1、2022-12-101人员卫生和微生物基础知识培训2022-12-102一、第二十九条所有人员所有人员都应当接受都应当接受卫生要求卫生要求的培的培训，企业应当建立人员卫生操作规训，企业应当建立人员卫生操作规程，最大限度地降低人员对药品生程，最大限度地降低人员对药品生产造成污染的风险。产造成污染的风险。药品生产质量管理规范2010年版2022-12-103一、第二十条 凡在洁净区工作的人员凡在洁净区工作的人员（包括（包括清洁工和清洁工和设备维修工设备维修工）应当定期培训，使无菌药品的）应当定期培训，使无菌药品的操作符合要求。培训的内容应当包括操作符合要求。培训的内容应当包括卫生和卫生和微生物方面
2、的基础知识微生物方面的基础知识。未受培训的外部人。未受培训的外部人员（如外部施工人员或维修人员）在生产期员（如外部施工人员或维修人员）在生产期间需进入洁净区时，应当对他们进行特别详间需进入洁净区时，应当对他们进行特别详细的指导和监督细的指导和监督药品生产质量管理规范2010年版 无菌附录2022-12-104主要内容一、人员卫生二、微生物基础知识2022-12-105法规要求法规要求 第三十条人员卫生操作规程应当包括与第三十条人员卫生操作规程应当包括与健康健康、卫生习惯卫生习惯及及人员着装人员着装相关的内容。相关的内容。生产区和质量控制区的人员应当正确理解生产区和质量控制区的人员应当正确理解相
3、关的人员卫生操作规程。企业应当采取相关的人员卫生操作规程。企业应当采取措施确保人员卫生操作规程的执行。措施确保人员卫生操作规程的执行。一、人员卫生2022-12-106法规要求法规要求 第三十一条企业应当对人员健康进行管第三十一条企业应当对人员健康进行管理，并理，并建立健康档案建立健康档案。直接接触药品的生。直接接触药品的生产人员上岗前应当接受健康检查，以后产人员上岗前应当接受健康检查，以后每每年至少进行一次年至少进行一次健康检查健康检查 一、人员卫生2022-12-107法规要求法规要求 第三十二条企业应当采取适当措第三十二条企业应当采取适当措施，避免体表有施，避免体表有伤口伤口、患有传染病
4、患有传染病或或其他可能污染药品疾病其他可能污染药品疾病的人员从的人员从事直接接触事直接接触药品的生产药品的生产。一、人员卫生2022-12-108法规要求法规要求 体表伤口体表伤口患有传染病：患有传染病：呼吸道传染病呼吸道传染病：流行性感冒，：流行性感冒，肺结核肺结核，腮，腮腺炎，麻疹，百日咳等腺炎，麻疹，百日咳等（空气传播）（空气传播）体表传染病体表传染病：血吸虫病血吸虫病，沙眼，沙眼，狂犬病狂犬病，破伤风破伤风，淋病淋病等等（接触传播）（接触传播）一、人员卫生2022-12-109法规要求法规要求 其他可能污染药品疾病：其他可能污染药品疾病：皮癣、真菌感染的皮肤病等皮癣、真菌感染的皮肤病等
5、一、人员卫生2022-12-1010法规要求法规要求 其他可能污染药品疾病：其他可能污染药品疾病：皮癣、真菌感染的皮肤病等皮癣、真菌感染的皮肤病等一、人员卫生2022-12-1011法规要求法规要求 第三十三条第三十三条参观人员参观人员和未经培未经培训的人员训的人员不得进入生产区生产区和质量控制区质量控制区，特殊情况确需进入的，应当事先对个人卫生、更衣等事项进行指导。一、人员卫生2022-12-1012法规要求法规要求 第三十五条进入洁净生产区的人第三十五条进入洁净生产区的人员员不得化妆和佩带饰物不得化妆和佩带饰物。一、人员卫生2022-12-1013摘下个人饰物：耳环、手表、戒摘下个人饰物：
6、耳环、手表、戒指、项链等指、项链等 不得留长指甲不得留长指甲提醒：提醒：进入洁净区人员不得化妆，进入洁净区人员不得化妆，否则否则需清洗需清洗去除化妆品去除化妆品2022-12-1014一、人员卫生人体是一个永不休止的污染媒介。人是药厂中最不清洁的成份，是最大的污染源。我体检过了,没问题!2022-12-1015 人类是第一的人类是第一的(主要主要)污染源。污染源。人们每人们每24小时就会脱落皮肤表面上最外层小时就会脱落皮肤表面上最外层的皮细胞。这等于每天高达的皮细胞。这等于每天高达109（1000，000，000）=10亿亿个细胞的数量。个细胞的数量。2022-12-1016人带来的污染来源人
