1、肠杆菌科知识讲座肠杆菌科知识讲座第一节第一节 埃希菌属埃希菌属（Escherichia)埃希菌属有埃希菌属有5个种，个种，其中最重要的是大肠其中最重要的是大肠埃希菌俗称大肠杆菌埃希菌俗称大肠杆菌（E.coli)，是最常见，是最常见的临床分离菌。的临床分离菌。肠杆菌科知识讲座2一、形态及染色特性一、形态及染色特性 革兰氏阴性小杆菌，散在或成对，周毛菌，有菌毛。革兰氏阴性小杆菌，散在或成对，周毛菌，有菌毛。肠杆菌科知识讲座3二、培养特性二、培养特性1.普通培养基上生长良好，光滑、普通培养基上生长良好，光滑、湿润、半透明、灰白色菌落；湿润、半透明、灰白色菌落；2.麦康凯琼脂上形成红色菌落，麦康凯琼脂
2、上形成红色菌落，伊红美蓝琼脂上产生黑色带金属伊红美蓝琼脂上产生黑色带金属光泽菌落；光泽菌落；3.致病菌株在绵羊血平板上呈致病菌株在绵羊血平板上呈型溶血；型溶血；4.生化特性：糖发酵试验（发酵乳糖）生化特性：糖发酵试验（发酵乳糖）和和IMViC（+-）试验。）试验。H2S阴性。阴性。麦康凯培养基麦康凯培养基肠杆菌科知识讲座4三、抗原及血清型三、抗原及血清型（一）抗原（一）抗原1.菌体抗原（菌体抗原（O抗原）：抗原）：其成分为其成分为LPS的多糖侧链。的多糖侧链。173种，耐种，耐热，热，1个菌株仅含个菌株仅含1种。种。2.荚膜抗原（荚膜抗原（K抗原）：抗原）：其成分多数为多糖（其成分多数为多糖（
3、K88、K99为蛋白为蛋白质），质），80种，种，1个菌株可含个菌株可含1-2种甚至无。根据对热的耐受程度不种甚至无。根据对热的耐受程度不同分同分L、A和和B型。型。3.3.鞭毛抗原（鞭毛抗原（H抗原）：抗原）：其成分为蛋白质，不耐热，其成分为蛋白质，不耐热，55种，种，1个菌株仅含个菌株仅含1种。种。4.（二）血清型（抗原式）（二）血清型（抗原式）5.表示方法：表示方法：O：K：H，如：如：O8：K23(L)：H19 肠杆菌科知识讲座5H抗原抗原(鞭毛鞭毛)O抗原抗原(LPS侧链侧链)K抗原抗原或或Vi(荚膜荚膜)F抗原抗原(菌毛菌毛)复杂的抗原构造复杂的抗原构造 肠杆菌科知识讲座6四、致病
4、性四、致病性根据毒力因子与发病机制不同，将病原性大肠杆菌分为根据毒力因子与发病机制不同，将病原性大肠杆菌分为5类：类：（1）产肠毒素大肠杆菌（）产肠毒素大肠杆菌（ETEC）（2）产类志贺毒素大肠杆菌（）产类志贺毒素大肠杆菌（SLTEC）（3）肠致病性大肠杆菌（）肠致病性大肠杆菌（EPEC）（4）尿道致病性大肠杆菌（）尿道致病性大肠杆菌（UPEC）（5）败血性大肠杆菌（）败血性大肠杆菌（SEPEC）肠杆菌科知识讲座7 （一）产肠毒素大肠杆菌（一）产肠毒素大肠杆菌（ETEC）引起人和动物腹泻，主要毒力因子有两类：引起人和动物腹泻，主要毒力因子有两类：1.黏附素（定居因子）：黏附素（定居因子）：菌毛
5、，能黏附宿主的小肠上皮菌毛，能黏附宿主的小肠上皮 细胞，虽不是直接的致病因子，却是首要的毒力因子细胞，虽不是直接的致病因子，却是首要的毒力因子。2.肠毒素：肠毒素：分泌到胞外的一种蛋白质性毒素。分泌到胞外的一种蛋白质性毒素。3.（1）不耐热肠毒素（）不耐热肠毒素（heat-labile enterotoxin,LT)4.对热敏感，可转变成类毒素，具有对热敏感，可转变成类毒素，具有A和和B亚单位。亚单位。5.（2）耐热肠毒素（）耐热肠毒素（heat-stable enterotoxin,ST)6.耐热，分子量小，无免疫原性。耐热，分子量小，无免疫原性。肠杆菌科知识讲座8（二）产类志贺毒素大肠杆菌
