1、罗非鱼病毒病 国内罗非鱼养殖一直被-病困扰，但是真正的大老虎有可能真的要来了。从2009 年开始，以色列、厄瓜多尔、埃及、泰国等国家先后暴发了罗非鱼湖病毒（Tilapia Lake Virus，TiLV）感染引起的传染病，导致大批 野生和养殖罗非鱼死亡，造成严重的经济损失。粮农组织确认，罗湖病毒（TiLV）现已在三大洲5个国家得到确认：哥伦比亚、厄瓜多尔、埃及、以色列和泰国。虽然该病原体不会引起公共卫生问题，但可以导致受感染种群大量死亡。台湾 海南省文昌市潭牛镇一罗非鱼养殖池塘 养殖户 王老板1罗湖病毒的流行情况和临诊症状 1.1以色列全国发生罗非鱼大量死亡事件 2009 年夏天，以色列在全国
2、范围内陆续发生 养殖场和野生罗非鱼大量死亡事件。以色列基内 雷特湖（也称为加利利海）的野生罗非鱼和国内养殖场的养殖罗非鱼突然大量死亡，死亡率高达 70%。基内雷特湖罗非鱼产量从2005 年的316 吨，下降到2007 年的51 吨、2009 年的8 吨和2010 年 的45 吨。罗非鱼大量死亡事件发生在天气炎热的5 10 月期间，其特点主要有以下三点：一是病毒扩散是从一个养殖池到另一个养殖池，波及不同生 长期阶段的罗非鱼；二是发病和死亡仅限于尼罗 罗非鱼（Oreochromis niloticus）与奥利亚罗非鱼（Oreochromis aureus）杂交产生的罗非鱼品种，与罗非鱼一起养殖的鲤
3、鱼和鲻鱼没有发现与罗非鱼 一样的发病症状；三是一次罗非鱼集中死亡之后，同一鱼池不会再有大量鱼死亡的事件发生。病鱼体色发黑，体表有溃烂，眼睛有明显的病变，发病前期晶状体浑浊，后期晶状体破裂发炎，眼睛内容物浓缩，失去正常视觉功能。罗非鱼大量 死亡的原因不明，常规的寄生虫监测、细菌监测、病毒监测和毒素监测均未见异常。病原：Tilapia lake virus,TiLV1.2厄瓜多尔养殖罗非鱼大量死亡事件 2011 年，厄瓜多尔发生罗非鱼大量死亡事 件。出现罗非鱼大量死亡的养殖场中，本场培育 的Chitralada 品系罗非鱼苗大量死亡，而从其他养殖场引进的尼罗罗非鱼大部分没有感染。鱼苗转入育成池47
4、 d 后开始出现死亡。被感染的鱼池中，Chitralada 品系罗非鱼存活率仅为20%，而尼罗罗非鱼的存活率达到80%。病鱼一般表现消瘦，体表 发黑，腹部膨胀有积水，鱼鳞突出，眼球突出。1.3埃及养殖罗非鱼大量死亡事件 20122016 年的夏季，埃及当地水温达到 25以上，罗非鱼主要产区的中、大规格尼罗罗非 鱼每年出现不明原因的大量死亡，称为“夏季死鱼 事件”，其中2015 年损失产量估计约98 000 吨（价 值1 亿美金）。对埃及罗非鱼主产区的68 个养殖 场进行调查表明，37%的养殖场（25 个）发生了“夏 季死鱼事件”，平均死亡率为9.2%（死亡率波动 区间为5%15%）。发病率最高
5、的是放养密度高的 养殖场和大型养殖场；其次是小型养殖场、鲻鱼和 罗非鱼混养场（鲻鱼15%和罗非鱼85%）；发病 率最低的是单品种养殖的养殖场。38 个仅养殖罗 非鱼的养殖场中，有3 个养殖场发病，而30 个混 养的养殖场中，有22 个养殖场发病。病鱼表现体 表浅层出血、发炎、水肿等症状。1病原学 罗非鱼湖病毒病又称为罗非鱼合胞体肝炎（syncytical hepatitis of tilapia，SHT）4，病原TiLV 为近年来新发现的病毒，其分类地位尚未被确认。根据其生物学特性，目前TiLV被归类为正粘病毒科（Orthomyxoviridae）的一种新的病毒。电子显微 镜显示病毒粒子为具包
6、膜的二十面体结构，大小为 5575 nm。病毒对乙醚和氯仿敏感。Eyngor 等 最先对以色列罗非鱼湖病毒病的 暴发进行了研究，证明病原是一种新的RNA病毒，并参考病原的发现地点命名为罗非鱼湖病毒。由于 TiLV 是 RNA 病毒，容易发生变异，可能存在多个不同的地理株。截至目前，美国国家生物技术信息中心（Genbank）已收录了 2 株 TiLV 的全基因组 序列，分别来自以色列分离的 Til-4-2011 毒株和泰国分离的TV1 毒株。Bacharach 等 5 对以色列分离的 Til-4-2011 毒株进行了深入研究。TiLV 为分段、单链的负 链 RNA 病毒，由 10 个基因片段组成
