1、抗菌药物筛选的实验方法与技术教案2022-10-312022-10-312022-10-312022-10-312022-10-312022-10-312022-10-312022-10-314 4，培养基的灭菌培养基的灭菌 高压蒸汽灭菌是微生物学实验、发酵工业高压蒸汽灭菌是微生物学实验、发酵工业生产、以及外科手术器械等方面最常用的生产、以及外科手术器械等方面最常用的一种灭菌方法。一种灭菌方法。（1 1）打开灭菌锅盖，加适量水；）打开灭菌锅盖，加适量水；（2 2）将待灭菌物品放入灭菌桶内。（）将待灭菌物品放入灭菌桶内。（3 3）将盖上的软管插入灭菌桶的槽内，加盖，将盖上的软管插入灭菌桶的槽内，
2、加盖，上下螺栓口对齐，均匀旋紧螺栓，使锅密上下螺栓口对齐，均匀旋紧螺栓，使锅密闭。闭。（4 4）打开放汽阀，加热，自锅内开始产）打开放汽阀，加热，自锅内开始产生蒸汽后再关紧放汽阀，待压力逐渐上升生蒸汽后再关紧放汽阀，待压力逐渐上升至所需温度时，控制热源，维持所需压力至所需温度时，控制热源，维持所需压力和温度，并开始计时和温度，并开始计时20 min20 min后停止加热。后停止加热。（5 5）待压力降至接近）待压力降至接近0 0时，慢慢打开放汽时，慢慢打开放汽阀阀(排汽口排汽口)，开盖，立即取出灭菌物品。，开盖，立即取出灭菌物品。2022-10-315 5，斜面和平板的制作，斜面和平板的制作
3、将巳灭菌装有琼脂培养基将巳灭菌装有琼脂培养基的试管，趁热置于木棒上的试管，趁热置于木棒上，使成适当斜度，凝固后，使成适当斜度，凝固后即成斜面即成斜面(图图1-3)1-3)斜面长斜面长度不超过试管长度度不超过试管长度1/21/2为为宜。宜。2022-10-31平板的制作平板的制作 2022-10-316 6，斜面培养基接种，斜面培养基接种 斜面培养基接种法斜面培养基接种法一般不用作分离培一般不用作分离培养，仅使细菌繁殖养，仅使细菌繁殖为菌种传代或观察为菌种传代或观察其某些生化特性之其某些生化特性之用。用。(1)(1)接种灭菌接种灭菌 (2)(2)开开启棉塞启棉塞 (3)(3)管口灭管口灭菌菌 (
4、4)(4)挑起菌苔挑起菌苔 (5)(5)接种接种 (6)(6)塞好棉塞好棉塞。塞。2022-10-317 7，液液体体培培养养基基接接种种法法2022-10-31三、微量稀释法体外抗菌实验三、微量稀释法体外抗菌实验v连续稀释法（试管稀释法）通常用于测定微生物连续稀释法（试管稀释法）通常用于测定微生物的最小抑菌浓度（的最小抑菌浓度（MICMIC），即将微生物的浓度按），即将微生物的浓度按几何级数或数学级数进行递减稀释，然后将不同几何级数或数学级数进行递减稀释，然后将不同浓度的微生物混入含试验菌的液体培养基或固体浓度的微生物混入含试验菌的液体培养基或固体培养基中，经培养后，能抑制试验菌生长的最低培
5、养基中，经培养后，能抑制试验菌生长的最低浓度，即为该微生物的最小抑菌浓度。浓度，即为该微生物的最小抑菌浓度。v微量稀释法微量稀释法 此种方法常用于测定细菌对药物敏此种方法常用于测定细菌对药物敏感性或新药对细菌的抗菌活性试验。一般应用感性或新药对细菌的抗菌活性试验。一般应用9696孔微量稀释板，孔底呈孔微量稀释板，孔底呈U U型，每孔容量为型，每孔容量为0.20-0.20-0.30ml0.30ml。本法操作较便，用培养基量少，可作大。本法操作较便，用培养基量少，可作大批量药敏试验。批量药敏试验。2022-10-31(一）实验过程一）实验过程（1 1）实验菌的准备。）实验菌的准备。选取大肠杆菌选取
6、大肠杆菌(Escherichia c o l i)、金 黄 色 葡 萄 球 菌、金 黄 色 葡 萄 球 菌(Staphylicoccus aureus)、白、白色葡萄球菌色葡萄球菌(Staphylococcus albus)、蜡状芽孢杆菌菌种、蜡状芽孢杆菌菌种在营养琼脂斜面培养基上传在营养琼脂斜面培养基上传代培养一次后，再将其接种代培养一次后，再将其接种至营养肉汤培养基中至营养肉汤培养基中3737培培养养6-12 h6-12 h，冰箱备用。，冰箱备用。（2 2）抗菌化合物的初步筛）抗菌化合物的初步筛选，按下表取选，按下表取9696孔培养板孔培养板一块，进行编号，将一块，进行编号，将4444种种