6、（二）产类志贺毒素大肠杆菌（SLTEC）引起猪水肿病，有两类毒力因子：引起猪水肿病，有两类毒力因子：1.黏附性菌毛黏附性菌毛2.F18，有助于细菌在肠黏膜上皮细胞定居和繁有助于细菌在肠黏膜上皮细胞定居和繁殖。殖。2.致水肿病致水肿病2型类志贺毒素型类志贺毒素3.直接导致该病发生的主要毒力因子。直接导致该病发生的主要毒力因子。肠杆菌科知识讲座9仔猪黄痢：仔猪黄痢：本病发生于一周以内的仔猪，以一至三日龄最为常见，本病发生于一周以内的仔猪，以一至三日龄最为常见，一周龄以后不发生。同窝发病率很高在一周龄以后不发生。同窝发病率很高在90%以上。以上。病死率很高，有的全窝死亡。病死率很高，有的全窝死亡。肠
7、杆菌科知识讲座10 五、诊断五、诊断n标本采集：标本采集：根据临床疾病类型的不同，采集适当的根据临床疾病类型的不同，采集适当的标本。如败血症病例采集病变的内脏组织，腹泻病例标本。如败血症病例采集病变的内脏组织，腹泻病例采集小肠内容物。采集小肠内容物。n检查方法：检查方法：（一）分离培养：选择培养基（一）分离培养：选择培养基 （二）生化试验：糖发酵、（二）生化试验：糖发酵、IMViC试验、试验、H2S阴性（三阴性（三 糖铁培养基）。糖铁培养基）。（三）血清学试验：玻片凝集试验鉴定血清型（三）血清学试验：玻片凝集试验鉴定血清型肠杆菌科知识讲座11微生物学诊断微生物学诊断n对败血症病例可无菌采集其病
8、变的内脏组织，直接在血琼脂或麦康凯平板上划线分离培养。n对幼畜腹泻及猪水肿病病例应取其各段小肠内容物或粘膜刮取物以及相应肠段的肠系膜淋巴结，分别在麦康凯平板和血平板上划线分离培养。n挑取麦康凯平板上的红色菌落或血平板上呈溶血的典型菌落，分别转种三糖铁（TSI）培养基和普通琼脂斜面做初步生化鉴定和纯培养。n将TSI琼脂反应模式符合埃希菌属的生长物或其相应的普通斜面纯培养物做O抗原鉴定。n进而检测毒力因子，便可确定其属于何类致病性大肠杆菌。肠杆菌科知识讲座12移植移植CAYECAYE培养基培养基大肠杆菌分离鉴定程序大肠杆菌分离鉴定程序病料病料粪便或肠内容物及肠粘膜刮取物粪便或肠内容物及肠粘膜刮取物
9、麦康凯或伊红美兰琼脂平板划线分离麦康凯或伊红美兰琼脂平板划线分离血、肠淋巴结或其他病变组织血、肠淋巴结或其他病变组织血琼脂和麦康凯琼脂平板划线分离血琼脂和麦康凯琼脂平板划线分离挑取疑似大肠杆菌菌落挑取疑似大肠杆菌菌落510个以上分别同时接种个以上分别同时接种TSITSI琼脂和普通琼脂斜面琼脂和普通琼脂斜面革兰氏染色镜检形态，革兰氏染色镜检形态，不符合者可终止鉴定不符合者可终止鉴定生化试验证实为生化试验证实为大肠杆菌大肠杆菌血清型鉴定血清型鉴定ETECETEC菌株毒力因子鉴定菌株毒力因子鉴定移植粘附素专用培养基移植粘附素专用培养基肠毒素鉴定（肠毒素鉴定（LTLT和和STST）粘附素抗原定型粘附素