7、带来的污染来源 人的头发和皮肤人的头发和皮肤 液滴液滴 衣着衣着 化妆品和珠宝手饰化妆品和珠宝手饰 人的操作人的操作（生产过程中人员不当的操作所引（生产过程中人员不当的操作所引起的起的混杂和误差混杂和误差）2022-12-1017人是最大的污染源人体内外表面广泛存在微生物人体携带的微生物根据卫生情况不同因人而异2022-12-1018未洗的手 清水漂洗的手 2022-12-1019洗净的手 洗净的手(用皂液)(用消毒剂)2022-12-1020难以觉察的难以觉察的口腔微滴（说话、口腔微滴（说话、喷嚏）喷嚏）人是最大的污染源2022-12-1021坐着不动能产生10万个颗粒走能产生500万个颗粒
8、跑能产生1500万个颗粒人是最大的污染源2022-12-1022人是第一的人是第一的(主要主要)污染源。污染源。怎么办？怎么办？2022-12-1023根据污染源查找解决方法根据污染源查找解决方法2022-12-1024工作服及其质量应当工作服及其质量应当与与生产操作的要求及操生产操作的要求及操作区的作区的洁净度级别相适应洁净度级别相适应，其式样和穿着方，其式样和穿着方式应当式应当能能够满足够满足-保护产品保护产品和和人员人员的要求。的要求。法规要求：附录第二十四条法规要求：附录第二十四条2022-12-1025人是第一的人是第一的(主要主要)污染源。污染源。清清 洗、包洗、包 裹裹 根据不同
9、洁净区要求，根据不同洁净区要求，穿戴不同衣服穿戴不同衣服2022-12-1026人是第一的人是第一的(主要主要)污染源。污染源。包裹物件包括：包裹物件包括：帽子、口罩、眼罩、帽子、口罩、眼罩、无菌服、鞋子无菌服、鞋子/鞋套、鞋套、手套手套2022-12-1027解决方法解决方法 人的头发和皮肤人的头发和皮肤 清洗、包裹清洗、包裹2022-12-1028第一步：第一步：用清水润用清水润湿双手及湿双手及手腕以上手腕以上10厘米厘米洗洗 手手2022-12-1029第二步：第二步：均匀涂均匀涂 上洗手上洗手 液液洗洗 手手2022-12-1030第三步：第三步：掌心相对，掌心相对，手手 指并拢指并拢
10、相互摩擦相互摩擦 洗洗 手手2022-12-1031第四步：第四步：手心对手手心对手背沿指缝背沿指缝相互摩擦相互摩擦 交换进行交换进行 洗洗 手手2022-12-1032第五步：第五步：掌心相掌心相对，双手对，双手交叉，沿交叉，沿指缝相互指缝相互摩擦摩擦 洗洗 手手2022-12-1033第六步：第六步：弯曲各手弯曲各手指关节，指关节，在另一手在另一手掌旋转搓掌旋转搓擦，交换擦，交换进行进行 洗洗 手手2022-12-1034第七步：第七步：一手握另一手握另一手大拇一手大拇指旋转搓指旋转搓擦，交换擦，交换进行进行 洗洗 手手2022-12-1035第八步：第八步：搓洗手搓洗手腕，交换腕，交换进
11、行。进行。洗洗 手手2022-12-1036第九步：第九步：将手及手腕用水冲洗干净，最后才将手及手腕用水冲洗干净，最后才可以用干净的手将干净的水龙头关可以用干净的手将干净的水龙头关掉。掉。洗洗 手手2022-12-1037第十步：第十步：然后在烘手器然后在烘手器下吹干下吹干洗洗 手手2022-12-1038洗手手的细菌对照实验2022-12-1039未洗的手 漂洗的手 (只用清水)2022-12-1040洗净的手 洗净的手(用皂液)(用消毒剂)2022-12-1041从上到下从上到下需要将头发、胡须等相关部位遮盖、需要将头发、胡须等相关部位遮盖、包裹。穿上合适的鞋子和包裹。穿上合适的鞋子和/或
12、鞋套。或鞋套。确保包裹效果。确保包裹效果。避免带入洁净区外避免带入洁净区外的污染物的污染物更洁净衣更洁净衣2022-12-1042万级更衣：万级更衣：连体服须将鞋套套好，连体服须将鞋套套好，戴上戴上手套手套，手套将袖口包裹，手套将袖口包裹更洁净衣更洁净衣2022-12-1043法规要求：附录第二十四条法规要求：附录第二十四条正确穿戴洁净服，必须包盖全部头发、胡须及脚部，并能阻留人体脱落物；口罩要罩住口鼻；洁净鞋应能遮盖住全脚。并定期按规定清洗。离开洁净室，必须脱掉洁净服装。2022-12-1044更衣头发应完全包在帽子内2022-12-1045洁净区更衣不能配戴手表、首饰2022-12-104
13、6更衣鞋套不能有破损2022-12-1047定时或在任何关键操作前，应消毒手套2022-12-1048填写批记录后，手套应消毒2022-12-1049主要内容一、人员卫生二、微生物基础知识2022-12-1050微生物的危害微生物中也有一部分能引起人及动、植物发生病害发生病害，这些具有致病性的微生物，称为病原微生物病原微生物。从药品生产的卫生学而言，微生物对药品的原料、生产环境和成品的污污染染是造成生产失败、可以导致产品腐败变质、成品不合格的重要因素不合格的重要因素。2022-12-1051微生物的危害2022-12-1052微生物的危害2022-12-1053 在药品生产过程中，根据GMP中
