1、专题2 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养,栏目链接,科学家在南极数百英尺的冰层下面，在没有光和氧气的环境中，发现了一种微生物。据推测，它们已经生存了150万年之久。基因检测显示，它们类似今天海洋环境中的微生物。科学家认为，这些微生物曾经生活在海洋里，150万200万年前海洋被冰川截断形成像大池塘的水面，后来又被冰川覆盖。从此，这些微生物与世隔绝了。,栏目链接,请思考： 1.微生物是如何获得能量维持生存的？ 2.它们还需要哪些营养物质？,栏目链接,栏目链接,1概念 人们按照微生物对_的不同需求，配制出供其_的营养基质。 2种类 按照培养基的_划分为_培养基和_培养基。,一、培养基,
2、营养物质,生长繁殖,物理状态,液体,固体,栏目链接,3营养要素 各种培养基一般都含有水、_、_、_，此外还要满足微生物生长对_、_以及_的要求。,碳源,氮源,无机盐,pH,特殊营养物质,氧气,栏目链接,二、无菌技术,1获得纯净培养物的关键是防止_的入侵，具体操作如下： (1)对实验操作的_、操作者的衣着和手进行_和_。 (2)将用于微生物培养的_、_和_等器具进行灭菌。,外来杂菌,空间,清洁,消毒,器皿,接种用具,培养基,栏目链接,(3)为避免周围环境中_的污染，实验操作应在_进行。 (4)实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与_相接触。,微生物,酒精灯火焰附近,周围的物品,栏目链接,2消毒
3、和灭菌 (1)消毒是指使用较为_的物理或化学方法仅杀死物体表面或_微生物(不包括芽孢和孢子)。常用的方法有_消毒法和_消毒法。 (2)灭菌是指使用_的理化因素杀死物体内外_的微生物(包括芽孢和孢子)。常见的方法有：_灭菌、_灭菌、_灭菌。,温和,内部一部分,煮沸,化学药剂,强烈,所有,灼烧,干热,高压蒸汽,栏目链接,三、大肠杆菌的纯化培养,牛肉膏蛋白胨,称量,灭菌,栏目链接,2纯化大肠杆菌 (1)纯化培养方法：在牛肉膏蛋白胨培养基上纯化大肠杆菌，最常用的方法有_法和_法。 (2)纯化培养的原理：想方设法在培养基上得到由一个细胞繁殖而来的肉眼可见的_，即获得较纯的菌种。 (3)平板划线法：通过_
4、在琼脂固体培养基表面连续_的操作，将聚集的菌种逐步_分散到培养基的表面。其具体操作是：,平板划线,稀释涂布平板,菌落,接种环,划线,稀释,栏目链接,将_放在火焰上燃烧，直到接种环烧红。 在火焰旁冷却_，并打开棉塞。 将试管口通过_。 将已冷却的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液。 将试管口通过火焰，并塞上棉塞。 左手将皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三到五条_线，盖上皿盖。注意不要划破培养基。,接种环,接种环,火焰,平行,栏目链接,灼烧_，待其冷却后，从第一区域划线的末端开始往第二区域内划线。重复以上操作，在三、四、五区域内划线。注意不要将最后一区的划线与第一区相连。 将
5、平板_放入培养箱中培养。 (4)稀释涂布平板法：将菌液进行一系列的梯度_，然后将不同稀释度的菌液分别_到琼脂固体培养基的表面，进行培养。其操作步骤是： 系列稀释(梯度稀释)操作：,接种环,倒置,稀释,涂布,栏目链接,栏目链接,酒精,表面,酒精,频繁使用的菌种,需长期保存的菌种,栏目链接,栏目链接,一、制备培养基,1配制原则 (1)目的明确：不同微生物需求不同，根据培养目的进行配制。 (2)营养要协调：营养物质的浓度和比例要适宜。 (3)pH要适宜：为维持pH的相对恒定，可在培养基中加入缓冲剂，常用磷酸氢二钾或磷酸二氢钾。,栏目链接,2培养基的营养成分及功能,栏目链接,栏目链接,对异养微生物来说
6、，含C、H、O、N的化合物既是碳源又是氮源、能源。 一些天然营养物质，如酵母膏、蛋白胨、动植物组织提取液等可为微生物提供生长因子。 不同微生物对营养的需求不同，因此，首先根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。 营养物质过少不能满足微生物的营养需要，过多对微生物的生长有抑制作用。,特 别 提 醒,栏目链接,例1下列关于配制培养基的有关叙述中，正确的是( ) A制作固体培养基必须加入琼脂 B发酵工程中一般用液体培养基 C氮源主要是为微生物提供能量 D牛肉膏主要为微生物提供氮元素,栏目链接,解析：制作固体培养基时必须加入凝固剂。琼脂是常用的凝固剂，但不是唯一的凝固剂，例如明胶也可作为凝固剂；
