1、选修一高考成功方案 第1步高考成功方案 第2步高考成功方案 第3步第二讲一、微生物的实验室培养一、微生物的实验室培养1培养基培养基(1)培养基即人们按照培养基即人们按照 ，配制出供其生长繁殖的基质。配制出供其生长繁殖的基质。(2)按物理状态，可将培养基划分为按物理状态，可将培养基划分为 培养基和培养基和 培培养基养基(如琼脂培养基如琼脂培养基)。(3)培养基一般都含有的成分是：培养基一般都含有的成分是：，在此基础上还需满足微生物生长对在此基础上还需满足微生物生长对 的需求。的需求。微生物对营养物质的不同需求微生物对营养物质的不同需求液体液体固体固体水、碳源、氮源和无机盐水、碳源、氮源和无机盐p
2、H、特殊营养物质、特殊营养物质及氧气及氧气2消毒和灭菌消毒和灭菌项目项目消毒消毒灭菌灭菌条件条件使用使用 的理的理化方法化方法使用使用 的理化因素的理化因素结果结果杀死物体表面或内部杀死物体表面或内部杀死物体内外杀死物体内外较为温和较为温和强烈强烈一部分对人体有害的一部分对人体有害的微生物微生物(不包括芽孢和不包括芽孢和孢子孢子)所有的所有的微生物，包括芽孢和微生物，包括芽孢和孢子孢子项目项目消毒消毒灭菌灭菌适用适用实验操作的空间、操作者实验操作的空间、操作者的衣着和手的衣着和手培养器皿、接种用具培养器皿、接种用具和培养基等和培养基等常用常用方法方法 消毒法，消毒法，消毒消毒法，酒精、氯气、石
3、炭酸法，酒精、氯气、石炭酸等化学试剂消毒法等化学试剂消毒法 灭菌、灭菌、灭灭菌、菌、灭菌灭菌煮沸煮沸巴氏巴氏灼烧灼烧干热干热高压蒸汽高压蒸汽3大肠杆菌纯化及菌种保藏大肠杆菌纯化及菌种保藏(1)制备牛肉膏蛋白胨培养基的步骤为：制备牛肉膏蛋白胨培养基的步骤为：称量称量溶化溶化 (2)微生物纯化的原理及方法：微生物纯化的原理及方法：原理：在原理：在 培养基上将细菌稀释或分散成培养基上将细菌稀释或分散成 ，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。方法：方法：，要求无菌操作。，要求无菌操作。计算计算灭菌灭菌固体固体单个细胞单个细胞倒平板倒平
4、板平板划线法、稀释涂布平板法平板划线法、稀释涂布平板法(3)菌种保藏：菌种保藏：短期保存：短期保存：上上4保藏，缺点是菌种保藏，缺点是菌种易被污染或产生变异。易被污染或产生变异。长期保存：采用长期保存：采用 20冷冻箱中保藏。冷冻箱中保藏。固体斜面培养基固体斜面培养基甘油管藏法甘油管藏法二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数二、土壤中分解尿素的细菌的分离与计数(1)分离原理：分离原理：土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们能合土壤中细菌之所以能分解尿素，是由于它们能合成成 ，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中，这种物质在把尿素分解成无机物的过程中起起 作用。作用。使用以使用以 为唯一氮源的培养
5、基能促进为唯一氮源的培养基能促进 的的细菌的生长和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生长，细菌的生长和繁殖，并抑制或阻止其他微生物的生长，从而分离出目的菌。从而分离出目的菌。脲酶脲酶催化催化尿素尿素分解尿素分解尿素(2)统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用统计菌落数目：统计样品中的活菌一般用 。(3)实验流程：土壤取样实验流程：土壤取样 微生物的培微生物的培养与观察养与观察细菌的计数。细菌的计数。稀释涂布稀释涂布平板法平板法制备培养基制备培养基三、分解纤维素的微生物的分离三、分解纤维素的微生物的分离1纤维素酶的组成及作用纤维素酶的组成及作用(1)组成：一种组成：一种 酶，它至少包括三种组分，即酶，
6、它至少包括三种组分，即 。(2)作用：作用：复合复合C1酶、酶、Cx酶和葡萄糖苷酶酶和葡萄糖苷酶纤维二糖纤维二糖 葡萄糖葡萄糖2筛选方法筛选方法(1)方法：方法：法，即通过是否产生法，即通过是否产生 来筛选来筛选纤维素分解菌。纤维素分解菌。(2)培养基：是以培养基：是以 为唯一碳源的选择培养基。为唯一碳源的选择培养基。3筛选流程筛选流程土壤取样土壤取样 将样品涂布到将样品涂布到 的培养基上的培养基上挑选挑选 的的菌落。菌落。刚果红染色刚果红染色透明圈透明圈纤维素粉纤维素粉选择培养选择培养梯度稀释梯度稀释鉴别纤维素分解菌鉴别纤维素分解菌产生透明圈产生透明圈考点一考点一微生物的营养与纯化微生物的营
