1、课题课题1微生物的实验室培养微生物的实验室培养课程标准课程标准进进行微生物的分离和培养。行微生物的分离和培养。课标解读课标解读1.知知道培养基的基础知识，进行无菌技术的操作。道培养基的基础知识，进行无菌技术的操作。2.进行微生物培养。进行微生物培养。1培养基培养基(1)培培养基概念养基概念按照微生物对按照微生物对 的不同需求，配制出供其的不同需求，配制出供其 的营的营养基质。养基质。培养基的成分及无菌操作技术培养基的成分及无菌操作技术 营养物质营养物质生长繁殖生长繁殖(2)培养基种类培养基种类包括包括 培养基和培养基和 培养基等。培养基等。(3)培养基的化学成分培养基的化学成分一般都含有一般都
2、含有 、和和 四类营养成分。还需四类营养成分。还需要满足微生物生长对要满足微生物生长对 、及及 等的要求。等的要求。固体固体液体液体水水碳源碳源氮源氮源无机盐无机盐pH特殊营养物质特殊营养物质氧气氧气2无菌技术无菌技术(1)无无菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括以下四菌技术围绕着如何避免杂菌的污染展开，主要包括以下四个方面个方面对实验操作的对实验操作的 、操作者的、操作者的 ，进行清洁和，进行清洁和 ；将用于微生物培养的器皿、将用于微生物培养的器皿、和和 等进行等进行；为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在 附近进行；附近进行；实验操作时
3、应避免已经灭菌处理的材料用具与实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与 相相接触。接触。空间空间衣着和手衣着和手消毒消毒接种用具接种用具培养基培养基灭菌灭菌酒精灯火焰酒精灯火焰周围的物品周围的物品(2)消毒和灭菌消毒和灭菌消毒：消毒是指使用较为温和的消毒：消毒是指使用较为温和的方法仅杀死物体方法仅杀死物体表面或内部一部分表面或内部一部分 的微生物，的微生物，(包括；不包括；不包括包括)芽孢和孢子，常用的方法有芽孢和孢子，常用的方法有 消毒法、消毒法、消毒法、消毒法、消毒法。消毒法。灭菌：灭菌是指使用灭菌：灭菌是指使用 杀死物体内外杀死物体内外 ，(包括，不包括包括，不包括)芽孢和孢子，常用的方
4、法有芽孢和孢子，常用的方法有 灭菌、灭菌、灭菌和灭菌和 灭菌。灭菌。物理或化学物理或化学对人体有害对人体有害不包括不包括煮沸煮沸巴氏巴氏化学药剂化学药剂强烈的理化因素强烈的理化因素所有的所有的微生物微生物包括包括灼烧灼烧高压蒸汽高压蒸汽干热干热思维激活思维激活1 用用酒精擦拭实验者手臂属消毒还是灭菌？酒精擦拭实验者手臂属消毒还是灭菌？70%与与95%的酒精，哪一种效果更好？为什么？的酒精，哪一种效果更好？为什么？提示提示酒精擦拭属化学消毒，酒精消毒时，酒精擦拭属化学消毒，酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果的酒精杀菌效果最好。原因是：浓度过高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，最好。原因是：浓度过
5、高，使菌体表面蛋白质凝固成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌力减弱。1碳源、氮源及生长因子的来源与功能归纳碳源、氮源及生长因子的来源与功能归纳2.培养基类型划分培养基类型划分3.无菌技术无菌技术(1)消消毒和灭菌的区别毒和灭菌的区别(2)无菌技术主要操作要求无菌技术主要操作要求实验前应对操作空间、操作人员消毒，对所用器具和培养基灭实验前应对操作空间、操作人员消毒，对所用器具和培养基灭菌。菌。实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作，另外要避免已灭实验进行时需在酒精灯火焰周围无菌区操作，另外要避免已灭菌处理材料再次污染。菌处理材料再次污染。
6、特别提示特别提示(1)微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常微生物最常用的碳源是糖类，尤其是葡萄糖；最常利用的氮源是铵盐、硝酸盐。利用的氮源是铵盐、硝酸盐。(2)对异养微生物来说，含对异养微生物来说，含C、H、O、N的有机物既是碳源，又是的有机物既是碳源，又是氮源、能源。氮源、能源。(3)大凡对生长因子不能合成或合成能力有限的微生物，其培养基大凡对生长因子不能合成或合成能力有限的微生物，其培养基中均需额外添加生长因子，而许多微生物能自行合成生长因子，中均需额外添加生长因子，而许多微生物能自行合成生长因子，其培养基中不需再添加。其培养基中不需再添加。【巩固巩固1】下下列培养基配方中能作为选
7、择培养基、鉴别培养基的列培养基配方中能作为选择培养基、鉴别培养基的依次是依次是()。A.B C D解析解析高浓度的食盐可以抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色高浓度的食盐可以抑制多种细菌的生长，但不影响金黄色葡萄球菌的生长，从而可以将金黄色葡萄球菌分离出来，有高浓葡萄球菌的生长，从而可以将金黄色葡萄球菌分离出来，有高浓度食盐的培养基为选择培养基。在培养基中加入伊红和美蓝，可度食盐的培养基为选择培养基。在培养基中加入伊红和美蓝，可以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌，有伊红和美蓝以用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌，有伊红和美蓝的培养基为鉴别培养基。的培养基为鉴别培养基。答案答案D1制
