1、病源性球菌与杆菌病源性球菌与杆菌一、实验目的1.掌握链球菌、脑膜炎双球菌、结核杆菌、白喉杆菌的形态特征和染色特性。2.熟悉肠道杆菌培养特征、生化反应及动力学等特性。3.了解三种葡萄球菌产生的色素。4.了解乙型溶血型链球菌在血琼脂平板上的菌落特点及溶血性。5熟悉抗“o”试验的方法及临床意义。病源性球菌与杆菌一、实验目的1.掌握链球菌、脑膜炎双球菌、结二、实验内容1.自己动手观察链球菌、脑膜炎双球菌的形态;示教观察结核杆菌、白喉杆菌的形态。2.观察肠道杆菌的双糖发酵，鉴别培养基（ss培养基）的生化反应。3.化脓性球菌的鉴定三种葡萄球菌的色素观察乙型链球菌的溶血现象观察抗“O”实验。二、实验内容1.
2、自己动手观察链球菌、脑膜炎双球菌的形态;示教?三、作业：?1.镜下绘出4种形态图?2.根据生化特性及产生色素，葡萄球菌分为哪几种类型？?三、作业：?1.镜下绘出4 种形态图?2.根据生化特性及产生管号加入物12345血清（Ab）1：250血清0.25ml1:500血清0.25ml1:750血清0.25ml缓冲液0.25ml0.25ml溶血素“O”(Ag)0.25ml0.25ml0.25ml0.25ml2%兔RBC0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml0.5ml结果管号加入物1 2 3 4 5 血清（A b）1：2 5 0 血清0.2 5 ml 1Salmonella-Shigella Med
3、iun主要成分主要成分基础营养基础营养乳糖指示剂抑制剂抑制剂分解乳糖分解乳糖不分解乳糖不分解乳糖产酸PH指示剂变红色红色大菌落大肠杆菌等无明显变化无色半透明小菌落志贺菌等志贺菌等S a l mo n e l l a -S h i g e l l a Me d i u n 主要大肠杆菌痢疾杆菌大肠杆菌痢疾杆菌实验四病源性球菌与杆菌x i u g a i-2 课件结核分枝杆菌?抗酸染色结核分枝杆菌?抗酸染色乙型溶血性链球菌?溶血环乙型溶血性链球菌?溶血环白喉棒状杆菌?异染颗粒白喉棒状杆菌?异染颗粒实验四 病原性球菌1.五类病原性球菌的形态、排列及染色性2.葡萄球菌、链球菌的培养物3.血浆凝固酶试验
4、-玻片法试管法4、抗链球菌溶血素”O”（ASO）乳胶试验5、脓汁中葡萄球菌的分离鉴定示教（操作，1人/组）示教示教示教（操作，1人/组）实验四病原性球菌1.五类病原性球菌的形态、排列及染色性2.实验四病源性球菌与杆菌x i u g a i-2 课件肺炎球菌肺炎球菌特殊染色可见的荚膜特殊染色可见的荚膜肺炎球菌特殊染色可见的荚膜实验四病源性球菌与杆菌x i u g a i-2 课件实验四病源性球菌与杆菌x i u g a i-2 课件G+球菌：金葡菌链球菌肺炎双球菌1.五类病原性球菌的形态、排列及染色性示教示教G+球菌：金葡菌链球菌肺炎双球菌1.五类病原性球菌的形态、G-球菌：球菌：淋球菌脑膜炎球
5、菌G-球菌：淋球菌脑膜炎球菌2.葡萄球菌、链球菌的培养物示教示教普通琼脂平板血平板菌落形状色素溶血性金葡圆形凸起光滑中等大小金黄色+柠葡同上柠檬色-白葡同上白色-表12.葡萄球菌、链球菌的培养物示教普通琼脂平板血平板菌落形状血平板甲型链球菌针尖小菌落、草绿色狭窄溶血环乙型链球菌针尖小菌落、透明宽大溶血环巧克力血平板脑膜炎双球菌菌落透明似露滴状表表2表表3血平板甲型链球菌针尖小菌落、草绿色狭窄溶血环乙型链球菌针尖小3.血浆凝固酶试验-玻片法（操作，1人/组）原理：方法：兔血浆兔血浆生理盐水123金葡白葡金葡+凝集（+）不凝集（-）不凝集（-）3.血浆凝固酶试验-玻片法（操作，1 人/组）原理：方
6、法：4、血浆凝固酶试验（试管法）金葡菌白葡菌+兔血浆兔血浆3730水浴观察凝集为阳性不凝集为阴性示教示教4、血浆凝固酶试验（试管法）金葡菌白葡菌+凝固酶实验凝固酶实验（试管法）（试管法）凝固酶实验（试管法）五、抗链球菌溶血素“O”（ASO）快速胶乳法高滴度病人血清被适量溶血素中和了正常水平的抗体后，还有多余 ASO，这些多余抗体即与 SLO胶乳试剂反应，出现清晰、均匀的凝集颗粒。（操作，1人/组）原理：五、抗链球菌溶血素“O”（A S O）快速胶乳法高滴度病人血清被阳性对照阴性对照待测血清各加溶血素“O”1滴轻摇1min再加SLO胶乳1滴轻摇3min观察结果方法：阳性对照阴性对照待测血清各加溶
