1、 可见分光光度计性能检查 卫生检验学教研室卫生检验学教研室 王茂清王茂清1、掌握可见分光光度计主要性能的检定方法和仪器 的使用2、熟悉仪器的主要性能和技术指标3、了解可见分光光度计的基本结构一、实验目的一、实验目的二、实验原理二、实验原理 紫外可见分光光度法是根据物质的分子对紫外可见光区辐射的吸收特征和吸收程度，对物质的组成进行定性或定量及结构分析的方法。Lambert-beer定律是分光光度法定量分析依据。A=bC 为了确保可见分光光度计分析的灵敏度和准确度，需要定期对仪器鉴定，通过对一些特定技术指标的评价，可以了解仪器是否处于良好状态。不同型号仪器的技术指标所能达到的标准不同，可以按照仪器
2、说明书中的标准，采用特定方法评价进行评价。1、开机：、开机：打开电源，仪器初始化，约打开电源，仪器初始化，约3min完成，然后预热完成，然后预热大约大约0.5h。2、选择测量模式：、选择测量模式：在初始化完成之后，系统默认进入光度在初始化完成之后，系统默认进入光度测量界面。如果要进行透光度或定量测量，可以按测量界面。如果要进行透光度或定量测量，可以按MODE键进行切换。键进行切换。三三 、仪器的使用方法、仪器的使用方法3、设置测量波长、设置测量波长：在测量界面下，按在测量界面下，按GOTO 键，在数字键盘上键入波键，在数字键盘上键入波 长数值，按长数值，按ENTER键键4、设置吸收池模式和个数
3、、设置吸收池模式和个数：按按SHIFT/RETURN键，切换至系统应用界面。键，切换至系统应用界面。（1）按上翻键，设置吸收池类型：）按上翻键，设置吸收池类型：（2）按下翻键，设置吸收池个数）按下翻键，设置吸收池个数 例如：如果实验需要例如：如果实验需要6个吸收池进行测量，那么吸收池个吸收池进行测量，那么吸收池类型应设置为类型应设置为8CELL，吸收池个数设为，吸收池个数设为6。注意：注意：设定的吸收池个数不应大于实际中所用到的吸收池个数，因设定的吸收池个数不应大于实际中所用到的吸收池个数，因为：多余的吸收池位置，仍然会有入射光通过，此时光线直接进入为：多余的吸收池位置，仍然会有入射光通过，此
4、时光线直接进入到检测器中，强度比较大，容易使检测器疲劳到检测器中，强度比较大，容易使检测器疲劳5、自动校零：自动校零：按按SHIFT/RETURN键，切换到测量界面。在键，切换到测量界面。在1号吸收池号吸收池中放入空白溶液，按中放入空白溶液，按Zero键进行空白校正。键进行空白校正。注意：空白校正这一步骤，一定要在各参数设置完成之后，样品测量注意：空白校正这一步骤，一定要在各参数设置完成之后，样品测量之前进行；同理，如果在测量过程中需要改变参数，那么在参数设置之前进行；同理，如果在测量过程中需要改变参数，那么在参数设置完成后，要再次进行空白校正完成后，要再次进行空白校正6 6、测量样品测量样品
5、：从从2号吸收池开始，依次放入样品，按号吸收池开始，依次放入样品，按START键，仪器测量全部样品，然后显示出最后一个样品键，仪器测量全部样品，然后显示出最后一个样品的吸光度值。读数：用上翻键可查看其他样品吸光度值的吸光度值。读数：用上翻键可查看其他样品吸光度值7 7、结束测量结束测量：按按SHIFT/RETURN键，从读数界面返回测键，从读数界面返回测量界面，关闭电源量界面，关闭电源1 1、试剂、试剂：氯化钴溶液：氯化钴溶液：2000、6000、10000g/ml 亚硝酸钠溶液：亚硝酸钠溶液：50g/L2 2、器材、器材：T6新悦可见分光光度计新悦可见分光光度计 1cm玻璃吸收池玻璃吸收池
6、镜头纸镜头纸 滤纸滤纸 洗瓶洗瓶 一次性吸管一次性吸管四、试剂与器材四、试剂与器材五、实验步骤五、实验步骤1 1、波长校正、波长校正2 2、波长重现性检定、波长重现性检定3 3、线性误差检查、线性误差检查4 4、透光度重现性检定、透光度重现性检定5 5、杂散辐射率、杂散辐射率6 6、吸收池的配套性检定、吸收池的配套性检定7 7、稳定度检测、稳定度检测1 1、波长校正（波长准确度检定）波长校正（波长准确度检定）：开机，预热开机，预热按SHIFT/RETURN按数字键9系统自动检测内置镨钕玻璃片系统自动检测内置镨钕玻璃片808.0nm的特征波长，的特征波长，时间大约时间大约1min。检测完成后，系
