1、宁夏医学院附属医院医学实验中心部 陈耀平1PPT课件purpose2PPT课件Section 1 概述概述是用手术或其他方法将健是用手术或其他方法将健 康的细胞、组织或器官从原部位移植到自体或异康的细胞、组织或器官从原部位移植到自体或异 体的一定部位，以替代或补偿移植部位所丧失的体的一定部位，以替代或补偿移植部位所丧失的 结构和结构和/或功能。或功能。3PPT课件 1954年年Murray肾移植获得成功。肾移植获得成功。1962年年成功。成功。1963年年Starzl首例肝移植。首例肝移植。1966年年Kelly首例胰腺移植。首例胰腺移植。1967年年Barnard首例心脏移植。首例心脏移植。
2、历历 史史4PPT课件一、移植的类型一、移植的类型根据移植物来源及供、受体遗传背景的差异，分为：5PPT课件6PPT课件7PPT课件8PPT课件9PPT课件一、移植的类型一、移植的类型根据移植部位的不同，分为：根据移植物种类的不同，分为：10PPT课件移植能否成功？移植能否成功？11PPT课件第一节、引起排斥反应的靶抗原第一节、引起排斥反应的靶抗原12PPT课件一、主要组织相容性抗原一、主要组织相容性抗原13PPT课件受体免疫细胞对移植物受体免疫细胞对移植物HLA的识别的识别（1 1）直接识别：直接识别：受者受者T T细胞细胞（2 2）间接识别：间接识别：受者受者T T细胞识别经过受者细胞识别
3、经过受者APCAPC加工处理的来加工处理的来源于移植物源于移植物HLAHLA的抗原肽。的抗原肽。14PPT课件二、其他组织相容性抗原二、其他组织相容性抗原15PPT课件（二）、次要组织相容性抗原（二）、次要组织相容性抗原16PPT课件（二）、（二）、ABO血型抗原系统血型抗原系统17PPT课件（三）、组织特异性抗原（三）、组织特异性抗原18PPT课件 不同个体间移植常引起受者对移植物的免疫不同个体间移植常引起受者对移植物的免疫排斥应答，从而导致移植物功能丧失或受者机体排斥应答，从而导致移植物功能丧失或受者机体损害的过程，这种免疫现象称为移植免疫（损害的过程，这种免疫现象称为移植免疫（）。）。移
4、植免疫学是研究排斥反应发生的机制，如移植免疫学是研究排斥反应发生的机制，如何防治排斥反应的发生以维持移植物的正常功能何防治排斥反应的发生以维持移植物的正常功能和长期存活。和长期存活。19PPT课件 受者对供体器官产生的排斥反应。受者对供体器官产生的排斥反应。移植排斥反应的类型移植排斥反应的类型20PPT课件 发生于术后数分钟至数小时内（发生于术后数分钟至数小时内（48h48h）由体液免疫介导由体液免疫介导（ABOABO或或RhRh血型抗体、抗血型抗体、抗MHC-IMHC-I类分子抗体类分子抗体)II型超敏反应型超敏反应 弥漫性血管内凝血弥漫性血管内凝血移植排斥反应的类型移植排斥反应的类型血型不
5、符，多次妊娠，反复输血或接受过器官移植者，也可发生在被移植器官灌流不畅或缺血时间过长等。反应发生迅速、强烈、不可逆转。反应发生迅速、强烈、不可逆转。21PPT课件 出现于移植后出现于移植后7天至天至3个月内，临床最常见。个月内，临床最常见。MHC抗原差异、免疫抑制剂的使用、抗原差异、免疫抑制剂的使用、受体免疫功能状态有关受体免疫功能状态有关主要由主要由T细胞介导的细胞免疫细胞介导的细胞免疫二、急性排斥反应二、急性排斥反应22PPT课件针对移植的抗原提呈至少有两条途径：针对移植的抗原提呈至少有两条途径：（1 1）直接途径直接途径（direct pathdirect path）：残留于移植物内的抗
6、）：残留于移植物内的抗原提呈细胞（过客细胞）对受者机体的免疫系统提供原提呈细胞（过客细胞）对受者机体的免疫系统提供最初的抗原刺激（来自移植物中的最初的抗原刺激（来自移植物中的DCDC和单核细胞等和单核细胞等表面富含的表面富含的HLA-HLA-、HLA-HLA-类分子）。类分子）。（2 2）间接途径间接途径（indirect pathindirect path）：是通过受者的抗原）：是通过受者的抗原提呈细胞，对具有同种异基因提呈细胞，对具有同种异基因HLA-HLA-、HLA-HLA-类分类分子的移植物实质细胞的识别。子的移植物实质细胞的识别。二、急性排斥反应二、急性排斥反应23PPT课件24PP