7、养与纯化考情考情解读解读微生物的营养、培养基的类型与功能、培养基微生物的营养、培养基的类型与功能、培养基对微生物的选择作用及培养基的制备和微生物的纯对微生物的选择作用及培养基的制备和微生物的纯化与培养是近年高考中生物技术实践内容的主要题化与培养是近年高考中生物技术实践内容的主要题源，考查频率高，题目灵活，内容丰富。预计源，考查频率高，题目灵活，内容丰富。预计2013年可能会结合微生物的分离与计数予以考查。年可能会结合微生物的分离与计数予以考查。做一题做一题例例1如下所示为培养某种微生物的培养基的配方，请如下所示为培养某种微生物的培养基的配方，请回答：回答：成分成分含量含量NaNO3K2HPO4
8、KClMgSO47H2OFeSO4(CH2O)H2O青霉素青霉素3 g1 g05 g05 g001 g30 g1 000 mL01万单位万单位(1)依物理状态，该培养基属于依物理状态，该培养基属于_培养基；依用途培养基；依用途划分，则属于划分，则属于_培养基。培养基。(2)根据培养基的配方可判断出，该培养基所培养微生物根据培养基的配方可判断出，该培养基所培养微生物的同化作用的类型是的同化作用的类型是_，培养的微生物可能，培养的微生物可能是是_。(3)该培养基中的碳源是该培养基中的碳源是_。不论何种培养基，在。不论何种培养基，在各成分都溶化后分装前，要进行的是各成分都溶化后分装前，要进行的是_和
9、和_；倒平板时，一般需冷却至；倒平板时，一般需冷却至_左右，左右，并且要在并且要在_附近操作。附近操作。(4)若用该培养液培养纤维素分解菌，应除去的物质是若用该培养液培养纤维素分解菌，应除去的物质是_，至少应加入的物质是，至少应加入的物质是_，为检测，为检测纤维素分解菌的存在与否还应加入纤维素分解菌的存在与否还应加入_，形成，形成_色复合物，若产生色复合物，若产生_，则证明有纤，则证明有纤维素分解菌存在。维素分解菌存在。解析解析(1)从培养基成分看，没有琼脂等凝固剂，属于液从培养基成分看，没有琼脂等凝固剂，属于液体培养基；从用途上分析，加入青霉素可以杀死细菌、放体培养基；从用途上分析，加入青霉
10、素可以杀死细菌、放线菌，选择出霉菌、酵母菌等属于选择培养基。线菌，选择出霉菌、酵母菌等属于选择培养基。(2)该生物该生物以培养基中的以培养基中的(CH2O)作碳源，为异养型微生物。作碳源，为异养型微生物。(3)考查微考查微生物培养的基本操作。生物培养的基本操作。(4)培养纤维素分解菌，是以纤维素培养纤维素分解菌，是以纤维素作碳源，故应去除作碳源，故应去除(CH2O)；培养细菌应去除能杀灭细菌的；培养细菌应去除能杀灭细菌的青霉素。可用刚果红与纤维素形成红色复合物，检测纤维青霉素。可用刚果红与纤维素形成红色复合物，检测纤维素分解菌的存在。若存在，菌落周围会形成透明圈。素分解菌的存在。若存在，菌落周
11、围会形成透明圈。答案答案(1)液体选择液体选择(2)异养型酵母菌或霉菌异养型酵母菌或霉菌(3)(CH2O)调整调整pH灭菌灭菌50酒精灯火焰酒精灯火焰(4)青霉素和青霉素和(CH2O)琼脂和纤维素粉刚果红红琼脂和纤维素粉刚果红红透明圈透明圈链一串链一串1微生物的营养微生物的营养营养营养要素要素含义含义作用作用主要来源主要来源碳源碳源凡能提供所凡能提供所需碳元素的需碳元素的物质物质构成生物体细构成生物体细胞的物质和一胞的物质和一些代谢产物，些代谢产物，有些是异养生有些是异养生物的能源物质物的能源物质无机化合物：无机化合物：CO2、NaHCO3；有机化合物：糖类、有机化合物：糖类、脂肪酸、花生饼粉
12、、脂肪酸、花生饼粉、石油等石油等营养营养要素要素含义含义作用作用主要来源主要来源氮源氮源凡能提供凡能提供所需氮元所需氮元素的物质素的物质合成蛋白质、合成蛋白质、核酸以及含氮核酸以及含氮的代谢产物的代谢产物无机化合物：无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐；、铵盐、硝酸盐；有机物化合物：尿素、有机物化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等牛肉膏、蛋白胨等营养营养要素要素含义含义作用作用主要来源主要来源生长生长因子因子生长必不可少生长必不可少的微量有机物的微量有机物酶和核酸的组酶和核酸的组成成分成成分维生素、氨基维生素、氨基酸、碱基等酸、碱基等水和无水和无机盐机盐水不仅是优良溶剂，而且可维水不仅是优良溶剂，
