1、1. 单侧输尿管结扎(UUO)导致的肾纤维化模型 2. 硝酸双氧铀(UN)所致肾纤维化模型 3. 肾大部切除所致的慢性肾衰模型 4. 微栓塞导致的进行性慢性肾衰大鼠模型 5. 缺血-再灌注模型 6. 马兜铃酸(AA)肾病模型 7. 嘌呤霉素(PAN)肾病模型 8. 环孢素 A 肾病模型 9. 阿霉素(ADR)肾病模型 10. 腺嘌呤肾病模型 一、 以含马兜铃酸中药的中毒反应为例， 谈谈如何预防中药的毒性反一、 以含马兜铃酸中药的中毒反应为例， 谈谈如何预防中药的毒性反 应？应？ 答： 1.引起马兜铃酸肾病的原因： a.剂量和疗程的不合理。大剂量或长期使用所致属于药物毒性反应的范畴。 b.药物的
2、误用，如将木防己误用为汉防己，将关木通当作川木通使用。 2.为预防中药毒副作用，要加强中药毒副作用的监测和研究： a. 加强处方合理性研究：在目前基础研究还不深入的情况下，进行含马兜铃酸 新药研究应慎重。在立项进行适应症选择时建议仅考虑疑难病证，组方时进行合 理性论证，并进行必要的拆方试验，以证明其是处方中不可缺少的药味。建议在 十分必要时才使用含马兜铃酸药材。 b. 加强药学研究：建议固定药材的品种、产地；考察炮制、制备工艺对马兜铃 酸含量的影响；研究建立药材及制剂中马兜铃酸的限量检查方法，提供详细的方 法学研究资料（包括方法选择、最低检出限考察等），并将该检查项分别列入药 材及制剂的质量标
3、准。 c. 加强药效毒理研究：加强中药安全性评价，制定符合中药特点的不良反应监 察报告方法。应进行急性毒性试验、长期毒性试验、一般毒理学试验、血液学、 血液生化学及组织病理形态学观察。 2 答：以 Wistar 大鼠为试验动物，对其进行免疫，从关节炎指数评定、血清学、 病理学和影像学检测等方面进行综合评价，从而测评抗风湿药物药效。 模型的选择：胶原诱导性关节炎或佐剂性关节炎 观察指标的选择：行为学检测，关节肿胀程度评价， 相关生化检测（类风湿因子抗核周因子，抗角蛋白抗体，抗 型胶原抗体，C-反应蛋白、血沉、淋巴细胞亚群、 白细胞介素、肿瘤坏死因子） 影像学检测（X 三、中药毒性试验包括哪些内容
4、？谈谈进行中药毒性试验的必要性。三、中药毒性试验包括哪些内容？谈谈进行中药毒性试验的必要性。 答： 1.中药毒性试验：一般毒性试验包括急性毒性试验，长期毒性试验，局部毒性研 究。特殊毒性试验包括致畸试验，致癌试验，致突变试验，药物依赖试验。 a. 急性毒性试验：指在一日内一次或多次应用受试药物给予动物后，短期内所产 生的毒性反应及死亡情况。 LD50试验：指动物单次给药后引起 50动物死亡的剂量。 LD50值的意义是：LD50越小表示药物的急性毒性越大。 最大耐受量试验（MTD）：指动物单次大剂量给药或在 24 小时内接受多次大剂 量受试药物后，动物在短期内出现的与药物相关的毒性反应，但是又不
5、引起动物 死亡的最大剂量。 最大给药量试验：该试验多用于中药和毒性较小的其它药物研究。指药物以最高 浓度和最大容积的给药，剂量可能并未达到最大耐受的剂量，所以该剂量被称为 最大给药量。 b. 长期毒性试验：一般是在急性毒性试验结果的基础上，观察评价动物反复给 予受试物后，机体产生毒性反应的特征及其毒性损害的严重程度，以及主要毒性 靶器官及其损害的可逆性。 c. 其他毒性试验：刺激性试验，过敏试验等。 2.中药毒性试验的必要性： 目的性： 1、发现中药的毒性反应 2、确定毒性作用的剂量范围 3、确定中药毒副作用的靶 组织和靶器官 4、判断毒性的可逆性 5、研究解毒药及药物中毒后的急救措施 必要性