8、备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基(1)制制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤：备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤：称量称量 倒平板。倒平板。(2)倒平板的过程：倒平板的过程：在火焰旁右手拿锥形瓶，左手在火焰旁右手拿锥形瓶，左手 。右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过 。左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，左左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基倒入培养皿，左手立刻手立刻 。待平板冷却凝固后，将平板待平板冷却凝固后，将平板 放置，使皿盖在下、皿放置，使皿盖在下、皿底在上。底在上。培养基的制备与大肠杆菌的纯化技术培养基的制备与大肠杆菌的纯
9、化技术 计算计算溶化溶化灭菌灭菌拔出棉塞拔出棉塞火焰火焰盖上皿盖盖上皿盖倒过来倒过来2纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌(1)微微生物接种的最常用方法是生物接种的最常用方法是 和和 。(2)平板划线法：通过平板划线法：通过 在琼脂固体培养基表面在琼脂固体培养基表面 的操作，将聚集的菌种的操作，将聚集的菌种 。(3)稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的 ，然后将不，然后将不同稀释度的菌液分别同稀释度的菌液分别 ，进行培，进行培养。当稀释倍数足够高时，即可获得养。当稀释倍数足够高时，即可获得 。平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法接种环接种环连续连续划线划线逐步稀
10、释分散到培养基的表面逐步稀释分散到培养基的表面梯度稀释梯度稀释涂布到琼脂固体培养基的表面涂布到琼脂固体培养基的表面单个细菌形成的菌落单个细菌形成的菌落3菌种的保存菌种的保存为为了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌了保持菌种的纯净，需对菌种进行保藏。对于频繁使用的菌种，我们可以采用种，我们可以采用 法；对于需要长期保存的菌种，可法；对于需要长期保存的菌种，可以采用以采用 法。法。临时保藏临时保藏甘油管藏甘油管藏思维激活思维激活2 除除平板划线法与稀释涂布平板法外，还有哪些接种方平板划线法与稀释涂布平板法外，还有哪些接种方法？微生物接种技术中最核心的内容是什么？法？微生物接种技术中
11、最核心的内容是什么？提示提示微生物接种方法还有斜面接种及穿刺接种等方法，所有微微生物接种方法还有斜面接种及穿刺接种等方法，所有微生物接种方法中最核心的内容是生物接种方法中最核心的内容是“防止杂菌污染，保证培养物的防止杂菌污染，保证培养物的纯度纯度”。1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基计计算：依据牛肉膏蛋白胨培养基配方比例，计算配制算：依据牛肉膏蛋白胨培养基配方比例，计算配制100 mL的培养基时，各种成分的用量的培养基时，各种成分的用量 称量：牛肉膏比较黏稠，可用称量纸称取，牛肉膏和蛋白胨都称量：牛肉膏比较黏稠，可用称量纸称取，牛肉膏和蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后
12、要及时盖上瓶盖易吸潮，称取时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖2微生物分离与纯化技术微生物分离与纯化技术(1)原理原理微微生物的分离与纯化就是将待检测微生物样品通过划线或涂布生物的分离与纯化就是将待检测微生物样品通过划线或涂布接种在固体培养基上，样品中的每一个细胞或孢子都可以生长接种在固体培养基上，样品中的每一个细胞或孢子都可以生长繁殖形成单个菌落。将单个菌落接种到斜面培养基上，经培养繁殖形成单个菌落。将单个菌落接种到斜面培养基上，经培养后，即可得到一个微生物的纯种。后，即可得到一个微生物的纯种。(2)方法步骤方法步骤微生物的分离包括样品稀释、划线或涂布及培养三个步骤微生物的分离包括样品稀释、划线
