1、维生素的测医学宣教维生素的测医学宣教第二节第二节 脂溶性维生素的测定脂溶性维生素的测定v一、维生素一、维生素A的测定的测定v二二、-胡萝卜素的测定胡萝卜素的测定v三三、维生素、维生素D的测定（的测定（HPLC法）法）v四、维生素四、维生素E的测定的测定3维生素的测医学宣教一、维生素一、维生素A的测定的测定v原理：维生素原理：维生素A在三氯甲烷中与三氯化锑作用生成蓝色物质，其深浅与溶在三氯甲烷中与三氯化锑作用生成蓝色物质，其深浅与溶液中维生素液中维生素A的量成正比。该蓝色物质虽不稳定，但在一定时间内可用分的量成正比。该蓝色物质虽不稳定，但在一定时间内可用分光光度计于光光度计于620nm波长处测定
2、。波长处测定。v测定：样品处理：用皂化法测定：样品处理：用皂化法 或研磨法对样品进行预处理；测定：准确取或研磨法对样品进行预处理；测定：准确取一定量的维生素一定量的维生素A标准液于标准液于45个容量瓶中，以三氯甲烷配制标准系列。个容量瓶中，以三氯甲烷配制标准系列。再取相同数量比色管顺次取再取相同数量比色管顺次取lmL三氯甲烷和标准系列使用液三氯甲烷和标准系列使用液lmL，各管加，各管加入乙酸酐入乙酸酐1滴，制成标准比色系列，于滴，制成标准比色系列，于620nm波长处以三氯甲烷调节吸光波长处以三氯甲烷调节吸光度零点，将其标准比色系列按顺序移入光路前，迅速加度零点，将其标准比色系列按顺序移入光路前
3、，迅速加9mL三氯化锑三氯化锑-三三氯甲烷溶液。于氯甲烷溶液。于6s内测定吸光度，绘制标准曲线图。于一比色管中加入内测定吸光度，绘制标准曲线图。于一比色管中加入l0mL三氯甲烷，加入三氯甲烷，加入1滴乙酸酐为空白液。另一比色管中加入滴乙酸酐为空白液。另一比色管中加入lmL三氯甲三氯甲烷，其余比色管中分别加入烷，其余比色管中分别加入lmL试样溶液及试样溶液及1滴乙酸酐。其余分析步骤同滴乙酸酐。其余分析步骤同标准曲线的绘制。结果按公式计算：标准曲线的绘制。结果按公式计算：4维生素的测医学宣教5维生素的测医学宣教二二、-胡萝卜素的测定胡萝卜素的测定v原理：试样中的原理：试样中的-胡萝卜素，用石油醚胡
4、萝卜素，用石油醚+丙酮丙酮(80+20)混合液提取，经三混合液提取，经三氧化二铝柱纯化，然后以氧化二铝柱纯化，然后以HPLC法测定，以保留时间定性，峰高或峰面积法测定，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。定量。6维生素的测医学宣教三三、维生素、维生素D的测定（的测定（HPLC法）法）v原理：将样品皂化，由酯型转化为游离型，用高效液相色谱测定。原理：将样品皂化，由酯型转化为游离型，用高效液相色谱测定。v取取5g10g样品加样品加1g焦性没食子酸，焦性没食子酸，50mL乙醇溶液，在磁力搅拌器下使乙醇溶液，在磁力搅拌器下使样品均匀溶解后加入样品均匀溶解后加入30mL 50%KOH溶液，在（溶液，在（5
5、02）上搅拌回流上搅拌回流40mim。取下回流液，冲凉后用。取下回流液，冲凉后用50mL、30mL、20mL、10mL乙醚萃取，乙醚萃取，合并乙醚层，用水洗至中性，过无水合并乙醚层，用水洗至中性，过无水Na2SO4，在，在50下浓缩至约下浓缩至约5mL，取下后用甲醇定容至取下后用甲醇定容至10mL，待测定。，待测定。v吸取处理好的样品吸取处理好的样品20L，注入高效液相色谱仪，进行，注入高效液相色谱仪，进行HPLC分析，同时分析，同时进行标准溶液的分析，将样品的峰与标准溶液峰比较，以保留时间定性，进行标准溶液的分析，将样品的峰与标准溶液峰比较，以保留时间定性，峰高或峰面积定量。峰高或峰面积定量
6、。7维生素的测医学宣教四、维生素四、维生素E的测定的测定v原理：试样中的维生素原理：试样中的维生素E经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至经皂化提取处理后，将其从不可皂化部分提取至有机溶剂中。用高效液相色谱有机溶剂中。用高效液相色谱C18反相柱分离维生素反相柱分离维生素E，经紫外检测器检，经紫外检测器检测，并用内标法定量测定。测，并用内标法定量测定。v1.色谱条件色谱条件(参考条件参考条件)：预柱：预柱：ultrasphere ODS lOm，4mm4.5cm；分析柱：分析柱：ultrasphere ODS 5m，4.6mm25cm；流动相：甲醇；流动相：甲醇+水水(98+2)混匀，临用前
7、脱气；紫外检测器波长混匀，临用前脱气；紫外检测器波长300nm，量程，量程0.02；进样量；进样量20L；流速；流速1.7mL/min。v2.试样分析试样分析v取试样浓缩液取试样浓缩液20L，待绘制出色谱图及色谱参数后，待绘制出色谱图及色谱参数后，用标准物色谱峰的用标准物色谱峰的保留时间定性。保留时间定性。8维生素的测医学宣教第三节第三节 水溶性维生素的测定水溶性维生素的测定v一、维生素一、维生素B1（硫胺素）的测定（硫胺素）的测定v二、维生素二、维生素B2 的测定的测定v三、维生素三、维生素C的测定的测定9维生素的测医学宣教一、维生素一、维生素B1（硫胺素）的测定（硫胺素）的测定v（一）原理
