1、学习目标学习目标1.使用专一的培养基（含有尿素）分离专一的细菌（有脲酶的细菌）。2.利用指示剂颜色的变化检知（脲酶）所催化的反应。新课导入新课导入尿素是一种重要的农业氮肥，分子式为H2NCONH2，不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。今天我们来学习如何分离以尿素为氮源的微生物。微生物的代谢1实验原理2基础知识基础知识实验中涉及的一些问题3微生物的代谢1u同化作用：生物体从外界获取营养物质，转化为自身组成物质的过程。u异化作用：生物体自身物质分解，放出能量，排出废物的过程。微生物的代谢类型是配制培养基及培养的基础（1）同化作用类型：自养型：直接利用环境中的无机物合
2、成自身所需要的有机物。如进行光合作用的绿色植物、蓝细菌；硝化细菌化能合成作用。异养型：直接利用环境中的有机物合成自身所需要的有机物。如各种动物、大多数细菌等。（2）异化作用类型：有氧呼吸型（需氧型）C6H12O6+6O2+6H2O6CO2+12H2O+能量 无氧呼吸型（厌氧型）C6H12O6 2C2H5OH+2CO2+能量 C6H12O6 2C3H6O3+能量实验原理2尿素在被脲酶催化分解前是中性的，由于尿素在脲酶的催化下分解产生了NH3，溶液会呈碱性。本实验中，酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中，其变色范围是pH6.48.2，在中性情况下呈黄色，碱性情况下呈红色，尿素 NH3 中性 碱性
3、酚红颜色：黄色 红色细菌实验中涉及的一些问题3（一）哪些土壤中含有这种以尿素为氮源的微生物多？（二）此实验用到的选择培养基必需含有哪些物质？（三）可用什么指标认定不同土壤中选择出的微生物对尿素分解能力的高低？没硬化，腐殖质丰富的土壤碳源、尿素、无机盐、水、酚红培养基红色的深浅（五）用稀释涂布平板法计数时，菌落数在30-300（20以内）计数。重复性原则对照原则做一系列浓度梯度实验，探究合适的稀释度（六）实验设计要遵循的原则：（四）统计微生物的数量可用哪些方法？稀释涂布平板法，显微镜直接记数法制备空白平板1制备细菌悬液2涂布法分离细菌3观察菌落数4实验操作实验操作制备空白平板1 取2个三角瓶，分
4、别装入已灭菌的全营养LB固体培养基和尿素固体培养基，放在超净工作台上，冷却至60 左右时，在酒精灯旁把上述两种培养基分别倒至2个培养皿中（做两组，共4个空白平板），轻轻摇匀，平放至凝固。制备细菌悬液2 在无菌条件下，在将1g土样加到装有99 mL无菌水的三角瓶中，振荡10min，即成10-2土壤稀释液，并依次制备出10-310-7稀释液。例如，若想制备10-6的稀释液，可取0.5 mL 10-5的稀释液。取样时，尽量只取悬液，倒入有4.5 mL无菌水的有盖试管中，摇匀，放在试管架上。1个99ml无菌水 2个4.5ml无菌水得10-2 10-3,10-4的菌悬液1g土壤涂布法分离细菌3 在无菌条
5、件下，分别取0.1 mL的稀释度为10-4和10-5的土壤稀释液（细菌悬液），分别加到装有全营养LB培养基和尿素培养基的培养皿（空白平板）中；再将保存在70%酒精中的玻璃刮刀放在酒精灯火焰上，待刮刀上火焰熄灭后，在酒精灯火焰旁打开培养皿，将前面已加入的土壤稀释液（细菌悬液）均匀涂布到整个平面上。u取0.1ml菌悬液高浓度低浓度，换枪头低浓度高浓度，可不用换枪头接 种涂布分离观察菌落数4 将培养皿倒置 摆 放 在37恒温箱中培养2448h，观察菌落数。微生物计数方法l活菌计数样品稀释度足够高时，培养基表面只生长1个菌落（来源于样品稀释液中的1个活菌）。根据平板上菌落数，推测样品中大约含有多少活菌
6、。结果一般用菌落数而不是活菌数表示。l显微观察计数红细胞计数板，观察数量，再根据浓度比例计算出菌体数量。自我检测自我检测 发酵法生产酒精后的废液（pH4.3）含有大量有机物，可用于培养、获得白地霉菌体，生产高蛋白饲料。培养、制取白地霉菌体的实验过程示意图如下。请据图分析回答问题：（1）实验过程中培养白地霉的培养基是 。培养基定量分装前，先调节_，分装后用棉塞封瓶口，最后_处理。灭菌（2）图中过程称为 ，从甲到丁的培养过程是为了 。白地霉的代谢类型为 。异养需氧型废液上清液pH接种扩大培养退出（3）为确定菌体产量，图中操作之前，应先称量_的质量。过滤后需反复烘干称量，直至 。（4）菌体干重等于 。滤纸恒重恒重时的质量与滤纸质量之差
