1、黄酮类化合物检识技术黄酮类化合物检识技术林林 玲玲1、化学检识现象：现象：黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）：黄酮（醇）、二氢黄酮（醇）：显橙红紫显橙红紫红色；查耳酮、橙酮、儿茶素：红色；查耳酮、橙酮、儿茶素：（）阴性阴性 操作：样品操作：样品/甲醇甲醇 +Mg粉粉+3d 浓浓 HCl12分钟分钟显色显色（1）还原反应 盐酸镁粉反应盐酸镁粉反应查耳酮、橙酮、儿茶素类则不显反应；异黄酮除少数查耳酮、橙酮、儿茶素类则不显反应；异黄酮除少数例外，均不显色；例外，均不显色；花色素在浓盐酸中也会发生色变，须先作空白对照实花色素在浓盐酸中也会发生色变，须先作空白对照实验。验。（1）还原反应v 四氢硼钠反应四氢硼钠
2、反应 操作：样品操作：样品/甲醇甲醇 +NaBH4的甲醇液的甲醇液1分钟分钟+数滴浓数滴浓HCl显色显色现象：二氢黄酮、二氢黄酮醇现象：二氢黄酮、二氢黄酮醇 红红紫红紫红 其它黄酮类其它黄酮类 （-）鉴别意义：此反应可用于二氢黄酮类、二氢黄酮醇类与鉴别意义：此反应可用于二氢黄酮类、二氢黄酮醇类与其他黄酮类化合物的鉴别。其他黄酮类均无此现象。其他黄酮类化合物的鉴别。其他黄酮类均无此现象。（2）金属盐类的络合反应可以发生金属盐类络合反应的基团：可以发生金属盐类络合反应的基团：常见的金属盐类：铝盐、镁盐、锆常见的金属盐类：铝盐、镁盐、锆盐等。盐等。OOOHOHOHOOH 三氯化铝反应：三氯化铝反应：
3、v操作方法操作方法：在滤纸上滴加样品液，再滴加：在滤纸上滴加样品液，再滴加1%三三氯化铝乙醇溶液，通过纸斑点反应观察现象。氯化铝乙醇溶液，通过纸斑点反应观察现象。v现象：大多数黄酮显现象：大多数黄酮显黄色并有荧光黄色并有荧光。例外例外 4-OH4-OH或或7 7，4-4-二二OHOH黄酮醇显黄酮醇显天蓝色荧光天蓝色荧光。v鉴别意义：鉴别意义：黄酮类化合物的定性定量分析。黄酮类化合物的定性定量分析。（2）金属盐类的络合反应 锆盐枸橼酸反应v鉴别意义鉴别意义：区别区别3-OH3-OH 和和/或或 5-OH5-OH的存在的存在。OOOHOHOZrClOH2O注意：注意：3-3-羟基羟基黄酮产生的络合
4、物稳定性大于黄酮产生的络合物稳定性大于5-5-羟基羟基黄酮。黄酮。（2）金属盐类的络合反应操作要点：操作要点：样品样品/MeOH/MeOH2%ZrOCl2%ZrOCl2 2/MeOH/MeOH溶液变黄溶液变黄有3-OH和/或5-OH2%2%枸橼酸枸橼酸/MeOH/MeOH仍显黄色仍显黄色显著褪色显著褪色有有3-OH3-OH无无3-OH3-OH，有，有5-OH5-OH 醋酸镁反应醋酸镁反应操作：操作：在滤纸上滴加样品液，喷以醋酸镁的甲醇液，加热干在滤纸上滴加样品液，喷以醋酸镁的甲醇液，加热干燥后观察纸班点现象。燥后观察纸班点现象。现象：二氢黄酮现象：二氢黄酮(醇醇)：天蓝色天蓝色荧光荧光 异黄酮
5、、黄酮异黄酮、黄酮(醇醇)：黄黄-橙黄橙黄-褐色褐色荧光荧光鉴别意义：鉴别意义：用于二氢黄酮、二氢黄酮醇类与其他黄酮类化合用于二氢黄酮、二氢黄酮醇类与其他黄酮类化合物的区别检识。物的区别检识。（2 2）金属盐类的络合反应）金属盐类的络合反应 氨性氯化锶反应v操作：操作：将样品的甲醇液置小试管中，加入将样品的甲醇液置小试管中，加入 3滴滴0.01mol/L氯化锶甲醇液，再加氯化锶甲醇液，再加3滴已用氨蒸气饱滴已用氨蒸气饱和的甲醇溶液，和的甲醇溶液，v现象：现象：具有具有邻二酚羟基邻二酚羟基结构的黄酮类化合物结构的黄酮类化合物:绿棕色及至黑色沉淀。绿棕色及至黑色沉淀。v鉴别意义：鉴别意义：具有具有