6、： 现在中药不同于传统意义上的中药。 1、中药成分复杂，有效成分、赋形剂、杂质澄清剂、增溶剂等诸多。 2、当前，各种新技术、新工艺不断应用于中药的研究，而且从中药、天然药物 中提取的有效成分、有效部位及其制剂日益增多，某些成分含量明显提高中药毒 性作用，因此对其临床前安全性评价应该给予足够的重视。 四、请述中医药抗肝纤维化的药效研究思路四、请述中医药抗肝纤维化的药效研究思路? 答： 1、中医范畴中的肝纤维化： 中医认为瘀血阻滞肝脉是肝纤维化的共同病理基础， 并兼有脾气虚损、肝肾阴虚、气机郁滞、痰浊凝滞、热毒内蕴等。根据以上病理 特点，中医一般采用活血化瘀、益气活血、滋阴活血、行气活血、解毒活血
7、及化 痰活血等六种治法。 西医范畴的肝纤维化：肝纤维化是指各种致肝脏损伤因素长期反复作用于肝脏， 引起肝细胞变性、坏死和炎症，在修复过程中导致细胞外基质(ECM)异常增多和 过度沉积的病理过程。肝纤维化的形成，主要是由于肝星状细胞激活，ECM 成 分生成过多，降解相对不足，胶原等 ECM 在肝内大量沉积所致。 2、研究思路： (1)基础研究基础研究：血清学实验，检测体内部 ALT、AST、HA、LN 的含量；免疫组 (2)作用机理研究作用机理研究：细胞因子研究。 研究方法： (1)实验动物的选择，应考虑年龄体重，为慢性实验，故选择低年龄的动物。6 周 造模选年幼动物；动物性别，一般雌雄均要；动
8、物种类，常用大鼠。 (2)常用于建立肝纤维化动物模型的毒物、药物等造模试药。 (3)常用的肝纤维化造模方式为：CCl4肝纤维化模型，该模型较为可靠，复制时 间较短， 肝纤维化进展稳定， 适合于肝纤维化发生、 发展过程的动态观察和研究， 是目前国内外常采用的动物模型。苯巴比妥加速 CCl4模型，可缩短造模周期。 五、五、如何全面评价抗高血压中药的药效如何全面评价抗高血压中药的药效? ? 答： 1、从证候研究证候研究入手探讨中医药评价手段：探索中医药评价手段、症状本质的研 究、症状相关基因研究。 积极引进微观辩证学最新成果，可为高血压病中医临床治疗学提供依据。目 前对各证型微观研究主要集中于肾素-
9、血管紧张素-醛固酮系统、激素、血液流变 学改变等各方面。今后对高血压病分型研究应结合血压水平、靶器官损伤程度及 病因学等进行，运用现代科学技术不断从整体、器官、细胞，更要从分子、基因 水平对各证型微观研究进行前瞻性、深层次的探讨。 2、从发病研究发病研究入手探讨中医药降压机制 a 对交感神经的抑制 b 钙通道阻断作用 c 利尿降血压作用 d 对 RNAs 系统的影响 e 对心脏血液动力学影响 f 对血液流变学的影响 g 对血管内皮能力的影响 h 对胰岛素抵抗的影响 抗高血压药中药具有多途径、多环节、多靶点作用，在治疗各型高血压中发挥了 独到疗效，为进一步深入研究提供了思路。 3 从靶器靶器官损
10、害官损害入手探讨中医药的的保护机制 a 心脏 b 肾脏 研究方法 a 动物模型阴虚模型-滋阴药 阳虚模型-助阳药 阴阳两虚型-桂附八味丸 实火 型-黄连解毒汤 肝阳上亢型潜阴方 血瘀证模型活血化瘀补肾中药 b 检测指标 舒张压平均的脉压 左室内 压等。 六、试述急性和慢性消化性溃疡的动物模型六、试述急性和慢性消化性溃疡的动物模型 答： 1.急性消化性溃疡：应激性胃溃疡模型、幽门结扎法胃溃疡模型、(药物法)乙醇 法致急性胃溃疡模型、 利血平法致急性胃溃疡模型、 吲哚美辛致急性胃溃疡模型。 2.慢性胃溃疡动物模型（308）：醋酸烧灼型胃溃疡动物模型（醋酸注射法、醋 酸浆膜面浸渍法）、幽门螺杆菌感染
