1、细胞因子与病理过程细胞因子细胞因子cytokinesconcept：是由细胞产生和分泌的低分子量的多：是由细胞产生和分泌的低分子量的多 肽类介质肽类介质effect：参与调节细胞生长、分化、器官发育：参与调节细胞生长、分化、器官发育;炎症、免疫、肿瘤、损伤、修复等许多病炎症、免疫、肿瘤、损伤、修复等许多病理及生理过程理及生理过程来源：来源：血管内皮细胞、血管内皮细胞、WBC（中性、单核巨噬（中性、单核巨噬细胞、LC）、纤维母细胞、神经组织、）、纤维母细胞、神经组织、平滑肌细胞、软骨组织、肿瘤细胞等平滑肌细胞、软骨组织、肿瘤细胞等1.白细胞介素类白细胞介素类 interleukins ILs2.
2、集落刺激因子类集落刺激因子类 colony stimulating factors CSFs3.肿瘤坏死因子类肿瘤坏死因子类 tumor necrosis factors TNFs4.淋巴因子类淋巴因子类 lymphokines5.化学趋化因子类化学趋化因子类 chemotactic factors6.生长因子类生长因子类 growth factors7.细胞粘附因子类细胞粘附因子类 cell adhension molecules总之：几乎所有组成多细胞间复杂的生物信号语言中的总之：几乎所有组成多细胞间复杂的生物信号语言中的各个元件，均属此范畴各个元件，均属此范畴Classification
3、细胞因子：细胞因子：autocrine(autocrine(自泌自泌)paracrine()paracrine(旁泌旁泌)在局部起作用在局部起作用激素：激素：endocrine(endocrine(内分泌内分泌)、经血到远隔器官起作、经血到远隔器官起作用用相同点：细胞产生、分泌，作用受体，放大作用相同点：细胞产生、分泌，作用受体，放大作用细胞因子与激素的运行机制不同细胞因子与激素的运行机制不同 举例举例 局部损伤、细胞产生因子、只对局部局部损伤、细胞产生因子、只对局部细胞产生影响，如象激素一样入血，对细胞产生影响，如象激素一样入血，对全体细胞都产生影响，就麻烦了。细胞全体细胞都产生影响，就麻烦
4、了。细胞因子种类很多，作用广泛，与细胞外基因子种类很多，作用广泛，与细胞外基质也有着密切的联系，下面仅就常见的质也有着密切的联系，下面仅就常见的细胞因子作以简介细胞因子作以简介 Wnt通路中的关键分子与肺癌侵袭转移o王恩华o中国医科大学研究背景 1l在中国肺癌的发生率在过去的在中国肺癌的发生率在过去的30年里年里 上升了上升了465%，死亡率居恶性肿瘤之首，死亡率居恶性肿瘤之首l每年死于肺癌的患者约每年死于肺癌的患者约45万人，其中约有万人，其中约有40万万人死于肺癌的转移人死于肺癌的转移l因此揭示肺癌侵袭转移的分子机制和寻找治疗因此揭示肺癌侵袭转移的分子机制和寻找治疗关键靶点，具有重要意义关
5、键靶点，具有重要意义研究背景 2lWnt通路中的关键分子GSK-3B、APC和B-catenin与肿瘤侵袭转移的关系已有较多报道，而位于其上游的DVL和Axin是如何调控肿瘤侵袭转移的则少有报道l与B-catenin同一家族的p120ctn是否与Wnt通路有关尚不清楚l已有报道p120ctn能与Kaiso结合，而Kaiso只有入核信号，没有出核信号，那么p120ctn是否具有调节Kaiso核浆分布的作用，进而影响肿瘤的侵袭转移尚无报道-catenin在正常支气管上皮细胞表现为膜表达，而在 NSCLC 中主要表现为细胞浆或核内的蓄积，这种蓄积与NSCLC 的低分化和淋巴结转移相关1.Axin对N
6、SCLC中-catenin蓄积所起的作用我们用SSCP和直接测序法检测了100例NSCLC 中-catenin第三外显子突变情况，结果发现-catenin 的第三外显子无一例突变 Am J Clin Pathol.2006,125(4):534-541是什么原因造成了-catenin 在肺癌细胞中的蓄积？我们发现我们发现Axin在在NSCLC中的表达明显中的表达明显下调下调转染转染AxinAxin可明显抑制肺癌细胞的可明显抑制肺癌细胞的侵袭转移和增殖能力侵袭转移和增殖能力过表达过表达Axin可使可使肺癌细胞中肺癌细胞中高表达高表达的的-catenin出现明显下调出现明显下调我们猜测：我们猜测：
