1、 输血前检查中的不规则抗体筛选 不规则抗体的筛选不规则抗体产生原因：输血、妊娠对受血者的血清或血浆进行抗体筛查是非常必要的，因为有临床意义的抗体会导致溶血性输血反应，破坏输入的不配合的红细胞或缩短其寿命，或引起新生儿溶血病。不规则抗体的筛选重要性抗体筛选的重要性可以在配血前早期发现和确认具有临床意义的意外抗体，获得充足的时间来选择缺少相应抗原的相配合的血，避免一些可能的情况造成病情延误。待检血液样本要求样本管上要明确标注能确认被检者身份的信息。如姓名、住院号等。可采用EDTA抗凝、肝素抗凝以及不抗凝血样。EDTA能螯合钙并阻止补体激活，避免补体附着在筛选红细胞上引起非特异性反应。建议不要使用血
2、清分离管：因为管中有凝胶，很难获得不被凝胶污染的自身红细胞。溶血的标本不能使用，因为可能掩盖抗体引起的溶血。自身细胞、筛选细胞使用前最好洗涤病历信息临床诊断妊娠史输血史近期使用的药物种族抗体筛选的试剂抗体筛选红细胞抗人球蛋白试剂增强介质的添加LissPEG4000酶凝聚胺 抗体筛选用的红细胞抗体筛选用的红细胞：双人份细胞和三人份细胞组。其Rh血型为：CCDee、ccDEE、和ccdee.必须具备全部Rh因子，还应该含有其他常见抗原：M,N,S,s,Lea,Leb,k,Fya,Fyb,Jka,和 Jkb 抗原，还必须具有Dia 抗原。两细胞和三细胞的筛选红细胞示意图Rh Kell Duffy K
3、idd Lewis P MN Lutheran XgCell D C c E e K k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb P1 M N S s Lua Lub XgaR1R1 +o o +o +o +o +o +R2R2 +o +o o +o +o +o +oRh Kell Duffy Kidd Lewis P MN Lutheran XgCell D C c E e K k Fya Fyb Jka Jkb Lea Leb P1 M N S s Lua Lub XgaR1R1 +o o +o +o +o +o +R2R2 +o +o o +o +o +o +orr o o +o
4、 +o +o +o +o +o +筛选红细胞试剂红细胞是保存在保存液中，一旦用生理盐水或 Liss液洗涤后则应该在小时内使用，否则会因污染、抗原（Lewis系统抗原）丢失导致试验错误。抗人球蛋白试剂抗人球蛋白分类：单特异性的抗-IgG，抗C3d，多特异性的抗IgG+C3d。抗-IgG、抗IgG+C3d的多特异性抗球蛋白试剂都可用于抗体检测。抗IgG+C3d可增加一些补体依赖稀有抗体的检出，如Kidd血型系统的一些抗体;与单纯的抗IgG相比，抗IgG+C3d 与这些需要补体参与反应的抗体可产生更强的反应。多特异性抗球蛋白试剂的缺点是容易产生假阳性反应。使用抗IgG可以避免补体引起的非特异反应，但
5、降低了补体依赖抗体的检测灵敏度。抗体筛选技术（1）技术要求：尽可能多的检测出有临床意义的抗体。(灵敏度高）尽可能少的检测出无临床意义的抗体。（特异性好）尽可能快的完成抗体检测。（简单、快速、易操作）抗体筛选技术（2）选择的技术不仅要能检查出不配合的IgM抗体，还必须能检查出尽可能多的不配合的IgG抗体。最大限度的减少抗体的漏检。每种方法都有自己的特点，适应于不同范围及情况。到目前为止，还没有任何单一的技术方法可以检测出所有的血型抗体。抗体筛选技术（3）在进行抗体筛选时，不能只选用IAT方法，必须同时选用立即离心技术和其他技术。立即离心法是间接抗人球法无法替代的。抗体筛选技术（盐水试验）立即离心