7、。每一个片 段都有 1 个开放阅读框（ORF），编码 10 种蛋 白。片段 1 最大，为 1.641 KB，片段 210 分别 为 1.471 KB、1.371 KB、1.250 KB、1.099 KB、1.044 KB、0.777 KB、0.657 KB、0.548 KB和0.465 KB。2流行病学 2.1地理分布 罗非鱼为热带鱼类，主要分布于热带、亚热带 的淡水和半咸水水域。至今TiLV已确认在哥伦比 亚、厄瓜多尔、以色列、埃及和泰国流行。罗非鱼国际贸易十分频繁，包括亚洲、非洲、欧 洲、北美洲和南美洲在内的 43 个国家已确认都 曾经从 TiLV 感染的国家引进过罗非鱼。因此，这些国家的
8、养殖鱼类存在较高的TiLV感染风险。实际上，很多国家的养殖罗非鱼常暴发传染性疫 病，由于多种原因并未对病原进行调查，无法排 除发病罗非鱼是否也感染了 TiLV，所以该病的实 际地理分布可能要广泛得多。虽然我国至今尚无 TiLV 感染的确切报告，但已有海南省罗非鱼养殖 场样品的 PCR 检测报告，结果表明 TiLV 感染为 阳性。2.2易感动物 至今只有罗非鱼罗非鱼被证明易感 TiLV，而且几乎 所有的罗非鱼物种均对 TiLV 易感。Eyngor 等调 查了以色列基内雷特湖的 27 种野生的慈鲷科、鲤 科、鼬科和鲷科鱼类，发现只有慈鲷科的罗非鱼类发病，并导致数量锐减，而其他鱼类均未出现临床症状和
9、死亡。Surachetpong 等 也证明 TiLV 只感 染罗非鱼，不会感染其他水生或陆生动物。TiLV 主要危害罗非鱼仔稚鱼和幼鱼，对成鱼影响相对 较小，因此幼体阶段似乎比成鱼更易感。由于 缺乏其他动物易感性的信息，有可能还存在其他 易感物种。在以色列暴发 TiLV 感染期间的共养实 验表明，乌鱼（Mugil cephalus）和鲤鱼（Cyprinuscarpio）均不会发生死亡。同样的，在埃及发病 疫区共养的乌鱼和薄唇乌鱼（Liza ramada）也未 发现感染。已经有证据表明某些罗非鱼的遗传品 系对 TiLV 具有一定抗性。Ferguson 等 报告，一 种罗非鱼品系的死亡率为 10%
10、20%，明显低于其 他品系的80%。2.3传播途径 至今尚不清楚 TiLV 的最初来源，野生或养殖 的受 TiLV 感染的鱼群是目前已知的唯一传染源。病鱼的眼睛、大脑和肝脏常常含有高 浓度的病毒，其肌肉组织也可能存在病毒。因此，发病死亡的罗非鱼可能是重要的病毒污染源。TiLV 可以通过混养进行水平传播。直接水平 传播是其主要传播途径，罗非鱼的活体交易和运输 最有可能传播疾病。至今尚无垂直传播的证据。Eyngor 等 证明 TiLV 可以通过水体途径传播。由 于 TiLV 的生物物理学特性尚不明确，很难评估通 过污染物间接传播的意义。鸟类可能对 TiLV 的传 播发挥一定的作用。Fathi 等
11、研究表明，因为埃 及与以色列接壤，TiLV 可能通过鸟类迁徙等多种 途径如从以色列传入埃及。以色列暴发 TiLV 感染 以后，埃及的养殖罗非鱼也常常暴发“夏季死亡 症”。不过，至今尚无直接证据能证明鸟类可以传 播 TiLV。2.4季节性 罗非鱼TiLV感染主要在高温季节暴发，但在热 带地区可能全年均可感染；从2009年夏天开始，以 色列全境出现罗非鱼大量死亡。通常在510月炎热 时间发病，发病水温为2232；近年来，埃及罗 非鱼不明原因死亡症的发病季节通常为610月，水 温大于25；厄瓜多尔主要在水温为2527 的5 11月；泰国，10月到次年5月之间采集 的部分样品TiLV检测结果为阳性。2
12、.5发病率和死亡率 不同种类的罗非鱼或不同生长阶段感染 TiLV 的发病率和死亡率差别明显。Eyngor 等 2 报告，因为 TiLV 感染导致以色列加利略罗非鱼（Sarotherodon galilaeus）年产量从 316 吨（2005 年）分别下降至51吨（2007年）、8吨（2009年）和 45 吨（2010 年），其他野生罗非鱼如普通罗 非鱼（Tilapia zilli）和约旦罗非鱼（Oreochromis aureus）等也大幅减产。健康的罗非鱼和病鱼混养，几天内死亡率达80%100%证明该病传染性很强。近年来，泰国养殖罗非鱼 TiLV 感染大部分发 生在鱼苗转移到水库网箱或公共水
13、域后 1 个月。大 多数死亡发生在出现第一条死鱼后的 2 周内，死亡 率约 20%90%。厄瓜多尔的养殖罗非鱼也发生 了类似的传染病，在转移到养殖池塘后47 d 内出 现发病死亡。不同品种罗非鱼的死亡率有较大差 异，较低的为10%20%，较高的可达80%。埃及 37%的罗非鱼渔场受到 TiLV 感染，平均死亡率为 9.2%。从发生“夏季死亡症”的7个养殖场采集组 织样本，其中 3 个养殖场的样品经过 PCR 检测显 示 TiLV 为阳性。Dong 等 报道，放养 1 个月 内的红罗非鱼鱼苗感染 TiLV 后死亡率可达 90%。Tattiyapong 等 在泰国进行了一项腹腔注射攻毒 实验，感染