11、性胃溃疡模型。 七、阐述急性应激性胃溃疡模型的造模机制。如何评价急性应激性胃溃疡动物七、阐述急性应激性胃溃疡模型的造模机制。如何评价急性应激性胃溃疡动物 实验模型？实验模型？ 答： 1.造模机制：各种应激刺激增强交感神经兴奋性，使血管收缩，胃黏膜缺血、缺氧，抵抗力 下 降 ， 造 成 应 激 性 溃 疡 ； 另 一 方 面 ， 应 激 刺 激 使 副 交 感 神 经 - 垂 体 - 肾 上腺系统兴奋性增加，进而使胃运动亢进，胃酸、胃蛋白酶和胃泌素分泌增加，造成应激性 溃疡。 2、评价： A. 溃疡程度溃疡程度的评定： 1）溃疡指数：以长度、宽度、点数长度、宽度、点数“记分”，或以淤血和长度淤血
12、和长度记分。 2）根据溃疡指数推算： 模型组溃疡指数给药组溃疡指数 溃疡抑制百分率 100% 模型组溃疡指数 发生溃疡的动物数 溃疡发生百分率 100% 实验动物数 B.总体评价总体评价： 水浸应激性胃溃疡发生率可达 100%，重复性较好。中枢抑制剂、抗胆碱药、制酸药中枢抑制剂、抗胆碱药、制酸药对其有 明显的对抗作用。尽管胃病变与人类消化性溃疡不同，但由于方法简单结果可靠，迄今仍是 研究抗溃疡药的常用模型。 八、 分别阐述四种药物性肝炎模型的造模机制。 如何评价这些动物实八、 分别阐述四种药物性肝炎模型的造模机制。 如何评价这些动物实 验模型？验模型？ 答： A. CCl4急性肝损伤模型急性肝
13、损伤模型：CCl4在肝内经还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）和肝 微粒体细胞色素 P450 混合功能氧化酶的作用，生成活性的三氯甲基（CCl3）和氯自由基 （Cl） a、肝细胞氧化肝细胞氧化： 自由基+细胞大分子共价结合脂质脂质过氧化膜结构和功能完整性 的破坏肝细胞损伤坏死 b、肝细胞死亡死亡：三氯甲基自由基抑制细胞膜钙泵膜钙泵活性使 Ca2+内生增加细胞中中 毒死亡毒死亡 c、肝脏能量生成障碍： 三氯甲基自由基+蛋白质共价键损害线粒体线粒体脂肪酸脂肪酸氧化 受抑制（影响肝脏能量生成障碍）三酰甘油和脂肪酸三酰甘油和脂肪酸在肝细胞内蓄积 结果： a、根据所给 CCl4计量和时间不同，肝
14、脏的损伤程度不同 b、 一般在给予 CCl4后 6-24h 血清丙氨酸氨基转移酶 （ALT） 和天门冬氨酸氨基转移酶 （AST） 活性升高，并能反映肝损伤的程度 c、形态学上表现为肝小叶中央区坏死和脂肪变性 评价评价： a、CCl4肝损伤模型是最常见的急性肝损伤模型，造模方法简单，成功率高，重复性好，价 格低廉 b、CCl4剂量不宜过大，以免造成动物中毒死亡 c、CCl4是无色澄清的有毒液体，难溶于水，一般用花生油、橄榄油、豆油等植物油混合成 所需浓度 d、缺点是：不同动物个体肝损伤的程度差异较大，小鼠接受 CCl4后肝脏病理学改变与血清 AML 等生理指标改变的相关性不如大鼠好 e、CCl4