7、化合物（由有机化学研究化合物（由有机化学研究所其他教师和研究生提供）所其他教师和研究生提供）用用DMSODMSO或蒸馏水配制成或蒸馏水配制成5050 mol/mlmol/ml，（也可用无菌，（也可用无菌过滤器过滤后）放置在灭过滤器过滤后）放置在灭菌的小离心管中。菌的小离心管中。2022-10-31筛选实验过程筛选实验过程（3 3）在超净工作台内，酒精灯下）在超净工作台内，酒精灯下，将液体培养的细菌菌种用培养液，将液体培养的细菌菌种用培养液进行稀释，稀释度为进行稀释，稀释度为1 1：10001000或或1:5001:500。用无菌的移液器（吸咀经。用无菌的移液器（吸咀经过灭菌处理）将稀释的液体菌
8、种过灭菌处理）将稀释的液体菌种198198 l l加入到除了加入到除了A1,B1A1,B1以外的孔内以外的孔内，2 2 l l各种化合物溶液（各种化合物溶液（DMSODMSO配置配置），），A1,B1,C1,D1A1,B1,C1,D1加加200 200 l l培养液培养液，震荡混合后，震荡混合后3737培养培养12h-18h,12h-18h,用酶标仪用酶标仪630nm630nm侧吸光度。侧吸光度。DMSODMSO的的最终浓度保持在最终浓度保持在1%1%。每个样品设两。每个样品设两个平行孔。个平行孔。2022-10-3196孔细胞培养板加样安排孔细胞培养板加样安排1 12 23 34 45 56
9、 67 78 89 9101011111212A A培养液培养液200200 l l样品样品1 12 23 34 45 56 67 78 89 910101111B B培养液培养液200200 l l样品样品1 12 23 34 45 56 67 78 89 910101111C C培养液培养液200200 l l样品样品12121313141415151616171718181919202021212222D D培养液培养液200200 l l样品样品12121313141415151616171718181919202021212222E E菌对照菌对照(2(2 l DMSO)l DMSO
10、)样品样品23232424252526262727282829293030313132323333F F菌对照菌对照(2(2 l DMSO)l DMSO)样品样品23232424252526262727282829293030313132323333G G菌对照菌对照(2(2 l DMSO)l DMSO)样品样品34343535363637373838393940404141424243434444H H菌对照菌对照(2(2 l DMSO)l DMSO)样品样品34343535363637373838393940404141424243434444样品浓度样品浓度0.02mmol/ml 0.0
11、2mmol/ml 样品分子量样品分子量/100.mg/100.mg 用用DMSODMSO配成配成0.5ml0.5ml即可，每即可，每次实验用次实验用2 2 l l，9696孔板的孔体积孔板的孔体积200200 l l，样品的最终浓度为，样品的最终浓度为200200 mol/Lmol/L，大，大于该浓度则无价值。于该浓度则无价值。2022-10-31试验用样品试验用样品v环丙沙星环丙沙星 v2 2,4,4,3-,3-三羟基二苯甲酮三羟基二苯甲酮 v2,4,42,4,4-三羟基二苯甲酮三羟基二苯甲酮 v2,4,22,4,2-三羟基二苯甲酮三羟基二苯甲酮 v2,3,4,22,3,4,2-四羟基二苯甲