14、 412 d 后尼罗罗非鱼和红罗非鱼的死 亡率分别高达 86%和 66%，并表现出与自然感染 相似的临床症状和病理变化。Eyngor 等 2 发现养 殖系统中罗非鱼群体经历发病事件后幸存的鱼对 TiLV 再次感染具有免疫力。2.6组织病理特征 泰国患病的鱼表现出食欲不振、嗜睡、行为 异常、游动迟缓、体色苍白、贫血、眼球突出、腹 部肿胀、皮肤充血和糜烂。埃及的病鱼主要表 现为体表出现出血斑、鱼鳞脱落、开放性伤口、体 色变黑、鳍糜烂等。肉眼病变主要表现为晶状 体混浊，进而发展到晶状体破裂。其他病变包括皮 肤糜烂、软脑膜出血、脾充血。海南省罗非鱼的主要症状是鳃盖内缘出血，烂鳃，腹腔有腹水，肝 脏和肾
15、脏出血。不同地理株的组织病变有所差异，以色列毒株的病理变化主要在中枢神经系统，而南美洲毒 株主要发生在肝脏。大脑病变包括软脑膜水肿 和局灶性出血，白质和灰质皮层的毛细血管充血，神经变性，胶质细胞增生，血管周围淋巴细胞浸 润等。肝组织病变包括肝细胞肿胀和脱落，并表 现出典型的合胞体肝炎特征。脾肿大，淋巴细 胞增生，肝脏和脾脏中的黑色素巨噬细胞中心（MMCs）数量增加。Emergence of Tilapia Lake Virus associated with mortalities of farmed Nile Tilapia Oreochromis niloticus(Linnaeus 17
16、58)in IndiaEstablishment and characterization of a cell line from tilapiabrain for detection of tilapia lake virus3诊断技术 TiLV 是近年来出现的急性传染性病原。国外已经在病毒的细胞培养、组织病理学、PCR、原位 杂交等检测技术方面进行了研究，并建立了相应的 检测方法。因为分子生物学方法具有快速、灵敏、简便的特点，大多数国家都采用 PCR 技术对 TiLV 进行监测和诊断。原位杂交方法可以定位 TiLV 感染的靶器官。国内针对 TiLV 的研究几乎是空 白。很多罗非鱼疫病的病因
17、未能彻底调查，无法明 确 TiLV 在我国的感染情况。3诊断技术 鱼成纤维细胞E-11被认为是最合适的细胞系。用 TiLV接种E-11细胞，510 d后出现明显的细胞病 变效应（CPE），细胞质空泡化，形成空斑，910 d 后出现单层细胞脱离。TiLV 接种罗非鱼原代 脑细胞细胞系，接种后 1012 d 细胞肿胀、变圆，出现颗粒细胞，接种 1419 d 后单层细胞脱离。OmB 和 TmB 细胞对 TiLV 的敏感性与 E-11 细胞 株相似。巢式PCR方法 半巢式 PCR 方法TiLV 已经对世界范围内的罗非鱼养殖带来巨 大威胁。加强对该病毒 的检疫和防范。在罗非鱼养殖区开展流行病学调查，并实
18、 施 TiLV 监控计划。口岸动物检疫部门更需要尽快 建立快速、实用的检测方法，对进境的罗非鱼及其 产品进行有效的检疫。加强鱼苗检疫监测，加强鱼场管理和消毒。部分罗非鱼在感染TiLV 后 能存活下来，说明存在针对病原的免疫应答，应尽 快研制出TiLV 疫苗。https:/a.glgoo.top/scholar?hl=zh-CN&as_sdt=0%2C5&q=&btnG=https:/ Detection of Tilapia Lake Virus Using Conventional RT-PCR and SYBR Green RT-qPCR Pamela Nicholson1,Pattarasuda Rawiwan2,Win Surachetpong21Institute of Veterinary Bacteriology Vetsuisse Faculty,University of Bern,2Department of Veterinary Microbiology and Immunology and Center for Advanced Studies for Agriculture and Food,Kasetsart University Institute for Advanced Studies,Kasetsart University