14、洁净度级别要求以及产品质量标准要求，对物料、产品、生产环境需进行控制的污染（有害）微生物主要为 。药品生产需控制的微生物2022-12-1054微生物五大共性微生物五大共性体积小，面积大；吸收多，转化快；生长旺，繁殖快；适应强，易变异；分布广，种类多；2022-12-1055微生物的概念 是所有形体微小，单细胞或个体结构较为简单的多细胞，甚至没有细胞结构的低等生物的通称。肉眼不能直接观察到微生物，必须经光镜或电镜放大几百倍，乃至几万倍方能看到。2022-12-1056微生物的分类*微生物类群十分庞杂，主要包括细细菌菌、放线菌放线菌、真菌（霉菌、酵母真菌（霉菌、酵母菌）、菌）、立克次体、螺旋体、
15、枝原体、衣原体与病毒病毒等，还包括显微藻类和原生动物。2022-12-1057几种微生物的比较2022-12-1058细菌的大小图 2022-12-1059细菌的繁殖(1)(1)充足的营养物质充足的营养物质 （碳源、氮源、无机盐、水）(2)(2)适宜的酸碱度适宜的酸碱度(3)(3)合适的温度合适的温度(4)(4)必要的气体环境（必要的气体环境（COCO2 2 和氧气和氧气）u 生长繁殖的条件 2022-12-1060繁殖最适条件对比2022-12-1061微生物的分类*按细胞结构的有无，可分为两大类群非细胞型微生物（不具细胞结构）无细胞结构，无产生能量的酶系统，由单一核酸（DNA/RNA）和蛋
16、白质衣壳组成，必须在活细胞内增殖。如：病毒、噬菌体、类病毒和朊病毒2022-12-1062烈性噬菌体生活周期概要2022-12-1063埃博拉病毒 virus-ebola噬菌体2022-12-1064禽流感病毒2022-12-1065流感病毒virus-influenza2022-12-1066微生物的分类细胞型微生物l原核细胞型：单细胞生物，细胞核分化程度低，只有DNA盘绕而成的拟核，无核仁和核膜。如：细菌、放线菌、螺旋体、立克次体、衣原体、枝原体等2022-12-1067细菌的形态2022-12-1068大肠埃希菌Escherichia coli 金黄色葡萄球菌Staphylococcus
17、 aureus 2022-12-1069沙门菌 Salmonella铜绿假单孢菌 Pseudomonas aeruginosa2022-12-1070枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis生孢梭菌Clostridium 2022-12-1071放 线 菌2022-12-1072细菌的繁殖*二分裂的无性繁殖（即裂殖，通过细胞分裂的方式繁殖）*一般细菌约2030分钟繁殖一代 u 细菌的繁殖方式 2022-12-1073=细菌细胞分裂的电镜超薄切片图杆菌二分裂过程模式图杆菌二分裂过程模式图2022-12-1074细菌的繁殖速度细菌一般每20-30分钟即可分裂一次2022-12-1075勾端
18、螺旋体2022-12-1076立克次体（rickettsiae）一种微小的寄生的细菌。右图是动物的淋巴细胞，红色的是寄生的立克次体。2022-12-1077衣原体 姬姆萨染色，油镜10*100，见到一个大单核细胞，胞浆内有球形和椭圆形的包含体衣原体。2022-12-1078枝原体扫描电镜图片枝原体枝原体（mycoplasma）以前被认为是最小的能独立存活的原核生物，以前也被认为是地球上迄今为止被发现的最小的细胞生物。全世界90%的猪体内寄生着枝原体。2022-12-1079微生物的分类细胞型微生物l真核细胞型真核细胞型：细胞核的分化程度高，有核膜、核仁和染色体有核膜、核仁和染色体，能进行有丝分
19、裂。如：真菌（酵母菌、念珠菌、霉菌）、藻类等。2022-12-1080真菌单细胞：呈圆形或卵圆形。如酵母菌、白色念珠菌。多细胞：由菌丝和孢子组成，并交织成团，称丝状菌或霉菌。结构复杂，个体较大的，如蘑菇。2022-12-1081真菌：酵母菌形态：通常有球状、卵圆状、椭圆状、柱状和香肠状等。结构：2022-12-1082酵母菌2022-12-1083酵母菌繁殖方式 无性繁殖 裂殖 有性繁殖产生子囊孢子 2022-12-1084白色念珠菌2022-12-1085霉菌 Mold 是一些丝状真菌的通称，其菌体由分枝或不分枝的菌丝构成，许多菌丝交织成团。大小：菌丝直径约210m，比一般的杆菌及放线菌菌丝