7、T课件u根据急性排斥反应的病理特点，可分为：急性体液排斥反应：主要由内皮细胞表面HLA分子的抗体所介导，病理改变是导致移植物或器官的血管炎，故又称急性脉管排斥反应()。特点是：病程进展迅速，治疗效果差。急性细胞排斥反应：又称加速性细胞排斥反应，病理特征为：移植器官或组织实质性损伤为主，伴有淋巴细胞和巨噬细胞浸润。与CD8+CTL的直接杀伤、活化的巨噬细胞和NK细胞介导的溶细胞作用相关。25PPT课件 出现于移植后数月甚至数年后出现于移植后数月甚至数年后免疫学因素和非免疫学因素有关免疫学因素和非免疫学因素有关细胞免疫、体液免疫皆参与细胞免疫、体液免疫皆参与（3）慢性排斥反应）慢性排斥反应血管壁细
8、胞浸润、间质纤维化和血管壁细胞浸润、间质纤维化和瘢痕形成，纤维化与在迟发性超敏反应中活瘢痕形成，纤维化与在迟发性超敏反应中活化的巨噬细胞分泌的化的巨噬细胞分泌的IL-1以及血小板和内皮以及血小板和内皮细胞产生的细胞产生的PDGF等有关。等有关。26PPT课件 T细胞、巨噬细胞等介导的迟发性超敏反应；细胞、巨噬细胞等介导的迟发性超敏反应；B细胞产生的抗体活化补体或通过细胞产生的抗体活化补体或通过ADCC破坏破坏血管内皮细胞。血管内皮细胞。引起慢性排斥反应的因素包括：引起慢性排斥反应的因素包括：27PPT课件 移植物中的淋巴细胞对宿主的组织抗原产生移植物中的淋巴细胞对宿主的组织抗原产生免疫应答并引
9、起组织损伤。免疫应答并引起组织损伤。（GVHR）28PPT课件（3 3）机制）机制 骨髓移植物中的骨髓移植物中的T T细胞被宿主的细胞被宿主的MHCMHC所激活，增生分化所激活，增生分化为效应细胞，对宿主组织器官发动免疫攻击，导致为效应细胞，对宿主组织器官发动免疫攻击，导致GVHDGVHD。主要是。主要是T T细胞起作用，细胞因子和黏附分子也与细胞起作用，细胞因子和黏附分子也与之有关。之有关。（4 4）临床症状）临床症状 食欲不振、消化不良、腹泻、黄疸和皮疹，严重者食欲不振、消化不良、腹泻、黄疸和皮疹，严重者导致死亡。导致死亡。29PPT课件图Figure 4 Graft versus hos
10、t disease 30PPT课件图Early,chronic graft-versus-host reaction with widespread,almost confluent hyperpigmented lichenoid papules and toxic epidermal necrosis-like appearance on knee 31PPT课件第三节、HLA分型 HLA分型并不只是一种应用性的临床检测指标，也推动了免疫遗传学研究的发展。HLA分型主要有：血清学分型法：20世纪60年代细胞学分型法：HLA产物的特异性分子生物学分型法：80年代，基因分型 32PPT课件一、
11、血清学分型法 原理：原理：是应用一系列已知抗是应用一系列已知抗HLAHLA的特异性标准的特异性标准分型血清与待测淋巴细胞混合，借助补体介导分型血清与待测淋巴细胞混合，借助补体介导的细胞毒试验的细胞毒试验(complement dependent cytotoxicity,CDC)。检测的抗原检测的抗原称为称为SDSD抗原抗原(serologically defined antigen),包括包括HLA-AHLA-A、HLA-BHLA-B、HLA-CHLA-C、HLA-DRHLA-DR和和HLA-DQHLA-DQ。基本材料：基本材料：定型血清板、兔血清、台盼蓝或伊定型血清板、兔血清、台盼蓝或伊红
12、。红。33PPT课件一、血清学分型法 优点：优点：操作简便易行、节约试剂、结果可靠、操作简便易行、节约试剂、结果可靠、重复性好、无需特殊设备。重复性好、无需特殊设备。缺点：缺点：需花大量时间去筛选抗血清，且不同批需花大量时间去筛选抗血清，且不同批号抗血清结果常有不同。此外，号抗血清结果常有不同。此外，HLA-DRHLA-DR和和HLA-DQHLA-DQ抗原分型所用的抗血清，须经血小板吸抗原分型所用的抗血清，须经血小板吸收以除去针对收以除去针对类抗原的抗体，待测细胞也应类抗原的抗体，待测细胞也应为纯化的为纯化的B B细胞。当外周血单个核细胞细胞。当外周血单个核细胞0.50.5*10 109 9/
13、L/L时，难以获得足够的时，难以获得足够的B B细胞。细胞。34PPT课件35PPT课件二、细胞学分型法 原理：原理：是以混合淋巴细胞培养是以混合淋巴细胞培养（mixed lymphocyte mixed lymphocyte culture,MLCculture,MLC）或称混合淋巴细胞反应或称混合淋巴细胞反应（mixed lympho-cyte mixed lympho-cyte reaction,MLRreaction,MLR）为基本技术。为基本技术。本法检测的抗原称本法检测的抗原称LDLD抗原抗原(lymphocyte defined antigen),lymphocyte defin