10、抗原定型猪水肿病菌株猪水肿病菌株Stx2e鉴定鉴定TSI呈呈A（K）/A反应者，其反应者，其TSI +（-），），-生长物或普通斜面纯菌生长物或普通斜面纯菌肠杆菌科知识讲座13六、防治六、防治目前国内外已有多种疫苗预防大肠杆菌目前国内外已有多种疫苗预防大肠杆菌病，如全菌灭活苗、亚单位疫苗、类毒病，如全菌灭活苗、亚单位疫苗、类毒素苗、基因工程疫苗等。素苗、基因工程疫苗等。肠杆菌科知识讲座14第二节第二节 沙门氏菌属（沙门氏菌属（Salmonella)绝大多数沙门氏菌对人绝大多数沙门氏菌对人和动物有致病性，人类和动物有致病性，人类食物中毒的主要病原之食物中毒的主要病原之一，在公共卫生上占有一，在公
11、共卫生上占有重要地位。重要地位。肠杆菌科知识讲座15一、形态及染色一、形态及染色与大肠杆菌相似，与大肠杆菌相似，除鸡白痢和鸡伤寒除鸡白痢和鸡伤寒沙门氏菌无鞭毛不沙门氏菌无鞭毛不运动外，其余均以运动外，其余均以周鞭毛运动。周鞭毛运动。肠杆菌科知识讲座16二、培养及生化特性二、培养及生化特性麦康凯琼脂培养基：发酵乳糖（大肠杆菌）；不发酵乳糖（沙门氏菌）麦康凯琼脂培养基：发酵乳糖（大肠杆菌）；不发酵乳糖（沙门氏菌）在选择培养基上因不发酵乳糖而呈无色菌落。在选择培养基上因不发酵乳糖而呈无色菌落。IMViC试验：试验：-+-+；多数菌株；多数菌株H2S阳性。阳性。肠杆菌科知识讲座17三、抗原及血清型三、
12、抗原及血清型（一）抗原（一）抗原1.菌体抗原（菌体抗原（O抗原）：抗原）：其成分为其成分为LPS的多糖侧链。的多糖侧链。58种，耐种，耐 热，热，1个菌株可含多种，以阿拉伯数字表示。个菌株可含多种，以阿拉伯数字表示。2.荚膜抗原（荚膜抗原（K抗原）：抗原）：与毒力有关，又称与毒力有关，又称Vi抗原。有的菌株有，抗原。有的菌株有，有的菌株无。有的菌株无。3.鞭毛抗原（鞭毛抗原（H抗原）：抗原）：其成分为蛋白质，不耐热，其成分为蛋白质，不耐热，63种种,分为两相：分为两相：（1）第）第1相（特异相）：小写英文字母表示相（特异相）：小写英文字母表示 （2）第）第2相（非特异相）：阿拉伯数字表示相（非
13、特异相）：阿拉伯数字表示肠杆菌科知识讲座18n表示方法：表示方法：O抗原：第抗原：第1相相H抗原：第抗原：第2相相H抗原抗原 如：如：1，4，5，12：i:1,2 有有Vi抗原的，则表示为：抗原的，则表示为：（二）血清型（抗原式）（二）血清型（抗原式）O抗原：抗原：Vi抗原：第抗原：第1相相H抗原：第抗原：第2相相H抗原抗原肠杆菌科知识讲座19四、致病性四、致病性多数具有致病性，是一种重要的人畜共患病原菌，很容易在动物与多数具有致病性，是一种重要的人畜共患病原菌，很容易在动物与动物、动物与人、人与人之间间接或直接传播。根据对宿主适动物、动物与人、人与人之间间接或直接传播。根据对宿主适应性不同，
14、可分为：应性不同，可分为：1.专嗜性：专嗜性：如鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌、马流产、牛流产、羊流如鸡白痢、鸡伤寒沙门氏菌、马流产、牛流产、羊流产沙门菌产沙门菌、猪伤寒沙门菌、猪伤寒沙门菌 2.2.偏嗜性：偏嗜性：如猪霍乱沙门氏菌和都柏林沙门菌如猪霍乱沙门氏菌和都柏林沙门菌 3.3.泛嗜性：泛嗜性：如鼠伤寒和肠炎沙门氏菌如鼠伤寒和肠炎沙门氏菌肠杆菌科知识讲座20致病机理致病机理 与侵袭有关。与侵袭有关。侵袭的两个途径：侵袭的两个途径：1.通过侵袭动物肠道粘膜表面肠系膜淋巴结集结（通过侵袭动物肠道粘膜表面肠系膜淋巴结集结（Payers patch）的淋巴上皮中的特殊抗原捕获细胞（）的淋巴上皮中的特殊抗