20、约宽几到几十倍。2022-12-1086黑曲霉可引起烧伤病人皮肤感染或真菌性肺部感染2022-12-1087青霉菌及其菌落2022-12-1088霉菌繁殖方式无性繁殖菌丝也可延伸、分枝而生长。有性繁殖有性孢子繁殖 （不常见）2022-12-1089霉菌繁殖方式2022-12-1090因为孢子繁殖孢子繁殖是霉菌的主要繁殖方式，孢子数量大，具一定抗性，繁殖能力极强繁殖能力极强,一条菌丝可产生很多个孢子，孢子又可生长发育为菌丝，所以洁净室一旦发生霉菌污染，必须立即采取措施，否则扩散越广越难控制。真菌对热的抵抗力不强，一般加热加热6060701701小时小时即被杀死，对干燥、日光、紫外线和一些化学消毒
21、剂有抵抗力，但对对2.52.5碘酒、碘酒、1010甲醛、过氧甲醛、过氧乙酸则较敏感。乙酸则较敏感。2022-12-1091芽孢某些细菌到一定的生长阶段，在细胞内形成一个圆形、椭圆形或圆柱形的、对不良环境条件具较强抗性的休眠体，称为芽孢。能形成芽孢的细菌均为 菌。2022-12-1092芽孢在条件适宜时，芽孢可形成新的菌体。一个细菌只形成一个芽孢，一个芽孢也只能形成一个菌体。芽孢的形成不是细菌的繁殖方式，而是营养缺乏的一种反应，是细菌的休眠状态是细菌的休眠状态。与芽孢相比，未形成芽孢而具有繁殖能力的菌体称为繁殖体。2022-12-1093芽孢的特征含水量低（40%）不易着色有多层厚而致密的膜结构
22、（壁）含有2,6-吡啶二羧酸（DPA）及耐热性很强的酶2022-12-1094微生物及无菌知识培训一、前言我们所生活的环境中，到处都存在着大量的微生物。在一般空气中，微生物达8003500个/m3，在土壤中达1500108个/g，在严重污染的水中可达107个/ml。（饮用水要求细菌总数100个/ml，大肠杆菌3个/ml。经水塔或贮水池贮存后，短期内可繁殖至105106个/ml。）人的头皮上有140万个/cm2，两手上约有440万个，1g指甲污垢有38亿个，1g粪便可达101000亿个。可以说微生物是无处不在，无处不有。许多以前被人们认为是极端（高温、高压、强酸、强碱、低温等）甚至是致死的环境，
23、现在已发现生活着各种类型的微生物（称为极端微 2022-12-1095 生物）。事实说明，微生物有特别顽强的生存、繁殖和变异能力来适应环境。微生物种类繁多，有的对人有益，有的有害，有的无益也无害。但在药品生产过程中，不可能对环境中的各种微生物加以区别对待，为保证药品的安全有效，需要对其进行控制。空气中的微生物多数附着在灰尘上，或以芽孢形式悬浮于空气中，1m以下者处于悬浮状态，10m以上者会逐渐沉下来而形成菌尘。所以也要对尘粒进行控制。大量临床资料表明，注射剂（尤其是静脉注射剂）如污染了712m的尘粒，可导致热原反应、肺动脉炎、微血栓或异物肉芽肿等，严重的还会致人死命。而如果污染了细菌，轻则局部
24、红肿化脓，重则引起全身细菌性感 2022-12-1096染。因此，对微生物和尘粒进行更加严格的控制对于针剂生产洁净室非常重要。人是洁净室最大的污染源，占90%左右。一般男性每人每分钟向周围排放1000个以上的含菌粒子，女性为750个以上。穿无菌服时，静止时的发菌量为10300个/min，一般活动时发菌量为1501000个/min，行走时发菌量为9002500个/min。咳嗽一次发菌量为70700个/min，喷嚏一次为400060000个/min。所以在洁净室中，人的数量和活动应有特别严格的限制。二微生物简介2022-12-1097微生物是广泛存在于自然界的一群体形微小（直径小于1mm）、结构简
25、单、肉眼看不见，必须藉助光学或电子显微镜放大数百至数万倍才能观察到的生物。需要说明的是，微生物是一个比较笼统的概念，界线有时非常模糊。如单细胞藻类和一些原生动物也应算是微生物，但通常它们并不放在微生物中进行研究。微生物具有以下特点：体积小，面积大；吸收多，转化快（2000倍体重/h）；生长旺，繁殖快（20min分裂一次）；易变异，适应强；分布广，种类多（10万种以上）。微生物按其结构、化学组成及生活习性等差异可分成三大类：1真核细胞型细胞核的分化程度较高，有核膜、核仁和染色体；胞质内有完整的细胞 2022-12-1098器（如内质网、核糖体及线粒体等）。真菌属于此类型微生物。2原核细胞型细胞核