13、而且可维持生物大分子的稳定；无机盐持生物大分子的稳定；无机盐是细胞内成分和调节物质是细胞内成分和调节物质外界摄入外界摄入关键一点关键一点微生物之所以需要补充生长因子，是由微生物之所以需要补充生长因子，是由于其体内缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力于其体内缺乏合成这些物质所需要的酶或合成能力有限，而对那些合成能力足以满足自身需求的微生有限，而对那些合成能力足以满足自身需求的微生物，其培养基中则不需额外补充生长因子。物，其培养基中则不需额外补充生长因子。2培养基的类型培养基的类型划分划分标准标准培养培养基种类基种类特点特点用途用途状态状态液体液体培养基培养基不加凝固剂不加凝固剂工业生产工业生产固
14、体固体培养基培养基加凝固剂，加凝固剂，如琼脂如琼脂微生物分离、微生物分离、鉴定等鉴定等划分划分标准标准培养培养基种类基种类特点特点用途用途用用途途选择选择培养基培养基培养基中加入某培养基中加入某种化学物质，用种化学物质，用来抑制不需要的来抑制不需要的微生物的生长，微生物的生长，促进所需要的微促进所需要的微生物的生长生物的生长培养和分离出特培养和分离出特定微生物定微生物(如分离如分离酵母菌和霉菌，酵母菌和霉菌，可以在培养基中可以在培养基中加入青霉素加入青霉素)划分划分标准标准培养培养基种类基种类特点特点用途用途用用途途鉴别鉴别培养基培养基根据微生物根据微生物的代谢特点，的代谢特点，在培养基中在培
15、养基中加入某种指加入某种指示剂或化学示剂或化学药品药品鉴别不同种类的微生物，鉴别不同种类的微生物，如用伊红如用伊红美蓝培养基美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中鉴别饮用水或乳制品中是否含有大肠杆菌是否含有大肠杆菌(若若有，则菌落呈深紫色并有，则菌落呈深紫色并带有金属光泽带有金属光泽)3平板划线法的注意事项平板划线法的注意事项(1)第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环进行灭菌，第一次划线及每次划线之前都需灼烧接种环进行灭菌，划线操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧目的如下表：划线操作结束仍需灼烧接种环，每次灼烧目的如下表：第一次灼烧第一次灼烧每次划线之前灼烧每次划线之前灼烧划线结束后灼划线结束后灼烧烧目
16、的目的避免接种环上避免接种环上可能存在的微可能存在的微生物污染培养生物污染培养物物杀死上次划线结束杀死上次划线结束后接种环上残留的后接种环上残留的菌种，保证每次划菌种，保证每次划线的菌种都来自上线的菌种都来自上次划线的末端次划线的末端杀死接种环上杀死接种环上残留的菌种，残留的菌种，避免细菌污染避免细菌污染环境和感染操环境和感染操作者作者(2)灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免因温度灼烧接种环之后，要冷却后才能伸入菌液，以免因温度太高杀死菌种。太高杀死菌种。(3)划线时最后一区域不要与第一区域相连。划线时最后一区域不要与第一区域相连。(4)划线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。划
17、线用力要大小适当，防止用力过大将培养基划破。通一类通一类1右图是微生物平板划线示意图。右图是微生物平板划线示意图。划线的顺序为划线的顺序为12345。下列操作。下列操作 方法正确的是方法正确的是()A只需操作前将接种环放在火焰旁灼烧灭菌即可只需操作前将接种环放在火焰旁灼烧灭菌即可B划线操作需在火焰上进行划线操作需在火焰上进行C在在5区域中才可以得到所需菌落区域中才可以得到所需菌落D在在12345区域中画线前后都要对接种环灭菌区域中画线前后都要对接种环灭菌解析：解析：操作的前后都要对接种环进行灭菌。划线操作需操作的前后都要对接种环进行灭菌。划线操作需在火焰旁进行，而不是在火焰上；所有的划线区都有
18、可在火焰旁进行，而不是在火焰上；所有的划线区都有可能得到所需菌落，只是能得到所需菌落，只是5区得到的菌落相对较纯。区得到的菌落相对较纯。答案：答案：D考点二考点二目标微生物的筛选与培养目标微生物的筛选与培养考情考情解读解读 目标微生物的筛选是微生物应用的前提，目标微生物的筛选是微生物应用的前提，相关技术广泛应用于微生物实验室培养及发酵相关技术广泛应用于微生物实验室培养及发酵工业生产实践中，本考点也常作为热点内容呈工业生产实践中，本考点也常作为热点内容呈现在各地高考试卷中，考查点着重于选择培养现在各地高考试卷中，考查点着重于选择培养基的制备、目标微生物的分离流程、对照实验基的制备、目标微生物的分