13、或涂布及培养三个步骤梯度稀释操作梯度稀释操作(如图如图1)图图1微生物分离操作流程图微生物分离操作流程图a将分别盛有将分别盛有9 mL水的水的6支试管灭菌，并按支试管灭菌，并按101106的顺序编号。的顺序编号。b用移液管吸取用移液管吸取1 mL已培养的菌悬液，注入第二支试管中。用已培养的菌悬液，注入第二支试管中。用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌悬液与水充分混匀。手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌悬液与水充分混匀。c从从101倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入稀释液，注入102倍稀释的试管倍稀释的试管中，重复第中，重复第2步的操作。以此类推，直到完成最后一
14、支试管的稀释。步的操作。以此类推，直到完成最后一支试管的稀释。注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火注意：移液管需要经过灭菌。操作时，试管口和移液管应在离火焰焰12 cm处。处。划线或涂布划线或涂布平板划线分离法：在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑平板划线分离法：在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取大肠杆菌培养液在平板上划线，常用的划线方法有平行划线和取大肠杆菌培养液在平板上划线，常用的划线方法有平行划线和连续划线两种。平行划线时，每转一个角度烧一次接种环。划线连续划线两种。平行划线时，每转一个角度烧一次接种环。划线完毕后，盖上培养皿盖，做好标记。完毕后，盖上培养
15、皿盖，做好标记。图图2划线示意图划线示意图涂布分离法：取涂布分离法：取3个平板，底面分别用记号笔写上个平板，底面分别用记号笔写上104、105和和106三种稀释度，然后用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各三种稀释度，然后用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各0.1 mL，放入已标记好的平板上，用无菌玻璃涂棒在培养基表面，放入已标记好的平板上，用无菌玻璃涂棒在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置轻轻地涂布均匀，室温下静置510 min，使菌悬液吸附进培养基，使菌悬液吸附进培养基(图图3)。培养培养将划线或涂布接种的平板倒置于培养箱或温室中将划线或涂布接种的平板倒置于培养箱或温室中37 培养培养
16、1624 h，即可长出单菌落，即可长出单菌落(图图4)图图3涂布法示意图图涂布法示意图图4斜面接种法斜面接种法(3)结果分析结果分析确认培养基制备是否合格确认培养基制备是否合格为确认培养基制备是否合格，需设置对照实验，即接种后的培养为确认培养基制备是否合格，需设置对照实验，即接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入基和一个未接种的培养基都放入37 恒温箱中，培养恒温箱中，培养12 h和和24 h，观察现象并记录观察现象并记录如果未接种的培养基在恒温箱中保温如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则实验失败需要重无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否
17、则实验失败需要重新制备。新制备。接种操作成功的标准接种操作成功的标准如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合该菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上该菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中无菌操作还未达到要求，实出现了其他菌落，则说明接种过程中无菌操作还未达到要求，实验失败，需要分析原因，再次制备。验失败，需要分析原因，再次制备。特别提醒特别提醒(1)进行划线时最后一区和第一区不可接触。进行划线时最后一区和第一区不可接触。(2)平板划线各次灼烧接种环的目的。平
18、板划线各次灼烧接种环的目的。平板划线操作第一次划线及每次划线之前都需灼烧灭菌，划线操平板划线操作第一次划线及每次划线之前都需灼烧灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧目的不同。作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧目的不同。(3)灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免温度太高杀死菌种。菌种。【巩固巩固2】下下列有关平板划线操作的叙述不正确的是列有关平板划线操作的叙述不正确的是()。A第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物物污染培养物B每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划
