1、喹啉和青蒿素类抗疟喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析疾药物的分析第一节第一节 喹啉类药物的分析喹啉类药物的分析 基本结构和主要性质基本结构和主要性质 鉴别实验鉴别实验 纯度检查纯度检查 含量测定含量测定2喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析一、基本结构一、基本结构NH3CONHCHHOHCH2H2SO42H2OH硫酸奎宁硫酸奎宁NH3CONHHCHHOHCH22HCl二盐酸奎宁二盐酸奎宁NNNNNNClCl4H3PO44H2O磷酸哌喹磷酸哌喹NHNCH3NCH3CH3Cl2H3PO4磷酸氯喹磷酸氯喹4H3PO4NNHNOHNNOCH3Cl磷酸咯萘啶磷酸咯萘啶2H3PO4NH3COHNNH2CH3磷酸伯氨
2、喹磷酸伯氨喹喹啉类药物分子结构中含有吡啶与苯稠合而成的喹啉类药物分子结构中含有吡啶与苯稠合而成的喹啉杂环喹啉杂环，环上杂原子，环上杂原子的反应性能基本与的反应性能基本与吡啶吡啶相同。相同。3喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析二、主要化学性质二、主要化学性质 奎宁为二元生物碱，其中奎宁环上的氮原子的碱性较强(pKa 8.8)，与强酸形成稳定的盐，奎宁和奎尼丁均与二元酸成盐，如与硫酸成盐；喹啉环上的氮原子碱性较弱(pKa 4.2)，不能与硫酸成盐。磷酸氯喹和磷酸伯氨喹为三元生物碱；磷酸咯萘啶为五元生物碱；磷酸哌喹为六元生物碱。1.碱性碱性4喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(二二)主要化学性质主要化学性质
3、 喹啉类抗疟药基本都具有手性，硫酸奎宁为左旋体，其比旋度为-237o至-224o；二盐酸奎尼也为左旋体，其比旋度为-223o至-229o。磷酸哌喹和磷酸咯萘啶不具有手性。2.旋光性旋光性5喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(二二)主要化学性质主要化学性质3.荧光特性荧光特性 硫酸奎宁和二盐酸奎尼在稀硫酸溶液中均显蓝色荧光。4.紫外吸收光谱特征紫外吸收光谱特征 由于喹啉类药物分子结构中含有吡啶与苯稠合而成的喹啉杂环，具有共轭体系，可用紫外吸收光谱的特征鉴别该类药物。6喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析二、鉴别试验二、鉴别试验(一一)绿奎宁反应绿奎宁反应(二二)光谱特征光谱特征(三三)无机酸盐无机酸盐7喹
4、啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(一一)绿奎宁反应绿奎宁反应 奎宁为6-位含氧喹啉衍生物，可以发生绿奎宁反应(Thalleioquin reaction)。反应基本机制是6-位含氧喹啉，经氯水(或溴水)氧化氯化，再以氨水处理缩合，生成绿色的二醌基亚胺的铵盐。NCH3ONOHClCl2NH3NOClClNONH4NNO+28喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(一一)绿奎宁反应绿奎宁反应 硫酸奎宁和二盐酸奎尼的绿奎宁反应机制同上。取其水溶液，加溴试液0.2ml和氨试液1ml，即显翠绿色，加酸成中性变成蓝色，成酸性时则为紫红色。翠绿色可转溶于醇、三氯甲烷中而不溶于醚。因此ChP2010采用此反应鉴别硫酸奎宁
5、和二盐酸奎尼。ChP2010硫酸奎宁的绿奎宁反应鉴别：取本品约5mg，加水5ml溶解后，加溴试液3滴与氨试液1ml，即显翠绿色。9喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(二二)光谱特征光谱特征1.紫外吸收光谱特征紫外吸收光谱特征 由于喹啉类药物分子结构中含有吡啶与苯稠合而成的喹啉杂环，具有共轭体系，可用紫外吸收光谱的特征鉴别该类药物。ChP2010采用本法鉴别磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯氨喹。10喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(二二)光谱特征光谱特征 2.荧光光谱特征荧光光谱特征 利用硫酸奎宁和二盐酸奎宁在稀硫酸溶液中均显蓝色荧光。ChP2010硫酸奎宁的荧光鉴别：取本品约20mg，加水20