26、分化程度低，仅有原始核质，没有核膜与核仁；细胞器不很完善。这类微生物种类众多，有细菌、支原体、衣原体、立克次体、螺旋体和放线菌。3非细胞型没有典型的细胞结构，亦无产生能量的酶系统，只能在活细胞内生长繁殖。体积微小，能通过除菌滤器。病毒属于此类型微生物。微生物在自然界中的分布极为广泛，空气、土壤、江河、湖泊、海洋等都有数量不等、种类不一的微生物存在。在人类、动物和植物的体表及其与外界相通的腔道中也有多种微生物存在。2022-12-1099绝大多数微生物对人类和动、植物的生存是有益而必需的。自然界中氮、碳、硫等多种元素循环靠微生物的代谢活动来进行。例如空气中的大量氮气只有依靠微生物的作用才能被植物
27、吸收，土壤中的微生物能将动、植物蛋白质转化为无机含氮化合物，以供植物生长的需要，而植物又为人类和动物所利用。因此，没有微生物，植物就不能新陈代谢，而人类和动物也将无法生存。另一方面，由极少数微生物引起的传染病发病快、死亡率高、传播迅速、传播范围广，严重危害着人民健康。三微生物的形态结构2022-12-101001细菌（原核单细胞生物）细菌按形状可分为：球菌（0.52m）、杆菌（长15m，宽0.31m）和螺形菌（大小与杆菌相似）。按革兰氏染色法染色的不同，分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。革兰氏阳性菌的细胞壁表面含较多的磷壁酸，会产生外毒素，如金黄色葡萄球菌；革兰氏阴性菌的细胞壁表面多含脂蛋白和脂
28、多糖，会产生内毒素（即热原），如大肠杆菌。细菌一般有细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核，有的还有荚膜、鞭毛、菌毛和芽胞等特殊结构。细菌一般为无性繁殖，以二分法繁殖，几十分钟或12小时分裂一次。2022-12-10101资料：关于芽孢在温度逐渐降低或营养缺乏时，芽胞杆菌属（如炭疽杆菌）及梭状芽胞杆菌属（如破伤风杆菌）能在菌体内形成一个折光性很强的不易着色小体，称为芽胞。芽胞是处于休眠状态的细菌，并非细菌的繁殖体，当环境适宜时，可恢复生长繁殖。芽胞在自然界分布广泛，要注意防止污染。芽胞的抵抗力强，对热力、干燥、辐射、化学消毒剂等理化因素均有强大的抵抗力，用一般的方法不易将其杀死。有的芽胞可耐100沸水
29、煮沸数小时。杀灭芽胞最可靠的方法是高压蒸汽灭菌。当进行消毒灭菌时往往以芽胞是否被杀死作为判断灭菌效果的指标。2霉菌（丝状真菌的通称，真核多细胞生物）2022-12-10102霉菌是真菌的一部分。在培养基上长成绒毛状或棉絮状的菌丝体的真菌统称为霉菌。霉菌细胞呈狭长的管状，称为菌丝。菌丝直径比细菌、放线菌大，约210m。菌丝分枝连接，交错集合在一起的总体称为菌丝体。霉菌大多数是多细胞微生物，菌丝细胞由细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核和各种细胞器组成。细胞壁很薄，往往在表面产生色素，使菌落出现各种颜色。霉菌靠孢子繁殖，有无性繁殖和有性繁殖两种方式，以无性繁殖为主。有些真菌可用酿酒造酱，或用于发酵生产柠
30、檬酸、葡萄糖酸、酶、抗生素（如青霉素、头孢菌素）；少数真菌能引起各种真菌病。真菌产生的真菌毒素（如黄曲霉素）有毒。2022-12-101033酵母菌（真核单细胞生物，属真菌）酵母菌以单细胞存在，呈圆形、卵圆形和香肠形，比细菌大，细胞长530m，宽15m。细胞结构有细胞壁、细胞膜、细胞质、细胞核和各种细胞器等。酵母菌的增殖分无性繁殖和有性繁殖两个阶段，有三种方式：芽殖、裂殖、孢子生殖。酵母菌是重要的工业微生物，用于酿酒，生产单细胞蛋白、B族维生素、核酸、辅酶A、细胞色素C等。一般对人体无害。4放线菌（原核单细胞生物）放线菌有生长发育良好的菌丝体，呈分枝状，菌丝宽为0.21.2m，革兰氏阳性。其内
31、部构造与细菌相似，无完整的细胞核。菌落常呈幅射状，因此称放线菌。2022-12-10104繁殖方式为无性孢子繁殖。最适pH6.77.5，温度2530。放线菌可用于生产抗生素、维生素和酶类，少数可引起人畜放线菌病。5病毒病毒是一类体积十分微小，结构简单，只含一种核酸（DNA或RNA），没有产生能量的酶系统，只能在活细胞内以复制方式增殖的非细胞型微生物。病毒在自然界分布非常广泛，在所有其它生物中都有病毒寄居。病毒是最常见的致病微生物，人类传染病中大约75%是由病毒引起的。病毒体主要由核酸和蛋白质组成。病毒体积微小，最大直径300nm（如牛痘病毒），最小直径20nm（如口蹄疫病毒），绝大多数在 20