12、酮四羟基二苯甲酮 v2,3,4,32,3,4,3-四羟基二苯甲酮四羟基二苯甲酮 v2,3,4,42,3,4,4-四羟基二苯甲酮四羟基二苯甲酮 v2,4,22,4,2,4,4-四羟基二苯甲酮四羟基二苯甲酮 v2,3,4,22,3,4,2,4,4-五羟基二苯甲酮五羟基二苯甲酮 v丹皮酚丹皮酚 v丹皮酚丹皮酚-镍（镍（IIII）配合物）配合物 v丹皮酚丹皮酚-氧钒（氧钒（V V）配合物）配合物 v丹皮酚丹皮酚-铜（铜（IIII）配合物）配合物 v丹皮酚丹皮酚-钴（钴（IIII）配合物）配合物 v丹皮酚丹皮酚-锰（锰（IIII）配合物）配合物 v丹皮酚丹皮酚-锌（锌（IIII）配合物）配合物 v苯甲基
13、苯甲基-N-N-苯基亚胺苯基亚胺 v3-3-羟基苯甲基羟基苯甲基-N-N-苯基亚胺苯基亚胺 v4-4-羟基苯甲基羟基苯甲基-N-2,4-N-2,4-二甲氧基苯基亚胺二甲氧基苯基亚胺 v2-2-羟基苯甲基羟基苯甲基-N-3,5-N-3,5-二苯基亚胺二苯基亚胺 v3,4-3,4-二羟基苯甲基二羟基苯甲基-N-N-苯基亚胺苯基亚胺 v4-4-羟基苯甲基羟基苯甲基-N-3,4-N-3,4-二甲氧基苯基亚胺二甲氧基苯基亚胺 23.4-23.4-羟基羟基-3-3-甲氧基甲氧基-N-2,4-N-2,4-二甲氧基苯基亚胺二甲氧基苯基亚胺24.24.苯甲基苯甲基-N-4-N-4-羟基苯基亚胺羟基苯基亚胺 v3
14、,4-3,4-二羟基苯甲基二羟基苯甲基-N-2,4-N-2,4-二甲氧基苯基亚胺二甲氧基苯基亚胺v4-4-羟基苯甲基羟基苯甲基-N-4-N-4-羟基苯基亚胺羟基苯基亚胺v3,5-3,5-二羟基苯甲基二羟基苯甲基-N-3,4-N-3,4-二甲氧基苯基亚胺二甲氧基苯基亚胺v2,5-2,5-二羟基苯甲基二羟基苯甲基-N-4-N-4-羟基苯基亚胺羟基苯基亚胺 v2,4-2,4-二羟基苯甲基二羟基苯甲基-N-4-N-4-羟基苯基亚胺羟基苯基亚胺 v2,4-2,4-二羟基苯甲基二羟基苯甲基-N-2,4-N-2,4-二甲氧基苯基亚胺二甲氧基苯基亚胺v4-4-羟基苯甲基羟基苯甲基-N-3-N-3-羟基苯基亚胺
15、羟基苯基亚胺v3,5-3,5-二羟基苯甲基二羟基苯甲基-N-2,4-N-2,4-二甲氧基苯基亚胺二甲氧基苯基亚胺 v4-4-羟基羟基-3-3-甲氧基甲氧基-N-3,4-N-3,4-二甲氧基苯基亚胺二甲氧基苯基亚胺 v4-4-羟基苯甲基羟基苯甲基-N-4-N-4-甲基苯基亚胺甲基苯基亚胺 v4-4-羟基羟基-3-3-甲氧基苯甲基甲氧基苯甲基-N-4-N-4-甲基苯基亚胺甲基苯基亚胺 v3,5-3,5-二羟基苯甲基二羟基苯甲基-N-4-N-4-甲基苯基亚胺甲基苯基亚胺 v2,4-2,4-二羟基苯甲基二羟基苯甲基-N-4-N-4-甲基苯基亚胺甲基苯基亚胺 v4-4-磺酸基磺酸基-3-3,4,4-二羟
16、基偶氮苯二羟基偶氮苯v4-4-磺酸基磺酸基-2-2,4,4-二羟基偶氮苯二羟基偶氮苯v4-4-硝基硝基-3-3,4,4-二羟基偶氮苯二羟基偶氮苯v4-4-硝基硝基-2-2,4,4-二羟基偶氮苯二羟基偶氮苯v4-4-硝基硝基-2-2,5,5-二羟基偶氮苯二羟基偶氮苯v4-4-溴溴-3-3,4,4-二羟基偶氮苯二羟基偶氮苯 v对羟基苯甲酸甲酯对羟基苯甲酸甲酯 2022-10-31筛选数据分析筛选数据分析 测试的样品中，测试的样品中，1 1号样为号样为市场上临床使用的环丙沙市场上临床使用的环丙沙星，浓度为星，浓度为0.005mmol/L0.005mmol/L。其 他 样 品 浓 度 为。其 他 样
17、品 浓 度 为0.02mmol/L0.02mmol/L。实验中，以培养基为空实验中，以培养基为空白白0%0%，以带菌培养液为对，以带菌培养液为对照照100%100%。如果酶标仪如果酶标仪630nm630nm测试的结果中，测试的结果中，空白为空白为-0.2-0.2，空内液体呈透明清，空内液体呈透明清澈，对照孔的值为澈，对照孔的值为+0.1-0+0.1-0.2 2。如果测试样品的值也同样达到如果测试样品的值也同样达到-0.20.2，表明样品在，表明样品在200200 mol/Lmol/L具有具有较好的抗菌活性。较好的抗菌活性。如果测试样品的值在对照孔和空如果测试样品的值在对照孔和空白之间，表明样品