7、Axin的表达减少可能是导致的表达减少可能是导致-catenin在在NSCLC中蓄积的原因之一中蓄积的原因之一 Ann Surg Oncol 2007,14:3251-9 我们将新鲜的我们将新鲜的NSCLC组织经组织经1 gray X-ray照射后发现照射后发现Axin的蛋白和的蛋白和mRNA均出现了明显的上调，同时均出现了明显的上调，同时Caspase-3的表达也出现了明显的的表达也出现了明显的上调上调既然既然Axin有如此明显的抑癌作用，如有如此明显的抑癌作用，如何上调何上调Axin的表达呢？的表达呢？因此，X-ray是否能上调Axin的表达及水平是判定NSCLC是否对X-ray治疗敏感的
8、有用指标X-ray 照射或转染照射或转染Axin都能上调肺癌细胞的凋亡率，都能上调肺癌细胞的凋亡率，转染转染Axin加上加上X-ray照射可使凋亡率明显增加照射可使凋亡率明显增加Axin诱导细胞凋亡的机制是什么？诱导细胞凋亡的机制是什么？转染转染Axin或不与或不与p53结合的结合的-Axin，再用，再用p53抑制剂抑制剂PFT-或或JNK抑制剂抑制剂SP处理处理 Int J Radio Oncol 2009我们意外地发现：过表达我们意外地发现：过表达AxinAxin可以下调可以下调TCF-4TCF-4的转录，但机制不清的转录，但机制不清已有文献报道：已有文献报道：-catenin具有促进具有
9、促进TCF-4转录，而转录，而p53具有抑具有抑 制制TCF-4转录的能力转录的能力 而而Axin既具有下调既具有下调-catenin的能力，又有激活的能力，又有激活 p53的能力的能力因此，因此，Axin既有可能是通过既有可能是通过-catenin，也有可能是通过，也有可能是通过p53下调下调TCF-4的转录的转录我们为了探讨这个问题，构建了我们为了探讨这个问题，构建了Axin不能与不能与-catenin结合，结合，Axin不能与不能与p53结合，以及结合，以及Axin既不能既不能与与-catenin也不能与也不能与p53结合的突变体结合的突变体转染转染Axin在下调在下调-catenin
10、表达的同时可明显下调表达的同时可明显下调TCF-4的表达，的表达，但转染但转染Axin-ca即保留了即保留了p53作用时却不能下调作用时却不能下调-catenin和和TCF-4，但由于，但由于BE1细胞系是细胞系是p53突变型细胞系，因此尚不能确定突变型细胞系，因此尚不能确定Axin是否具有通过是否具有通过p53下调下调TCF-4的作用的作用因此，我们向因此，我们向BE1细胞中转染了野生型细胞中转染了野生型p53，结果显示单纯转染野，结果显示单纯转染野生型生型p53可以下调可以下调TCF-4，但共转染，但共转染Axin-ca和和p53后后TCF-4并没并没有出现进一步下调，表明有出现进一步下调
11、，表明Axin并不能加强并不能加强p53下调下调TCF-4的作用的作用 Mol Cancer.2010 Feb 2;9:25.二、DVLs对Wnt通路的调节作用 非小细胞肺癌组织中存在DVL-1和3的过表达，其表达与高TNM分期、低分化有关 Dvls在淋巴结转移灶中的表达总是高于原发灶在淋巴结转移灶中的表达总是高于原发灶Dvl-1 和和Dvl-3的过表达与非小细胞肺癌的不良预后相关的过表达与非小细胞肺癌的不良预后相关Lung Cancer(2008)62,181192我们发现：过表达Dvl-1可以明显的上调-catenin的蛋白水平，同时激活TCF-4依赖的转录活性，表明Dvl-1主要参与经典
12、的Wnt通路而过表达Dvl-3却不能明显上调-catenin水平和TCF-4依赖的转录活性但无论过表达Dvl-1还是Dvl-3均能明显增强肺癌细胞的侵袭转移能力我们发现：转染我们发现：转染Dvl-3能明显上调肺癌细胞中磷酸化的能明显上调肺癌细胞中磷酸化的 JNK和和p38水平水平 那么那么Dvl-3是怎样促进肺癌细胞侵袭转移的呢？是怎样促进肺癌细胞侵袭转移的呢？并且明显下调并且明显下调RhoA的活性的活性上调上调Cdc42和和Rac1活性活性我们发现：过表达我们发现：过表达DVL-3上调上调p120mRNA水水平但是转染但是转染Dvl-1却不能却不能ChIP分析证实了转录因子分析证实了转录因子
13、Pax6可以可以直接与直接与p120ctn的启动子区结合的启动子区结合上述结果说明：上述结果说明：Dvl-3调节调节Pax6，而，而Pax6又与又与p120ct的启动的启动 子区作用，进而启动了子区作用，进而启动了p120ctn的转录的转录 但但Dvl-3是如何上调是如何上调Pax6的尚不清楚的尚不清楚上述结果提示我们上述结果提示我们p120ctn通过通过Dvl-3与与Wnt通路联系通路联系p120ctn与与Wnt 通路之间还存在哪些联系呢？通路之间还存在哪些联系呢？3.p120ctn 在肺癌侵袭和转移中的作用，及其在肺癌侵袭和转移中的作用，及其 与与Wnt通路的联系通路的联系p120ctn在
