金免疫标记技术课件(模板).pptx

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资源描述

1、 v胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,聚合成为特定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,称为胶体金。v了解金免疫检测的临床应用v在加抗原(抗体)后,迅速加抗体(抗原),再加金标记第二抗体,由于有渗滤装置,反应很快,在数分钟内即可显出颜色反应。v会金免疫标记物的制备操作v胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,聚合成为特定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,称为胶体金。v01HAuCl4水溶液100ml,加入1枸橼酸三钠水溶液3ml,加热煮沸30min,冷却至4,溶液呈红色。v

2、此简单、方便如何用荧光v这样制成的胶体金颗粒则分别为15nm、1820nm、30nm和50nmv四立即加1-2滴缓冲液v01HAuCl4水溶液100ml,加入1枸橼酸三钠水溶液2ml,加热煮沸15min30min,直至颜色变红。v(2)15nm胶体金颗粒的制备:取0.v在加抗原(抗体)后,迅速加抗体(抗原),再加金标记第二抗体,由于有渗滤装置,反应很快,在数分钟内即可显出颜色反应。v45m)过滤,以除去其中的聚合物和其它可能混入的杂质。v制备高质量胶体金的注意事项vB液加入A液中,溶液变蓝,继续加热搅拌至溶液变v(3)15nm、18nm20nm、30nm或50nm胶体金颗粒的制备:取0.vB液

3、加入A液中,溶液变蓝,继续加热搅拌至溶液变v01HAuCl4水溶液100ml,加入1枸橼酸三钠水溶液3ml,加热煮沸30min,冷却至4,溶液呈红色。v这样制成的胶体金颗粒则分别为15nm、1820nm、30nm和50nmv根据需要迅速加入1枸橼酸三钠水溶液4ml、2.胶体金标记技术胶体金标记技术 (Immunogold labeling technique)是以胶体金作为示是以胶体金作为示踪标记物,应用于踪标记物,应用于抗原抗体反应的一抗原抗体反应的一种新型免疫标记技种新型免疫标记技术。术。(制备高质量胶体金的注意事项制备高质量胶体金的注意事项 讨论分析讨论分析v2鞣酸枸橼酸钠还原法v在加抗

4、原(抗体)后,迅速加抗体(抗原),再加金标记第二抗体,由于有渗滤装置,反应很快,在数分钟内即可显出颜色反应。v根据需要迅速加入1枸橼酸三钠水溶液4ml、2.v这样制成的胶体金颗粒则分别为15nm、1820nm、30nm和50nmv会熟练操作金免疫检测过程v会熟练操作金免疫检测过程v会熟练操作金免疫检测过程v(3)配制胶体金溶液的pH以中性(pH7.v身形成免疫分析过程后的颜色标记v根据需要迅速加入1枸橼酸三钠水溶液4ml、2.v金免疫法能测出抗体,如vB液加入A液中,溶液变蓝,继续加热搅拌至溶液变v在加抗原(抗体)后,迅速加抗体(抗原),再加金标记第二抗体,由于有渗滤装置,反应很快,在数分钟内

5、即可显出颜色反应。v(3)15nm、18nm20nm、30nm或50nm胶体金颗粒的制备:取0.v身形成免疫分析过程后的颜色标记v胶体金标记技术(Immunogold labeling technique)是以胶体金作为示踪标记物,应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。v四立即加1-2滴缓冲液v在加抗原(抗体)后,迅速加抗体(抗原),再加金标记第二抗体,由于有渗滤装置,反应很快,在数分钟内即可显出颜色反应。v调整鞣酸及K2CO3的用量v(2)15nm胶体金颗粒的制备:取0.v(3)15nm、18nm20nm、30nm或50nm胶体金颗粒的制备:取0.标本标本G G区:金标特异性抗体区:金标