7、统显示实测波长值。检测完成后，系统显示实测波长值（1）实测值与实测值与808.0nm的差值大于的差值大于1nm时，应进行校正：在时，应进行校正：在 默认的默认的“yes”状态下，按状态下，按ENTER键，系统将进行校键，系统将进行校 正，然后返回系统应用界面正，然后返回系统应用界面（2）实测值与实测值与808.0nm差值小于差值小于1nm时，无须校正：时，无须校正：按下翻键，切换至按下翻键，切换至“no”，再按，再按ENTER键，系统直接键，系统直接返返 回系统应用界面回系统应用界面 以蒸馏水为参比，测定以蒸馏水为参比，测定CoCl2溶溶(6000g/ml)在在506、508、510、512、
8、514，516nm处的吸光度。从一个波长方向，逐处的吸光度。从一个波长方向，逐一作一作3次测量，记录吸光度值，做吸收光谱图，波长为横次测量，记录吸光度值，做吸收光谱图，波长为横坐标，吸光度值为纵坐标。选择最大吸收峰波长测量值，坐标，吸光度值为纵坐标。选择最大吸收峰波长测量值，代入公式计算波长重复性代入公式计算波长重复性(0.2nm)。311max3iii2 2、波长重现性检定波长重现性检定：3 3、线性误差检查线性误差检查：以蒸馏水为参比，测量以蒸馏水为参比，测量2000、6000、10000g/ml氯化钴溶氯化钴溶 液于液于514nm处的吸光度，重复测定处的吸光度，重复测定3次，记录吸光度值
9、，取次，记录吸光度值，取 其平均值代入公式计算其平均值代入公式计算 按按SHIFT/RETURN键，从读数界面切换至测量界面。键，从读数界面切换至测量界面。（1）设置波长：）设置波长：514nm（2）设置吸收池个数：）设置吸收池个数：4个个（3）空白校正）空白校正（4）测量：将氯化钴溶液分别倒入）测量：将氯化钴溶液分别倒入2、3、4号吸收池中，按号吸收池中，按START键开始测量，记录读数。键开始测量，记录读数。具体步骤具体步骤：计算线性误差公式计算线性误差公式：4、透光度重现性检定透光度重现性检定：以蒸馏水为参比，测定以蒸馏水为参比，测定CoCl2溶液（溶液（6mg/ml）510nm的透的透
10、 光度（英文缩写光度（英文缩写T），重复），重复7次，记录读数。次，记录读数。7171maxiiiTTT技术指标：技术指标：T 0.15 以蒸馏水为参比，测定以蒸馏水为参比，测定50g/LNaNO2 360nm处的透光度，处的透光度，即为仪器在此波长处的杂散辐射率即为仪器在此波长处的杂散辐射率 技术指标：技术指标：杂散辐射率杂散辐射率0.15、杂散辐射率杂散辐射率：在同一工作条件下，同一光径吸收池分别注入蒸馏水，测在同一工作条件下，同一光径吸收池分别注入蒸馏水，测定各吸收池在定各吸收池在700nm处的透光度。凡透光度值之差不大于处的透光度。凡透光度值之差不大于5%的吸收池可以配套使用的吸收池可
11、以配套使用6 6、吸收池的配套性检定吸收池的配套性检定：（2）光电流稳定度（光电流稳定度（100%）：调节透光度为透光度为）：调节透光度为透光度为 100时，观察时，观察3min，记录读数。示值的最大漂移，记录读数。示值的最大漂移 量，即为光电流稳定度量，即为光电流稳定度 100%：0.5%/3min7 7、稳定度检测稳定度检测（1）零点（零点（0%）稳定度：吸光度为）稳定度：吸光度为0，观察，观察3min，记录读数。示值的最大漂移量，即为零点稳定度记录读数。示值的最大漂移量，即为零点稳定度 0%：0.3%/3min思考题：1.了解吸收光谱吸收光谱 2.Lambert_Beer定律的适用条件和影响因素预习预习实验二实验二 原子吸收分光光度法测定发中锌含量原子吸收分光光度法测定发中锌含量 预习重点：1、湿法消化 2、标准曲线
