1、猪链球菌病诊断一、病原分离1 采样活猪:采样用灭菌棉拭子擦拭扁桃体病死猪:扁桃体、肺、肝、血液,有脑炎症状取脑组织,关节炎可取关节囊液2 分离培养(1)培养基:THB培养基、绵羊血或马血平板(2)培养条件:需氧兼性厌氧、37、pH7、2 猪链球菌2性营养要求比马链球菌兽疫亚种低,后者需加3-5%的犊牛血清二、临床诊断 主要表现为败血症、化脓性淋巴结炎、脑膜炎、心内膜炎、关节炎等。但不同链球菌病原引起的症状类似,故该诊断不能用于确诊。关节炎症状败血症1 染色镜检猪链球菌2型:革兰氏染色阳性、菌体呈圆形或椭圆形,直径小于2、0m,一般呈短链或成双排列,革兰氏染色阳性,菌体表面能形成荚膜。二、微生物
2、学诊断马链球菌兽疫亚种:革兰氏阳性球菌,直径0、51um,液体培养基中呈长链,菌体表面能形成荚膜。营养要求较高,在5%犊牛血清生长良好。依照类M蛋白抗原性的差异,该菌至少有15个血清型。马链球菌兽疫亚种 猪链球菌2型菌(溶血)图2 猪链球菌2型 (ZY05719)ATCC 35246株2 培养特性猪链球菌2型:菌落形态 血平板上呈灰白色小菌落,粘稠,2型在绵 羊血平板上呈溶血,马血平板则呈溶血。马链球菌兽疫亚种:在血清肉汤培养基中培养该菌,开始时有轻度混浊,继而变清,于管底形成沉淀。于5绵羊血琼脂(THA)培养基上培养24 h,大部分菌株形成34mm的粘液样大菌落,产生明显的溶血。小部分呈非粘
3、液样菌落,大小约1mm左右。3 生化鉴定猪链球菌2型:发酵乳糖、海藻糖、水扬苷,部分菌株发酵 棉实糖、菊糖;不发酵甘露醇、山梨醇马链球菌兽疫亚种:能水解精氨酸,发酵乳糖、水扬苷、山梨醇产酸。不能发酵菊糖、甘露醇、棉子糖与海藻糖。V-P试验阴性,不产生靛基质,不还原硝酸盐,不液化明胶。三、免疫学诊断1 玻板凝集实验 用于猪链球菌2型快速定型,但要求抗体效价高;马链球菌兽疫亚种只能用于定群 2 乳胶凝集实验 敏感性较高,结果容易判断,但有非特异性3 免疫荧光猪链球菌2型:用MRP特异抗体可用于菌体表面其分布的观察,但需用激光共聚焦显微镜。马链球菌兽疫亚种:用类M蛋白特异抗体可用于菌体表面其分布的观
4、察MRP单抗介导FITC标记SS2表面MRP的激光共聚焦图像 MRP单抗介导FITC标记SS2表面MRP的激光共聚焦图像 SS2多抗介导FITC标记的SS2的激光共聚焦图像 4 4 ELISAELISA 常用链球菌多克隆抗体包被,以MRPMRP或类M M蛋白的单克隆抗体夹心,敏感性高,特异性较强。四、分子诊断1多酶电泳法:原理:不同型猪链球菌,胞内酶分子的氨基酸有差异,因而电荷有差异,在电场中,其迁移率有差异。用于不同型链球菌的分析2 限制性酶切图谱分析 原理:不同种或亚种链球菌基因不同,因而用限制性内切酶酶切后,其电泳图谱不同。用于分离株变异分析,亦可用于不同种或型的鉴定3 3 随机扩增多态
5、DNA分析(RAPD)用多对随机引物进行PCR扩增,可得到不同的产物,且产物具有多态性。可用于种或型的鉴定或分离株变异分析4 PCR猪链球菌2型:mrp、ef、cps2、orf2以及溶血素基因均可作为靶基因进行检测 cps2具有型特异性bp970744622557 mrp,ef,sly,CPS 2 1 2 3 4 51:HA9801;2:ZY05719;3:Marker;4,5:阴性对比250bp 500bp750bpM 1 22000bp1000bpMaker 1、HA 9801(cps2)2、ZY05719(cps2)cps2250bp 500bp750bp2000bpM 1 2 3 4ef,mrp,gdh,orf2Maker1、ef(626 bp)2、mrp(316 bp)3、gdh(688 bp)4、orf2(858 bp)、250bp 500bp750bp1000bp2000bp250bp 500bp750bp1000bp2000bp1099bp1310bpM 1M 1 slyfbpsMaker 1、slyMaker1、fbps感谢您的聆听！感谢您的聆听！