32、22-12-10105150nm以下，能通过细菌滤器，用普通光学显微镜看不见，必须用电子显微镜放大数千至数万倍才能看见。形态多呈球形，少数为杆状或砖形。噬菌体（细菌病毒）有呈蝌蚪状的。朊病毒于1982年发现，它很特殊，与一般病毒不同，是一种异常蛋白质，不含有核酸。与疯牛病（牛海绵状脑病）及人克雅氏病关系密切。其复制方式不明。四微生物的营养1水分：水占细胞浆的70%90%，是细胞的重要组成成分。较普遍的观点认为：只有 2022-12-10106在含水的环境中微生物才能存活。但也有人发现在无水碳氢化合物中微生物可长期存活。2碳源：碳源是构成细胞的重要物质。有些微生物的碳源必须来自有机碳化合物如糖、
33、蛋白质、脂肪、有机酸等（同时利用其化学能），属异养型；有些微生物不需有机碳化合物，以CO2为碳源，属自养型（分为光能自养型和化能自养型）。3氮源：氮是组成蛋白质和核酸的重要元素。4无机盐类：细菌所需无机盐包括磷、硫、镁、铁、钾、钠、钙、氯、锰、锌、钴、铜等。其中磷、硫、镁、钾、钠、铁需要量较多，其他只需微量。5生长因子：生长因子是某些微生物生长发2022-12-10107育所必需，而其自身又不能合成的一类营养物质。包括维生素、嘌呤和嘧啶等。五微生物生长的影响因素1营养物2pH值：各种微生物都有其最适宜的pH值，大多数细菌最适pH为6.87.4，但一般有较大的容忍度，在49也可存活和生长，少数细
34、菌能在极端pH值范围内生长。真菌适于pH值36的微酸性环境，但在210也可生长。3温度：微生物适于生长繁殖要有适宜的温度，当超过其最低或最高可耐受的温度时，即停止生长或死亡。一般细菌最适温度为 2022-12-101083040，真菌为2030。4氧气：大多数细菌和所有霉菌都是需氧菌（在有氧环境中才能生长），少数细菌是厌氧菌（在无氧环境中才能生长），有些细菌和酵母菌是兼性需氧厌氧的，在有氧或无氧环境中都能生长繁殖。5渗透压：微生物细胞膜和所有生物膜一样是一种半透膜，可让水自由通过，对溶质则有选择性。由于细胞壁的保护，微生物能存活在低渗透压的水中。而在高渗溶液（如高浓度的盐溶液或糖溶液、40%甘
35、油）中，细胞会脱水并停止生长繁殖。但也有一些专性耐高盐细菌只有在高盐（1015%）条件下才生长。6表面张力：表面活性剂可降低表面张力 2022-12-10109它是影响细菌生长的因素之一。很多革兰氏阴性菌，特别是大肠菌群可很好地在表面活性剂包围的介质中生长，而大多数革兰氏阳性菌在表面张力低时（0.05N/m）不能很好生长。阳离子表面活性剂对很多有机体有毒性，阴离子表面活性剂毒性很小，非离子表面活性剂几乎没有毒性，并可成为某些微生物的营养物。六消毒与灭菌消毒与灭菌是微生物实验技术中最基本的操作，从事药品生产和检验的人员都应当了解消毒与灭菌的方法及其意义，严格遵守操作规程，否则会影响产品质量，危害
36、患者安全。1概念2022-12-101101概念无菌不存在活的生物（GMP指南）。“无菌”从定义上来说是一个绝对的概念，但遗憾的是，在科学和技术高度发展的今天，药品的绝对无菌即做不到，也无法加以证实。然而，无菌制剂的安全性要求人们设定无菌的相对标准。FDA、欧洲制药工业界曾将百万分之一微生物污染率作为灭菌产品“无菌”的相对标准，它和蒸汽灭菌后产品中微生物存活的概率为10-6（即产品的无菌保证值为6），系同一标准的不同表示法。这一标准于1980起收录于USP XX中，如今已为世界各国普遍接受和采用。灭菌使达到无菌状态的方法（GMP指南2022-12-10111南）。用物理或化学方法杀灭传播媒介上
37、所有的微生物，使其达到无菌（GB）。通常是指杀灭或除去全部活的微生物（包括繁殖体和芽孢）。消毒用物理或化学方法杀灭或清除传播媒介上的病原微生物，使其达到无害化（GB）。通常是指杀死病原微生物的繁殖体，但不能破坏其芽孢。所以消毒是不彻底的，不能代替灭菌。无菌制剂不存在活的微生物的制剂（GMP指南）。非无菌制剂所含活的微生物量符合卫生学标准的制剂（GMP指南）。2常用消毒剂消毒剂 常用量 用途2022-12-10112乙醇 70%75%水溶液 0.5%洗必泰溶于70%乙醇，再加入2%甘油 用于皮肤、器具等消毒供洗手用消毒异丙醇 75%水溶液 用于皮肤、器具等消毒甲醛 37%40%甲醛液89ml，再