19、线结束后，每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种接种环上残留的菌种C在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液在第二区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液D划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的划线结束后，灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者菌种，避免细菌污染环境和感染操作者解析解析平板划线操作中，接种环取菌种前灼烧的目的是避免接种平板划线操作中，接种环取菌种前灼烧的目的是避免接种环上可能存在的微生物污染培养物，以后每次划线前灼烧接种环环上可能存在的微生物污染培养物，以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残
20、留的菌种。划线结束仍需灼烧接种环，是为了杀死上次划线后残留的菌种。划线结束仍需灼烧接种环，是为了能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感是为了能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接染操作者。从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。来源于上次划线的末端。答案答案C【例例1】氯氯苯化合物是重要的有机化工原料，因其不易降解，会污苯化合物是重要的有机化工原料，因其不易降解，会污染环境。某研究小组依照下列实验方案染环境。某研究小组依照下列实验方案(图图1)筛选出能高效降解筛选出能高效降解氯苯的微生物
21、氯苯的微生物SP1菌。培养基配方如表菌。培养基配方如表1。微生物的营养与培养基类型微生物的营养与培养基类型 图图1表表1培养基的组成培养基的组成(1)配制配制号固体培养基时，除添加号固体培养基时，除添加号液体培养基成分外，还应号液体培养基成分外，还应添加添加1%的的_。(2)培养基配制时，灭菌与调培养基配制时，灭菌与调pH的先后顺序是的先后顺序是_。(3)从用途上来说，从用途上来说，号培养基和号培养基和号培养基分别属于号培养基分别属于_培养培养基和基和_培养基。在培养基。在号培养基中，为号培养基中，为SP1菌提供氮源的成分是菌提供氮源的成分是_。(4)在营养缺乏或环境恶劣时，在营养缺乏或环境恶
22、劣时，SP1的菌体变成一个圆形的休眠体，的菌体变成一个圆形的休眠体，这种休眠体被称为这种休眠体被称为_。(5)将将SP1菌接种在含不同浓度氯苯的菌接种在含不同浓度氯苯的号培养液中培养，得到生号培养液中培养，得到生长曲线长曲线(如图如图2)。从图。从图2可知，可知，SP1菌在菌在_培养条件下最早停止培养条件下最早停止生长，其原因是生长，其原因是_。图图2思维导图：思维导图：深度剖析深度剖析本题考查培养基的配制原则以及微生物的实验室培养本题考查培养基的配制原则以及微生物的实验室培养过程，意在考查考生的图表信息转换与分析能力。过程，意在考查考生的图表信息转换与分析能力。(1)固体培养基固体培养基中需
23、加入琼脂作为凝固剂。中需加入琼脂作为凝固剂。(2)先配制培养基后灭菌，调先配制培养基后灭菌，调pH属于培属于培养基的配制过程，故先调养基的配制过程，故先调pH后灭菌。后灭菌。(3)从用途上看，从用途上看，号培养基号培养基为通用培养基为通用培养基(基本培养基基本培养基)；号培养基是选择培养基，以氯苯为号培养基是选择培养基，以氯苯为唯一的碳源，其中为唯一的碳源，其中为SP1菌提供氮源的成分是硝酸铵。菌提供氮源的成分是硝酸铵。(4)芽孢是芽孢是在细胞质内高度浓缩脱水形成的抗逆性很强的球形或椭圆形的休在细胞质内高度浓缩脱水形成的抗逆性很强的球形或椭圆形的休眠体。眠体。(5)由图示可知由图示可知SP1菌
24、在菌在20 mg/L氯苯培养条件下最早停止生氯苯培养条件下最早停止生长，长，20 mg/L氯苯可提供的碳源较少，碳源最早耗尽，影响菌体的氯苯可提供的碳源较少，碳源最早耗尽，影响菌体的生长繁殖。生长繁殖。答案答案(1)琼琼脂脂(2)先调先调pH，后灭菌，后灭菌(3)通用选择硝酸铵通用选择硝酸铵(4)芽孢芽孢(5)20 mg/L氯苯碳源最早耗尽氯苯碳源最早耗尽误区警示误区警示(1)琼脂是最常用的凝固剂，但固体培养基未必均加琼琼脂是最常用的凝固剂，但固体培养基未必均加琼脂，如棉子壳培养基也属固体培养基。脂，如棉子壳培养基也属固体培养基。(2)牛肉膏、蛋白胨等天然物质既可提供碳源，也可提供氮源及生牛肉
25、膏、蛋白胨等天然物质既可提供碳源，也可提供氮源及生长因子。长因子。【例例2】培养培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是牛奶所采用的灭菌、消毒方法依次是()。化学消毒灼烧灭菌干热灭菌紫外线灭菌化学消毒灼烧灭菌干热灭菌紫外线灭菌高压蒸汽灭菌巴氏消毒法高压蒸汽灭菌巴氏消毒法A BC D无菌操作技术无菌操作技术 思维导图：思维导图：深度剖析深度剖析培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需用干热培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿能耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作灭菌；接种环可用灼烧灭菌