18、在高浓度有抗白之间，表明样品在高浓度有抗菌作用，请选取菌作用，请选取1111个抗菌效果较个抗菌效果较好的样品做下面的最小抑菌浓度好的样品做下面的最小抑菌浓度实验。实验。2022-10-31筛选数据分析筛选数据分析 测试的样品中，测试的样品中，1 1号样为号样为市场上临床使用的环丙沙市场上临床使用的环丙沙星，浓度为星，浓度为0.005mmol/L0.005mmol/L。其 他 样 品 浓 度 为。其 他 样 品 浓 度 为0.02mmol/L0.02mmol/L。实验中，以培养基为空实验中，以培养基为空白白0%0%，以带菌培养液为对，以带菌培养液为对照照100%100%。如果酶标仪如果酶标仪63
19、0nm630nm测试的结果中，测试的结果中，空白为空白为-0.2-0.2，空内液体呈透明清，空内液体呈透明清澈，对照孔的值为澈，对照孔的值为+0.1-0+0.1-0.2 2。如果测试样品的值也同样达到如果测试样品的值也同样达到-0.20.2，表明样品在，表明样品在200200 mol/Lmol/L具有具有较好的抗菌活性。较好的抗菌活性。如果测试样品的值在对照孔和空如果测试样品的值在对照孔和空白之间，表明样品在高浓度有抗白之间，表明样品在高浓度有抗菌作用，请选取菌作用，请选取1111个抗菌效果较个抗菌效果较好的样品做下面的最小抑菌浓度好的样品做下面的最小抑菌浓度实验。实验。2022-10-31（
20、4 4）最小抑菌浓度或）最小抑菌浓度或EC50EC50的测试的测试 v操作步骤与试管稀释法相似，一般常用操作步骤与试管稀释法相似，一般常用MHMH培养基，培养基，根据上面筛选试验选取出来的样品，在微孔板孔根据上面筛选试验选取出来的样品，在微孔板孔内用微量移液器直接在微孔板孔内作二倍稀释，内用微量移液器直接在微孔板孔内作二倍稀释，然后接种稀释菌液，其中留一列孔作为药液对照，然后接种稀释菌液，其中留一列孔作为药液对照，另一孔仅加培养基和菌液作为菌对照，试验完毕另一孔仅加培养基和菌液作为菌对照，试验完毕后，用微量搅拌器震荡混匀后，置后，用微量搅拌器震荡混匀后，置3737温孵温孵12-12-18h18
21、h，用酶标仪，用酶标仪630nm630nm侧吸光度。侧吸光度。2022-10-31样品稀释后的浓度表样品稀释后的浓度表A 培养液培养液200 l样品样品1，200 M234567891011B 培养液培养液200 l样品样品1，100 MC 培养液培养液200 l样品样品1，50 MD 培养液培养液200 l样品样品1，25 ME 菌对照菌对照(2 l DMSO)样品样品1，12.5 MF 菌对照菌对照(2 l DMSO)样品样品1，6.25 MG 菌对照菌对照(2 l DMSO)样品样品1，3.13 MH 菌对照菌对照(2 l DMSO)样品样品1，1.56 M2022-10-31（二）数据
22、处理与分析（二）数据处理与分析抗菌药物的最小抗菌浓度测抗菌药物的最小抗菌浓度测试结果可能出现两种形式：试结果可能出现两种形式：1 1，在某一个稀释的样品浓，在某一个稀释的样品浓度，结果表现出细菌没有生度，结果表现出细菌没有生长，菌液较清（可与空白培长，菌液较清（可与空白培养基比），而下一个稀释的养基比），而下一个稀释的样品浓度，菌液中细菌生长样品浓度，菌液中细菌生长比较旺盛（可与含菌对照比比较旺盛（可与含菌对照比），那么，这个稀释的样品），那么，这个稀释的样品浓度就为该样品抗菌的最小浓度就为该样品抗菌的最小浓度。这种化合物的抗菌作浓度。这种化合物的抗菌作用可以称为杀菌作用。用可以称为杀菌作用。
