1、1生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022一、基因治疗一、基因治疗基因治疗（基因治疗（gene therapy）应用分子生物应用分子生物学的技术向有功能缺陷的细胞补充相应功能学的技术向有功能缺陷的细胞补充相应功能基因，以纠正或补偿其基因缺陷，从而达到基因，以纠正或补偿其基因缺陷，从而达到治疗的目的。治疗的目的。对象：对象：体细胞体细胞 生殖细胞生殖细胞 2生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022基因治疗被认为是多种重要疾病基因治疗被认为是多种重要疾病包括肿瘤治疗的希望所在包括肿瘤治疗的希望所在3生物治疗及在
2、临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022 1990 Ashanti de Silva，USA 1999 Jesse Gelsinger，USA 2000 Alain Fischer，France 2003 Adrian Thrasher，UKJesse Gelsinger，1999Ashanti de Silva，1990Alain Fischer，2003（一）基因治疗的曲折发展（一）基因治疗的曲折发展2003 Adrian Thrasher1990 Fresh Anderson1969 Concept of gene therapy4生物治疗及在临床肿瘤治疗
3、中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022 19991999年美国年美国 Univ.of Pennsylvania Univ.of Pennsylvania 一例患者一例患者在接受腺病毒介导的基因治疗过程中死亡。在接受腺病毒介导的基因治疗过程中死亡。2002-20032002-2003年法国年法国Necker-EnfantsNecker-Enfants儿童医院儿童医院1111例例SCIDSCID患者接受了逆转录病毒介导的基因治疗患者接受了逆转录病毒介导的基因治疗其中其中3 3例治愈后出现白血病样症状。例治愈后出现白血病样症状。Jesse Gelsinger，1999Ashan
4、ti de Silva，1990Alain Fischer，2003基因治疗遭遇的挫折基因治疗遭遇的挫折Nature 2003,January,421,305Nature Biotechnology 2003,Febuary,vol 21,1215生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022The Cause of Leukemia:Insertion of activating retrovirus vector in Pro-oncogene LOM2 Locus.EX 1Patient 5 IntegrationPatient 4 Integrat
5、ionMFG CMFG CEX 2EX 6LOM26生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022全世界基因治疗临床试验共全世界基因治疗临床试验共17141714项项USAUAAustraliaGermany7生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022（二）（二）Strategy of Gene TherapyTo transfer a repair gene into a patient,the researchers must go through several steps:1.They must isola
6、te the disease-related gene;2.It must be packaged in a vector,usually a disabled virus that cannot reproduce and cause disease,but that can act like a delivery truck to transport the gene inside the patientcells;3.Once inside the bodys cells,the new gene can begin to function and restore health.8生物治
