淋巴瘤细胞为瘤细胞为CD3CD7CD19CD20、CD10、lCD45（RO）、）、CD45（RA）等。）等。l表表4中中4例淋巴瘤例淋巴瘤BM浸润恶组待排拟诊病人，因浸润恶组待排拟诊病人，因免疫组化的应用而得到明确诊断。所以鉴定免疫组化的应用而得到明确诊断。所以鉴定BM中肿瘤细胞的种类及来源，应常规使用免疫组化。中肿瘤细胞的种类及来源，应常规使用免疫组化。l综上所述，应用免疫组化，可增加白血病诊断的综上所述，应用免疫组化，可增加白血病诊断的准确性，弥补形态学分型的不足，鉴定准确性，弥补形态学分型的不足，鉴定BM中肿中肿瘤细胞种类和来源，为临床白血病的化疗和判
39、断瘤细胞种类和来源，为临床白血病的化疗和判断预后提供实验室依据。预后提供实验室依据。疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移541姚尔固，徐世荣，董作仁姚尔固，徐世荣，董作仁.新编白血病化疗学新编白血病化疗学.第第一版一版.天津：天津科学技术出版社，天津：天津科学技术出版社，2000：12谭齐贤谭齐贤.临床血液学和血液检验临床血液学和血液检验.第三版第三版.北京：人北京：人民卫生出版社，民卫生出版社，2003年年2月月3曾小菁，晏家益曾小菁，晏家益.采用免疫组化技术进行白血病免采用免疫组化技术进行白血病免疫分型的研究，疫分型的研究，2000；24（5）：）：2842864裴敏飞，张广森裴敏飞，张广森.成人急性白血病免疫表型特征分成人急性白血病免疫表型特征分析及意义析及意义.湖南医科大学学报，湖南医科大学学报，2000；25（3）：）：262264 5叶任高，陆再英叶任高，陆再英.内科学内科学.第六版第六版.北京：人民卫生北京：人民卫生出版社，出版社，2004年年5月月疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移55疫细胞化学染色在白血病免疫分型和肿瘤细胞骨髓转移56