14、ed antigen),包括包括HLA-DHLA-D、HLA-DPHLA-DP。MLCMLC：又有单向和双向之分。又有单向和双向之分。36PPT课件（一）、单向MLC原理：原理：将已知将已知HLAHLA细胞用丝裂酶素细胞用丝裂酶素C C或或X X射线预射线预处理，使其失去增殖能力仅作为刺激细胞；而处理，使其失去增殖能力仅作为刺激细胞；而以具有增殖能力的受检者外周血单个核细胞为以具有增殖能力的受检者外周血单个核细胞为反应细胞。两者混合培养时，反应细胞可对刺反应细胞。两者混合培养时，反应细胞可对刺激细胞发生应答而增殖，用激细胞发生应答而增殖，用3 3H-TdRH-TdR掺入法测定掺入法测定细胞增殖
15、强度，从而判断受检细胞的型别。细胞增殖强度，从而判断受检细胞的型别。根据选用的刺激细胞类型根据选用的刺激细胞类型：可将其分为阳性：可将其分为阳性和阴性分型法。和阴性分型法。37PPT课件（一）、单向MLC阴性分型法原理：阴性分型法原理：该法使用的刺激细胞或称该法使用的刺激细胞或称标准分型细胞，系表面只具有一种标准分型细胞，系表面只具有一种LDLD抗原的纯抗原的纯合子分型细胞合子分型细胞(homozygous typing cell,HTC),(homozygous typing cell,HTC),其与待分其与待分型的细胞混合进行单向型的细胞混合进行单向HLCHLC时，若待分型细胞的时，若待分
16、型细胞的LDLD抗原与抗原与HTCHTC相同，则不发生或仅出现轻微的相同，则不发生或仅出现轻微的增殖反应。由于选用的刺激细胞为增殖反应。由于选用的刺激细胞为HTCHTC，故又称，故又称纯合子细胞分型法。纯合子细胞分型法。38PPT课件（一）、单向MLC阳性分型法阳性分型法又称预致敏的淋巴细胞分型法又称预致敏的淋巴细胞分型法原理：原理：该法使用预致敏的淋巴细胞为标准分型该法使用预致敏的淋巴细胞为标准分型细胞进行细胞进行HLA-DHLA-D和和HLA-DPHLA-DP等分型，预致敏的淋等分型，预致敏的淋巴细胞为反应细胞，待测细胞处理后作为刺激巴细胞为反应细胞，待测细胞处理后作为刺激细胞，进行细胞，
17、进行MLCMLC，若待分型细胞的，若待分型细胞的LDLD抗原与致抗原与致敏的淋巴细胞预先所识别的型别相同，则呈现敏的淋巴细胞预先所识别的型别相同，则呈现阳性反应。由于只有出现阳性反应时才能做出阳性反应。由于只有出现阳性反应时才能做出型别的判断，故名阳性分型法。型别的判断，故名阳性分型法。39PPT课件（二）、双向MLC原理：原理：遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外遗传型不同的两个个体淋巴细胞在体外混合培养时，由于两者的混合培养时，由于两者的HLAHLA不同，能相互刺激不同，能相互刺激对方导致对方淋巴细胞增殖，故称双向对方导致对方淋巴细胞增殖，故称双向MLCMLC。器官或细胞移植时，应选择器官或
18、细胞移植时，应选择MLCMLC最弱者为供体。最弱者为供体。缺点缺点：由于细胞分型法的分型细胞或是来源困由于细胞分型法的分型细胞或是来源困难，或是制备繁琐，且试验耗时较长，不适于难，或是制备繁琐，且试验耗时较长，不适于临床常规检验，已逐步被分子生物学分型法所临床常规检验，已逐步被分子生物学分型法所取代。取代。40PPT课件三、分子生物学分型法 传统的血清学和细胞学分型法在器官和细胞传统的血清学和细胞学分型法在器官和细胞移植中发挥了重要作用。但鉴于标准分型血清移植中发挥了重要作用。但鉴于标准分型血清或分型细胞来源的限制、细胞表面或分型细胞来源的限制、细胞表面HLAHLA的弱表达的弱表达或共同表位的
19、存在，以及方法的敏感度与精确或共同表位的存在，以及方法的敏感度与精确度等不足。度等不足。分子生物学技术的迅速发展，使得分子生物学技术的迅速发展，使得HLAHLA的的DNADNA分型技术应运而生，并在开展分型技术应运而生，并在开展DNA-RFLPDNA-RFLP、DNADNA指纹图、等位基因特异性寡核苷酸杂交的基础指纹图、等位基因特异性寡核苷酸杂交的基础上，引入上，引入PCRPCR，使，使HLAHLA分型得以在更精密的水平分型得以在更精密的水平上进行。上进行。41PPT课件三、分子生物学分型法 常用的分子生物学分型技术：常用的分子生物学分型技术：RFLPRFLP与与PCR-RFLPPCR-RFL