7、血素“O”1 滴轻摇1 mi n 再加稀释度ASO（IU/ml）1：15 4001：30 8001：60 1600ASO250 IU/ml 阴性结果判定：结果判定：稀释度A S O （I U/ml）1：1 5 注意事项：1.液体量要一样，菌量一样。2.血浆多挑几环（一滴的量），菌少挑点，不能干。3.涂菌时间一样，出现凝集为阳性，再涂凝集物可被涂散，变阴性。注意事项：1.液体量要一样，菌量一样。2.血浆多挑几环（一滴肠道杆菌?一、肠道杆菌的形态及染色性?二、肠道杆菌的培养特性?三、肠道杆菌的生化反应特点?四、Widal实验肠道杆菌?一、肠道杆菌的形态及染色性?二、肠道杆菌的培养特性肠道杆菌的形态
8、及染色片肠道杆菌的形态及染色片肠道菌的菌落形态?EMB?大肠：菌落呈紫黑色，有金属光泽。?伤寒 痢疾：菌落无色半透明。?SS?D大肠：大而不透明的红色菌落。?伤寒 痢疾：中等大小淡黄色菌落。肠道菌的菌落形态?E MB?大肠：菌落呈紫黑色，有金属光泽。大肠杆菌（EMB培养基）大肠杆菌（E MB 培养基）肠道致病菌（SS培养基）肠道致病菌（S S 培养基）粪便标本中致病性肠道杆菌的分离与鉴定粪便标本中致病性肠道杆菌的分离与鉴定生化反应1单糖发酵?葡萄糖及乳糖发酵一）实验目的与原理?了解糖发酵试验方法二）实验材料1、菌种：大肠杆菌、伤寒杆菌、痢疾杆菌培养物2、培养基：乳糖及葡萄糖发酵管三）实验方法、
9、用接种环将大肠杆菌、伤寒杆菌分别各接种于葡萄糖及乳糖发酵管中（方法同前）。2、37孵育1824小时，取出观察结果。?生化反应1 单糖发酵?葡萄糖及乳糖发酵一）实验目的与原理?动力检测动力检测菌名葡萄糖甘露醇乳糖靛基质甲基红VP 试验枸椽酸盐硫化氢尿素分解动力福氏志贺菌+/+伤寒沙门菌+/+乙型副伤寒沙门菌+大肠杆菌+产气杆菌+普通变形杆菌+/+常见肠道杆菌的生化反应鉴别表菌名葡萄糖甘露醇乳糖靛基质甲基红V P 试验枸椽酸盐硫化氢尿素斜面底部H2S 初步鉴定+非病原菌非病原菌+/副伤寒杆菌及其他沙门氏菌+伤寒杆菌+痢疾杆菌铁质双糖琼脂基上各种肠道杆菌的生长情况斜面底部H 2 S 初步鉴定+非病原
10、菌非病原菌+肠道杆菌在KI培养基上的培养特性肠道杆菌在K I 培养基上的培养特性Indol实验生化反应2Indol实验I n d o l 实验生化反应2 I n d o l 实验2.肠道杆菌在SS培养基上的生长现象示教示教大肠杆菌伤寒杆菌SS平板红色大菌落无色透明小菌落基础培养基，乳糖(底物)，胆盐、煌绿(抑制非致病菌)，中性红（指示剂）。SS培养基：2.肠道杆菌在S S 培养基上的生长现象示教大肠杆菌伤寒杆菌S3.五类肠道杆菌的生化反应及动力五类肠道杆菌的生化反应及动力示教示教大肠杆菌-+/变形杆菌-+/-+-/乙型副伤寒杆菌-+-+-/伤寒杆菌+-+/-+-/+痢疾杆菌+-+/-/+葡萄糖
11、乳糖H2S 尿素靛基质 动力 双糖铁3.五类肠道杆菌的生化反应及动力示教大肠杆菌 -+4.肠道杆菌未知菌1和未知菌2的鉴定（操作，2人/组）未知菌双糖铁培养基(乳糖/固体/上，葡萄糖/半固体/下)生化反应葡萄糖发酵乳糖发酵尿素酶试验H2S试验靛基质试验（蛋白胨水液体培养基）动力试验（半固体培养基）（微量发酵管）方法：血清学鉴定（玻片凝集反应）（371824h）4.肠道杆菌未知菌1 和未知菌2 的鉴定（操作，2 人/组）未知伤寒诊断血清伤寒诊断血清伤寒诊断血清+未知菌1 未知菌2血清学鉴定（玻片凝集反应）血清学鉴定（玻片凝集反应）？伤寒诊断血清伤寒诊断血清+结果：结果：双糖铁葡乳尿H2S 靛动力血清学未知菌未知菌1未知菌2结论：未知菌1：？未知菌2：？结果：双糖铁葡乳尿H 2 S 靛动力血清学未知菌1 未知菌实验四病源性球菌与杆菌x i u g a i-2 课件