7、疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022基因治疗的必要条件基因治疗的必要条件1、发病机制在、发病机制在DNA水平上已经清楚；水平上已经清楚；2、要转移的基因已经克隆分离，其表达产物有详、要转移的基因已经克隆分离，其表达产物有详尽的了解；尽的了解；3、该基因正常表达的组织可在体外进行遗传操作、该基因正常表达的组织可在体外进行遗传操作理想的基因治疗还必须：理想的基因治疗还必须：1、外源基因可有效导入靶细胞、外源基因可有效导入靶细胞2、外源基因能在靶细胞中长期稳定存留、外源基因能在靶细胞中长期稳定存留3、导入基因能适量表达、导入基因能适量表达4、导入基因的方法及
8、载体对宿主细胞安全无害、导入基因的方法及载体对宿主细胞安全无害9生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022腺病毒模式图腺病毒模式图10生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022 利用第2代腺病毒载体（E1区和部分E3区缺失，E2A部分修饰），将人内皮抑素基因（human endostatin gene）的表达盒，插入E1区，构建新型重组人内皮抑素腺病毒。构建新型重组人内皮抑素腺病毒构建新型重组人内皮抑素腺病毒11生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022Fundamen
9、tals of Gene Therapy12生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022The Gene Therapy of Severe Combine Immune Deficiency（SCID）13生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022（三）肿瘤基因治疗的研究策略（三）肿瘤基因治疗的研究策略1、抗肿瘤细胞因子基因治疗、抗肿瘤细胞因子基因治疗 通过将抗肿瘤细胞因子基因转入肿瘤细胞或机体特定细胞使其通过将抗肿瘤细胞因子基因转入肿瘤细胞或机体特定细胞使其持续高效分泌这种细胞因子以达到杀瘤目的的疗法。（如肿
10、瘤持续高效分泌这种细胞因子以达到杀瘤目的的疗法。（如肿瘤坏死因子）。坏死因子）。2、修正肿瘤相关基因的功能、修正肿瘤相关基因的功能1）恢复抑癌基因的功能）恢复抑癌基因的功能 最具代表性的肿瘤抑制基因为最具代表性的肿瘤抑制基因为p53基因。现已有腺病毒载体携基因。现已有腺病毒载体携带的带的p53基因治疗。基因治疗。2）纠正癌基因的过度表达）纠正癌基因的过度表达 利用反义利用反义RNA、核酸或肽核酸等反义技术及、核酸或肽核酸等反义技术及RNA干涉技术等干涉技术等 特异性地封闭基因表达的特性特异性地封闭基因表达的特性,抑制一些癌基因的过度表达抑制一些癌基因的过度表达,以以 达到治疗疾病的目的。如利用
11、反义癌基因对恶性肿瘤的治疗。达到治疗疾病的目的。如利用反义癌基因对恶性肿瘤的治疗。14生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/20223、自杀基因治疗：、自杀基因治疗：这类治疗方案的原理是将编码某种酶的这类治疗方案的原理是将编码某种酶的基因（自杀基因）转染到肿瘤细胞中，这种酶能使某种药基因（自杀基因）转染到肿瘤细胞中，这种酶能使某种药物转化为对细胞有害的物质，使肿瘤细胞物转化为对细胞有害的物质，使肿瘤细胞DNA不能复制不能复制而死亡，这种药物对正常细胞无毒害作用。例如：而死亡，这种药物对正常细胞无毒害作用。例如：5氟氟胞嘧啶系统。胞嘧啶系统。4、药物抗性基因
12、转移治疗：、药物抗性基因转移治疗：增强肿瘤细胞药物敏感性和提增强肿瘤细胞药物敏感性和提高正常细胞对化疗药物的耐受性。给肿瘤细胞转入某些药高正常细胞对化疗药物的耐受性。给肿瘤细胞转入某些药物敏感基因可增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性；相反，物敏感基因可增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性；相反，耐药基因治疗则是对正常细胞进行修饰，使其具有比肿瘤耐药基因治疗则是对正常细胞进行修饰，使其具有比肿瘤细胞更强的对化疗药物的耐受力。细胞更强的对化疗药物的耐受力。15生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022（四）基因治疗的载体（四）基因治疗的载体 基因治疗载体可分两大类基