26、达到迅速彻底的灭菌效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。紫外线消毒；牛奶为不破坏其营养成分可采用巴氏消毒法。答案答案A思维深化思维深化几种常用灭菌方法比较几种常用灭菌方法比较(见下表见下表)【例例3】如如图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为图是微生物平板划线示意图，划线的顺序为12345。下。下列操作方法正确的是列操作方法正确的是()。A操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌B划线操作须在火焰上进行划线操作须在火焰上进行C在
27、在5区域中才可以得到所需菌落区域中才可以得到所需菌落D在在12345区域中划线前后都要对接种环灭菌区域中划线前后都要对接种环灭菌微生物纯化培养微生物纯化培养 深度剖析深度剖析本题考查平板划线的操作方法。在每次划线前后都要本题考查平板划线的操作方法。在每次划线前后都要对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种对接种环进行灭菌，接种环的灭菌方法应是在火焰上灼烧，接种时划线操作是在火焰边进行。在时划线操作是在火焰边进行。在5个区域中，只要有单个活细菌，个区域中，只要有单个活细菌，通过培养即可获得所需菌落。通过培养即可获得所需菌落。答案答案D归纳提升归纳提升(1)倒平板时不要将培养基溅在
28、皿盖与皿底之间，否则倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物。此培养基不能用来培养微生物。(2)平板倒置原因：平板皿盖上会凝结水珠，培养基表面的温度也平板倒置原因：平板皿盖上会凝结水珠，培养基表面的温度也较高，平板倒置后，既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可较高，平板倒置后，既可使培养基表面的水分更好地挥发，又可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。(3)两种纯化方法的比较两种纯化方法的比较单击此处进入单击此处进入 随堂达标检测随堂达标检测旁栏思考题旁栏思考题1无无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物菌技术除了用
29、来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？污染外，还有什么目的？解析解析许多微生物对人类是有害的，因此实验室中无菌技术许多微生物对人类是有害的，因此实验室中无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。还能有效避免操作者自身被微生物感染。答案答案无无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。2请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。请选择合适的方法。(1)培养细菌用的培养基与培养皿。培养细菌用的培养基与培养皿。(2)玻璃试管、烧瓶和吸管。玻璃试管、烧瓶和吸管
30、。(3)实验操作者的双手。实验操作者的双手。解析解析消毒和灭菌是无菌技术的两项基本技术，实践中需要消毒和灭菌是无菌技术的两项基本技术，实践中需要根据无菌操作的对象合理地选择使用。原则是既要考虑使用的效根据无菌操作的对象合理地选择使用。原则是既要考虑使用的效果，又要考虑无菌操作对象的承受能力。果，又要考虑无菌操作对象的承受能力。答案答案(1)、(2)需需要灭菌；要灭菌；(3)需要消毒。需要消毒。倒平板操作讨论题倒平板操作讨论题1培培养基灭菌后，需要冷却到养基灭菌后，需要冷却到50 左右时，才能用来倒平左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？板。你用什么办法来估计培养基的温度？答案
31、答案可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。2为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？答案答案通通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。3平板冷凝后，为什么要将平板倒置？平板冷凝后，为什么要将平板倒置？答案答案平平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以
32、使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。4在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？答案答案空空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。生，因此最好不要用这个平板培养微生物。平板划线操作讨论题平板划线操作讨论题1为为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？什