14、肺癌中的异常表达及意义在肺癌中的异常表达及意义 肺癌中肺癌中p120ctn-1A、3A和和E-cadherin的表的表达下调与达下调与small GTP酶过表达相关酶过表达相关Lung Cancer 63(2009)375382 敲除敲除p120ctn后，后，Pulldown结果证实结果证实cdc42、Rac1活性增强，但活性增强，但RhoA活性下降活性下降E-cadherin的蛋白表达下降的蛋白表达下降敲除p120ctn后S期细胞比例增加、侵袭和转移能力增强 过表达过表达p120-1A下调下调Rac1活性活性而过表达而过表达p120-3A下调下调Cdc42活性活性p120ctn-1A 和和
15、3A都可抑制都可抑制肺癌细胞增殖、侵袭和转肺癌细胞增殖、侵袭和转移移 但是但是p120ctn-1A 抑制肺癌抑制肺癌细胞侵袭转移的能力强于细胞侵袭转移的能力强于3A而而p120ctn-3A 抑制增殖的抑制增殖的能力明显强于能力明显强于1AExp Cell Res 2009,315:890-898 我们发现：我们发现：转染转染 p120-1A可以明显可以明显的上调的上调-catenin的蛋白的蛋白和和mRNA的表达的表达我们得出以下结论我们得出以下结论:p120ctn-1A通过通过-catenin 与与 Wnt通路关联通路关联 Kaiso是如何出核的？是如何出核的？4.Kaiso 在肺癌侵袭转移
16、中的作用在肺癌侵袭转移中的作用 Kaiso 过表达与过表达与NSCLC不良预后相关不良预后相关BMC Cancer.2009,9:178 无论是在肺癌原发灶和淋巴结转移灶中，Kaiso 和p120ctn总是呈现同样的表达部位免疫共沉淀证实，无论在肺癌组织还是细胞系中，Kaiso和p120都可以形成复合体 干扰干扰p120后后Kaiso核内增多，核浆蛋白分离核内增多，核浆蛋白分离进一步验证进一步验证Kaiso在核内分布增多在核内分布增多说明：p120无论在细胞浆还是在核内，都能与Kaiso结合转染p120ctn-3A，Kaiso和p120ctn主要为浆表达LMB阻断p120ctn出核则p120c
17、tn和Kaiso主要位于核内转染p120-NLS-3A入核序列质粒则p120ctn位于核内，Kaiso也位于核内我们得出结论：我们得出结论：p120ctn-3A影响影响Kaiso的核浆分布，的核浆分布，Kaiso的出核的出核 依赖与依赖与p120ctn-3A的存在的存在Exp Cell Res(revised)结论：lAxin、DVL、p120ctn、Kaiso在肺癌侵袭转移中发挥着重要的调控作用l-catenin在NSCLC中蓄积是由于Axin表达下调 所致，过表达Axin或用X线照射肺癌组织上调Axin的表达，都可明显抑制肺癌的侵袭转移，促进肺癌细胞凋亡lP120与Wnt通路中的关键分子D
18、vl-3和-catenin相关lKaiso是通过与p120-3A结合被携带出核的Published ariticles(directly relative)1.Axin downregulates TCF-4 transcription via beta-catenin,but not p53,and inhibits the proliferation and invasion of lung cancer cells.Mol Cancer.2010 Feb 2;9:25.2.Cytoplasmic Kaiso is associated with poor prognosis in non
19、-small cell lung cancer.BMC Cancer.2009 Jun 9;9:178.3.Kaiso is expressed in lung cancer:its expression and localization is affected by p120ctn.Lung Cancer 2010,67(2):205-215.4.X-ray induces non-smal cell lung cancer apoptosis by up regulating Axin expression.Inter J Rad Onc.Biol.Phys.2009,75(2):518-