6、盐水试验技术：可以用于检测IgM性质的盐水反应活性抗体。此方法缺点是检查出无临床意义的抗体，如冷凝集素抗及抗等；且漏检IgG性质的抗体。发现和确认缗钱现象发现冷特异性抗体（如抗-Lea)发现冷自身抗体抗体筛选技术（经典间接抗人球蛋白试验）程序程序：2滴血清、1滴2-5%的红细胞，37孵育45-60分钟，生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂，离心后判读结果。用抗体致敏的红细胞检测试验结果的正确性。优点优点：特异性好。缺点缺点：灵敏度比Liss-IAT、PEG-IAT、凝胶卡差，耗时长。抗体筛选技术（LISS-间接抗人球蛋白试验）原理：1、Liss液可以降低红细胞周围的离子云，
7、促进 抗体致敏红细胞。2、降低反应体系中的离子强度，使抗体易于 接近抗原，缩短红细胞致敏时间优点：1、缩短孵育时间 2、使用抗-IgG，可以减少假阳性反应。缺点：1、易出现假阳性反应 2、方法的灵敏度要弱于PEG-IAT法程序：程序：2滴血清、1滴2-5%的红细胞，加2-4滴LISS液后混匀，37孵育15分钟，离心观察细胞的凝集情况，用生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂，离心后判读结果。抗体筛选技术（PEG-间接抗人球蛋白试验）原理：1、破坏红细胞水膜层，使抗原抗体容易结合 2、固定水分子，使反应体系中抗体浓度相对提高（空间排斥效应）优点：1、大幅提高IAT的反应强度和灵
8、敏度 2、特异性好，假阳性反应低于凝聚胺方法。缺点：1、促进自身抗体的检出 2、不能观测37孵育后结果 3、对于高蛋白血清或血浆，会出现蛋白析出。程序程序：2滴血清、1滴2-5%的红细胞，加4滴PEG溶液后混 匀，37孵育15分钟，生理盐水洗涤3遍后倾倒上清液，控干，加2滴抗人球蛋白试剂，离心后判读结果。抗体筛选技术（酶试验）原理原理：蛋白水解酶可破坏红细胞表面的带负电荷的唾液酸基团，使红细胞表面负电荷减少，降低了红细胞之间的排斥力，缩短了相邻红细胞之间的距离，使IgG抗体凝集红细胞。程序程序：2滴血清、1滴2-4%红细胞，加入2滴酶，37孵育15分钟，离心看结果。优缺点：酶试验（菠萝酶或木瓜
9、酶）：用于输血前检查中的抗体筛查，因为酶方法会破坏一些红细胞抗原，如，Fya和Fyb,但酶技术可以增强Rh及Kell系统的抗体检测。主要用于MNSs系统的抗体检测。酶可以引起假的阳性和阴性反应。酶试验可以发现唯酶介质反应性抗体（如唯酶抗E）抗体筛选技术（凝胶卡试验）试验原理代替试管，血清与细胞在一个微型管内反应 每个柱中含有约25-30ul的葡聚糖 凝胶。凝胶中还包含有抗人球蛋白成分在离心时，在样品槽中的RBC在离心力作用下进入凝胶管中。血清与游离的血清蛋白因缺乏足够的重力留在样品槽中。实验操作步骤 用含有抗人球蛋白的凝胶微管 样品槽中加入25ul的血清/血浆和50ul悬浮在LISS液中的0.
10、8-1的RBC37中孵育15分钟，用专用凝胶卡离心机在设定条件下离心 判读 减少了试验人员接触样本的频率，减少接触感染的机会需要的样本少在试验的重复性方面有着极强的一致性，无需细胞洗涤步骤以及对技术的依赖性降低。提供了一个明确的较易判读的稳定的结果，且结果可以保留较长时间供多人判读，还可以拍照永久保存。灵敏度更高。孵育时间短。15分钟。凝胶卡试验的优点凝胶卡试验的缺点要精确调节红细胞浓度至0.8-1，这较为麻烦。将试剂瓶中的细胞加入试管要比加入如此小的凝胶孔中要容易的多。缗钱状凝集与不完全的小血块样本也可造成假阳性。可以检出大量临床无意义的抗体。自身对照试验必要性自身对照：即使用病人自己的血清