15、原捕获细胞（microfold cell，M细胞），进入上皮下层组织细胞），进入上皮下层组织 2.直接侵袭直接侵袭M细胞周围具有吸收能力的上皮细胞，通过上皮细细胞周围具有吸收能力的上皮细胞，通过上皮细胞进入上皮下层组织。胞进入上皮下层组织。细菌在膜小泡中存活、繁殖并被释放，被巨噬细胞吞噬或皮下细菌在膜小泡中存活、繁殖并被释放，被巨噬细胞吞噬或皮下淋巴组织吞噬。在巨噬细胞中生存，随巨噬细胞进入肠系膜淋巴结，淋巴组织吞噬。在巨噬细胞中生存，随巨噬细胞进入肠系膜淋巴结，最终侵入肝、脾、骨髓等不同器官或组织，进一步产生毒素，从而最终侵入肝、脾、骨髓等不同器官或组织，进一步产生毒素，从而引起各种临床症状
16、。巨噬细胞为沙门菌提供了逃避中性粒细胞和体引起各种临床症状。巨噬细胞为沙门菌提供了逃避中性粒细胞和体液免疫的攻击。液免疫的攻击。对本菌毒力因子的研究长期以来未能取得突破性进展，目前对本菌毒力因子的研究长期以来未能取得突破性进展，目前从毒力岛及毒力基因水平研究其致病机理，将认识提高到新水平。从毒力岛及毒力基因水平研究其致病机理，将认识提高到新水平。肠杆菌科知识讲座21 （一）分离培养：选择培养基（一）分离培养：选择培养基 （二）生化试验：糖发酵、（二）生化试验：糖发酵、IMViC试验、试验、H2S阳性（三阳性（三 糖铁培养基）。糖铁培养基）。（三）血清学试验：玻片凝集试验鉴定血清型（三）血清学试
17、验：玻片凝集试验鉴定血清型五、诊断五、诊断肠杆菌科知识讲座22 沙沙门门氏氏菌菌属属常常规规生生化化项项目目鉴鉴定定 病病 料料 未未 污污 染染者者 在在肠肠道道杆杆菌菌鉴鉴别别培培养养基基上上划划线线分分离离 用用肠肠道道杆杆菌菌增增菌菌培培养养基基增增菌菌 取取几几个个疑疑似似菌菌落落分分别别接接种种 TSI和和尿尿素素琼琼脂脂 普普通通斜斜面面纯纯培培养养 菌菌株株鉴鉴定定 报报告告初初步步鉴鉴定定结结果果，必必要要时时进进一一步步鉴鉴定定 沙沙门门氏氏菌菌 AF 群群多多价价 O 血血清清玻玻板板凝凝集集 系系统统生生化化试试验验 血血清清型型鉴鉴定定 污污染染者者 TSI 呈呈 K
18、(A)/A 反反应应和和尿尿素素分分解解阴阴性性的的 TSI 培培养养物物+(-)，+(-)报报告告最最后后鉴鉴定定结结果果 沙门杆菌属的分离鉴定程序沙门杆菌属的分离鉴定程序肠杆菌科知识讲座23复习思考题复习思考题1.大肠杆菌和沙门氏菌的血清型表示方法。大肠杆菌和沙门氏菌的血清型表示方法。2.大肠杆菌和沙门氏菌的鉴别诊断要点。大肠杆菌和沙门氏菌的鉴别诊断要点。肠杆菌科知识讲座24第三章第三章 巴氏杆菌科及相关属巴氏杆菌科及相关属巴氏杆菌属巴氏杆菌属里氏杆菌属里氏杆菌属嗜血杆菌属嗜血杆菌属肠杆菌科知识讲座25 巴氏杆菌属（巴氏杆菌属（Pasteurella)本属细菌已报道有本属细菌已报道有20多