13、因治疗载体可分两大类:病毒性载体和非病病毒性载体和非病毒性载体。毒性载体。1、病毒性载体：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病、病毒性载体：逆转录病毒、腺病毒、腺相关病毒、痘苗病毒、疱疹病毒等；毒、痘苗病毒、疱疹病毒等；2、非病毒载体：裸露、阳离子脂质体、非病毒载体：裸露、阳离子脂质体、包装颗粒等包装颗粒等16生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022NIH&FDA:AAV Vector is the Most Safe Viral Vector for Gene Therapy1.Non-pathogenic，2.Inhibit replication of
14、 pathogenic virus，3.Inhibit oncogenesis17生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/20221、没有致病性没有致病性,AAV 是缺陷型病毒是缺陷型病毒,只能潜伏感染只能潜伏感染,不不 能自主复制；能自主复制；2、可特异位点整合、可特异位点整合,AAV 可特异整合于人可特异整合于人19 号染色号染色 体上体上,从而避免随机整合导致细胞突变的危险。而且从而避免随机整合导致细胞突变的危险。而且 染色体的整合可使转导的基因长期稳定表达；染色体的整合可使转导的基因长期稳定表达；3、免疫源性弱、免疫源性弱,避免了病毒自身蛋白引起的免
15、疫反应；避免了病毒自身蛋白引起的免疫反应；4、感染的宿主细胞包括静止细胞和分裂细胞。、感染的宿主细胞包括静止细胞和分裂细胞。AAV载体不能插入较大的外源基因，缺少高效的包载体不能插入较大的外源基因，缺少高效的包 装细胞，制备过程复杂，制备滴度低等缺陷。装细胞，制备过程复杂，制备滴度低等缺陷。病毒是一种可利用的基因治疗载体，它们对哺乳动物细病毒是一种可利用的基因治疗载体，它们对哺乳动物细胞的感染效率很高，能在靶细胞中高效表达目的基因。目前胞的感染效率很高，能在靶细胞中高效表达目的基因。目前认为腺相关病毒认为腺相关病毒(AAV)是人类基因治疗研究中最理想的病毒是人类基因治疗研究中最理想的病毒载体之
16、一，它较其他病毒载体有如下的优点载体之一，它较其他病毒载体有如下的优点:18生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022（五）肿瘤基因治疗的临床应用（五）肿瘤基因治疗的临床应用 肿瘤基因治疗的策略主要包括：肿瘤基因治疗的策略主要包括：抑癌基因替换治疗；抑癌基因替换治疗；抑制细胞表面生长因子受体基因治疗；抑制细胞表面生长因子受体基因治疗；抗血管生成基因治疗。抗血管生成基因治疗。其中，以其中，以p53抑癌基因替换治疗研究开展的临床试验抑癌基因替换治疗研究开展的临床试验最为广泛。目前发现多数恶性实体瘤含有最为广泛。目前发现多数恶性实体瘤含有p53的突变，临的突
17、变，临床上采用腺病毒转入野生型床上采用腺病毒转入野生型p53基因可在体内外抑制含有基因可在体内外抑制含有p53的突变癌细胞的生长，在此基础上研究者们开展了相的突变癌细胞的生长，在此基础上研究者们开展了相关的临床试验。关的临床试验。19生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/20221、重组人重组人p53腺病毒注射液（今又生），腺病毒注射液（今又生），是一种广谱抗癌药，是一种广谱抗癌药，用于治疗头颈部鳞癌等恶性肿瘤，是经国家药品食品监督管理用于治疗头颈部鳞癌等恶性肿瘤，是经国家药品食品监督管理局批准的世界首个基因治疗药物。局批准的世界首个基因治疗药物。2、安柯
18、瑞（重组人、安柯瑞（重组人5型腺病毒注射液）型腺病毒注射液）：它利用肿瘤细胞内：它利用肿瘤细胞内P53基因及其通路的变异，能识别肿瘤细胞并将其杀死。适应基因及其通路的变异，能识别肿瘤细胞并将其杀死。适应症：晚期鼻咽癌。症：晚期鼻咽癌。3、恩度、恩度(针剂针剂)：重组人血管内皮抑制素注射液重组人血管内皮抑制素注射液，作用机理是作用机理是通过抑制形成血管的内皮细胞迁移来达到抑制肿瘤新生血管的通过抑制形成血管的内皮细胞迁移来达到抑制肿瘤新生血管的生成，阻断了肿瘤细胞的营养供给，从而达到抑制肿瘤增殖或生成，阻断了肿瘤细胞的营养供给，从而达到抑制肿瘤增殖或转移目的。转移目的。目前在我国已上市的肿瘤基因治
19、疗药物目前在我国已上市的肿瘤基因治疗药物20生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022二、肿瘤免疫治疗二、肿瘤免疫治疗 21生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022（一）肿瘤免疫理论的建立（一）肿瘤免疫理论的建立肿瘤免疫的概念起源于上世纪初。肿瘤免疫的概念起源于上世纪初。1909年年Ehrlich首先提首先提出，免疫系统不仅负责防御微生物侵犯，而且能从机体内出，免疫系统不仅负责防御微生物侵犯，而且能从机体内清除改变了的宿主成分。清除改变了的宿主成分。并提出了细胞免疫直接对抗肿瘤并提出了细胞免疫直接对抗肿瘤的概