33、么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？答案答案操操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数
34、目逐渐减少，以便得到单个菌落。划线结使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到单个菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。染环境和感染操作者。2在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？答案答案以免接种环温度太高，杀死菌种。以免接种环温度太高，杀死菌种。3在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次在做第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？划线的末端开始划线？答案答案划划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处
35、要少，每线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。涂布平板操作讨论题涂布平板操作讨论题涂涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列系列稀释的无菌操作要求，想一想，第稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？步应如何进行无菌操作？答案答案应从操作的各个细节保证应从操作的各个细节保证“无菌无菌”。例如，酒精灯与。
36、例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围；等等。酒精灯火焰周围；等等。练习练习1提示提示可以通过保持干燥、真空的条件，以及冷藏等方法可以通过保持干燥、真空的条件，以及冷藏等方法来阻止微生物的生长。来阻止微生物的生长。解析解析可以从微生物生长需要哪些条件的角度来思考。例如，可以从微生物生长需要哪些条件的角度来思考。例如，微生物的生长需要水、空气、适宜的温度等。微生物的生长需要水、空气、适宜的温度等。2提示提示相同点：三种培养技术都需要为培养物提供充足的营养。相同点：三种培养技术都需要为培养物提供充
37、足的营养。不同点：无土栽培技术的操作并不需要保证无菌的条件，而其他不同点：无土栽培技术的操作并不需要保证无菌的条件，而其他两种技术都要求严格的无菌条件。两种技术都要求严格的无菌条件。解析解析可以从这三种培养技术的原理、操作步骤等方面分别进行可以从这三种培养技术的原理、操作步骤等方面分别进行总结归纳。总结归纳。3提示提示巴斯德设计了一个鹅颈瓶巴斯德设计了一个鹅颈瓶(曲颈瓶曲颈瓶)，现称巴斯德烧瓶。，现称巴斯德烧瓶。烧瓶有一个弯曲的长管与外界空气相通。瓶内的溶液加热至沸点，烧瓶有一个弯曲的长管与外界空气相通。瓶内的溶液加热至沸点，冷却后，空气可以重新进入，但因为有向下弯曲的长管，空气中冷却后，空气
38、可以重新进入，但因为有向下弯曲的长管，空气中的尘埃和微生物不能与溶液接触，使溶液保持无菌状态，溶液可的尘埃和微生物不能与溶液接触，使溶液保持无菌状态，溶液可以较长时间不腐败。如果瓶颈破裂，溶液就会很快腐败变质，并以较长时间不腐败。如果瓶颈破裂，溶液就会很快腐败变质，并有大量的微生物出现。实验得到了令人信服的结论：腐败物质中有大量的微生物出现。实验得到了令人信服的结论：腐败物质中的微生物是来自空气中的微生物，这个实验也导致了巴斯德创造的微生物是来自空气中的微生物，这个实验也导致了巴斯德创造了一种有效的灭菌方法了一种有效的灭菌方法巴氏灭菌法。巴氏灭菌法又称低温灭菌巴氏灭菌法。巴氏灭菌法又称低温灭菌
39、法，先将要求灭菌的物质加热到法，先将要求灭菌的物质加热到65 30 min钟或钟或72 15 min，随后迅速冷却到随后迅速冷却到10 以下。这样既不破坏营养成分，又能杀死细以下。这样既不破坏营养成分，又能杀死细菌的营养体，巴斯德发明的这种方法解决了酒质变酸的问题，拯菌的营养体，巴斯德发明的这种方法解决了酒质变酸的问题，拯救了法国酿酒业。现代的食品工业多采取间歇低温灭菌法进行灭救了法国酿酒业。现代的食品工业多采取间歇低温灭菌法进行灭菌。菌。解析解析这是一道开放性的问题，答案并不唯一，重点在于鼓励学这是一道开放性的问题，答案并不唯一，重点在于鼓励学生积极参与，从不同的角度思考问题。例如，正是由于证明了微生积极参与，从不同的角度思考问题。例如，正是由于证明了微生物不是自发产生的，微生物学才可能发展成为一门独立的学科；生物不是自发产生的，微生物学才可能发展成为一门独立的学科；巴斯德实验中用到的加热灭菌的方法导致了有效的灭菌方法的出巴斯德实验中用到的加热灭菌的方法导致了有效的灭菌方法的出现，而这一灭菌原理也适用于食品的保存等。现，而这一灭菌原理也适用于食品的保存等。