6、ml溶解后，分取溶液10ml，加稀硫酸使成酸性，即显蓝色荧光。11喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(二二)光谱特征光谱特征 3.红外吸收光谱特征红外吸收光谱特征 硫酸奎宁、二盐酸奎宁、磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯氨喹在ChP2010中均采用红外光谱的方法进行鉴别。ChP2010磷酸氯喹的IR鉴别：取本品约0.5g，置分液漏斗中，加水25ml溶解后，加氢氧化钠试液5ml、乙醚50ml振摇提取，醚层用水洗涤后通过置有无水硫酸钠的漏斗滤过，滤液置水浴上蒸干，残渣用五氧化二磷为干燥剂减压干燥至析出结晶，其红外光吸收图谱应与氯喹的对照图谱一致。12喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(三三)无机酸盐无
7、机酸盐1.1.硫酸盐的鉴别反应硫酸盐的鉴别反应硫酸奎宁的硫酸根，显硫酸盐的鉴别反应进行鉴别。v 取供试品溶液，滴加氯化钡试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在盐酸或硝酸中均不溶解。v取供试品溶液，加醋酸铅试液，即生成白色沉淀；分离，沉淀在醋酸铵试液或氢氧化钠试液中溶解。v取供试品溶液，加盐酸，不生成白色沉淀(与硫代硫酸盐区别)。13喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(三三)无机酸盐无机酸盐 2.氯化物的鉴别反应氯化物的鉴别反应 二盐酸奎宁中具有盐酸根，即显氯化物的鉴别反应进行鉴别。v取供试品溶液，加稀硝酸使成酸性后,滴加硝酸银试液，即生成白色凝乳状沉淀；分离，沉淀加氨试液即溶解，再加稀硝酸酸化后，沉淀
8、复生成。如供试品为生物碱或其他有机碱的盐酸盐，须先加氨试液使成碱性，将析出的沉淀滤过除去，取滤液进行试验。v取供试品少量，置试管中，加等量的二氧化锰，混匀，加硫酸湿润，缓缓加热，即发生氯气，能使用水湿润的碘化钾淀粉试纸显蓝色。14喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(三三)无机酸盐无机酸盐3.磷酸盐的鉴别反应磷酸盐的鉴别反应 磷酸氯喹、磷酸哌喹、磷酸咯萘啶和磷酸伯氨喹都具有磷酸根，显磷酸盐反应进行鉴别。v取供试品的中性溶液，加硝酸银试液，即生成浅黄色沉淀；分离，沉淀在氨试液或稀硝酸中均易溶解。v取供试品溶液，加氯化铵镁试液，即生成白色结晶性沉淀。v取供试品溶液，加钼酸铵试液与硝酸后，加热即生成黄色沉
9、淀；分离，沉淀能在氨试液中溶解。15喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析三、纯度检查三、纯度检查v理化特性：理化特性：硫酸奎宁为白色细微的针状结晶，轻柔，易压缩；无硫酸奎宁为白色细微的针状结晶，轻柔，易压缩；无臭，味极苦；遇光渐变色；水溶液显中性反应。在氯仿臭，味极苦；遇光渐变色；水溶液显中性反应。在氯仿-无水乙醇无水乙醇(2:1)的混合液中易溶，在水、乙醇、氯仿或乙醚的混合液中易溶，在水、乙醇、氯仿或乙醚中微溶。中微溶。v有关物质有关物质 根据硫酸奎宁的制备工艺，产品中有关物质主要是生根据硫酸奎宁的制备工艺，产品中有关物质主要是生产过程中产生的中间体以及副反应产物。通过检查以下产过程中产生的中间体
10、以及副反应产物。通过检查以下项加以控制：项加以控制：酸度酸度三氯甲烷三氯甲烷-乙醇中不溶物质乙醇中不溶物质其他金鸡纳碱等其他金鸡纳碱等(一一)硫酸奎宁的检查硫酸奎宁的检查 16喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(一一)硫酸奎宁的检查硫酸奎宁的检查3.其他金鸡纳碱 本项检查主要控制硫酸奎宁中的其他生物碱，采用HPLC或TLC中的主成分自身对照法或杂质对照品对照法进行检查。18喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(二二)磷酸咯萘啶的纯度检查磷酸咯萘啶的纯度检查1.酸度 v主要是在成盐过程中引入。本品水溶液的pH值如小于2.4，刺激性较大。v检查法：取本品1.0g，加水25ml溶解后，用酸度计进行测定，pH值