20、265.Ablation of p120-Catenin Enhances Invasion and Metastasis of Human Lung Cancer Cells.Cancer Sci.2009,100(3):441-448.6.Abnormal expression of p120-catenin,E-cadherin,and small GTPases is significantlyassociated with malignant phenotype of human lung cancer.Lung cancer.2009,63:375-382.7.P120-caten
21、in Isoforms 1A and 3A Differently Affect Invasion and Proliferation of Lung Cancer Cells.Exp cell res.2009,315(5):890-898.8.Dishevelled family proteins are expressed in non-small cell lung cancer and function differentially on tumor progression.Lung Cancer.2008;62(2):181-19 9.Reduction of p120(ctn)i
22、soforms 1 and 3 is significantly associated with metastatic progression of human lung cancer.APMIS.2007,115(7):848-56.10.Overexpression of Axin Downregulates TCF-4 and Inhibits the Development of Lung Cancer.Ann Surg Oncol.2007,14(11):3251-9.11.Abnormal beta-catenin and reduced axin expression are a
23、ssociated with poor differentiation and progression in non-small cell lung cancer.Am J Clin Pathol.2006,125(4):534-541.12.Abnormal expression and clinicopathologic significance of p120-catenin in lung cancer.Histol Histopathol.2006,21(8):841-847.13.Expression of T cell factor-4 in non-small cell lun
24、g cancer.Chin Med J.2005,118(2):136-40.14.Connexin 43 recruits E-cadherin expression and inhibits the malignant behaviour of lung cancer cells.Folia Histochem Cytobiol.2008;46(3):315-21.15.Expression of serine threonine kinase 15 is associated with poor differentiation in lung squamous cell carcinom
25、a and adenocarcinoma.Pathol Int.2006,56(7):375-380.是由细胞产生或分泌，对细胞生长，分化等是由细胞产生或分泌，对细胞生长，分化等具有显著调节作用的多肽具有显著调节作用的多肽目前已发现的生长因子已有目前已发现的生长因子已有5050多种，并有新多种，并有新的因子的报道，其中部分生长因子的结构与的因子的报道，其中部分生长因子的结构与生物学活性已基本搞清，有的已商品化，并生物学活性已基本搞清，有的已商品化，并在临床上得以应用在临床上得以应用一、生长因子一、生长因子growth factorgrowth factor意义意义 对各类生长因子的广泛深入的研