20、念，此后人们认识到癌细胞是改变了的宿主成分。的概念，此后人们认识到癌细胞是改变了的宿主成分。上个世纪末，感染性疾病病原的发现和接种疫苗可以诱导上个世纪末，感染性疾病病原的发现和接种疫苗可以诱导免疫系统产生对抗疾病的保护效应，对医学研究产生了深免疫系统产生对抗疾病的保护效应，对医学研究产生了深远的影响。正是以这些理论和原理为背景，产生了最初的远的影响。正是以这些理论和原理为背景，产生了最初的理论，理论，提出抗肿瘤保护性免疫反应的存在以及诱导和扩大提出抗肿瘤保护性免疫反应的存在以及诱导和扩大这种反应的可能性。这种反应的可能性。22生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10
21、/14/2022 六十年代经六十年代经Thomas、Burnet和和Good等人将该观点系等人将该观点系统化，提出了免疫监视学说。免疫监视学说的中心思想统化，提出了免疫监视学说。免疫监视学说的中心思想是：是：免疫系统具有一个十分完备的监视功能，能准确地免疫系统具有一个十分完备的监视功能，能准确地分辨分辨“自己自己”和和“非己非己”的成分；的成分；它不仅能清除外界侵它不仅能清除外界侵入的各种微生物，排斥同种异体移植物，而且还能消灭入的各种微生物，排斥同种异体移植物，而且还能消灭机体内突变的细胞，防止肿瘤的生长，保护机体的健康。机体内突变的细胞，防止肿瘤的生长，保护机体的健康。每当免疫监视功能由于
22、这种或那种原因被消弱时，便为每当免疫监视功能由于这种或那种原因被消弱时，便为肿瘤的发生提供了有利条件；如果机体不具备免疫监视肿瘤的发生提供了有利条件；如果机体不具备免疫监视功能，人类的肿瘤发病率会大大的提高。功能，人类的肿瘤发病率会大大的提高。23生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022（二）肿瘤免疫治疗的方法（二）肿瘤免疫治疗的方法1 1、细胞因子疗法细胞因子疗法 (IL-2,IFN-,IL-12,TNF-a)(IL-2,IFN-,IL-12,TNF-a)；2 2、生物分子靶向药物：、生物分子靶向药物：1 1）美罗华）美罗华 注射液（利妥昔单抗注射
23、液注射液（利妥昔单抗注射液 ）利妥昔单抗是一种嵌合鼠利妥昔单抗是一种嵌合鼠/人的单克隆抗体，该抗体与细胞膜的人的单克隆抗体，该抗体与细胞膜的CD20CD20抗原结合。如与抗原结合。如与B B细胞上的细胞上的CD20CD20抗原结合，可引发抗原结合，可引发B B细胞的溶细胞的溶解反应。适用于复发或化疗抵抗性解反应。适用于复发或化疗抵抗性B B淋巴细胞型非何杰金氏淋巴瘤淋巴细胞型非何杰金氏淋巴瘤的病人。的病人。2 2）抗人细胞表皮生长因子的单克隆抗体（）抗人细胞表皮生长因子的单克隆抗体（C225C225）西妥昔单体（西妥昔单体（cetuximabcetuximab）为）为IgG1IgG1单克隆抗体
24、，是表皮生长因子受单克隆抗体，是表皮生长因子受体（体（EGFREGFR）阻止剂，通过干扰肿瘤细胞表面的）阻止剂，通过干扰肿瘤细胞表面的EGFREGFR蛋白质的生长，蛋白质的生长，达到抗肿瘤的目的。目前用于治疗晚期结肠癌。达到抗肿瘤的目的。目前用于治疗晚期结肠癌。24生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/20223 3）抗血管内皮生长因子（）抗血管内皮生长因子（VEGFVEGF）配体的单克隆抗体（）配体的单克隆抗体（AvastinAvastin）:研究发現研究发現VEGFVEGF在多种肿瘤，如脑瘤、肺癌、乳癌、消化道肿瘤在多种肿瘤，如脑瘤、肺癌、乳癌、消化道
25、肿瘤及泌尿道肿瘤等均有过度表达。及泌尿道肿瘤等均有过度表达。AvastinAvastin通过抑制通过抑制VEGFVEGF的生物学活的生物学活性，减少肿瘤新血管的形成，从而抑制肿瘤的生长和转移，适用于性，减少肿瘤新血管的形成，从而抑制肿瘤的生长和转移，适用于联合以联合以5 5FUFU为基础的化疗方案一线治疗转移性结直肠癌。为基础的化疗方案一线治疗转移性结直肠癌。4 4）表皮生长因子受体（）表皮生长因子受体（EGFREGFR）酪氨酸激酶抑制剂（）酪氨酸激酶抑制剂（IressaIressa）；）；药名吉非替尼，是一种选择性表皮生长因子受体（药名吉非替尼，是一种选择性表皮生长因子受体（EGFREGFR