19、离流程、对照实验的设置等，的设置等，2013年备考应格外关注。年备考应格外关注。做一题做一题例例2从自然菌样筛选较理想生产菌种的一般步骤是：采集从自然菌样筛选较理想生产菌种的一般步骤是：采集菌样菌样富集培养富集培养纯种分离纯种分离性能测定。性能测定。(1)不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是不同微生物的生存环境不同，获得理想微生物的第一步是 从合适的环境中采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯从合适的环境中采集菌样，然后再按一定的方法分离、纯 化。培养嗜盐菌的菌样应从化。培养嗜盐菌的菌样应从 _ 环境中采集。环境中采集。(2)富集培养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境富集培
20、养指创设仅适合待分离微生物旺盛生长的特定环境 条件，使其数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养条件，使其数量大大增加，从而分离出所需微生物的培养 方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择方法。对产耐高温淀粉酶微生物的富集培养应选择 _ 的培养基，并在的培养基，并在 _ 条件下培养。条件下培养。(3)下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后下面两图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图解，请分析接种的具体方法。培养的效果图解，请分析接种的具体方法。获得图获得图A效果的接种方法是效果的接种方法是 _，获得图，获得图B效果效果的接种方法是的接种方法是 _。(4)配制培养基
21、时各种成分在溶化后分装前必须进行配制培养基时各种成分在溶化后分装前必须进行 _，接种前要进行，接种前要进行_，在整个微生物的分，在整个微生物的分离和培养中，一定要注意在离和培养中，一定要注意在 _ 条件下进行。条件下进行。解析解析(1)嗜盐菌就生活在高盐环境中，如海滩等环境。嗜盐菌就生活在高盐环境中，如海滩等环境。(2)耐高温淀粉酶应存在于以淀粉为唯一碳源且在高温环耐高温淀粉酶应存在于以淀粉为唯一碳源且在高温环境中生存的微生物体内。境中生存的微生物体内。(3)从菌落分布的特点可以看出，从菌落分布的特点可以看出，A纯化微生物的接种方法是稀释涂布平板法，纯化微生物的接种方法是稀释涂布平板法，B纯化
22、微生纯化微生物的接种方法是平板划线法。物的接种方法是平板划线法。(4)培养基配制时应先溶化，培养基配制时应先溶化，再调整再调整pH值，然后灭菌。值，然后灭菌。答案答案(1)海滩等高盐海滩等高盐(2)以淀粉为唯一碳源高温以淀粉为唯一碳源高温(3)稀释涂布平板法稀释涂布平板法 平板划线法平板划线法(4)pH调整高压蒸汽灭菌无菌调整高压蒸汽灭菌无菌链一串链一串1几种典型微生物的筛选方法几种典型微生物的筛选方法(1)培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。培养基中加入青霉素可以分离出酵母菌和霉菌。(2)培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。培养基中加入高浓度的食盐可得到金黄色葡萄球菌。(3)
23、培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非培养基中缺乏氮源时，可以分离固氮微生物，因为非固氮微生物不能在此培养基上生存。固氮微生物不能在此培养基上生存。(4)当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有当培养基的某种营养成分为特定化学成分时，也具有分离效果。如当石油是唯一碳源时，可以抑制不能利分离效果。如当石油是唯一碳源时，可以抑制不能利用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生用石油的微生物的生长，使能够利用石油的微生物生存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。存，达到分离能消除石油污染的微生物的目的。(5)改变微生物的培养条件，也可以达到分离微生物的目改变微生物的培养条件，也可