15、可从呼吸道、皮肤吸收，对人体有毒性，注意防护。 B. D-半乳糖胺急性肝损伤模型半乳糖胺急性肝损伤模型： 造模机制：D-半乳糖胺（肝细胞磷酸尿嘧啶核苷酸干扰剂）+磷酸尿苷磷酸尿苷磷酸尿苷-半乳糖 胺复合物磷酸尿苷含量降低核酸、糖蛋白、脂糖核酸、糖蛋白、脂糖等物质的合成减少 评价评价： 1.D-半乳糖胺与 CCl4 所致肝损伤的组织学改变明显不同。CCl4 损伤：肝小叶中央静脉周围 区大量肝细胞坏死和 出血，脂肪变性十分明显；D-半乳糖胺损伤：呈弥漫性、多发性片状 坏死，脂肪变性不如 CCl4 明显，嗜酸性小体较多见，与人类病毒性肝炎的肝损伤类似。 2.方法简便，成功率高，重复性好，肝脏病变具有
16、特异性，是目前公认的研究病毒性肝炎发 病机制和药物治疗效果的较好模型。 C. 刀豆蛋白刀豆蛋白 ConA 急性肝损伤模型：急性肝损伤模型： 造模机制：造模机制： 1、ConA 是一种植物蛋白，可活化 T 细胞的丝裂原； 2、其进入体内后可引起与人类自身免疫性肝炎相似的肝损伤 相关因素： 1、活化 T 淋巴细胞、巨噬细胞淋巴细胞、巨噬细胞，促进细胞因子释放，如 TNF-，IFN-，IL-2 等与早期肝 细胞损害关系密切 2、其他如粘附因子，趋化因子，一氧化氮，肝细胞凋亡等也参与了 ConA 所致肝细胞损伤 的发病过程 评价评价： 1、本模型是由淋巴细胞介导的肝损害模型，很好的模拟了人类病毒性肝炎
17、、自身免疫性肝 病等疾病，是研究这些肝病发病机制和治疗药物的较理想模型。 2、Con A 所致肝损害，一次性尾静脉注射后 2h 即可见肝细胞损害，8h 肝损害达高峰，制 作快速、简便。 3、Con A 致肝损害具有剂量依赖性，选用剂量 0.1530mg/kg 体重时，肝损害程度随药物剂 量加大而加重，当剂量达 20mg/kg 体重以上时，8h 内出现小鼠死亡。 4、病变具有肝脏特异性，Con A 静脉注射 8h 后组织病理学检查未发现肺、肾、脾、心等肝 外器官损伤。 D. CCl4慢性肝损伤模型：慢性肝损伤模型：CCl4反复多次给药，易造成慢性肝中毒，致使肝细胞变性，坏死 及纤维组织增生，甚至
18、发生肝硬化。 九、请设计中药治疗胆囊炎胆石症的主要药效学实验方案九、请设计中药治疗胆囊炎胆石症的主要药效学实验方案 答： 1、造模：根据人类胆石形成的主要诱发因素，如：胆汁理化状态的改变胆汁理化状态的改变、胆汁瘀滞、胆道、胆汁瘀滞、胆道 感染、胆道异物、代谢因素感染、胆道异物、代谢因素等，采取单一或复合因素造模；如食饵性食饵性胆色素结石模型、感感 染性染性胆色素结石模型、异物植入性异物植入性胆色素结石模型等。 2、药效学考察： 1）体外溶石实验：在模拟生理环境下，利用药物与胆石直接接触，观察药物对胆石的溶解 作用。 2）体内实验： a 抗炎试验抗炎试验：（1）小鼠耳廊肿胀法、足跖肿胀法、棉球肉
19、芽肿法进行抗炎试验，观察受试 药物的抗炎作用。（2）毛细血管通透性试验：小鼠或大鼠，致炎后进行毛细血管通透性试 验，观察受试药物对急性炎症的影响。（3）白细胞游走试验：大鼠或小鼠，致炎后，观察 受试药物对炎性渗出液中白细胞游走及血浆蛋白的影响。 b 止痛试验止痛试验：可用镇痛试验及或平滑肌解痉试验观察受试药物的止痛作用。 c 解热试验解热试验： 可用家兔或大鼠， 制备各种致热动物模型 （如用内毒素、 酵母、 菌苗、 药物等） ， 观察受试药物的解热作用。 d 利胆试验利胆试验：可用大鼠或家兔进行胆汁流量的测定，观察受试药物的利胆作用。 e 抑菌试验抑菌试验： f 其他试验其他试验：必要时可作及