26、究，对各类生长因子的广泛深入的研究，将有助于人类对胚胎发育、组织与器将有助于人类对胚胎发育、组织与器官的形成等基本生物学问题的认识官的形成等基本生物学问题的认识（如干细胞）同时对肿瘤，血管疾病（如干细胞）同时对肿瘤，血管疾病的诊断治疗以及对创伤修复技术的提的诊断治疗以及对创伤修复技术的提高等都将产生巨大的影响高等都将产生巨大的影响（一）生长因子分类（一）生长因子分类 生长因子种类繁多，来源复杂，结生长因子种类繁多，来源复杂，结构各异，生物学作用与其它细胞因子构各异，生物学作用与其它细胞因子间又有交叉，因此，单靠一种分类方间又有交叉，因此，单靠一种分类方法是不足以反应生长因子的本质和作法是不足以
27、反应生长因子的本质和作用机制的。目前的分类方法有以下几用机制的。目前的分类方法有以下几种种1.1.根据生物学效应根据生物学效应细胞生长促进因子细胞生长促进因子细胞生长抑制因子细胞生长抑制因子生长抑素生长抑素注意注意 同一种生长因子，对不同的组织细胞或同同一种生长因子，对不同的组织细胞或同一种组织细胞的不同生长阶段，可有相反的一种组织细胞的不同生长阶段，可有相反的作用作用 如转化生长因子（如转化生长因子（TGF-TGF-）早期纤维母细）早期纤维母细胞生长胞生长，晚期起抑制作用，对细胞的增殖，晚期起抑制作用，对细胞的增殖既有促进又有抑制既有促进又有抑制2.2.根据理化特性根据理化特性单链多肽单链多
28、肽表皮生长因子表皮生长因子EGFEGF含糖链的多肽二聚体蛋白含糖链的多肽二聚体蛋白PDGFPDGF糖蛋白糖蛋白集落刺激因子集落刺激因子CSFCSF和白细胞介和白细胞介素素ILIL3.3.根据其作用细胞类型根据其作用细胞类型 单价因子单价因子一种因子只作用于一类细一种因子只作用于一类细胞胞 多价因子多价因子一种因子可作用于不同类一种因子可作用于不同类型细胞型细胞4.4.按其作用效果按其作用效果增殖因子增殖因子IL-2、IL-3、GM-CSF、BCGF分化因子分化因子IL-2、IL-3、BCGF、IFN效应因子效应因子TNF（二）生长因子作用的靶细胞范围（二）生长因子作用的靶细胞范围 随着对各类生
29、长因子的认识不断加深，发现生随着对各类生长因子的认识不断加深，发现生长因子的作用和作用范围都较原来发现时广得多，长因子的作用和作用范围都较原来发现时广得多，宽得多宽得多举例举例 在免疫细胞中分离出来在免疫细胞中分离出来IL-IIL-I，起初认为是调节，起初认为是调节免疫系统的信号分子，后来发现，还对角质细胞、免疫系统的信号分子，后来发现，还对角质细胞、f f母细胞，星状细胞，软骨细胞有作用母细胞，星状细胞，软骨细胞有作用另外另外 从非免疫细胞中分离出来的转化生长因子从非免疫细胞中分离出来的转化生长因子TGF-TGF-却有着很强的免疫调节作用，在抑制却有着很强的免疫调节作用，在抑制T T细胞功能
30、上要比环孢霉素至少强细胞功能上要比环孢霉素至少强1010倍。同时也倍。同时也有很强的抑制有很强的抑制B B细胞合成免疫球蛋白的作用。细胞合成免疫球蛋白的作用。因此，它是在器官移植方面，一个非常好的生因此，它是在器官移植方面，一个非常好的生物制剂物制剂（三）生长因子作用的处境依赖性三）生长因子作用的处境依赖性 生长因子的作用及作用强度是视其周围环境条生长因子的作用及作用强度是视其周围环境条件而定的，即依赖于受体和其它效应分子的存在件而定的，即依赖于受体和其它效应分子的存在举例举例TGF-在在EGF存在时，对存在时，对f母细胞的生长起抑制作用母细胞的生长起抑制作用TGF-在在PDGF存在时，对存在
31、时，对f母细胞的生长起促进作用母细胞的生长起促进作用另外另外TNF在在IL-1和和TGF-存在时才发挥作用存在时才发挥作用因此要辩证地看待生长因子作用的广泛性、可变性因此要辩证地看待生长因子作用的广泛性、可变性（四）生长因子与原癌基因产物的关系（四）生长因子与原癌基因产物的关系 绝大多数原癌基因产物已被证明都是与细胞生绝大多数原癌基因产物已被证明都是与细胞生长，增殖、分化有关的蛋白质。现已搞清，生长长，增殖、分化有关的蛋白质。现已搞清，生长调控基因与原癌基因，在很大程序上就是一回事调控基因与原癌基因，在很大程序上就是一回事举例举例 sissis基因表达产物与基因表达产物与PDGFPDGF的的B