19、种，多杀性多种，多杀性巴氏杆菌巴氏杆菌(P.multocidaP.multocida)是本属中最重是本属中最重要的畜禽致病菌，可引起多种动物发生要的畜禽致病菌，可引起多种动物发生出血性败血症或传染性肺炎。出血性败血症或传染性肺炎。肠杆菌科知识讲座26一、形态及染色一、形态及染色两端钝圆，中央微凸的短杆菌两端钝圆，中央微凸的短杆菌G G-菌，单个存在，有时成双排菌，单个存在，有时成双排列列,病料涂片用瑞氏染色或美病料涂片用瑞氏染色或美蓝染色时，可见典型的两极着蓝染色时，可见典型的两极着色，培养物所作的涂片，两极色，培养物所作的涂片，两极着色不明显。着色不明显。巴氏巴氏杆菌杆菌肠杆菌科知识讲座27
20、二、培养特性二、培养特性 对营养要求较严格。在普通培养基上生长贫对营养要求较严格。在普通培养基上生长贫瘠，血液或血清培养基中生长良好，长成灰瘠，血液或血清培养基中生长良好，长成灰白色露珠状针尖大小菌落，不溶血，麦康凯白色露珠状针尖大小菌落，不溶血，麦康凯培养上不生长。培养上不生长。肠杆菌科知识讲座28 1.菌体抗原菌体抗原:16个型，个型，以阿拉伯数字表示以阿拉伯数字表示 2.荚膜抗原荚膜抗原:多糖成分，多糖成分，有有6个型，个型，大写英文字母表示大写英文字母表示 我国分离的禽多杀性巴氏杆菌以我国分离的禽多杀性巴氏杆菌以5A为多为多，其次为其次为8：A。猪以。猪以5：A和和6:B为主为主三、血
21、清三、血清型型肠杆菌科知识讲座29 本菌抵抗力不强，普通消毒药常用浓度本菌抵抗力不强，普通消毒药常用浓度对本菌都有很好的消毒力。在无菌蒸馏水和对本菌都有很好的消毒力。在无菌蒸馏水和生理盐水中很快死亡。冻干菌种在低温中可生理盐水中很快死亡。冻干菌种在低温中可保存长达保存长达26年年。四、四、抵抗力抵抗力肠杆菌科知识讲座30六、微生物学诊断六、微生物学诊断 1.1.涂片或触片镜检涂片或触片镜检 染色（美蓝或瑞氏），两极着色染色（美蓝或瑞氏），两极着色 2.2.分离培养分离培养 麦康凯琼脂不生长麦康凯琼脂不生长,血平板不溶血血平板不溶血 3.3.动物试验动物试验 病料悬液或培养物接种小白鼠病料悬液或
22、培养物接种小白鼠,引起小白鼠迅速死亡引起小白鼠迅速死亡 肠杆菌科知识讲座32病变组织分离培养纯培养动物接种触片镜检革兰氏染色，镜检生化鉴定肠杆菌科知识讲座33 里氏杆菌属（里氏杆菌属（Riemerella)鸭疫里氏杆菌（鸭疫里氏杆菌（R.anatipestiferR.anatipestifer）是）是本属的代表种，原名鸭疫巴氏杆菌，是雏本属的代表种，原名鸭疫巴氏杆菌，是雏鸭传染性浆膜炎的病原菌。鸭传染性浆膜炎的病原菌。肠杆菌科知识讲座34一一.形态及染色形态及染色 菌体呈杆状或椭圆形，多为单个，少菌体呈杆状或椭圆形，多为单个，少数成双或短链排列。可形成荚膜，无数成双或短链排列。可形成荚膜，无芽
23、胞，无鞭毛。芽胞，无鞭毛。G G-菌，两极着色。菌，两极着色。肠杆菌科知识讲座35 营养要求较高，普通培养基和麦康凯培养基上不营养要求较高，普通培养基和麦康凯培养基上不生长，在巧克力或胰蛋白胨大豆琼脂（生长，在巧克力或胰蛋白胨大豆琼脂（TSA）平板上，）平板上，呈圆形、微突起、表面光滑、奶油状小菌落。生化试呈圆形、微突起、表面光滑、奶油状小菌落。生化试验大多阴性，不发酵葡萄糖和蔗糖，与多杀性巴氏杆验大多阴性，不发酵葡萄糖和蔗糖，与多杀性巴氏杆菌相区别。菌相区别。二二.培养及生化特性培养及生化特性肠杆菌科知识讲座36三三.血清型血清型 21个型，以阿拉伯数字表示，我国个型，以阿拉伯数字表示，我国