20、红、白细胞数、白细胞分类，尿素氮、尿胆素、胆红素、胆固醇 及转氨酶等指标。 十、目前镇痛药物作用机制研究的新思路与新方法有哪些？十、目前镇痛药物作用机制研究的新思路与新方法有哪些？ 答： 1、热刺激法：利用一定强度的温度来刺激动物躯体的某一体部位，使其产生疼痛反应。常 用方法有辐射热测痛法（大白鼠或小白鼠辐射热致痛引起甩尾反应）、小白鼠热板法等。 （1）辐射热刺激法（又称光热法）：用小型聚光灯产生一定强度的光束，通过透镜聚焦照 射大白鼠（或小白鼠）的尾巴或家兔鼻部来致痛。大白鼠以甩尾时间为痛反应指标，家兔则 以甩头为痛反应指标。此法仪器装置简单，反应灵敏；若固定照射时间能准确测出阈值及刺 激强
21、度。对筛选麻醉性镇痛药及非麻醉性镇痛药均适用。 （2）小鼠热板法：小鼠的足底无毛，皮肤裸露，在温度为 550.5的的金属板上产生疼痛反 应，表现为舔后足、舔后足、踢后腿踢后腿等现象。此法仪器装置简单，指标明确；痛反应潜伏期长，便于 观察及测出药物之间的较小差异，有利于比较药物镇痛作用的强弱、快慢及持续时间。是目 前常用的方法之一。主要用于筛选麻醉性镇痛药。 2、化学刺激法：许多化学物质如强酸、强碱、钾离子、缓激肽等，接触到完整的皮肤和粘 膜时，即引起疼痛反应。因此，将某些化学物质涂布于开口的皮泡基部暴露的神经末梢上或 注入动脉、静脉或腹腔内，均可造成疼痛模型，作为研究疼痛生理及筛选镇痛药物的方
22、法。 （1）小鼠扭体法：应用有些化学刺激物注入小鼠腹腔内，引起深部的、大面积而较持久的 疼痛刺激，致使小鼠产生“扭体”反应（腹部内凹、躯干与后腿伸张、臀部高起）。本法对 筛选弱镇痛药是一种敏感、简便、重复性好的方法，但缺乏特异性。 （2）钾离子皮下透入致痛法：饱和氯化钾溶液，采用一定强度的直流电经动物不同部位的 皮下透入，可使家兔缩腿、挣扎、扬爪，或使大鼠甩尾、嘶叫等，均可作为致痛的指标。此 法简便灵活， 输入电流强度与钾离子透入及其引起的痛反应呈正比， 在研究疼痛生理中较多 采用。 （3）缓激肽动脉动脉注射法：动脉内逆行逆行注入缓激肽，使动物产生一些症状，称为假情感反应， 表现有嘶叫、肢体屈
23、曲、呼吸加深、血压升高、角膜反射与膝反射阳性等，可作为测定镇痛 药的指标。此法可以用作鉴别外周作用的实验方法。 3、机械刺激法：对大鼠或小鼠尾根或尾尖施加一定的压力，可产生嘶叫嘶叫，以此作为痛反应 的指标。此法指标明确，使用简便，是筛选镇痛药的常用方法之一。本法主要有大鼠尾尖压大鼠尾尖压 痛法痛法和小鼠尾根压痛法小鼠尾根压痛法。 4、电刺激法：系采用电刺激器进行刺激，引起疼痛反应。本法的优点是无论弱效或强效药 物的镇痛效应都能测定出来。 缺点是机体阻止的阻抗易变而不易控制， 而且电刺激法敏感性 不很高，其反应的变化与多种因素有关，如年龄、性别、种族及用药前的阈值等。此外，电 击致痛还包含反射性
24、因素， 因而临床上没有镇痛作用的药物， 当用本法测定时也可能出现阳 性反应。与机械刺激法比较，对电刺激法的评价是严谨不足。 （1）齿髓刺激法：目前公认牙髓神经是对痛颇敏感的刺激部位，其痛反应近似临床病理性 疼痛。 因此认为齿髓刺激法是评价镇痛药的标准而可靠的方法。 动物在麻醉下用电钻在牙齿 上钻孔后，将电极插入齿髓作慢性埋藏电极。电刺激时，动物因疼痛会引起咀嚼运动咀嚼运动与摆头摆头 等反应，这些反应可作为痛阈的指标。本法操作简便，所测得的镇痛强度及持续时间，与临 床观察一致，可作为模拟病理性疼痛的一种有价值的敏感方法。 （2）小鼠尾刺激法：电刺激小鼠尾部小鼠尾部时，会引起小鼠嘶叫反应，以此作为痛反应指标。此 法反应灵敏，对多数镇痛药物都适用。