26、）酪）酪 氨氨酸激酶抑制剂，该酶通常表达于上皮细胞来源的实体瘤。适合于接酸激酶抑制剂，该酶通常表达于上皮细胞来源的实体瘤。适合于接受化疗的局部晚期或转移性非小细胞肺癌。受化疗的局部晚期或转移性非小细胞肺癌。5 5）表皮生长因子受体（）表皮生长因子受体（EGFREGFR）抑制剂特罗凯（）抑制剂特罗凯（Tarceva Tarceva）：）：它也是一种它也是一种EGFREGFR酪氨酸激酶结构磷酸化的阻断剂。研究显示，酪氨酸激酶结构磷酸化的阻断剂。研究显示，404085%85%的非小細胞肺癌患者的的非小細胞肺癌患者的EGFREGFR呈阳性，呈阳性，TarcevaTarceva的作用机理与的作用机理与I
27、ressaIressa相似，都是抑制在肿瘤细胞中过度表达的相似，都是抑制在肿瘤细胞中过度表达的EGFREGFR酪氨酸激酶結酪氨酸激酶結構的活性而达到治疗肿瘤的目的。構的活性而达到治疗肿瘤的目的。25生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/20226 6）甲苯磺酸索拉非尼）甲苯磺酸索拉非尼 (sorafenib)(sorafenib)，多吉美，多吉美 索拉非尼是首个口服多激酶抑制药索拉非尼是首个口服多激酶抑制药,靶向作用于肿瘤细胞和肿瘤血靶向作用于肿瘤细胞和肿瘤血管上的丝氨酸和管上的丝氨酸和(或或)苏氨酸及受体酪氨酸激酶苏氨酸及受体酪氨酸激酶,阻断信号传导阻断
28、信号传导,抑抑制肿瘤生长。制肿瘤生长。20052005年底经年底经FDAFDA批准上市批准上市,用于进展性肾脏细胞癌和用于进展性肾脏细胞癌和转移性或晚期肝细胞癌的治疗。转移性或晚期肝细胞癌的治疗。7 7）苹果酸舒尼替尼（）苹果酸舒尼替尼（sunitinibsunitinib，sutentsutent），索坦），索坦/SUTENT/SUTENT舒尼替尼是一种能抑制多个受体酪氨酸激酶的小分子，其中某些舒尼替尼是一种能抑制多个受体酪氨酸激酶的小分子，其中某些受体酪氨酸激酶参与肿瘤生长、病理性血管形成和肿瘤转移的过受体酪氨酸激酶参与肿瘤生长、病理性血管形成和肿瘤转移的过程，美国程，美国FDA 2006
29、FDA 2006年年1 1月批准舒尼替尼用于治疗胃肠道间质瘤月批准舒尼替尼用于治疗胃肠道间质瘤(GIST)(GIST)和不能手术的转移肾细胞癌（和不能手术的转移肾细胞癌（MRCCMRCC）。）。26生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/20223 3、肿瘤疫苗疗法、肿瘤疫苗疗法 肿瘤疫苗治疗肿瘤是利用肿瘤细胞抗原或相应的核酸肿瘤疫苗治疗肿瘤是利用肿瘤细胞抗原或相应的核酸 进行治疗肿瘤的方法。主要包括以下几种：进行治疗肿瘤的方法。主要包括以下几种：（1 1）基因修饰的肿瘤疫苗；基因修饰的肿瘤疫苗；（2 2）热休克蛋白疫苗；热休克蛋白疫苗；（3 3）肿瘤抗原肽
30、疫苗；肿瘤抗原肽疫苗；（4 4）核酸疫苗；核酸疫苗；（5 5）树突状细胞（树突状细胞（DCDC）疫苗）疫苗 （6 6）DC/DC/肿瘤融合细胞疫苗；肿瘤融合细胞疫苗；（7 7）CA125CA125的抗独特型抗体的抗独特型抗体ACA125ACA125疫苗；疫苗；（8 8）预防宫颈癌发生的）预防宫颈癌发生的HPVHPV疫苗。疫苗。27生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022 树突状细胞（树突状细胞（DCDC）源自骨髓中的前体细胞，是已知机）源自骨髓中的前体细胞，是已知机体内抗原呈递能力最强的细胞，比普通抗原呈递细胞强体内抗原呈递能力最强的细胞，比普通抗原
31、呈递细胞强10001000倍，它能在机体内外捕获抗原后，将信息传递给倍，它能在机体内外捕获抗原后，将信息传递给T T、B B淋巴细胞，从而引发一系列的特异性免疫应答反应。但该淋巴细胞，从而引发一系列的特异性免疫应答反应。但该种细胞在机体内含量极低，占正常人外周血白细胞的种细胞在机体内含量极低，占正常人外周血白细胞的1 1左右。左右。近年来，联合应用细胞因子体外培养大量近年来，联合应用细胞因子体外培养大量DCDC获得成功，获得成功，为其功能及分化状态的深入研究和在肿瘤生物治疗领域中为其功能及分化状态的深入研究和在肿瘤生物治疗领域中的应用创造了条件。因具有长长的树突状突起和星状多形的应用创造了条件
32、。因具有长长的树突状突起和星状多形性而得名。性而得名。28生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022树突状细胞（树突状细胞（DCDC）是功能最强的抗原递）是功能最强的抗原递呈细胞，发挥重要的抗肿瘤功能呈细胞，发挥重要的抗肿瘤功能DC DC 肿瘤抗原摄取肿瘤抗原摄取 诱导诱导CTLs CTLs 对肿瘤细胞特异杀伤对肿瘤细胞特异杀伤 2010.4.29 2010.4.29 美国食品药品管理局批准美国食品药品管理局批准 Provenge Provenge(sipuleucel-T)(sipuleucel-T)，作为一种治疗晚期前列腺癌患者的免疫活性，作为一种