38、加入45g高锰酸钾 每m3熏蒸量，密闭1224h。刺激性强戊二醛 2%水溶液 用于空气、器具等消毒。广谱、高效、低毒，可杀芽孢和病毒。刺激性较轻。新洁尔灭（苯扎溴铵）0.1%水溶液 用于皮肤、粘膜、器具等消毒，有清洁和消毒双重功效。抗菌谱较窄。2022-12-10113杜灭芬（消毒宁）0.05%0.1%水溶液 用于皮肤、器具等消毒过氧乙酸 0.2%0.5%水溶液 新配0.5%水溶液 1g/m3 用于器具等消毒抗菌谱广，可用于皮肤消毒杀灭某些病毒熏蒸但性质不稳定乳酸 0.331mol/L 11.5ml/m3熏蒸或与等量苯酚合用熏蒸 喷雾，用于空气消毒，有强杀菌作用熏蒸，密闭12h以上麝香草酚 5
39、%麝香草酚溶于50%乙醇 喷洒墙面、地面，杀霉菌2022-12-101143常用灭菌法1）干热灭菌法常见的有火焰、烧灼、干烤和红外线灭菌等。火焰、烧灼：通常用于实验室无菌操作中金属或其它耐火材料制成的器具的灭菌。干烤和红外线：利用干热空气或热辐射进行灭菌。一般135145需35h，160170需2h以上，170180需1h以上，180200需0.51h。除热原则需25030min，或20045min，1802h。空气传热慢，穿透力不强，故干热灭菌时间长。干热灭菌时烤箱内装入物品应留有空隙，以利空气流动，否则使箱内温度不均，部分物品灭菌不彻底。2022-12-101152）湿热灭菌法通过热蒸汽或
40、沸水使蛋白质变性而杀灭微生物的方法。湿热穿透力强，灭菌效果较干热好。煮沸或流通蒸汽灭菌：常压下沸水和蒸汽的温度是100，一般处理3060min可杀死细菌繁殖体，但不能完全杀灭芽孢。此法适用于不能高压蒸汽灭菌的物品。低温间隙灭菌（巴斯德灭菌法）：将物品先用6080加热（或煮沸）1h，然后置2025保存24h（或常温过夜），使其中残存的芽孢萌发成繁殖体，再用以上条件灭菌，如此反复三次。本法适用于不耐高温或高温下易变质的物品，但很费时。高压蒸汽灭菌（热压灭菌法）：超过一个大气压时，水的沸点高于100，反之亦然。2022-12-10116高压蒸汽灭菌就是通过加压提高蒸汽温度，灭菌效果最好。它简便、经济
41、、可靠、无毒，是最可靠、应用最广泛的灭菌法。此法适用于耐高温和潮湿的物品。常用条件为：115.5 30min121.5 20min126.5 15min注意事项：a.必须完全排出灭菌器内的空气。否则会影响灭菌器内温度达到规定的要求。b.注意被灭菌物品的温度。灭菌器内温度与被灭菌物品的温度一般是一致的，但在蒸汽输入过快时，后者可能低于前者，所以升温时要有一定的预热时间。另外，降温过快易引起玻璃炸裂。因此，对于一种灭菌产品，2022-12-10117应制定一固定的灭菌曲线（象冻干曲线一样）。c.定期检查灭菌器内温度的准确性。3）化学灭菌法利用化学试剂形成的气体来杀灭微生物的方法。常用的灭菌剂为环氧
42、乙烷（又称氧化乙烯）。环氧乙烷是广谱杀菌剂，能杀灭细菌、芽孢和多种病毒，还能杀死昆虫及虫卵。但由于环氧乙烷易燃易爆且有毒（有致变异性），用于药品方面极有限，多用于医疗器械、塑料制品等灭菌。（不能用于橡胶和乳胶手套，能将其溶解。）4）滤过除菌法利用细菌不能通过致密具孔滤材的原理，除去对热不稳定的药品溶液或液体物质中的细菌的方法。过滤法一般只能除菌，不能除去支原体和病毒。2022-12-10118过滤除菌的效果与滤膜的性能、孔径的大小、密度、滤膜的厚度等因素有关。滤过除菌法要求最终过滤的滤膜孔径为0.22m。由于各厂家生产的相同规格的滤膜质量并不一致，为了保证除菌效果，在使用前后应检查滤器的完好性
43、（如压力维持试验或起泡点试验）。一个过滤器的使用时间应根据品种验证后确定，一般不应超过8小时。5）辐射灭菌法辐射有两种类型：一种是电磁波辐射，如紫外线、红外线、微波；一种是电离辐射，如可引起被照射物电离的X射线、射线。紫外线：紫外光波长在136390nm之间，其中260nm左右能破坏核酸，杀菌作用最强。2022-12-10119另外，空气中的氧受紫外线照射后，可微量转变为臭氧共同起杀菌作用。紫外线消毒的效果与光源的功率、光源与被照射物的距离、照射时间、温度和湿度等因素有关。我国规定紫外灯照射强度在距离1m处不低于70W/cm2（以紫外线测强仪测定）。在操作面上要求强度达40W/cm2以上。一般
44、每10m2装30W灯管1支，工作前开3060min。紫外灯的输出功率随使用时间增加而降低。国产紫外灯的平均寿命（点到70%额定功率的时间）一般为2000h，超过平均寿命时，就达不到预期效果，必须更换。紫外线的穿透力很弱，不能穿透一般包装材料，如玻璃、塑料薄膜、纸等。玻璃能强烈吸收小于350nm的紫外线，石英玻璃能吸收 2022-12-10120小于200nm的紫外线。因此，它主要用于空气和物体表面消毒，特制的紫外灯装置也可用于水的消毒。紫外线对眼、皮肤有损坏，照射过程中产生的臭氧对眼、鼻腔有刺激，臭氧过多时使人头晕、胸闷、血压下降。红外线：通过加热碳化硅板产生的辐射热能，由空气传导加热灭菌。如