23、如右表中红色值中的样品浓如右表中红色值中的样品浓度就是最小抗菌浓度。度就是最小抗菌浓度。培养液值培养液值-0.2013-0.2013样品样品1 1值值-0.2094-0.2094样品样品2 2值值-0.2066-0.2066培养液值培养液值-0.2027-0.2027样品样品1 1值值-0.2102-0.2102样品样品2 2值值-0.2103-0.2103培养液值培养液值-0.2005-0.2005样品样品1 1值值-0.2068-0.2068样品样品2 2值值-0.2112-0.2112培养液值培养液值-0.2106-0.2106样品样品1 1值值-0.2054-0.2054样品样品2 2
24、值值-0.2022-0.2022菌对照值菌对照值 0.21820.2182样品样品1 1值值-0.2028-0.2028样品样品2 2值值 0.20870.2087菌对照值菌对照值 0.20680.2068样品样品1 1值值-0.2008-0.2008样品样品2 2值值 0.21120.2112菌对照值菌对照值 0.21460.2146样品样品1 1值值 0.20230.2023样品样品2 2值值 0.20880.2088菌对照值菌对照值 0.20330.2033样品样品1 1值值 0.20360.2036样品样品2 2值值 0.20330.20332022-10-312 2，实验中，不同稀释
25、的样，实验中，不同稀释的样品浓度的测试结果没有上面品浓度的测试结果没有上面的现象，而是出现规律性的的现象，而是出现规律性的上升。即，这种样品测出的上升。即，这种样品测出的数据是随着样品浓度的下降数据是随着样品浓度的下降而上升，可以根据其数据画而上升，可以根据其数据画出一条细菌的生长曲线，如出一条细菌的生长曲线，如果对照样的值定为果对照样的值定为100%100%，可，可以从曲线上求出抑制以从曲线上求出抑制50%50%时时样品的浓度，所以，我们称样品的浓度，所以，我们称这种这种 抗菌为抑菌作用，表抗菌为抑菌作用，表明该化合物不能杀死细菌，明该化合物不能杀死细菌，但可以抑制其生长。但可以抑制其生长。
26、培养液值培养液值-0.2013-0.2013样品样品1 1值值-0.2194-0.2194样品样品2 2值值-0.2166-0.2166培养液值培养液值-0.2027-0.2027样品样品1 1值值-0.2082-0.2082样品样品2 2值值-0.1893-0.1893培养液值培养液值-0.2005-0.2005样品样品1 1值值-0.1694-0.1694样品样品2 2值值-0.1002-0.1002培养液值培养液值-0.2106-0.2106样品样品1 1值值-0.1268-0.1268样品样品2 2值值 0.00220.0022菌对照值菌对照值 0.21820.2182样品样品1 1值
27、值-0.0428-0.0428样品样品2 2值值 0.05870.0587菌对照值菌对照值 0.20680.2068样品样品1 1值值-0.0023-0.0023样品样品2 2值值 0.16120.1612菌对照值菌对照值 0.21460.2146样品样品1 1值值 0.68040.6804样品样品2 2值值 0.20880.2088菌对照值菌对照值 0.20330.2033样品样品1 1值值 0.13890.1389样品样品2 2值值 0.21330.21332022-10-31四、琼脂扩散法四、琼脂扩散法v 此种方法包括纸片法，杯碟法挖洞法等，它们的共同此种方法包括纸片法，杯碟法挖洞法等，
28、它们的共同点均在平皿琼脂内加入适量测试细菌，按上述方法放置点均在平皿琼脂内加入适量测试细菌，按上述方法放置适量药液在菌层上，药物在琼脂四周扩散，经孵育后，适量药液在菌层上，药物在琼脂四周扩散，经孵育后，细菌生长受抑制，出现抑菌圈，测定抑菌圈直径，能了细菌生长受抑制，出现抑菌圈，测定抑菌圈直径，能了解细菌对药物的敏感程度。解细菌对药物的敏感程度。v 琼脂扩散法可定性或初步判断该化合物的抗菌能力，一琼脂扩散法可定性或初步判断该化合物的抗菌能力，一般是将化合物稀释后，加如含试验菌的混菌平板中，由般是将化合物稀释后，加如含试验菌的混菌平板中，由于化合物在琼脂培养基中的扩散作用，使化合物周围的于化合物在