20、P分型法分型法PCR-SSOPCR-SSO分型法分型法PCR/SSPPCR/SSP分型法分型法PCR-SSCPPCR-SSCP分型法分型法SBTSBT分型法分型法42PPT课件（一）、RFLP与PCR-RFLP分型法限制性片段长度多态性限制性片段长度多态性（restriction fragment length restriction fragment length polymorphism,RFLPpolymorphism,RFLP）原理：不同个体间的原理：不同个体间的HLAHLA抗原特异性差异，是由各自氨抗原特异性差异，是由各自氨基酸序列不同所决定的，后者的不同是由相应基因的基酸序列不同所
21、决定的，后者的不同是由相应基因的碱基序列决定的。这种碱基序列的差别则造成限制性碱基序列决定的。这种碱基序列的差别则造成限制性内切酶识别位置及酶切位点数目的不同，由此产生数内切酶识别位置及酶切位点数目的不同，由此产生数量和长度不同的量和长度不同的DNADNA酶解片段，经琼脂糖电泳或用特异酶解片段，经琼脂糖电泳或用特异性探针与整个基因组性探针与整个基因组DNADNA的酶解片段进行杂交，即可分的酶解片段进行杂交，即可分析限制性片段长度多态性，借以确定析限制性片段长度多态性，借以确定HLAHLA的型别。这种的型别。这种HLAHLA分型法称为分型法称为DNA-RFLPDNA-RFLP。43PPT课件（一
22、）、RFLP与PCR-RFLP分型法PCR-RFLP：原理：若对若对DNADNA片段进行体外扩增，然后再用限制性片段进行体外扩增，然后再用限制性内切酶进行酶切分析，可使内切酶进行酶切分析，可使RFLPRFLP分析的敏感性大大增分析的敏感性大大增加，此法引入加，此法引入DNADNA体外扩增技术，称为体外扩增技术，称为PCR-RFLPPCR-RFLP分型分型法。法。优点：此法所应用的此法所应用的PCRPCR引物为引物为HLAHLA组特异性的，特组特异性的，特别适用于小量标本的研究和异基因骨髓移植供者的选别适用于小量标本的研究和异基因骨髓移植供者的选择。择。缺点：由于有些由于有些PCRPCR扩增产物
23、不能被内切酶作用，较扩增产物不能被内切酶作用，较难选择能够消化和区分所有等位基因的内切酶。难选择能够消化和区分所有等位基因的内切酶。44PPT课件（二）、PCR-SSO分型法序列特异性寡核苷酸-聚合酶链反应（PCR-sequence specific oligonucledtide,PCR-SSO)：原理：是以是以PCRPCR为基础，将凝胶上扩增的为基础，将凝胶上扩增的HLAHLA基因基因DNADNA转移至硝酸纤维膜或尼龙膜，进而用放射性核素或转移至硝酸纤维膜或尼龙膜，进而用放射性核素或酶、地高辛等非放射性物质标记的寡核苷酸探针与之酶、地高辛等非放射性物质标记的寡核苷酸探针与之进行杂交，从而对
24、扩增产物做出进行杂交，从而对扩增产物做出HLAHLA型别判断。型别判断。特异性寡核苷酸探针（特异性寡核苷酸探针（sequence-specific oligonucleotide sequence-specific oligonucleotide probe,SSOPprobe,SSOP）,故此法又称为故此法又称为PCR-PCR-SSOP分型法。分型法。45PPT课件（二）、PCR-SSO分型法操作过程：包括待测细胞包括待测细胞HLAHLA基因片段扩增、扩增的基因片段扩增、扩增的DNADNA变性后移至固相支持物、基因杂交和杂交部分的显变性后移至固相支持物、基因杂交和杂交部分的显示。示。根据固相
25、支持物所载成分的不同，将根据固相支持物所载成分的不同，将PCR-SSOPCR-SSO分为两分为两类：类：斑点或印迹法：斑点或印迹法：即用扩增的待测即用扩增的待测DNADNA印迹或点至固相印迹或点至固相支持物，再与探针行杂交试验；用于大量标本的分型。支持物，再与探针行杂交试验；用于大量标本的分型。反向斑点或印迹法：反向斑点或印迹法：将已知将已知DNADNA印迹或点至固相支持印迹或点至固相支持物，然后与扩增的待测物，然后与扩增的待测DNADNA（预先标记）杂交。用于少（预先标记）杂交。用于少量标本的测定。量标本的测定。46PPT课件（二）、PCR-SSO分型法优点：灵敏度高、特异性强、需样本量少。