33、治疗晚期前列腺癌患者的免疫活性细胞，细胞，这标志着癌症进入一种新的治疗：自身免疫活性细胞治这标志着癌症进入一种新的治疗：自身免疫活性细胞治疗。疗。利用前列腺癌组织中高表达的一种抗原，由利用前列腺癌组织中高表达的一种抗原，由DCDC负载这种抗负载这种抗原刺激自体的原刺激自体的T T淋巴细胞。将这些经体外刺激扩增的免疫活性细淋巴细胞。将这些经体外刺激扩增的免疫活性细胞回输给前列腺癌患者达到治疗的目的。胞回输给前列腺癌患者达到治疗的目的。29生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022Dendritic Cells Highly specialized ant
34、igen presenting cells Activate nave T cells Generate cell-mediated immune responseImmature Dendritic Cell(Periphery)Mature Dendritic Cell(Lymphoid)Antigen capture and processing30生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022人成熟人成熟DCDC的扫描电镜图的扫描电镜图31生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/202232生物治疗及在临床肿瘤治
35、疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/202220112011年诺贝尔生理学医学奖年诺贝尔生理学医学奖 Bruce A.Beutler Jules A.Hoffmann Ralph M.Steinman20112011年诺贝尔生理学或医学奖揭晓，美国、法国三位科学家因在免疫学方面的发现获奖。其年诺贝尔生理学或医学奖揭晓，美国、法国三位科学家因在免疫学方面的发现获奖。其中一半的奖金归于中一半的奖金归于Bruce A.BeutlerBruce A.Beutler和和Jules A.HoffmannJules A.Hoffmann，获奖理由是在，获奖理由是在“TollToll样受体和
36、样受体和先天免疫激活方面的发现先天免疫激活方面的发现”；另一半奖金归于；另一半奖金归于Ralph M.SteinmanRalph M.Steinman，获奖理由是，获奖理由是“发现树突发现树突状细胞及其在获得性免疫中的作用状细胞及其在获得性免疫中的作用”。美籍科学家比尤特勒和卢森堡籍科学家霍夫曼是因为发现美籍科学家比尤特勒和卢森堡籍科学家霍夫曼是因为发现“TollToll样受体（样受体（Toll-like Toll-like ReceptorsReceptors，TLRsTLRs）及其配体）及其配体”获得获得20112011年诺贝尔生理学或医学奖年诺贝尔生理学或医学奖33生物治疗及在临床肿瘤治
37、疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022美国食品药品管理局已批准一种自体免疫美国食品药品管理局已批准一种自体免疫活性细胞治疗前列腺癌的细胞类药活性细胞治疗前列腺癌的细胞类药 2010.4.29 2010.4.29 美国食品药品管理局批准美国食品药品管理局批准 Provenge Provenge(sipuleucel-T)(sipuleucel-T)，作为一种治疗晚期前列腺癌患者的免疫活性细，作为一种治疗晚期前列腺癌患者的免疫活性细胞，胞，这标志着癌症进入一种新的治疗：自身免疫活性细胞治疗。这标志着癌症进入一种新的治疗：自身免疫活性细胞治疗。ProvengeProvenge
38、诱导作用是通过抗原提呈细胞诱导作用是通过抗原提呈细胞(APCs)(APCs)负载前列腺癌负载前列腺癌酸性磷酸酶（酸性磷酸酶（PAPPAP）抗原，继而激活肿瘤特异的）抗原，继而激活肿瘤特异的CD8+TCD8+T细胞，杀灭细胞，杀灭前列腺癌细胞。这是前列腺癌细胞。这是FDAFDA批准的第一种自体细胞免疫疗法。批准的第一种自体细胞免疫疗法。34生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022ProvengeProvenge疫苗治疗方案疫苗治疗方案35生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022GM-CSF-PAPGM-CSF