24、多数属多数属1型。型。肠杆菌科知识讲座37四四.致病性致病性主要感染雏鸭，尤其主要感染雏鸭，尤其23周龄者，引起急性或慢性周龄者，引起急性或慢性的败血症和浆膜炎。的败血症和浆膜炎。肠杆菌科知识讲座38五五.诊断诊断n涂片镜检涂片镜检:两极着色两极着色n分离培养分离培养:巧克力培养基巧克力培养基n生化试验生化试验:不发酵葡萄糖和蔗糖不发酵葡萄糖和蔗糖肠杆菌科知识讲座39 嗜血杆菌属（嗜血杆菌属（Haemophilus）嗜血杆菌是一群酶系统不完全的革兰氏嗜血杆菌是一群酶系统不完全的革兰氏阴性杆菌，生长需要血液中的生长因子，阴性杆菌，生长需要血液中的生长因子，尤其是尤其是X因子和因子和V因子。因子。
25、肠杆菌科知识讲座40一、一、形态及染色形态及染色 多为短杆状，有时呈多形性，无鞭毛，无芽胞，多为短杆状，有时呈多形性，无鞭毛，无芽胞，新分离的致病菌株有荚膜。新分离的致病菌株有荚膜。G G-菌，两极着色。菌，两极着色。肠杆菌科知识讲座41二、培养特性二、培养特性 初次分离培养时供给初次分离培养时供给5%10%CO2可促进生长可促进生长,本属本属菌生长需供给菌生长需供给X因子和因子和V因子（细菌呼吸过程中起递因子（细菌呼吸过程中起递氢作用的两种脱氢辅酶），在巧克力平板上生长较佳。氢作用的两种脱氢辅酶），在巧克力平板上生长较佳。肠杆菌科知识讲座42 本属菌对外界的抵抗力不强本属菌对外界的抵抗力不强
26、,分离到分离到的嗜血杆菌要及时移植或冻干保存的嗜血杆菌要及时移植或冻干保存。三、抵抗力三、抵抗力肠杆菌科知识讲座43 可引起人和多种动物发病，其毒力因子包括荚膜、可引起人和多种动物发病，其毒力因子包括荚膜、菌毛和内毒素等。与兽医有关的嗜血杆菌有：菌毛和内毒素等。与兽医有关的嗜血杆菌有：1.副猪嗜血杆菌：副猪嗜血杆菌：可引起猪的心肌炎、腹膜炎、胸可引起猪的心肌炎、腹膜炎、胸2.膜炎及关节炎等，常与猪流感病毒联合引起猪流膜炎及关节炎等，常与猪流感病毒联合引起猪流感。感。2.副禽嗜血杆菌：副禽嗜血杆菌：可引起可引起鸡传染性鼻炎，导致产蛋量鸡传染性鼻炎，导致产蛋量 3.迅速下降。迅速下降。肠杆菌科知识
27、讲座44 五、微生物学诊断五、微生物学诊断 1.1.显微镜检查显微镜检查 ：两极着色两极着色 2.2.分离培养分离培养 ：血平板（生长不好或不长）血平板（生长不好或不长）巧克力平板（生长良好）巧克力平板（生长良好）3.3.卫星现象：卫星现象：可疑菌落可疑菌落 鲜血平板鲜血平板 再接金葡菌再接金葡菌 培养培养 卫星现象卫星现象 4.4.生化试验生化试验 5.5.血清学试验血清学试验 肠杆菌科知识讲座45复习思考题复习思考题1 多杀性巴氏杆菌的形态染色及培养方面多杀性巴氏杆菌的形态染色及培养方面 有何特征？如何进行微生物学诊断？有何特征？如何进行微生物学诊断？2 鸭疫里氏杆菌的微生物学诊断。鸭疫里氏杆菌的微生物学诊断。3 嗜血杆菌为什么需要用巧克力琼脂培养基嗜血杆菌为什么需要用巧克力琼脂培养基 进行分离培养？进行分离培养？4 什么叫什么叫“卫星现象卫星现象”？肠杆菌科知识讲座46