26、是灵敏度高、特异性强、需样本量少。是类类HLAHLA分型应用最广泛的方法，能够鉴定所有分型应用最广泛的方法，能够鉴定所有已知序列的等位基因。已知序列的等位基因。缺点：尚难完成对新的尚难完成对新的HLAHLA等位基因的精确判等位基因的精确判断。断。基因芯片（gene chip）：是是PCR-SSOPCR-SSO反向斑反向斑点或印迹法的微型化。可使点或印迹法的微型化。可使HLAHLA分型趋于规模化分型趋于规模化和自动化。和自动化。47PPT课件（三）、PCR/SSP分型法原理：该法应用设计的一套该法应用设计的一套HLAHLA等位基因的序等位基因的序列特异性引物列特异性引物(sequence spe
27、cific primer,SSP),(sequence specific primer,SSP),对待测对待测DNADNA进行进行PCRPCR扩增，从而获得扩增，从而获得HLAHLA型别特异性的型别特异性的扩增产物。扩增产物。HLAHLA基因扩增的特异性包括：座位特基因扩增的特异性包括：座位特异性、组特异性和等位基因特异性。异性、组特异性和等位基因特异性。缺点：PCRPCR扩增产物的特异性取决于引物的序扩增产物的特异性取决于引物的序列和扩增条件，应在设计试验时避免假基因共列和扩增条件，应在设计试验时避免假基因共扩增的可能。扩增的可能。48PPT课件（四）、PCR-SSCP分型法单链构象特异性-
28、聚合酶链反应（PCR-single strand conformation polymorphism,PCR-SSCP）原理：是以待测基因是以待测基因PCRPCR扩增为基础，对扩增的扩增为基础，对扩增的DNADNA单链（单链（ssDNAssDNA）的）的HLAHLA分型方法。分型方法。ssDNAssDNA在无变性剂的聚在无变性剂的聚丙烯酰胺凝胶电泳时，因其序列的差异形成不同的空丙烯酰胺凝胶电泳时，因其序列的差异形成不同的空间构象，导致电泳迁移率的差异，如此可分辨出单一间构象，导致电泳迁移率的差异，如此可分辨出单一碱基的差异和检测出碱基的差异和检测出DNADNA多态性或点突变，有助于新的多态性或
29、点突变，有助于新的HLAHLA等位基因或突变体的发现。等位基因或突变体的发现。PCR-SSCP作为PCR-SSO的补充，在区分纯合子和杂合子方面有其独到之处，有利于排除SSO杂交的假性。49PPT课件（五）、SBT分型法基于序列的HLA分型法（sequence-based HLA typing,SBT）原理：通过对扩增后的HLA基因片段进行核酸序列测定判断HLA型别。基本过程：待测细胞的DNA分离，应用座位、组或等位基因特异性引物进行PCR扩增，扩增产物的纯化和测序，测出的基因序列与HLA基因库的DNA已知序列比较，判断待测的HLA型别。50PPT课件（六）、其他分型法PCR指纹图分析虚拟DN
30、A分析嵌合体测定差异显示PCR扩增非变异突变系统或扩增阻滞突变系统等 这些技术单独或联合用于各类HLA抗原分型，敏感性和精确度均高于血清学和细胞学分型法，但传统方法是基础，仍有应用价值。51PPT课件第四节、常见的组织或器官移植 从肾脏移植到心肺移植、肝脏移植；从肾脏移植到心肺移植、肝脏移植；从完整的器官移植到部分组织器官甚至细胞移从完整的器官移植到部分组织器官甚至细胞移植；植；从单一器官移植到器官联合移植；从单一器官移植到器官联合移植；经历了理论、伦理、技术等考验，走向成熟。经历了理论、伦理、技术等考验，走向成熟。u临床开展较多的移植有：角膜、皮肤、胰腺、临床开展较多的移植有：角膜、皮肤、胰
31、腺、肾、心脏、肺、肝和骨髓移植等。肾、心脏、肺、肝和骨髓移植等。52PPT课件第四节、常见的组织或器官移植 肾脏移植肾脏移植肝脏移植肝脏移植心脏移植和心肺联合移植心脏移植和心肺联合移植骨髓与其他来源的干细胞移植骨髓与其他来源的干细胞移植53PPT课件一、肾脏移植创始于创始于19501950年，临床开展最早、应用最多和疗年，临床开展最早、应用最多和疗效最佳；效最佳；由于免疫抑制剂和移植技术的不断提高，移由于免疫抑制剂和移植技术的不断提高，移植患者的植患者的1 1年和年和5 5年存活率分别可达年存活率分别可达95%95%和和90%90%，在在HLAHLA基因背景与供者相同或接近的患者，移基因背景与