11、应大于2.4。2.水中不溶物 v本品加水溶解后，稍放置即有黄色不溶物产生，影响质量。故质量标准按给药途径不同，规定其不同限量以控制质量。v 检查法：取本品2.0g，加水25ml振摇使溶解，放置30分钟，用置105恒重的4号垂熔玻璃坩埚滤过，沉淀用水15ml分次洗涤，在105干燥4小时，遗留残渣不得过4mg(供注射用)或7mg(供口服用)。19喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(二二)磷酸咯萘啶的纯度检查磷酸咯萘啶的纯度检查3.氯化物 v系生产工艺中带入。检查时为了避免溶液颜色的干扰，先加碱使咯萘啶沉淀析出，然后再对滤液进行检查。v检查法 取本品0.10g，加水4ml使溶解，加20碳酸钠溶液5ml，
12、摇匀，使沉淀完全，用5号垂熔玻璃漏斗滤过，容器用水15ml分次洗涤、滤过，合并滤液，加水使成25ml，依氯化物法检查，与标准氯化钠溶液3.0ml制成的对照液比较，不得更浓(0.03)。20喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(二二)磷酸咯萘啶的纯度检查磷酸咯萘啶的纯度检查4.甲醛 v在合成磷酸咯萘啶的反应中使用了甲醛进行缩合，甲醛具有毒性，应对产品中可能剩余的甲醛进行检查。v检查法：取本品50.0mg，加水2ml使溶解，加5%碳酸钠溶液4ml，搅匀，滤过，滤液加硫酸溶液(12)3ml，冷却后加品红亚硫酸试液5ml，在2030保温30分钟，如显色，与新制的甲醛溶液(每1ml含甲醛0.10mg的水溶液)
13、1.0ml用同一方法制成的对照液比较，不得更深(0.2%)。5.四氢吡咯 v在合成磷酸咯萘啶的反应中使用了四氢吡咯进行缩合，四氢吡咯具有毒性，应对产品中可能剩余的四氢吡咯进行检查。v检查法：取本品10mg，加水2ml溶解后，加5碳酸钠溶液2ml，搅拌，滤过，滤液加新制的亚硝基铁氰化钠乙醛试液1ml，摇匀，5分钟内不得显蓝紫色。21喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析四、含量测定四、含量测定 硫酸奎宁具有生物碱的性质，很难在水溶液中用酸直接滴定。而在硫酸奎宁具有生物碱的性质，很难在水溶液中用酸直接滴定。而在非水酸性介质中，碱性显著增强非水酸性介质中，碱性显著增强，即可以在冰醋酸或醋酐等酸性溶液，即可以
14、在冰醋酸或醋酐等酸性溶液中，用高氯酸滴定液直接滴定，以指示剂或电位法确定终点。中，用高氯酸滴定液直接滴定，以指示剂或电位法确定终点。由于硫酸为二元酸，在水溶液中能进行二级解离，但在冰醋酸介质由于硫酸为二元酸，在水溶液中能进行二级解离，但在冰醋酸介质中，只能解离为中，只能解离为HSO4，所以生物碱的硫酸盐在冰醋酸中只能滴定至，所以生物碱的硫酸盐在冰醋酸中只能滴定至硫酸氢盐。硫酸氢盐。(BH+)2SO42-+HClO4 BH+ClO4-+BH+HSO4 测定时还应注意生物碱分子结构中氮原子碱性的强弱，正确判断反测定时还应注意生物碱分子结构中氮原子碱性的强弱，正确判断反应的摩尔比，以准确计算结果。应
15、的摩尔比，以准确计算结果。(一一)硫酸奎宁的含量测定硫酸奎宁的含量测定22喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(一一)硫酸奎宁的含量测定硫酸奎宁的含量测定取本品约0.2g，精密称定，加冰醋酸10ml溶解后，加醋酐5ml与结晶紫指示液12滴，用高氯酸滴定液(0.1mol/L)滴定至溶液显蓝绿色，并将滴定的结果用空白试验校正。每1ml高氯酸滴定液(0.1mol/L)相当于24.90mg的(C20H24N2O2)2H2SO4。ChP2010硫酸奎宁的含量测定法：硫酸奎宁的含量测定法：奎宁为二元碱，喹核氮可与硫酸成盐，喹啉环氮不与硫酸成盐，但在冰醋酸介质中用高氯酸滴定时，却能与高氯酸成盐。即：因此，1 mo