7、发酵工程一般都是用液体培养基，原因是液体培养基便于调节pH、温度、溶氧等，而且液体培养基还能有利于微生物充分利用营养物质；氮源主要是作为微生物合成蛋白质和核酸的原料；牛肉膏主要为微生物提供碳源、磷酸盐和维生素。 答案：B,栏目链接,变式 训练,1下列制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是( ) A操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌 B将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯 C将培养基冷却至50 左右时进行倒平板 D将平板冷却凝固约510 min后将平板倒过来放置,栏目链接,变式 训练,解析：制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，顺序不能颠倒。牛肉膏容易吸潮，
8、所以当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻棒取出称量纸。将培养基冷却至50 ，用手触摸锥形瓶感觉刚刚不烫手时倒平板，平板冷却后还需倒置。 答案：A,栏目链接,二、消毒与灭菌的比较,栏目链接,酒精消毒时，70%的酒精杀菌效果最好。原因是浓度过高，菌体表面蛋白质变性过快从而凝固成一层保护膜，乙醇分子不能渗入其中；浓度过低，杀菌能力减弱,特 别 提 醒,栏目链接,例2 细菌培养过程中分别采用了高压蒸汽、酒精、火焰灼烧等几种不同的处理方法，这些方法依次用于杀灭哪些部位的杂菌( ) A接种针、手、培养基 B高压锅、手、接种针 C培养基、手、接种针 D接种针、手、高压锅,栏目链接,解析：高压蒸汽灭菌锅是灭菌的
9、一个设备，通常用于培养基的灭菌。用酒精擦拭双手是消毒的一种方法。火焰灼烧，可以迅速彻底地灭菌，适用于微生物的接种工具，如接种环、接种针。 答案：C,栏目链接,2下列操作与消毒和灭菌无关的是( ) A接种前用火焰灼烧接种环 B接种前用酒精擦拭双手 C将平板倒置，放入培养箱中培养 D接种在酒精灯的火焰旁完成,变 式 训 练,栏目链接,解析：要建立“有菌观念”。接种用具、器皿、空气中都充满了微生物，都有污染的可能，必须严格地消毒、灭菌。A、B、D都是实验操作过程中常用的消毒和灭菌方法。将平板倒置，放入培养箱中培养与消毒、灭菌无关。 答案：C,变 式 训 练,栏目链接,三、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基及
10、纯化大肠杆菌,1制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程,栏目链接,栏目链接,2纯化大肠杆菌操作过程中的注意事项 (1)平板划线法中几次灼烧接种环的目的：,栏目链接,(2)稀释涂布平板法操作比较复杂，且各个细节均需保证无菌操作，应特别注意： 酒精灯与培养皿的距离要适宜。 吸管头不要接触其他任何物体。 吸管要在酒精灯火焰周围使用。 涂布器末端浸在盛有70%酒精的烧杯中，取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰上引燃，注意防火。,栏目链接,在稀释涂布平板操作中，每个步骤都要注意无菌操作，以防培养基被污染，影响实验效果。 每一稀释倍数菌液都至少要涂布三个平板，作为实验重复，
11、求平均值，若其中有菌落数与其他实验差距悬殊者，应舍弃该实验数据，不进行统计、计算。 平板冷凝后，皿盖上会凝结成水珠。凝固后的培养基表面的温度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。,特 别 提 醒,栏目链接,例3 关于平板划线操作的叙述正确的是( ) A使用已灭菌的接种环、培养皿，在操作过程中不需要再灭菌 B打开含菌种的试管，需通过火焰灭菌，取出菌种后，需马上塞上棉塞 C将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线即可 D最后将平板倒置，放在培养箱中,栏目链接,解析：使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程仍要灭菌；打开含菌种的试管需要通过火焰灭菌，取出菌种后含菌种的试管需要通过火焰灭菌后再塞好棉塞；将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线后盖上皿盖；最后应将平板倒置，放入培养箱中培养。 答案：D,栏目链接,3稀释涂布平板法是微生物培养中的一种常用的接种方法。下列相关叙述错误的是( ) A操作中需要将菌液进行一系列的浓度梯度稀释 B需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面 C不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个的菌落 D操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理,变 式 训 练,C,栏目链接,