32、供者相同或接近的患者，移植存活率甚至高达十数年或数十年。植存活率甚至高达十数年或数十年。54PPT课件一、肾脏移植（一）组织配型在肾脏移植中的应用（一）组织配型在肾脏移植中的应用包括包括ABOABO血型配型、血型配型、HLAHLA配型和交叉配型。配型和交叉配型。配型原则：配型原则：ABOABO血型完全相同者为好，至少能相容。血型完全相同者为好，至少能相容。选择最佳选择最佳HLAHLA配型的供者器官。配型的供者器官。55PPT课件一、肾脏移植（二）肾脏移植者的疗效检测（二）肾脏移植者的疗效检测临床观测的项目包括：临床观测的项目包括：T T细胞总数、细胞总数、CD4/CD8CD4/CD8比值和比值
33、和IL-2IL-2及其受体检及其受体检测，以帮助判断排斥反应的发生和评估免疫抑测，以帮助判断排斥反应的发生和评估免疫抑制剂治疗效果；制剂治疗效果；组织活检观察肾组织炎症细胞的浸润；组织活检观察肾组织炎症细胞的浸润；抑制剂药物浓度的监测。抑制剂药物浓度的监测。56PPT课件二、肝脏移植自自19631963年，年，StarzlStarzl在美国成功第一例后，全世界在美国成功第一例后，全世界各地广泛开展；各地广泛开展；术后术后1 1年和年和5 5年存活率分别为年存活率分别为90%90%以上和以上和80%80%以上，以上，最长生存已超过最长生存已超过2020年；年；一般考虑用于移植存活达一般考虑用于移
34、植存活达18 18个月以上患者；个月以上患者；部分肝移植的者，单一供者可用于两个以上部分肝移植的者，单一供者可用于两个以上的受者。的受者。57PPT课件二、肝脏移植（一）组织配型在肝脏移植中的应用（一）组织配型在肝脏移植中的应用 肝脏移植后可出现天然或自发性免疫耐受现肝脏移植后可出现天然或自发性免疫耐受现象，也称象，也称“移植肝免疫特惠现象移植肝免疫特惠现象”。临床上在。临床上在供者选择时仅注重供者选择时仅注重ABOABO血型的配合，而忽视血型的配合，而忽视HLAHLA配型。配型。58PPT课件二、肝脏移植（二）肝移植受者的疗效检测（二）肝移植受者的疗效检测临床观测的项目包括：临床观测的项目包
35、括：T T细胞总数、细胞总数、CD4/CD8CD4/CD8比值和比值和IL-2IL-2及其受体检及其受体检测，以帮助判断排斥反应的发生和评估免疫抑测，以帮助判断排斥反应的发生和评估免疫抑制剂治疗效果；制剂治疗效果；抑制剂药物浓度的监测。抑制剂药物浓度的监测。59PPT课件三、心脏移植与心肺联合移植在世界范围内，心脏移植广泛开展；在世界范围内，心脏移植广泛开展；心脏移植患者的心脏移植患者的1 1年和年和5 5年存活率分别为年存活率分别为80%80%和和70%70%。心肺联合移植的开展晚于心脏移植，手术及心肺联合移植的开展晚于心脏移植，手术及术后处理都较难。术后处理都较难。60PPT课件(一一)组
36、织配型在心脏和心肺联合移植中的应用组织配型在心脏和心肺联合移植中的应用心脏和心肺联合移植时，应进行心脏和心肺联合移植时，应进行ABOABO血型鉴定、血型鉴定、HLAHLA配型、淋巴细胞毒交叉配型和群体反应性配型、淋巴细胞毒交叉配型和群体反应性抗体检测。抗体检测。配型原则：配型原则：ABOABO血型完全相同者为好，至少能相容。血型完全相同者为好，至少能相容。HLAHLA配型尚有争议。配型尚有争议。三、心脏移植与心肺联合移植61PPT课件（二）移植受者的疗效检测（二）移植受者的疗效检测除可根据患者的临床表现或移入器官的功能指除可根据患者的临床表现或移入器官的功能指征判断外，对受者机体进行免疫监测有
37、助于评征判断外，对受者机体进行免疫监测有助于评估和预测排斥反应发生的情况。估和预测排斥反应发生的情况。免疫监测主要包括：免疫监测主要包括：T T细胞亚群；细胞亚群；CTLCTL细胞毒细胞毒作用；作用；NKNK、K K细胞介导的自然杀伤或细胞介导的自然杀伤或ADCCADCC效应；效应；细胞因子及其受体检测，粘附分子及其配体在细胞因子及其受体检测，粘附分子及其配体在各类细胞表达情况等；各类细胞表达情况等；关注：关注：TGFTGF。抑制剂药物浓度的监测。抑制剂药物浓度的监测。三、心脏移植与心肺联合移植62PPT课件四、骨髓与其他来源的干细胞移植骨髓移植开展得较早；骨髓移植开展得较早；干细胞移植日益受