32、 B链有链有92%92%的同源性，的同源性，erbBerbB基因产物与基因产物与EGFEGF受体高度同源受体高度同源所以，在一定程度上讲，癌蛋白就是生长因子、所以，在一定程度上讲，癌蛋白就是生长因子、受体、细胞内信号转导因子或受体、细胞内信号转导因子或DNADNA结合蛋白结合蛋白（五）生长因子的临床应用（五）生长因子的临床应用 生长因子参与了炎症、血管新生、损伤修复生长因子参与了炎症、血管新生、损伤修复和肿瘤的发生发展。在肿瘤形成中起关键作用和肿瘤的发生发展。在肿瘤形成中起关键作用的生长因子，在炎症、损伤修复中，却是一种的生长因子，在炎症、损伤修复中，却是一种正常的反应性的生理表达，这种表达也
33、是至关正常的反应性的生理表达，这种表达也是至关重要的重要的目前应用目前应用TGF-TGF-用于抑制免疫反应和排斥反应用于抑制免疫反应和排斥反应bFGFbFGF用于抑制肿瘤内血管形成用于抑制肿瘤内血管形成GM-CSFGM-CSF用于再障或放化疗后用于再障或放化疗后 几乎每种生长因子都可用基因重组方法生产，几乎每种生长因子都可用基因重组方法生产，未来的未来的1010年将是生长因子从基础到临床过渡的年将是生长因子从基础到临床过渡的1010年年几种常见的生长因子：几种常见的生长因子：1.1.血小板源生长因子血小板源生长因子 platelet-derived growth factor PDGF pla
34、telet-derived growth factor PDGF，最初是，最初是在血小板中发现的一种促分裂剂在血小板中发现的一种促分裂剂1)1)这一名称不够准确这一名称不够准确，因为血小板可产生许多生长，因为血小板可产生许多生长因子因子血管内皮细胞生长因子血管内皮细胞生长因子vascular endothelial growth factor，VEGF表皮生长因子表皮生长因子epidermal growth factor，EGF转化生长因子转化生长因子transforming growth factor-，TGF-2）另外，许多细胞都可产生）另外，许多细胞都可产生PDGF如VSMC、表皮细胞、
35、皮肤f母细胞、肿瘤细胞PDGF分子量为28-35KDa，由A、B两条链组成，B链与sis原癌基因编码蛋白有92%同源性体内存在形式：PDGF-AA PDGF-BB PDGF-ABA链与A受体结合B链即能与B又能与A结合购买抗体时应注意实验的组织或细胞上是否存在被检受体生物作用生物作用诱导细胞增殖，是一种强促有丝分裂剂诱导细胞增殖，是一种强促有丝分裂剂趋化作用，引起间充质细胞、单核细胞、中趋化作用，引起间充质细胞、单核细胞、中性粒细胞，定向迁移及释放颗粒性粒细胞，定向迁移及释放颗粒引起引起-型胶原的合成和分泌，调节细胞外型胶原的合成和分泌，调节细胞外基质基质 PDGF的临床意义的临床意义1)创伤
36、修复创伤修复创口处血小板沉积创口处血小板沉积PDGF中性中性WBC、单核、单核/巨噬巨噬C内移清除异物内移清除异物cap f母细胞、母细胞、SMC内内移、增生移、增生肉芽肉芽填补伤口填补伤口cap f母细胞、母细胞、SMC释放释放PDGFC.T增生、增加增生、增加胶原沉积胶原沉积愈合愈合举例举例 Knighton采用病人自身血小板释采用病人自身血小板释放物质（放物质（PDGF），处理因糖尿病），处理因糖尿病出现的难愈合的皮下溃疡，使濒于出现的难愈合的皮下溃疡，使濒于截肢危险的溃疡得到了愈合截肢危险的溃疡得到了愈合2)2)动脉粥样硬化形成及血管再狭窄动脉粥样硬化形成及血管再狭窄动脉内皮细胞动脉内
37、皮细胞 血小板血小板增殖增殖内膜增厚内膜增厚SMC收缩型收缩型分泌型分泌型胶原沉积胶原沉积硬化硬化PTCA血管移植血管移植PDGFVSMC游走游走分裂分裂PDGFSMC游走、增殖游走、增殖再狭窄再狭窄restenosis设想设想用单克隆抗体中和局部产生的用单克隆抗体中和局部产生的PDGF在动物及细胞培养上获得成功，但用于人体，在动物及细胞培养上获得成功，但用于人体，给药途径受到限制给药途径受到限制antisense RNA局部转染，可以研究探讨局部转染，可以研究探讨抑制疤痕形成抑制疤痕形成中和抗体和反义中和抗体和反义RNA技术等技术等但应注意但应注意 PDGF PDGF的作用，不是孤立的，它是
38、在其它细的作用，不是孤立的，它是在其它细胞因子和生长因子也参与细胞反应的复杂环胞因子和生长因子也参与细胞反应的复杂环境中发挥其作用的，也就是说，抑制了境中发挥其作用的，也就是说，抑制了PDGFPDGF的作用只是一个方面，而其它的因子仍然在的作用只是一个方面，而其它的因子仍然在起作用，在判定实验结果时，要综合进行考起作用，在判定实验结果时，要综合进行考虑虑2.纤维母细胞生长因子纤维母细胞生长因子 fibroblast growth factor 最初是在脑和垂体中发现，对纤维母细胞有最初是在脑和垂体中发现，对纤维母细胞有促分裂作用而命名的。促分裂作用而命名的。FGF本身种类繁多，由本身种类繁多，