24、以达到分离微生物的目的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的，如将培养基放在高温环境中培养只能得到耐高温的微生物。的微生物。2微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用微生物筛选过程中必要的两种对照培养基及其作用对照组对照组作用作用现象现象结论结论未接种未接种培养基培养基有无杂菌污有无杂菌污染的判断染的判断未接种的培养皿中未接种的培养皿中无菌落生长无菌落生长未被杂未被杂菌污染菌污染接种的接种的牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨培养基培养基选择培养基选择培养基筛选作用的筛选作用的确认确认牛肉膏培养基上的牛肉膏培养基上的菌落数大于选择培菌落数大于选择培养基上的数目养基上的数目选择培选择培养基具养基
25、具有筛选有筛选作用作用关键一点关键一点即使使用了选择培养基，所得到的微生物也即使使用了选择培养基，所得到的微生物也未必全为未必全为“目标微生物目标微生物”，因此，常需对选择培养基中菌落，因此，常需对选择培养基中菌落作进一步鉴定。作进一步鉴定。通一类通一类2下表为培养某种微生物的培养基配方，下列相关叙述下表为培养某种微生物的培养基配方，下列相关叙述错误的是错误的是()成分成分NaNO3K2HPO4KClMgSO47H2OFeSO4(CH2O)H2O青霉青霉素素含量含量3 g1 g0.5 g0.5 g0.01 g30 g1 000 mL0.1万万单位单位A依物理性质划分，该培养基属于液体培养基依物
26、理性质划分，该培养基属于液体培养基B依用途划分，该培养基属于选择培养基依用途划分，该培养基属于选择培养基C培养基中的唯一碳源是培养基中的唯一碳源是(CH2O)，唯，唯 一氮源是一氮源是NaNO3D若用该培养基培养纤维素分解菌，则应除去若用该培养基培养纤维素分解菌，则应除去(CH2O)，再添加纤维素再添加纤维素解析：解析：由于配方中没有琼脂，所以从物理性质上划分为由于配方中没有琼脂，所以从物理性质上划分为液体培养基；由于配方中含有青霉素，对微生物有一定液体培养基；由于配方中含有青霉素，对微生物有一定的筛选作用，所以从用途上划分为选择培养基；由于培的筛选作用，所以从用途上划分为选择培养基；由于培养
27、基中含有青霉素，纤维素分解菌不能生存，除去养基中含有青霉素，纤维素分解菌不能生存，除去(CH2O)外，还应除去青霉素，同时添加纤维素和琼脂。外，还应除去青霉素，同时添加纤维素和琼脂。答案：答案：D3苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在苯酚是工业生产排放的有毒污染物质，自然界中存在着能降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯着能降解苯酚的微生物。某工厂产生的废水中含有苯酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选酚，为了降解废水中的苯酚，研究人员从土壤中筛选获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步获得了只能降解利用苯酚的细菌菌株，筛选的主要步骤如下图所示，为土壤样品。下列相关
28、叙述错误的骤如下图所示，为土壤样品。下列相关叙述错误的是是 ()A图中培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为图中培养目的菌株的选择培养基中应加入苯酚作为碳源碳源B如果要测定中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法如果要测定中活细菌数量，常采用稀释涂布平板法C若图中为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一的碳若图中为对照实验，则其中应以苯酚作为唯一的碳源源D使用平板划线法可以在上获得单菌落使用平板划线法可以在上获得单菌落解析：解析：用苯酚作为选择培养基的特殊碳源，目的菌能够用苯酚作为选择培养基的特殊碳源，目的菌能够存活，而其他菌因没有可利用的碳源而不能生长。测定存活，而其他菌因没有可利用的碳源而不能生长。