8、：硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成噻嘧色素，在紫外（一）原理：硫胺素在碱性铁氰化钾溶液中被氧化成噻嘧色素，在紫外线照射下发出荧光。没有其他物质干扰时，此荧光相对强度与噻嘧色素线照射下发出荧光。没有其他物质干扰时，此荧光相对强度与噻嘧色素量成正比，即与溶液中硫胺素量成正比。量成正比，即与溶液中硫胺素量成正比。v（二）测定：依次对样品进行提取和净化。（二）测定：依次对样品进行提取和净化。v荧光测定条件：激发波长荧光测定条件：激发波长365nm，发射波长，发射波长435nm；激发波狭缝；激发波狭缝5nm，发射波狭缝发射波狭缝5nm。v依次测定下列荧光强度：依次测定下列荧光强度：试样空白荧光强度试样
9、空白荧光强度(试样反应瓶试样反应瓶A)；标准空标准空白荧光强度白荧光强度(标准反应瓶标准反应瓶A)；试样荧光强度；试样荧光强度(试样反应瓶试样反应瓶B)；标准荧标准荧光强度光强度(标准反应瓶标准反应瓶B)。v结果按公式计算结果按公式计算10维生素的测医学宣教11维生素的测医学宣教二、维生素二、维生素B2 的测定的测定v（一）原理：核黄素在（一）原理：核黄素在440500nm波长光照射下发生黄绿色荧光。在稀波长光照射下发生黄绿色荧光。在稀溶液中其荧光相对强度与核黄素的浓度成正比。在波长溶液中其荧光相对强度与核黄素的浓度成正比。在波长525nm下测定其下测定其荧光相对强度。试液再加入低亚硫酸钠荧光
10、相对强度。试液再加入低亚硫酸钠(Na2S204)，将核黄素还原为无荧，将核黄素还原为无荧光的物质，然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度，两者之差即为光的物质，然后再测定试液中残余荧光杂质的荧光强度，两者之差即为食品中核黄素所产生的荧光强度。食品中核黄素所产生的荧光强度。v（二）测定：样品制备；核黄素吸附柱；过柱与洗脱；标准曲线制备。（二）测定：样品制备；核黄素吸附柱；过柱与洗脱；标准曲线制备。v于激发光波长于激发光波长440nm，发射光波长，发射光波长525nm，测量试样管及标准管的荧光，测量试样管及标准管的荧光值。待试样及标准的荧光值测量后，在各管的剩余液值。待试样及标准的荧光值测量后，在
11、各管的剩余液(约约5mL7mL)中加中加 O.1mL 20低亚硫酸钠溶液，立即混匀，在低亚硫酸钠溶液，立即混匀，在20s内测出各管的荧光值，内测出各管的荧光值，作各自的空白值。作各自的空白值。v结果按公式计算：结果按公式计算：12维生素的测医学宣教13维生素的测医学宣教三、维生素三、维生素C的测定的测定v（一）原理：总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸，样品中（一）原理：总抗坏血酸包括还原型、脱氢型和二酮古乐糖酸，样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与还原型抗坏血酸经活性炭氧化为脱氢抗坏血酸，再与2.4二硝基苯肼作二硝基苯肼作用生成红色脎，根据脎在用生成红色脎，根据脎在H2
12、SO4溶液中的含量与总抗坏血酸成正比，进溶液中的含量与总抗坏血酸成正比，进行比色定量。行比色定量。v（二）测定：样品的制备（二）测定：样品的制备；绘制标准曲线。按公式计算：；绘制标准曲线。按公式计算：14维生素的测医学宣教15维生素的测医学宣教小小 结结v本章概述了维生素常用的荧光法、高效液相色谱法、化学滴定法等几种本章概述了维生素常用的荧光法、高效液相色谱法、化学滴定法等几种测定方法。通常，这些方法可用于多种维生素和食品基质的分析，但其测定方法。通常，这些方法可用于多种维生素和食品基质的分析，但其分析方法需能够适合于待分析物质及其生物基质，其中包括样品的制备、分析方法需能够适合于待分析物质及
13、其生物基质，其中包括样品的制备、提取和定量测定。在使用提取和定量测定。在使用HPLC的色谱分析法时，方法的有效性尤为重要，的色谱分析法时，方法的有效性尤为重要，因为这些方法着重于化合物的分离，而不是鉴定，因此，包括化合物的因为这些方法着重于化合物的分离，而不是鉴定，因此，包括化合物的定性鉴定以及定量测定都同样是非常重要，且十分必要的。定性鉴定以及定量测定都同样是非常重要，且十分必要的。16维生素的测医学宣教习题与思考题习题与思考题1 对于某一特定的维生素，在选择分析方法时应考虑哪些因素对于某一特定的维生素，在选择分析方法时应考虑哪些因素?2 大多数维生素定量方法中，维生素必须先从食品中提取出来，通常使用哪大多数维生素定量方法中，维生素必须先从食品中提取出来，通常使用哪些方法提取维生素些方法提取维生素?对于水溶性维生素和脂溶性维生素，分别给出一个适对于水溶性维生素和脂溶性维生素，分别给出一个适当的提取方法。当的提取方法。3 维生素维生素A 比色法测定原理？比色法测定原理？4 在生产和储备食品过程中，在生产和储备食品过程中，L-抗坏血酸能被氧化成抗坏血酸能被氧化成L-脱氢抗坏血酸。你如脱氢抗坏血酸。你如何用何用2,6-二氯酚靛酚滴定法来测定总的维生素二氯酚靛酚滴定法来测定总的维生素C含量，以及如何分别测定含量，以及如何分别测定这两种形式？这两种形式？17维生素的测医学宣教
