1、第第10章章 高效液相色谱分离检测技术高效液相色谱分离检测技术学习目标学习目标知识目标知识目标 掌握化学键合相色谱法、离子色谱法和高效液相色谱的定性与掌握化学键合相色谱法、离子色谱法和高效液相色谱的定性与定量分析方法；熟悉高效液相色谱仪的组成结构及其工作原理，定量分析方法；熟悉高效液相色谱仪的组成结构及其工作原理，了解毛细管电泳法、毛细管电泳仪组成结构、分离模式及应用和了解毛细管电泳法、毛细管电泳仪组成结构、分离模式及应用和高效液相色谱分离方法选择与应用。高效液相色谱分离方法选择与应用。技能目标技能目标 掌握高效液相色谱仪使用操作技术，会运用高效液相色谱分离掌握高效液相色谱仪使用操作技术，会运
2、用高效液相色谱分离检测的技术，能对高效液相色谱仪进行简单维护。检测的技术，能对高效液相色谱仪进行简单维护。第第2节节 高效液相色谱仪高效液相色谱仪 高效液相色谱仪结构及流程高效液相色谱仪结构及流程 一、输液系统一、输液系统单柱塞往复泵结构示意图单柱塞往复泵结构示意图 1高压输液泵高压输液泵 单柱塞往复泵单柱塞往复泵双柱塞往复泵双柱塞往复泵(串或并联串或并联）恒压泵恒压泵(淘汰淘汰)恒流泵恒流泵2梯度洗脱装置梯度洗脱装置 内梯度内梯度-高压泵将溶剂按程序压入混合室，高压泵将溶剂按程序压入混合室，混合后再注入色谱柱混合后再注入色谱柱 外梯度外梯度-多元溶剂通过比例阀再由泵注入色谱柱多元溶剂通过比例
3、阀再由泵注入色谱柱二元二元内梯度洗脱内梯度洗脱装置示意图装置示意图四元四元外梯度洗脱外梯度洗脱装置双泵装置双泵(串联串联)工作原理示意图工作原理示意图 3洗脱方式洗脱方式等度洗脱等度洗脱梯度洗脱梯度洗脱想一想想一想分别在何种情况下选择等度或梯度洗脱分别在何种情况下选择等度或梯度洗脱?二、进样系统二、进样系统1六通阀进样器六通阀进样器 2自动进样器自动进样器三、分离系统三、分离系统1色谱柱类型色谱柱类型常量柱内径24.6mm，柱长1025cm半微量柱：内径11.5mm，柱长1020cm毛细管柱：内径0.51mm，柱长3075mm分析型柱制备型柱制备型柱 内径内径2040mm，柱长，柱长1030c
4、m分析型分析型制备型制备型2填充剂填充剂-最最常用填充剂为化学键合硅胶常用填充剂为化学键合硅胶 四、检测系统四、检测系统1.紫外检测器紫外检测器可变波长检测器可变波长检测器光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器 光电二极管阵列检测器结构与光路示意图光电二极管阵列检测器结构与光路示意图 三维色谱图三维色谱图 2电化学检测器电化学检测器介电型介电型-测量两电极之间电容介质的介电测量两电极之间电容介质的介电常数变化测得组分浓度常数变化测得组分浓度 电导型电导型-测电导率变化来测量电离物质含量测电导率变化来测量电离物质含量 电位型电位型-测定电流为零时电极间的电位差值测定电流为零时电极间的电位差值 安培型安培型-测定电极间的电流变化而测定样品测定电极间的电流变化而测定样品浓度浓度典型电化学检测器示意图典型电化学检测器示意图 3蒸发光散射检测蒸发光散射检测 ELSD是基于是基于光线通过微小光线通过微小粒子时会产生粒子时会产生光散射的现象光散射的现象 蒸发光散射检测器工作原理示意图蒸发光散射检测器工作原理示意图 五、数据记录及处理系统（五、数据记录及处理系统（类似于类似于GC)GC)