29、测定培养液中细菌数目多使用稀释涂布平板法。若为对照培养液中细菌数目多使用稀释涂布平板法。若为对照实验，则应含除苯酚外的其他碳源，以苯酚作为唯实验，则应含除苯酚外的其他碳源，以苯酚作为唯一碳源。使用稀释涂布平板法或平板划线法都可以在一碳源。使用稀释涂布平板法或平板划线法都可以在上获得单菌落。上获得单菌落。答案：答案：C考点三考点三微生物的数量测定微生物的数量测定考情考情解读解读本考点内容在生物技术实践中占有比较重本考点内容在生物技术实践中占有比较重要的地位，有关特定微生物的数量测定广泛应要的地位，有关特定微生物的数量测定广泛应用于食品及水质检测等实践中，具重要的应用用于食品及水质检测等实践中，具
30、重要的应用价值，近年高考常将微生物计数与微生物培养价值，近年高考常将微生物计数与微生物培养及筛选综合命题，故及筛选综合命题，故2013年备考仍需重点关注。年备考仍需重点关注。做一题做一题 例例3急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌和病毒通过消化急性肠胃炎、手足口病分别是由细菌和病毒通过消化道进入人体导致的。因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量道进入人体导致的。因此检验饮用水的细菌含量和病毒含量是有效监控疾病发生的必要措施，请回答下列与检验饮用水是有效监控疾病发生的必要措施，请回答下列与检验饮用水有关的问题：有关的问题：(1)检验大肠杆菌的含量时，通常将水样进行一系列的梯度稀检验大肠杆菌的含量时，通常
31、将水样进行一系列的梯度稀 释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固释，然后将不同稀释度的水样用涂布器分别涂布到琼脂固 体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为体培养基的表面进行培养，记录菌落数量，这种方法称为 _。在下面所示的四种菌。在下面所示的四种菌 落分布图中，不可能是用该方法得到的是落分布图中，不可能是用该方法得到的是_。(2)用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？用该方法统计样本菌落数时是否需要设置对照组？_。为什么？。为什么？_。(3)如分别取如分别取0.1 mL已稀释已稀释103倍的水样分别涂布到三个琼脂倍的水样分别涂布到三个琼脂 固体培养基的表面进行培养
32、，培养基记录到大肠杆菌的菌固体培养基的表面进行培养，培养基记录到大肠杆菌的菌 落数分别为落数分别为55、56、57，则每升原水样中大肠杆菌数为，则每升原水样中大肠杆菌数为 _。(4)已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已知大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，现提供足量的已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断已灭菌的乳糖蛋白胨培养液和具塞试管，应如何判断待检水样中是否含有大肠杆菌？待检水样中是否含有大肠杆菌？_。解析解析纯化大肠杆菌的方法纯化大肠杆菌的方法稀释涂布平板法和平板稀释涂布平板法和平板划线法。删除偏差太大的数据，对剩下的多个培养数据划线法。删除偏差太大的数据，对剩下的多个培
33、养数据进行平均处理就可以得到水样中的大肠杆菌数。大肠杆进行平均处理就可以得到水样中的大肠杆菌数。大肠杆菌能发酵乳糖并产酸产气，通过密封培养，大肠杆菌可菌能发酵乳糖并产酸产气，通过密封培养，大肠杆菌可以进行无氧呼吸产生气体，以气泡的形式释放出来。以进行无氧呼吸产生气体，以气泡的形式释放出来。答案答案(1)稀释涂布平板法稀释涂布平板法D(2)需要因为需要判需要因为需要判断培养基是否被杂菌污染断培养基是否被杂菌污染(培养基灭菌是否合格培养基灭菌是否合格)(3)5.6108(4)通过无菌操作向试管内注入一定量待检通过无菌操作向试管内注入一定量待检水样，再注入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，水样，再
34、注入已灭菌的乳糖蛋白胨培养液将试管充满，塞上塞子，混匀后置于塞上塞子，混匀后置于37恒温箱培养恒温箱培养24 h。若试管内有。若试管内有气泡生成，则说明水样中有大肠杆菌气泡生成，则说明水样中有大肠杆菌链一串链一串微生物的数量测定微生物的数量测定1实验流程实验流程2统计菌落数目的方法统计菌落数目的方法(1)显微镜直接计数法：显微镜直接计数法：原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显原理：利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。微镜下计算一定容积的样品中微生物数量。方法：用计数板计数。方法：用计数板计数。缺点：不能区分死菌与活菌。缺点：不能区分死菌与活菌。(