39、由于制备方法和来源不同给予许多特殊命名，因于制备方法和来源不同给予许多特殊命名，因此，极易混淆。如肝素结合生长因子等。多数此，极易混淆。如肝素结合生长因子等。多数人认为，按其等电点分为两类比较合适，人认为，按其等电点分为两类比较合适，即即aFGF和和bFGFPathol Int.与B-catenin同一家族的p120ctn是否与Wnt通路有关尚不清楚选择蛋白家族selectin family SFAnn Surg Oncol 2007,14:3251-9那么Dvl-3是怎样促进肺癌细胞侵袭转移的呢？Cells.Molecular carcinogenesis(2010)Reduction of
40、 p120(ctn)isoforms 1 and 3 is significantly associated with metastatic progression of human lung cancer.IL-12 使NK细胞激活免疫细胞间粘附的分子ChIP分析证实了转录因子Pax6可以直接与p120ctn的启动子区结合BMC Cancer.malignant phenotype of human lung cancer.所以，在一定程度上讲，癌蛋白就是生长因子、受体、细胞内信号转导因子或DNA结合蛋白2007,14(11):3251-9.Cancer Sci.IL-12 使NK细胞激活e
41、ffect：参与调节细胞生长、分化、器官发育;FGF与原癌基因与原癌基因hst，int-2编码的蛋编码的蛋白有很大同源性白有很大同源性来源来源f母母c，血管内皮，血管内皮C、SMC，粒，粒C，肾上，肾上腺皮质腺皮质C、星形胶质、星形胶质C，肿瘤细胞等，肿瘤细胞等2006,56(7):375-380.（四）生长因子与原癌基因产物的关系我们发现：转染Dvl-3能明显上调肺癌细胞中磷酸化的以前生产的TNF主要问题是副作用太大如休克等，目前美国、日本等采用重组人的TNF已进入二期临床我国也已能生产重视人的TNFKaiso是通过与p120-3A结合被携带出核的由于小GTP酶活性和JNK、p38均与非经典
42、的Wnt通路有关，因此我们可以得出如下结论：过表达Axin可使肺癌细胞中高表达的-catenin出现明显下调但是转染Dvl-1却不能我们得出以下结论:p120ctn-1A通过-catenin 与一、生长因子growth factor生物作用生物作用强的血管生长因子，诱发新生强的血管生长因子，诱发新生capcap作用作用促进创伤愈合和组织修复促进创伤愈合和组织修复参与胚胎发育和分化参与胚胎发育和分化刺激外周神经再生和营养神经的作用刺激外周神经再生和营养神经的作用调节内分泌的作用调节内分泌的作用FGF的临床意义的临床意义创伤愈合创伤愈合FGF用于治疗胃溃疡方面的尝试最多，但用于治疗胃溃疡方面的尝试
43、最多，但由于由于FGF不稳定，全身投与很难达到胃溃不稳定，全身投与很难达到胃溃疡部位，直接口服由于胃酸的破坏使其作疡部位，直接口服由于胃酸的破坏使其作用大大减弱用大大减弱办法：办法：FGF可与肝素结合，不仅稳定，且可与肝素结合，不仅稳定，且耐酸、耐热，可获较好的效果耐酸、耐热，可获较好的效果肿瘤治疗肿瘤治疗实体肿瘤无一例外均能产生实体肿瘤无一例外均能产生FGFautocrineautointra-factorparacrine血管生长血管生长自身增殖自身增殖举例举例利用利用bFGFbFGF单抗中和单抗中和FGFFGF，达到对肿，达到对肿瘤的治疗，在动物体内获成功瘤的治疗，在动物体内获成功苏拉明
44、阻止苏拉明阻止bFGFbFGF与受体结合，达到与受体结合，达到了对肿瘤的抑制了对肿瘤的抑制设想设想用人的用人的bFGFbFGF单抗和受体单抗，结合介入单抗和受体单抗，结合介入局部给药，或放入支架制成缓释剂局部给药，或放入支架制成缓释剂结合介入，局部给予反义结合介入，局部给予反义RNA-RNA-基因治基因治内皮支架基因表达内皮支架基因表达 促进侧枝循环的形成促进侧枝循环的形成 大面积心梗最令人担心的是猝死，但经大面积心梗最令人担心的是猝死，但经抢救免于一死，也担心心脏破裂或室壁瘤的抢救免于一死，也担心心脏破裂或室壁瘤的出现。如何加强梗死部位的强度，最好的方出现。如何加强梗死部位的强度，最好的方式