38、到临床工作者的重视。干细胞移植日益受到临床工作者的重视。63PPT课件(一一)骨髓移植骨髓移植移植的骨髓和受者之间同时存在移植的骨髓和受者之间同时存在HVGRHVGR和和GVHRGVHR；可被用于造血系统疾病和原发性免疫缺陷病的可被用于造血系统疾病和原发性免疫缺陷病的治疗；治疗；根据被移植骨髓的来源分为自体、同基因和同根据被移植骨髓的来源分为自体、同基因和同种异基因骨髓移植三种类型；种异基因骨髓移植三种类型；配型：配型：ABOABO血型和血型和HLAHLA配型。配型。四、骨髓与其他来源的干细胞移植64PPT课件移植受者的疗效检测移植受者的疗效检测皮疹活检、血清总胆红素及直接胆红素测定、皮疹活检
39、、血清总胆红素及直接胆红素测定、腹泻症状等，均有助于判断腹泻症状等，均有助于判断GVHRGVHR的发生。的发生。患者造血功能的恢复可看成是移植成功。患者造血功能的恢复可看成是移植成功。抑制剂药物浓度的监测。抑制剂药物浓度的监测。（一）骨髓移植（一）骨髓移植65PPT课件(二二)外周血和脐血干细胞移植外周血和脐血干细胞移植使用药物动员剂促使造血干细胞从骨髓释放到外周血，使用药物动员剂促使造血干细胞从骨髓释放到外周血，从中获取足量的干细胞用于移植；与骨髓移植相比，具从中获取足量的干细胞用于移植；与骨髓移植相比，具有采集方便、供者不需麻醉、移植后造血恢复快，有采集方便、供者不需麻醉、移植后造血恢复快
40、，GVHRGVHR发生率和严重程度不高等优点。发生率和严重程度不高等优点。脐带血经脐带血经GCFGCF、IL-3IL-3等刺激后，等刺激后，CD34+CD34+细胞含量可高出细胞含量可高出成人外周血近成人外周血近2020倍，与其他来源的干细胞相比，免疫原倍，与其他来源的干细胞相比，免疫原性弱、来源广泛、获取的方法简便、易于储存；性弱、来源广泛、获取的方法简便、易于储存；配型和检查：配型和检查：ABOABO血型和血型和HLAHLA配型；血常规、骨髓检配型；血常规、骨髓检验、性染色体测定、造血干细胞鉴定和验、性染色体测定、造血干细胞鉴定和GVFRGVFR征象追踪等。征象追踪等。66PPT课件大致有
41、三类：大致有三类：适应于同种异型或异基因骨髓移植的疾病包括：再适应于同种异型或异基因骨髓移植的疾病包括：再障、慢性髓系白血病等血液系统疾病和免疫系统缺陷障、慢性髓系白血病等血液系统疾病和免疫系统缺陷病。病。实体瘤不宜行骨髓移植，多应用自体末梢血干细胞实体瘤不宜行骨髓移植，多应用自体末梢血干细胞移植；而自体末梢血干细胞移植对再障慢性髓系白血移植；而自体末梢血干细胞移植对再障慢性髓系白血病等血液系统疾病和免疫系统缺陷病无效。病等血液系统疾病和免疫系统缺陷病无效。急性髓系白血病、急性髓系白血病、ALLALL、MMMM、淋巴瘤既是骨髓移植、淋巴瘤既是骨髓移植的适应症，也可用末梢血干细胞移植进行治疗。的
42、适应症，也可用末梢血干细胞移植进行治疗。（三）适于骨髓或干细胞移植的常见疾病（三）适于骨髓或干细胞移植的常见疾病67PPT课件第五节、排斥反应的预防与治疗 显微外科的发展显微外科的发展组织配型方法的改进组织配型方法的改进离体组织器官冷冻技术的进步离体组织器官冷冻技术的进步免疫抑制剂的发现和应用免疫抑制剂的发现和应用u除角膜、脑、睾丸和子宫等少数组织或器官外，除角膜、脑、睾丸和子宫等少数组织或器官外，移植排斥反应仍然是临床移植的重要问题。移植排斥反应仍然是临床移植的重要问题。68PPT课件第五节、排斥反应的预防与治疗 组织配型组织配型抑制物与受体的预处理抑制物与受体的预处理免疫抑制措施免疫抑制措
43、施69PPT课件一、组织配型HLAHLA配型配型HLAHLA交叉配型与预存抗体的检测交叉配型与预存抗体的检测群体反应性抗体的检测群体反应性抗体的检测70PPT课件一、组织配型（一）（一）HLAHLA配型配型 在常规配型中，多用血清学方法做在常规配型中，多用血清学方法做HLA-AHLA-A、HLA-BHLA-B、HLA-DRHLA-DR配型，然后需要配型，然后需要MLCMLC确定确定HLA-HLA-类分子是否匹类分子是否匹配。配。u抑制物存活与抑制物存活与HLAHLA配型的关系：配型的关系：供、受者供、受者HLA-A和和HLA-B相配的位点数越多，移植物相配的位点数越多，移植物存活的几率越高；存
44、活的几率越高；供、受者供、受者HLA-DR位点相配更重要，因为位点相配更重要，因为HLA-DR和和HLA-DQ基因有很强的连锁不平衡，基因有很强的连锁不平衡，DR位点相配的个位点相配的个体，通常体，通常DQ位点也相配；位点也相配；不同地区不同地区HLA匹配程度与移植结果的关系有着不同的匹配程度与移植结果的关系有着不同的预测价值。预测价值。71PPT课件（二）（二）HLAHLA交叉配型与预存抗体的检测交叉配型与预存抗体的检测 交叉配型采用交叉配型采用CDCCDC，试验时每一标本至少应做，试验时每一标本至少应做3 3份，同份，同时设阳性和阴性对照，阳性血清可用淋巴细胞免疫家兔时设阳性和阴性对照，阳