45、红外线烤箱，温度可达180左右。热效应特点是由表及里。微波：微波灭菌主要是因其热效应。微波加热升温快，温度高且均匀，杀菌作用强。热效应特点是由里及表。不同性质的物品吸收微波的能力不同，其热效应和消毒效果也不同。2022-12-10121微波有一定穿透力，但不强。微波对人体有害，要注意防护。60Co灭菌：放射性同位素60Co（或137Cs）衰变时可放射出射线，射线的能量高、穿透力强，可使细胞内各种活性物质发生化学变化，从而使细菌损伤或死亡。经60Co辐射灭菌的物品温度升高很少，一般仅约5，故又称“冷灭菌”。60Co辐射存在两个方面的安全问题：一是辐射的直接作用。射线对人体细胞同样有害；二是经过辐
46、射的食品、药品的安全性。1984年美国农业部食品安全实验室用辐射处理的鸡肉喂饲小鼠，发现患*肿瘤增加，包括加重癌病损害。因此60Co辐射用于食品和药品都应经过安全试验，进行科学的、全面的评 2022-12-10122价，高剂量的辐射药品更应慎重。美国药典（？版）规定25kGy为有效灭菌剂量。1997年我国卫生部颁发了60Co中药灭菌标准，该标准限国内流通中药可用60Co辐照灭菌，规定了允许辐照的药材和中成药的品种和剂量。中药辐照最大吸收剂量标准：散剂 3kGy片剂 3kGy丸剂 5kGy中药原料粉 6kGy附录：1药品生产洁净室（区）的空气洁净度等级（GMP1998）洁净度级别 尘粒最大允许数
47、（个/m3）微生物最大允许数 0.5m 5m 浮游菌（个/m3）沉降菌（个/皿）100级 3,500 0 5 110,000级 350,000 2,000 100 32022-12-10123100,000级 3,500,000 20,000 500 10300,000级 10,500,000 60,000 15注：我国GMP1998附录规定：“洁净室（区）在静态条件下检测的尘埃粒子数、浮游菌数或沉降菌必须符合规定，应定期监控动态条件下的洁净状况。”因此，洁净室（区）空气洁净度的测定要求为静态测试，动态监控。对尘粒和微生物中的两项测定指标，至少各测一项。空气洁净度为100级的洁净室，室内大于等
48、于5m尘粒的计数，应进行多次采样，当某一测试值多次出现时，该值方可认可。测试按医药工业洁净室（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法。2水和一些物料的卫生学（法定）标准：饮用水 某些辅料#二部片剂 二部胶囊剂%XX霜*细菌总数 100/ml 1000/g 1000/g 1000/g 100/g霉菌、酵母菌数 100/g 100/g 100/g 10/g大肠杆菌 3/100ml NC沙门氏菌 NC NC NC NC铜绿假单胞菌 NC NC NC 金黄色葡萄球菌 NC NC NC 注：#：包括有乳糖、药用炭、淀粉、葡萄糖、糊精。2022-12-10124%：XX胶囊属中药制剂，含胎盘粉，按中国药典
49、2000版一部规定，还不得检出沙门菌。*：XX霜属中药制剂，用于创伤、烧伤，故要求细菌总数100个/g、霉菌数10个/g。说明：表示每1g或每1ml不得检出。NC：表示无规定。可不检查。2022-12-10125 操作员工进入生产区的操作员工进入生产区的 清洗、消毒规程清洗、消毒规程2022-12-10126操作员工进入生产区的清洗、消毒规程操作员工进入生产区的清洗、消毒规程 脱鞋将鞋放入鞋柜转身穿脱鞋2022-12-10127将衣服饰物放入衣柜将衣服饰物放入衣柜 关柜门戴口罩戴口罩穿洁净衣（下身）穿洁净衣（下身）2022-12-10128穿洁净衣（右袖穿洁净衣（右袖）穿洁净衣（左袖）穿洁净衣（左袖）穿洁净衣（系帽带）穿洁净衣（系帽带）穿洁净衣（拉拉链）穿洁净衣（拉拉链）2022-12-10129脱拖鞋脱拖鞋 转身转身 穿工鞋穿工鞋 对镜整理2022-12-10130清洗清洗 取洗手液取洗手液 用洗手液揉搓手部用洗手液揉搓手部 冲洗去除洗手液冲洗去除洗手液 2022-12-10131手风干手风干 喷消毒液喷消毒液 开门至碰珠开门至碰珠 进入风淋室并关门进入风淋室并关门 2022-12-10132风淋（面朝西）风淋（面朝西）风淋（面朝南）风淋（面朝南）风淋（面朝东）风淋（面朝东）出风淋室并关门出风淋室并关门 2022-12-10133