16、l硫酸奎宁消耗3 mol高氯酸滴定液。即1 mol奎宁可以结合4 mol质子，其中1 mol质子是硫酸提供的，其它3 mol质子是由高氯酸提供的。USP与本法相同。23喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(二二)磷酸氯喹制剂的含量测定磷酸氯喹制剂的含量测定 取本品10片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于磷酸氯喹0.13g)，置200ml量瓶中，加0.lmol/L盐酸溶液适量，充分振摇使磷酸氯喹溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置100ml量瓶中，用0.lmol/L盐酸溶液稀释至刻度，摇匀，在343nm的波长处测定吸光度；另取磷酸氯喹对照品适量，精密称定，加0.lmol/L盐酸
17、溶液溶解并定是稀释制成每lml中约含13g的溶液，同法测定，计算，即得。本品含磷酸氯喹(C18H26ClN32H3PO4)应为标示量的93.0%107.0%。ChP2010中磷酸氯喹片的紫外-可见分光光度含量测定法：24喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(二二)磷酸氯喹制剂的含量测定磷酸氯喹制剂的含量测定 ChP2010中磷酸氯喹中磷酸氯喹注射液注射液(本品含磷酸氯喹的本品含磷酸氯喹的灭菌水溶液。含磷酸氯喹灭菌水溶液。含磷酸氯喹(C18H26ClN32H3PO4)应应为标示量的为标示量的95.0%105.0%。)的含量的的含量的提取酸量提取酸量测定法测定法：精密量取本品适量(约相当于磷酸氯喹0.3
18、g)，用水稀释至30ml，加20%氢氧化钠溶液3ml，摇匀，用乙醚提取4次，每次20ml，合并乙醚液，用10ml水洗涤，水洗涤液再用15ml乙醚提取1次，合并前后两次的乙醚液，蒸发至近23ml时，精密加盐酸滴定液(0.lmol/L)25ml，温热蒸去乙醚并使残渣溶解，冷却，加溴甲酚绿指示液数滴，用氢氧化钠滴定液(0.lmol/L)滴定。每lml盐酸滴定液(0.lmol/L)相当于25.79mg C18H26ClN32H3PO4。USP 采用提取后采用提取后HPLC测定磷酸氯喹注测定磷酸氯喹注射液的含量。射液的含量。25喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析第二节第二节 青蒿素类药物的分析青蒿素类药物的
19、分析 基本结构与主要性质基本结构与主要性质 鉴别试验鉴别试验 纯度检查纯度检查 含量测定含量测定26喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析一、青蒿素类药物的基本结构与主要性质一、青蒿素类药物的基本结构与主要性质OOH3COOHCH3HHOCH3青蒿素青蒿素 OOH3COOHCH3HHCH3HHHO双氢青蒿素双氢青蒿素 OOH3COOHH3CHHCH3HHOHOHOO青蒿琥酯青蒿琥酯 OOH3COOHCH3HHCH3HHOCH3H蒿甲醚蒿甲醚 27喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析UV吸收特性 由于青蒿素类药物分子结构中母核，不具有共轭体系，其紫 外吸收光谱的主要是末端吸收。但C-10由于取代基的不同具 有
20、一定吸收特征。氧化性 由于青蒿素类是具有过氧桥的倍半萜内酯类化合物，这类化合物具有氧化性。旋光性 青蒿素类药物都均有旋光性，均为右旋体药物。青蒿素其比旋度为+75o+78o。蒿甲醚其比旋度为+168o+173o。水解反应 青蒿素结构中由于有内酯，在碱性条件下，发生水解，但其 他药物由于母核中没有内酯，没法发生水解。28喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析二、鉴别试验二、鉴别试验(一一)、呈色反应、呈色反应(二二)、吸收光谱特征、吸收光谱特征(三三)、色谱法、色谱法29喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(一一)呈色反应呈色反应由于青蒿素类是具有由于青蒿素类是具有过氧桥的倍半萜内酯类化合物过氧桥的倍半萜内酯