39、-PAP治疗机制治疗机制36生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022受试者：受试者：512名名总体生存期：对照组总体生存期：对照组 21.7个月，个月，治疗组治疗组25.8个月。个月。3年存活率：年存活率：治疗组治疗组 32%，对照，对照组只有组只有23%。副作用：主要是发烧、发冷、疲副作用：主要是发烧、发冷、疲劳和疼痛。劳和疼痛。治疗结果治疗结果37生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022DCDC疫苗的疫苗的制备制备38生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022人
40、成熟人成熟DCDC表型的流式细胞检测表型的流式细胞检测（可见（可见CD 80,CD 83CD 80,CD 83，CD86CD86高表达）高表达）39生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022DCDC肿瘤疫苗制备流程肿瘤疫苗制备流程如何获得高纯度的肿瘤抗原？如何获得高纯度的肿瘤抗原？40生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022国家发明专利国家发明专利-人肿瘤细胞的分离人肿瘤细胞的分离纯化方法纯化方法41生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022 纯化后的肺癌细胞纯化后的
41、肺癌细胞42生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022贴壁生长的肺癌细胞贴壁生长的肺癌细胞43生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022从手术后肾癌组织中分离纯化肾癌细胞从手术后肾癌组织中分离纯化肾癌细胞未纯化的人肾癌细胞未纯化的人肾癌细胞44生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022贴壁生长的肾癌细胞贴壁生长的肾癌细胞45生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022从术后卵巢癌组织中分离纯化卵巢癌细胞从术后卵巢癌组织中分离纯化卵
42、巢癌细胞未纯化的人卵巢癌细胞未纯化的人卵巢癌细胞纯化的人卵巢癌细胞纯化的人卵巢癌细胞46生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022贴壁生长的卵巢癌细胞贴壁生长的卵巢癌细胞47生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022树突状细胞疫苗在实体瘤树突状细胞疫苗在实体瘤治疗中的策略治疗中的策略（1）抽病人抽病人50ml-60ml外周血外周血 48生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022树突状细胞疫苗在实体瘤树突状细胞疫苗在实体瘤治疗中的策略（治疗中的策略（2 2）抽病人抽病人5
43、0ml-60ml外周血外周血刺激自体刺激自体T T细胞产生细胞毒性细胞产生细胞毒性T T淋巴细胞淋巴细胞细胞毒性细胞毒性T T淋巴细胞淋巴细胞 直接杀伤肿瘤肿瘤细胞直接杀伤肿瘤肿瘤细胞 49生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/202250生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022肿瘤细胞表面抗原的多样性肿瘤细胞表面抗原的多样性肿瘤细胞模式图肿瘤细胞模式图肿瘤抗原免疫原性弱，难以激活有效的机体免疫肿瘤抗原免疫原性弱，难以激活有效的机体免疫51生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14
44、/2022人乳腺癌细胞电镜扫描图人乳腺癌细胞电镜扫描图52生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/202253生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022 Strategy of FusionFusionDendritic cellMMT tumor cell50%PEGFC/MMTDF3/MUC1MHC IIB7ICAMMHC IDC与肿瘤细胞融合与肿瘤细胞融合54生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022自体自体DC/DC/肿瘤融合细胞疫苗肿瘤融合细胞疫苗原代肿瘤细胞原代肿