29、琼脂培养基中的扩散作用，使化合物周围的试验菌不能生长，从而产生抑菌圈或抑菌带。根据抑菌试验菌不能生长，从而产生抑菌圈或抑菌带。根据抑菌圈或抑菌带的大小来评价化合物抗菌作用的强弱。圈或抑菌带的大小来评价化合物抗菌作用的强弱。2022-10-31图图:标准曲线法标准曲线法 图图 ：链霉素标准曲线：链霉素标准曲线 双碟、钢管与抑菌圈位置图双碟、钢管与抑菌圈位置图S S：标准品：标准品T T：供试品：供试品 抑菌圈直径抑菌圈直径(mm)(mm)2022-10-31（一）滤纸片法实验过程（一）滤纸片法实验过程 （1 1）试验菌的准备。在营养培养基接）试验菌的准备。在营养培养基接种金黄色葡萄球菌和大肠杆菌
30、菌种培养传种金黄色葡萄球菌和大肠杆菌菌种培养传代依次后，再移种至营养肉汤培养基中，代依次后，再移种至营养肉汤培养基中，在在3737培养培养10-18h10-18h，取出备用。，取出备用。（2 2）混菌平板的植被。用无菌吸管分别）混菌平板的植被。用无菌吸管分别取金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的肉汤培养取金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的肉汤培养物，在无菌平皿中各滴加物，在无菌平皿中各滴加4-54-5滴，再将已滴，再将已溶化并冷却至溶化并冷却至4545的琼脂培养基倒入平皿的琼脂培养基倒入平皿中，每皿中，每皿20mL20mL，立即晃动平皿混匀，平放，立即晃动平皿混匀，平放台上，凝固后备用。台上，凝固后备用。（3
31、3）用记号笔在无菌平皿底部划十字线，）用记号笔在无菌平皿底部划十字线，将平板分为四将平板分为四-六个区，每一个区上标注六个区，每一个区上标注加入药品名称。加入药品名称。（4 4）用无菌镊子取无菌滤）用无菌镊子取无菌滤纸片（直径纸片（直径6-8mm6-8mm），浸入），浸入待测药液（可以稀释成待测药液（可以稀释成4-64-6不同浓度），然后轻轻放不同浓度），然后轻轻放入混菌平板对应的区域中入混菌平板对应的区域中央，贴紧（如图）。央，贴紧（如图）。（5 5）将平皿放入）将平皿放入3737恒温恒温箱中倒置培养箱中倒置培养20h20h，然后观，然后观察结果。察结果。（6 6）用卡尺测量抑菌圈的）用卡尺
32、测量抑菌圈的直径，以判断微生物的抑直径，以判断微生物的抑菌能力。菌能力。2022-10-312022-10-31效果评价效果评价v抑菌圈直径抑菌圈直径15mm 15mm 高度敏感高度敏感v抑菌圈直径抑菌圈直径10-15mm 10-15mm 中度敏感中度敏感v抑菌圈直径抑菌圈直径10mm 10mm 低度敏感低度敏感v无抑菌圈无抑菌圈 不敏感或耐药不敏感或耐药2022-10-31四、实验安排四、实验安排每周四上午，先进行抗菌药物的筛选，然后进行培养基每周四上午，先进行抗菌药物的筛选，然后进行培养基的配制、灭菌，斜面和液体试管培养的制作及接菌，为的配制、灭菌，斜面和液体试管培养的制作及接菌，为第二天的实验做准备。第二天的实验做准备。每周五上午，用酶标仪进行抗菌药物的测定，然后进行每周五上午，用酶标仪进行抗菌药物的测定，然后进行最小浓度测试和琼脂扩散法测试实验。每周六上午最小浓度测试和琼脂扩散法测试实验。每周六上午9 9时，时，用酶标仪检测最小抑菌浓度和抑菌圈测试。用酶标仪检测最小抑菌浓度和抑菌圈测试。由指导教师预先进行细菌试管液体培养由指导教师预先进行细菌试管液体培养18-2018-20小时，为后小时，为后续实验做准备。续实验做准备。123谢谢您的欣赏谢谢您的欣赏