45、就是能尽快机化。而式就是能尽快机化。而bFGFbFGF是一种强的新生是一种强的新生CapCap生成因子。国外在狗模型中证实给梗死生成因子。国外在狗模型中证实给梗死部位血管内注入部位血管内注入bFGFbFGF，很快使梗死面积缩小，很快使梗死面积缩小，组织学上有较多的侧枝循环的出现。说明组织学上有较多的侧枝循环的出现。说明FGFFGF用于治疗心梗方面可望成为可能用于治疗心梗方面可望成为可能血管再狭窄血管再狭窄PTCAbFGF PDGFSMS增生增生restenosis设想：狗设想：狗+介入球囊介入球囊心梗模型、冠状血管狭窄心梗模型、冠状血管狭窄模型模型放置放置注入注入bFGF心梗缩小心梗缩小 注入
46、注入bFGF抗体抗体狭窄减轻反义狭窄减轻反义RNA周围神经再生周围神经再生 脊髓损伤脊髓损伤+bFGF 促进神经纤维膜细胞生长，轴促进神经纤维膜细胞生长，轴突长入突长入3.表皮生长因子表皮生长因子 epidermal growth factor EGF 是一个较早被发现的生长因子，是一个较早被发现的生长因子，EGF基因基因与与V-mos原癌基因有部分同源性，原癌基因有部分同源性，EGF受体基受体基因与因与erbB-1基因有基因有75%以上同源性，在人体以上同源性，在人体主要存在于各种体液或分泌物中，促进愈合，主要存在于各种体液或分泌物中，促进愈合，其中前列腺液、乳液中最高。除表皮细胞外，其中前
47、列腺液、乳液中最高。除表皮细胞外，对许多细胞都有促进生长作用对许多细胞都有促进生长作用应用应用细胞培养细胞培养培养液中加入培养液中加入EGF角膜损伤修复：在动物角膜上早获成功，角膜损伤修复：在动物角膜上早获成功，将将EGF制成点眼液，使角膜烧伤无法愈制成点眼液，使角膜烧伤无法愈合，只留光感的患者，几周后恢复正常合，只留光感的患者，几周后恢复正常皮肤创伤愈合皮肤创伤愈合1)植皮病人，加用植皮病人，加用EGF明显达到了促进创面愈明显达到了促进创面愈合的目的合的目的2)EGF体外培养自体表皮或表皮细胞，繁殖到体外培养自体表皮或表皮细胞，繁殖到一定数量后，将培养好的表皮植入创面，一定数量后，将培养好的
48、表皮植入创面，或将培养的表皮细胞象播种一样撒在创面，或将培养的表皮细胞象播种一样撒在创面，不仅加快愈合，也减少了疤痕产生不仅加快愈合，也减少了疤痕产生二、白细胞介素二、白细胞介素interleukins 为淋巴因子家族中一类，是联系白细胞间相互作用的为淋巴因子家族中一类，是联系白细胞间相互作用的细胞因子。共有细胞因子。共有18种，种，IL1-13研究的比较多，研究的比较多，IL14-18是是最近才被命名的最近才被命名的主要生物学作用：主要生物学作用：1.参与免疫反应参与免疫反应 在移植物排斥反应、哮喘疾病发生、肿在移植物排斥反应、哮喘疾病发生、肿瘤免疫中均起重要作用瘤免疫中均起重要作用它们的作
49、用相互协同而加强它们的作用相互协同而加强如如IL-1 BC增殖、分化、产生抗体增殖、分化、产生抗体 TC产生产生IL-2及及IL-2受体受体 IL-4,5 可协同加强可协同加强IL-1对对BC的作用的作用2.参与炎症反应参与炎症反应IL-1 使机体发热，外周使机体发热，外周WBC升高，促进内升高，促进内皮细胞表达粘附分子，增进皮细胞表达粘附分子，增进WBC与与之粘附之粘附IL-8 是中性是中性WBC趋化因子和激活因子趋化因子和激活因子 IL-12 是是T、NK细胞等免疫效应细胞的促进细胞等免疫效应细胞的促进因子，具有抗寄生虫、病毒和细菌和因子，具有抗寄生虫、病毒和细菌和抗肿瘤等功能抗肿瘤等功能
50、3.3.参与损伤修复参与损伤修复 IL-1 与酸性与酸性FGF有同源性，促进血有同源性，促进血管新生管新生 IL-2 可使可使f母母C数量增加数量增加4.4.抗肿瘤作用抗肿瘤作用 IL-12 使使NK细胞激活细胞激活 使使CD8+T细胞细胞细胞毒淋巴细胞细胞毒淋巴细胞CTL 这已在这已在IL-12转基因动物研究中得到证实转基因动物研究中得到证实IL-2 使使T细胞细胞淋巴细胞激活的杀伤细胞淋巴细胞激活的杀伤细胞 LAK细胞细胞 从外周血分离从外周血分离TC、经、经IL-12、2作用后，作用后，回输给病人回输给病人抗抗 肿瘤作用肿瘤作用 白细胞介素功能很多，作用极强，白细胞介素功能很多，作用极强