45、瘤细胞成熟成熟DC细胞细胞自体自体DC/DC/肿瘤融合细胞疫苗肿瘤融合细胞疫苗 融合融合术后肿瘤组织术后肿瘤组织55生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022自体自体DC/DC/肿瘤融合细胞疫苗治疗策略（肿瘤融合细胞疫苗治疗策略（1 1）抽病人抽病人50ml-60ml外周血外周血 诱导诱导制备制备DC/肿瘤融合细胞疫苗肿瘤融合细胞疫苗56生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022自体自体DC/DC/肿瘤融合细胞疫苗治疗策略（肿瘤融合细胞疫苗治疗策略（2 2）抽病人抽病人50ml-60ml外周血外周血DC/肿瘤融
46、合细胞肿瘤融合细胞刺激产生细刺激产生细胞毒性胞毒性T T淋巴细胞淋巴细胞细胞毒性细胞毒性T T淋巴细胞淋巴细胞 直接杀伤肿瘤细胞直接杀伤肿瘤细胞 制备制备DC/肿瘤融合细胞疫苗肿瘤融合细胞疫苗57生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022（1）抗原激活的杀伤细胞抗原激活的杀伤细胞(TAK)；（2）肿瘤浸润性淋巴细胞（）肿瘤浸润性淋巴细胞（TIL）；（3）细胞毒性）细胞毒性T淋巴细胞淋巴细胞(CTL)；（4）激活的杀伤性单核细胞）激活的杀伤性单核细胞(AKM)；（5）自然杀伤细胞）自然杀伤细胞(NK)；（6）细胞因子诱导的杀伤细胞）细胞因子诱导的杀伤细胞
47、(CIK)。2 2、肿瘤过继性细胞免疫治疗、肿瘤过继性细胞免疫治疗 向肿瘤患者输入具有抗肿瘤活性的免疫细胞，直接向肿瘤患者输入具有抗肿瘤活性的免疫细胞，直接杀伤肿瘤或激发机体抗肿瘤免疫效应，从而达到治疗肿杀伤肿瘤或激发机体抗肿瘤免疫效应，从而达到治疗肿瘤的目的。主要包括以下几类：瘤的目的。主要包括以下几类：58生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022过继性细胞免疫治疗的过程过继性细胞免疫治疗的过程59生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022（1 1）CIKCIK细胞治疗肿瘤细胞治疗肿瘤 “CIK细胞细胞”是
48、将人的外周血单个核细胞在体外用多种是将人的外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子（如抗细胞因子（如抗CD3McAb,IL-2,IFN-,IL-1等）共同培等）共同培养一段时间后获得的一群异质细胞，由于该种细胞同时表养一段时间后获得的一群异质细胞，由于该种细胞同时表达达CD3和和CD56两种膜蛋白分子，故又被称为两种膜蛋白分子，故又被称为NK细胞样细胞样T淋淋巴细胞，兼具有巴细胞，兼具有T淋巴细胞强大的抗肿瘤活性和淋巴细胞强大的抗肿瘤活性和NK细胞的细胞的非非MHC限制性杀瘤优点。目前，限制性杀瘤优点。目前，CIK细胞被认为是新一代细胞被认为是新一代抗肿瘤过继免疫治疗的方案之一抗肿瘤过继免疫治疗的
49、方案之一.60生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022自体自体CIKCIK细胞的制备细胞的制备61生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022经淋巴细胞亚群检测，经淋巴细胞亚群检测，CIKCIK细胞的中细胞的中CD3CD56CD3CD56双阳性细双阳性细胞的数量达到胞的数量达到42.35%42.35%，62生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022（2 2）自体）自体DCDC细胞激活的细胞激活的CIKCIK细胞治疗肿瘤细胞治疗肿瘤 通过体外诱导有功能的自体通过体外诱导有
50、功能的自体DCDC细胞，将这种有细胞，将这种有功能的自体功能的自体DCDC细胞激活自体细胞激活自体CIKCIK细胞，产生一种更强细胞，产生一种更强的抗肿瘤的效应细胞（的抗肿瘤的效应细胞（DC-CIKDC-CIK细胞），从而发挥其细胞），从而发挥其抗肿瘤作用。实验证实，抗肿瘤作用。实验证实，DC-CIKDC-CIK细胞能促进细胞能促进IL-12IL-12和和INF-INF-的分泌，提高细胞毒性，增强对肿瘤细胞的的分泌，提高细胞毒性，增强对肿瘤细胞的杀伤作用，杀伤作用，63生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用生物治疗及在临床肿瘤治疗中的应用10/14/2022自体自体DC-CIK DC-CIK 细胞的