11、和自己红细胞进行抗体检测。有助于确定抗体筛选阳性结果是同种抗体还是自身抗体、或是缗钱引起。抗体筛选一般程序患者血清或血浆筛选细胞患者血清或血浆自身细胞用试管法室温盐水离心检测IgM抗体用抗人球法（试管法、卡）、聚凝胺法、酶法检测IgG抗体抗体筛选结果的分析（1）在分析抗体筛选结果时，应综合运用以下资料：受检血清与每个筛选细胞的反应结果受检血清与自身细胞的反应结果检查比较不同反应相的结果，如盐水介质、抗人球蛋白试验、酶试验等在试验中红细胞与血清孵育后是否溶血 阳性反应的强度，有无剂量效应抗体筛选结果分析（2）患者的血浆与筛选细胞在不同的介质中反应，若：抗体筛选阴性阴性，只能说明患者血清中没有针对
12、筛选细胞所具有抗原的抗体，不能排除有抗低频抗原抗体存在的可能。抗体筛选阳性阳性，说明患者血清中有意外抗体，可进一步进行抗体鉴定，以确定抗体的特异性。抗体筛选结果分析（3）自身对照阳性的解释存在自身抗体，如自身免疫性溶血性贫血患者。输血反应：如果患者对近期输入的红细胞产生同种抗体，其体内献血者的红细胞被抗体致敏，使自身对照阳性，很容易误认为是自身抗体。因此了解患者近期输血史和有无输血反应十分重要抗体筛选结果的解释（1）自身对照阴性自身对照阴性患者血清与筛选细胞室温盐水和抗人球蛋白试验均阴性，说明抗体筛选阴性。患者血清与筛选细胞室温盐水介质凝集，说明有IgM性质的同种抗体。患者血清与筛选细胞室温盐
13、水介质不凝集，抗人球蛋白试验阳性，说明有IgG性质的同种抗体。患者血清与筛选细胞室温盐水介质凝集，用DTT或2Me处理血清后，抗人球蛋白试验阴性，说明只有IgM抗体，没有IgG性质的同种抗体；抗人球蛋白试验阳性，说明既有IgM抗体还有IgG性质的同种抗体。抗体筛选结果的解释（2）自身对照阳性自身对照阳性患者血清与筛选细胞室温盐水和抗人球蛋白试验均阴性，说明抗体筛选阴性。患者血清与筛选细胞室温盐水介质凝集，说明有IgM性质的自身抗体或/和同种抗体。患者血清与筛选细胞室温盐水介质不凝集，抗人球蛋白试验阳性，说明有IgG性质的自身抗体或/和同种抗体。患者血清与筛选细胞室温盐水介质凝集，用DTT或2M
14、e处理血清后，抗人球蛋白试验阴性，说明没有IgG性质的自身或/和同种抗体；抗人球蛋白试验阳性，说明还有IgG性质的自身或/和同种抗体。谱细胞反应结果的判断对照筛选细胞表，通过阴性排除法可初步看出可能有哪些抗体，再通过谱细胞做抗体鉴定，来确定抗体的特异性微柱凝胶法抗体筛选程序（1）确定待检样本符合要求，确定化验单的检验项目包含抗体筛选项目。病历记录要包含既往的抗体筛选结果。准备实验材料：将待用试剂平衡至室温用Liss液将筛选细胞调节到0.8-1%浓度准备好抗IgG微柱凝胶卡，并标记三个微管，分别为1、2、3号。微柱凝胶法抗体筛选程序（2）去除已作标记的微管上口的封口膜。按照下表向样品槽中加入试剂
15、：轻扣凝胶卡，检查样品槽中试剂量及液面，保证三管样品槽中液面均匀且处于同一水平面位置。微管号微管号 筛选红细胞量筛选红细胞量 患者血浆量患者血浆量 1一号筛选细胞50微升 25微升 2二号筛选细胞50微升 25微升 3三号筛选细胞50微升 25微升微柱凝胶法抗体筛选程序（3）置抗IgG凝胶卡于37 1 孵育箱中孵育15分钟。取出凝胶卡，用凝胶卡专用离心机离心：将卡放入离心机转子上的卡槽中，注意要保持转子的平衡。扣上离心机盖板。启动运行按钮。检查倒计时时间及离心转速符合试验要求。离心机运转停止且盖板自动打开后取出凝胶卡。微柱凝胶法抗体筛选程序（4）结果判定将检测结果与既往记录比较。对于抗体筛选阳性的样本进行抗体鉴定。抗抗IgG卡结果卡结果解释解释记录记录微管中均无溶血、凝集未检测出不规则抗体阴性微管中有任一管出现溶血或凝集存在不规则抗体阳性抗体鉴定抗体鉴定：在病人血清不规则抗体检查为阳性时，且时间允许的情况下，在交叉配血之前，可以进行简单的抗体鉴定试验，确定抗体的特异性，会有助于选择无对应抗原的相合血。如抗cE抗体在人群中的相合率为30%。抗体鉴定的一般程序不规则抗体筛选阳性谱细胞鉴定：室温盐水法结果IAT结果必要时添加酶处理谱细胞鉴定得出抗体特异性初步结果被检者红细胞上所推测的抗体对应抗原检测吸收放散试验进行确认