45、性血清可用淋巴细胞免疫家兔获得，阴性血清可采用无受血史的获得，阴性血清可采用无受血史的ABAB血型男性血清。血型男性血清。u根据反应时参与的细胞成分不同，有以下做法：根据反应时参与的细胞成分不同，有以下做法：淋巴细胞交叉配合；淋巴细胞交叉配合；T细胞淋巴细胞毒性交叉配型；细胞淋巴细胞毒性交叉配型；B细胞淋巴细胞毒性交叉配型；细胞淋巴细胞毒性交叉配型；流式细胞法交叉配型；流式细胞法交叉配型；自身交叉配型。自身交叉配型。组织配型差，交叉配型为阴性，可实行移植；交组织配型差，交叉配型为阴性，可实行移植；交叉配型为阳性，组织配型好，也不宜实行移植。叉配型为阳性，组织配型好，也不宜实行移植。72PPT课
46、件（三）群体反应性抗体的检测（三）群体反应性抗体的检测 国际上，应用群体反应性抗体国际上，应用群体反应性抗体(panel reactive antibody,PRA)(panel reactive antibody,PRA)水平，判断器官移植时受体的敏感程度。水平，判断器官移植时受体的敏感程度。PRA是指用是指用4060人含已知人含已知HLA的的T细胞或细胞或T、B混合混合细胞，检测待移植受者血清所得到的抗体阳性百分数。细胞，检测待移植受者血清所得到的抗体阳性百分数。高高PRA血清可针对多个血清可针对多个HLA抗原发生反应，故高抗原发生反应，故高PRA状态的受体对所接受的移植器官或组织将构成较
47、大的威状态的受体对所接受的移植器官或组织将构成较大的威胁，尤其是实体器官移植时。胁，尤其是实体器官移植时。但在做但在做PRA测定时，应考虑在不同测定时，应考虑在不同HLA上可能出现的上可能出现的共同表位或公告抗原与受体血清发生的交叉反应。共同表位或公告抗原与受体血清发生的交叉反应。73PPT课件二、移植物与受体的预处理移植物的预处理移植物的预处理受体的准备受体的准备74PPT课件（一）、移植物的预处理不同的组织器官的移植，其移植物的处理不不同的组织器官的移植，其移植物的处理不尽相同；尽相同；首先，根据移植术的角度对离体组织器官进首先，根据移植术的角度对离体组织器官进行外科修整；行外科修整；半灌
48、注基础上，进行免疫学处理；半灌注基础上，进行免疫学处理；75PPT课件（二）、受体的准备除了进行必要的组织配型或交叉配型外；除了进行必要的组织配型或交叉配型外；于移植前应用一定剂量的免疫抑制剂。于移植前应用一定剂量的免疫抑制剂。76PPT课件三、免疫抑制措施使用免疫抑制剂使用免疫抑制剂诱导受者对移植抗原的特异性免疫耐受诱导受者对移植抗原的特异性免疫耐受77PPT课件（一）、免疫抑制剂的应用 由于参与移植排斥反应的免疫细胞主要以由于参与移植排斥反应的免疫细胞主要以T T细细胞为主，因此，免疫抑制药物主要是抑制胞为主，因此，免疫抑制药物主要是抑制T T细胞细胞的作用。常用的有三类：的作用。常用的有
49、三类：化学性免疫抑制剂：化学性免疫抑制剂：常用的有：常用的有：CsACsA、糖皮质激、糖皮质激素、硫唑嘌呤、环磷酰胺、他克莫司、麦考酚吗乙酯。素、硫唑嘌呤、环磷酰胺、他克莫司、麦考酚吗乙酯。生物性免疫抑制剂：临床已使用的有：抗淋巴细胞生物性免疫抑制剂：临床已使用的有：抗淋巴细胞球蛋白或抗胸腺细胞球蛋白、细胞性单克隆抗体、某球蛋白或抗胸腺细胞球蛋白、细胞性单克隆抗体、某些融合蛋白、反义寡核苷酸。些融合蛋白、反义寡核苷酸。某些中草药：如雷公藤和冬虫夏草。某些中草药：如雷公藤和冬虫夏草。78PPT课件（二）、对移植抗原特异性免疫耐受诱导目前仅限于研究阶段：目前仅限于研究阶段：对同种抗原的特异性免疫耐
50、受，可通过将同种抗原植对同种抗原的特异性免疫耐受，可通过将同种抗原植入子宫或注射给新生儿而诱导。入子宫或注射给新生儿而诱导。应用大剂量天然可溶性或人工合成的供者应用大剂量天然可溶性或人工合成的供者HLAHLA分子，分子，通过封闭通过封闭T T细胞的细胞的TCRTCR，以诱导受者特异性，以诱导受者特异性T T细胞凋亡，细胞凋亡，产生免疫耐受。产生免疫耐受。通过输入可溶性的通过输入可溶性的CTLA-4CTLA-4。阻断阻断CD40-CD40LCD40-CD40L、CD2-LFA3CD2-LFA3等膜分子的相互作用。等膜分子的相互作用。借助基因工程技术。借助基因工程技术。T T细胞疫苗。细胞疫苗。7