6、特异性抗体(兔型兔型)C区:羊抗兔IgT区:标准抗原 吸水纸阴性结果 v1Mol/L K2CO30.vB液加入A液中,溶液变蓝,继续加热搅拌至溶液变v调整鞣酸及K2CO3的用量v了解金免疫检测的临床应用v以双抗体夹心法HCG为例:标本中HCG与NC膜上抗-HCG结v根据需要迅速加入1枸橼酸三钠水溶液4ml、2.vB液:1枸橼酸三钠4ml,1鞣酸0.v患儿,女,11岁,间断发热1周,伴咳嗽3天。v根据胶体金的一些物理性状,如高电子密度、颗粒大小、形状及颜色反应,加上结合物的免疫和生物学特性,因而使胶体金广泛地应用于免疫学、组织学、病理学和细胞生物学等领域。v01HAuCl4水溶液100ml,加热

7、煮沸。v调整鞣酸及K2CO3的用量v四立即加1-2滴缓冲液v身形成免疫分析过程后的颜色标记vB液加入A液中,溶液变蓝,继续加热搅拌至溶液变v会金免疫标记物的制备操作v45m)过滤,以除去其中的聚合物和其它可能混入的杂质。v(1)玻璃器皿必须彻底清洗,最好是经过硅化处理的玻璃器皿,或用第一次配制的胶体金稳定的玻璃器皿,再用双馏水冲洗后使用。v(5)氯金酸配成1水溶液在4可保持数月稳定,由于氯金酸易潮解,因此在配制时,最好将整个小包装一次性溶解。v在加抗原(抗体)后,迅速加抗体(抗原),再加金标记第二抗体,由于有渗滤装置,反应很快,在数分钟内即可显出颜色反应。v了解金免疫检测的临床应用v01HAu

8、Cl4水溶液100ml,加入1枸橼酸三钠水溶液2ml,加热煮沸15min30min,直至颜色变红。v了解金免疫检测的临床应用v四立即加1-2滴缓冲液v制备高质量胶体金的注意事项v以双抗体夹心法HCG为例:标本中HCG与NC膜上抗-HCG结v制备高质量胶体金的注意事项v免疫能检测出吗?,下一v这样制成的胶体金颗粒则分别为15nm、1820nm、30nm和50nmv1度,病程第2天查血常规正常,诊断“呼吸道感染”并静滴“阿奇霉素”3天,无明显改变,即而出现咳嗽,为阵发性刺激性咳嗽,少痰,胸片提示:双肺纹理增粗,右上肺片影。v根据需要迅速加入1枸橼酸三钠水溶液4ml、2.vB液:1枸橼酸三钠4ml,

9、1鞣酸0.v胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,聚合成为特定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,称为胶体金。v身形成免疫分析过程后的颜色标记v胶体金标记技术进一步发展应用于免疫转印、流式细胞术、液相免疫测定、固相斑点金银染色及斑点金免疫渗滤测定法等多种标记免疫检测方法v身形成免疫分析过程后的颜色标记v(1)10nm胶体金粒的制备:取0.v01HAuCl4水溶液100ml,加入1枸橼酸三钠水溶液3ml,加热煮沸30min,冷却至4,溶液呈红色。v(1)玻璃器皿必须彻底清洗,最好是经过硅化处理的玻璃器皿,或用第一次配制的胶体金稳定的玻璃

10、器皿,再用双馏水冲洗后使用。v75ml,继续煮沸约5min,出现橙红色。v(5)氯金酸配成1水溶液在4可保持数月稳定,由于氯金酸易潮解,因此在配制时,最好将整个小包装一次性溶解。v以双抗体夹心法HCG为例:标本中HCG与NC膜上抗-HCG结v01HAuCl4水溶液100ml,加热煮沸。(制备高质量胶体金的注意事项制备高质量胶体金的注意事项 v1Mol/L K2CO30.v胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,聚合成为特定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,称为胶体金。v免疫能检测出吗?,下一v胶体金标记技术(Immunogold la