21、类化合物，这类化合物具有，这类化合物具有氧化性氧化性。在酸性条件能将。在酸性条件能将I I-氧化成氧化成I I2 2与淀粉指示液，生成与淀粉指示液，生成蓝紫色蓝紫色。1.1.碘化钾试液碘化钾试液-淀粉反应淀粉反应(过氧桥的氧化反应过氧桥的氧化反应)2.2.羟肟酸铁反应羟肟酸铁反应 含有内酯的化合物、羧酸衍生物和一些酯类化合物在碱性条件与羟含有内酯的化合物、羧酸衍生物和一些酯类化合物在碱性条件与羟胺作用，生成胺作用，生成羟肟酸羟肟酸；在；在稀酸中与高铁离子稀酸中与高铁离子呈色。呈色。ChP2010收载了收载了青蒿素和青蒿琥酯的羟肟酸铁鉴别反应。青蒿素和青蒿琥酯的羟肟酸铁鉴别反应。3.3.香草醛香
22、草醛-硫酸反应硫酸反应 v 硫酸香草醛溶液显色原理硫酸香草醛溶液显色原理:使羧基脱水，增加双键结构，再经使羧基脱水，增加双键结构，再经双键位移，双分子缩合等反应生成共轭双键系统，又在酸作用下双键位移，双分子缩合等反应生成共轭双键系统，又在酸作用下形成阳碳离子盐而显色。是一种通用显色剂。形成阳碳离子盐而显色。是一种通用显色剂。30喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析(二二)吸收光谱特征吸收光谱特征v青蒿素类抗疟原料药在青蒿素类抗疟原料药在ChP2010中均采用中均采用红外光谱红外光谱的方法进行鉴别。的方法进行鉴别。1.1.红外吸收光谱特征红外吸收光谱特征 v但是但是制剂制剂的红外光吸收图谱鉴别须的红外
23、光吸收图谱鉴别须经提取分离经提取分离，残渣干燥后，进行，残渣干燥后，进行红外光吸收图谱与对照的图谱比较。红外光吸收图谱与对照的图谱比较。v要求所得的红外光吸收图谱应与对照的要求所得的红外光吸收图谱应与对照的图谱一致图谱一致。2.2.紫外吸收光谱特征紫外吸收光谱特征 由于青蒿素类药物分子结构中由于青蒿素类药物分子结构中母核母核，不具有共轭体系，其紫外吸收，不具有共轭体系，其紫外吸收光谱的主要是末端吸收。但光谱的主要是末端吸收。但C-10C-10由于取代基由于取代基的不同具有一定吸收特的不同具有一定吸收特征。征。ChP2010ChP2010均未采用本法鉴别所收载青蒿素类药物。均未采用本法鉴别所收载
24、青蒿素类药物。31喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析利用比较供试品溶液主峰与对照品溶液主峰的利用比较供试品溶液主峰与对照品溶液主峰的保留时间保留时间(tR)是否是否一致或比较供试品溶液所显一致或比较供试品溶液所显主斑点的位置和颜色主斑点的位置和颜色与对照品溶液主与对照品溶液主斑点的位置和颜色是否相同进行鉴别。斑点的位置和颜色是否相同进行鉴别。HPLC法法一般都规定在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶一般都规定在含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。青蒿素类抗疟青蒿素类抗疟原料药原料药在在ChP201
25、0中均采用中均采用HPLC的方法进行鉴别。的方法进行鉴别。但但制剂制剂中也有采用中也有采用TLC法法进行鉴别。进行鉴别。(三三)色谱法色谱法 32喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析三、检查三、检查 目前青蒿素的制备仍以天然药材分离提取为主，目前青蒿素的制备仍以天然药材分离提取为主，并用于其衍生药物的生产，所以药品中通常都存在并用于其衍生药物的生产，所以药品中通常都存在结构类似的有关物质，主要通过结构类似的有关物质，主要通过TLCTLC和和HPLCHPLC进行检进行检查控制查控制。33喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析四、含量测定四、含量测定 目前青蒿素类原料药物ChP2010中均采用HPLC法进行含量测定，双氢青蒿素片中采用水解后用UV测定法。34喹啉和青蒿素类抗疟疾药物的分析