35、2)间接计数法间接计数法(活菌计数法活菌计数法)：原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌。通过统计平板通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。操作：为了保证结果准确，一般选择菌落数在操作：为了保证结果准确，一般选择菌落数在30300 的平板进行计数。的平板进行计数。计算公式：每克样品中的菌株数计算公式：每克样品中的菌株数(CV)M，其中，其中C代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，代表某一稀释度下平
36、板上生长的平均菌落数，V代表涂布代表涂布平板时所用的稀释液的体积平板时所用的稀释液的体积(mL)，M代表稀释倍数。代表稀释倍数。3操作提示操作提示(1)将待测样品经一系列将待测样品经一系列10倍梯度稀释，然后选择倍梯度稀释，然后选择3个稀个稀释度的菌液，分别取释度的菌液，分别取0.1 mL接种到已制备好的平板接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落数。放在适宜的温度下培养计数菌落数。(2)为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到3个个或或3个以上的平板
37、上，经涂布、培养，计算出菌落平个以上的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平均数。均数。关键一点关键一点统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这统计的菌落往往比活菌的实际数目低。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。因此，统计结果用菌落数而不是活菌数只是一个菌落。因此，统计结果用菌落数而不是活菌数来表示。来表示。通一类通一类4通过实验测定土壤中的细菌数量，下列与此操作有通过实验测定土壤中的细菌数量，下列与此操作有关的叙述中，不正确的是关的叙述中，不正确的是()A用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养
38、基，经高温、高压灭菌后倒平板高压灭菌后倒平板B取稀释倍数分别为取稀释倍数分别为104、105和和106倍的土壤稀释倍的土壤稀释液各液各0.1 mL，分别涂布于各组平板上，分别涂布于各组平板上C将培养皿倒置，将培养皿倒置，37恒温培养恒温培养1224小时小时D选择菌落数在选择菌落数在300个以上的培养皿进行计数个以上的培养皿进行计数.解析：解析：检测土壤中细菌总数，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白检测土壤中细菌总数，用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，取胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板，取104、105、106倍的土壤稀释液各倍的土壤稀释液各0.1 mL，分别涂布于各组平板上，分别
39、涂布于各组平板上，将平板倒置，将平板倒置，37恒温培养恒温培养2448小时，选择菌落数在小时，选择菌落数在30300的平板进行计数。的平板进行计数。答案：答案：D5在做分离分解尿素的细菌实验时，某同学从对应在做分离分解尿素的细菌实验时，某同学从对应106倍稀释的培养基中筛选出大约倍稀释的培养基中筛选出大约150个菌落，而其他同个菌落，而其他同学只选择出大约学只选择出大约50个菌落。某同学的结果产生原因个菌落。某同学的结果产生原因可能有可能有 ()土样不同土样不同培养基污染培养基污染操作失误操作失误没有没有设置对照设置对照ABC D解析：解析：某同学比其他同学的实验结果数据大许多，可能某同学比其他同学的实验结果数据大许多，可能由于选取的土样不同、培养基灭菌不彻底或操作过程中由于选取的土样不同、培养基灭菌不彻底或操作过程中杂菌污染，也可能是操作失误，如配制的培养基中混入杂菌污染，也可能是操作失误，如配制的培养基中混入其他含氮物质等。其他含氮物质等。答案：答案：A