11、beling technique)是以胶体金作为示踪标记物,应用于抗原抗体反应的一种新型免疫标记技术。v根据需要迅速加入1枸橼酸三钠水溶液4ml、2.v身形成免疫分析过程后的颜色标记v在加抗原(抗体)后,迅速加抗体(抗原),再加金标记第二抗体,由于有渗滤装置,反应很快,在数分钟内即可显出颜色反应。v(1)10nm胶体金粒的制备:取0.v(1)10nm胶体金粒的制备:取0.v制备高质量胶体金的注意事项v(3)15nm、18nm20nm、30nm或50nm胶体金颗粒的制备:取0.v45m)过滤,以除去其中的聚合物和其它可能混入的杂质。v01HAuCl4水溶液100ml,加热煮沸。v调整鞣酸及K2C

12、O3的用量v在加抗原(抗体)后,迅速加抗体(抗原),再加金标记第二抗体,由于有渗滤装置,反应很快,在数分钟内即可显出颜色反应。v(5)氯金酸配成1水溶液在4可保持数月稳定,由于氯金酸易潮解,因此在配制时,最好将整个小包装一次性溶解。v(5)氯金酸配成1水溶液在4可保持数月稳定,由于氯金酸易潮解,因此在配制时,最好将整个小包装一次性溶解。v根据需要迅速加入1枸橼酸三钠水溶液4ml、2.v(2)15nm胶体金颗粒的制备:取0.vB液加入A液中,溶液变蓝,继续加热搅拌至溶液变v01HAuCl4水溶液100ml,加热煮沸。vB液:1枸橼酸三钠4ml,1鞣酸0.v胶体金标记技术进一步发展应用于免疫转印、

13、流式细胞术、液相免疫测定、固相斑点金银染色及斑点金免疫渗滤测定法等多种标记免疫检测方法v胶体金在弱碱环境下带负电荷,可与蛋白质分子的正电荷基团形成牢固的结合,由于这种结合是静电结合,所以不影响蛋白质的生物特性。v胶体金是由氯金酸(HAuCl4)在还原剂如白磷、抗坏血酸、枸橼酸钠、鞣酸等作用下,聚合成为特定大小的金颗粒,并由于静电作用成为一种稳定的胶体状态,称为胶体金。v01HAuCl4水溶液100ml,加入1枸橼酸三钠水溶液3ml,加热煮沸30min,冷却至4,溶液呈红色。v(1)10nm胶体金粒的制备:取0.vB液加入A液中,溶液变蓝,继续加热搅拌至溶液变v2ml,混合,加入双馏水至20ml

14、。v(1)玻璃器皿必须彻底清洗,最好是经过硅化处理的玻璃器皿,或用第一次配制的胶体金稳定的玻璃器皿,再用双馏水冲洗后使用。v45m)过滤,以除去其中的聚合物和其它可能混入的杂质。v1Mol/L K2CO30.v掌握金免疫标记技术原理和分类v这样制成的胶体金颗粒则分别为15nm、1820nm、30nm和50nmv(5)氯金酸配成1水溶液在4可保持数月稳定,由于氯金酸易潮解,因此在配制时,最好将整个小包装一次性溶解。v(3)15nm、18nm20nm、30nm或50nm胶体金颗粒的制备:取0.v(2)15nm胶体金颗粒的制备:取0.v此简单、方便如何用荧光v(1)10nm胶体金粒的制备:取0.v此简单、方便如何用荧光v(2)试剂配制必须保持严格的纯净,所有试剂都必须使用双馏水或三馏水并去离子后配制,或者在临用前将配好的试剂经超滤或微孔滤膜(0.v在加抗原(抗体)后,迅速加抗体(抗原),再加金标记第二抗体,由于有渗滤装置,反应很快,在数分钟内即可显出颜色反应。v2鞣酸枸橼酸钠还原法

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