6、邻二酚羟基邻二酚羟基结构的黄酮类化合物结构的黄酮类化合物（2）金属盐类的络合反应（3 3）碱性试剂反应）碱性试剂反应OOOHOHOHOCH3OOHOHOHOCH3OHOHH+二氢黄酮类二氢黄酮类遇碱遇碱变成相应异构体查耳酮显变成相应异构体查耳酮显橙或黄色橙或黄色氨熏后能使黄酮、黄酮醇类转为亮黄色，紫外光下欢察更为氨熏后能使黄酮、黄酮醇类转为亮黄色，紫外光下欢察更为明显。氨熏放置后，颜色因氨挥发而褪色，故变色是可逆的；明显。氨熏放置后，颜色因氨挥发而褪色，故变色是可逆的；碳酸钠显色的颜色较稳定。碳酸钠显色的颜色较稳定。具有具有邻二酚羟基邻二酚羟基结构的黄酮在碱液中由结构的黄酮在碱液中由黄黄-棕色
7、絮状棕色絮状沉淀。沉淀。（4 4）硼酸显色反应）硼酸显色反应黄酮类化合物分子中有黄酮类化合物分子中有羟基羟基结构的存在时，结构的存在时，在在酸性条件酸性条件下与下与硼酸硼酸反应生成反应生成亮黄色。亮黄色。例如：例如：OOHOOHO2、色谱检识 常采用硅胶或聚酰胺薄层色谱。常采用硅胶或聚酰胺薄层色谱。硅胶薄层色谱：硅胶薄层色谱：【用途用途】用于分析与鉴定弱极性黄酮类化合物。用于分析与鉴定弱极性黄酮类化合物。【展开剂展开剂】甲苯甲苯-甲酸甲酯甲酸甲酯-甲酸甲酸(5:4:1)(5:4:1)，苯，苯-甲醇，氯仿甲醇，氯仿-甲醇等。甲醇等。聚酰胺薄层色谱：聚酰胺薄层色谱：【用途用途】分离大多数黄酮及苷类
8、，适用范围广，分离效果好。分离大多数黄酮及苷类，适用范围广，分离效果好。【展开剂展开剂】聚酰胺对黄酮类化合物吸附能力强，大多数展开剂聚酰胺对黄酮类化合物吸附能力强，大多数展开剂中含有醇、酸或水。中含有醇、酸或水。（1 1）薄层色谱鉴定）薄层色谱鉴定 【用途用途】适用于各种黄酮类化合物及其苷类的分析；适用于各种黄酮类化合物及其苷类的分析；【展开剂展开剂】黄酮类化合物一般宜用极性相对较小的黄酮类化合物一般宜用极性相对较小的“醇性醇性”溶剂展开溶剂展开 ；黄酮苷类宜用极性相对较大的黄酮苷类宜用极性相对较大的“水性水性”展开剂展开剂 ；黄酮苷和苷元混合物的分离和检识常用黄酮苷和苷元混合物的分离和检识常
9、用双向纸色谱法双向纸色谱法，第一向通第一向通常用常用“醇性醇性”展开剂展开，第二向用极性大的展开剂展开，第二向用极性大的“水性水性”展开剂展开。展开剂展开。（2）纸色谱v苷元：分配色谱。流动相：苷元：分配色谱。流动相：正丁醇正丁醇-冰醋酸冰醋酸-水水(4：1：5上层，上层，BAW)系统。系统。v苷：双向纸色谱。苷：双向纸色谱。第一向：醇性溶剂展开，例如第一向：醇性溶剂展开，例如正丁醇正丁醇-冰醋酸冰醋酸-水水(4：1：5上层，上层，BAW)系统，化合物极性大，吸附强。系统，化合物极性大，吸附强。第二向：水性溶剂展开，例如第二向：水性溶剂展开，例如2-6%2-6%醋酸水，化合物极醋酸水，化合物极性大，吸附弱。性大，吸附弱。（2）纸色谱双向纸色谱图例双向纸色谱图例一一次次二二次次展开剂：展开剂：正丁醇正丁醇-冰醋冰醋酸酸-水水(4：1：5上层，上层，BAW)系统系统展开剂：醋酸展开剂：醋酸-水水
