1、 细胞免疫检测细胞免疫检测南京中医药大学西内教研室南京中医药大学西内教研室 徐庆徐庆一.细胞免疫概念 由T淋巴细胞所介导的免疫反应为细胞免疫。细胞免疫并不是单独由T淋巴细胞一种细胞参与，在T细胞发挥免疫效应的过程中,依赖于多种免疫细胞和免疫分子的参与，其中包括B淋巴细胞、K细胞、NK细胞及巨噬细胞等。细胞免疫见于细胞内寄生虫病原体的抗感染作用，迟发型超敏反应，抗肿瘤免疫，同种移植排斥反应，移植物抗宿主反应，某些自身免疫性疾病。二二.细胞免疫测定的方法细胞免疫测定的方法：体内试验:皮内试验 方法 体外试验:免疫功能的测定 淋巴细胞计数 T细胞转化试验细胞免疫功能测定 巨噬细胞移动抑制试验 混合淋
2、巴细胞培养 K与NK细胞活性检测 T细胞花结形成试验 细胞表面受体测定 B细胞膜表面IgG测定淋巴细胞 计数测定 细胞表面分化抗原 T淋巴细胞亚群测定 B细胞表面分化抗原测定 三.T淋巴细胞 1.分群 CD4+(Th)CD3 CD8+(Ts)Th/Ts Th1:分泌IL-2、IFN-、TNF-Th2:分泌IL-4、IL-5、IL-6、IL-10 CD4+抑制细胞诱导亚群 TI（CD4+CD45RA+）辅助细胞诱导亚群 Th（CD4+CD29+）CD3 杀伤T细胞亚群 Tc（CD8+CD28+）CD8+抑制T细胞亚群 Ts（CD8+CD28-）2.功能1)Ti：抑制细胞诱导亚群其主要功能是诱导T
3、s细胞的产生。2）Th：辅助细胞诱导亚群辅助B细胞产生抗体和诱导细胞介导的淋巴细胞溶解作用（CML）。3）Tc：静 止 的CTL以前体细胞形式存在，在识别并结合APC表面抗原多肽-MHC-1类分子复合物后，活化为 抗 原 特 异 性 的CTL效应细胞，发挥特异性杀伤靶细胞的功能。4）Ts：细胞作用的靶细胞主要是抗原特异性的Th和B细胞。通过对Th和B细胞的抑制作用，发挥对各种免疫功能的负调节作用。Ts细胞功能低下，使Th细胞活性相对增高，而使B细胞多克隆激活产生大量的自身抗原。Th1细胞主要介导细胞免疫，参与迟发型超敏反应和辅助CTL细胞表达杀伤功能；Th2细胞主要介导体液免疫，辅助B细胞产生
4、高滴度抗体和参与速发型超敏反应。3.参考值 CD3:0.650.75CD3CD4：0.320.42CD3CD8:0.210.32CD4CD29:0.200.32CD4CD45RA:0.0850.20CD8CD28:0.100.16CD8CD28:0.0540.13四淋巴细胞四淋巴细胞 1 分群分群：目前对淋巴细胞亚群的研究，尚不如对淋巴细胞亚群研究的深入，根据是否表达CD5可将细胞分为1(CD5+)细胞和B2(CD5-)细胞两个亚群。B2细胞即通常参与体液免疫的B细胞，而B1细胞在发生、分布、表型和功能等方面具有不同于B2细胞的特点。2.B细胞表面特异性抗原：CD19、CD20、CD22CD1
5、9：为全部B细胞所共有的表面标志，B细胞活化后亦不消失；CD20：表达于静止的成熟B细胞阶段，在B细胞激活后逐渐丢失；CD22：当B细胞活化时，表达增强，一旦分化为浆细胞则表达下降。五五临床意义临床意义(一一).辅助诊断辅助诊断 1.CD3：（1）甲亢、淋巴细胞性甲状腺炎（2）传染性单核细胞增多症（3）急性淋巴细胞型白血病（4）重症肌无力 (5）SLE活动期（6）排斥反应 2.CD3 ：（1）原发性细胞免疫缺陷病（如先天无 胸腺症）（2）某些恶性肿瘤（3）流感、麻疹等病毒感染3.CD4/CD8：1)艾滋病 （CD4，）CD4+细胞数200个/mm3 预后较好 CD4+细胞数200个/mm3 艾
6、滋病期 CD4+细胞数50 个/mm3 艾滋病末期2SLE(系统性红斑狼疮)活动期(CD4，CD8)3.急性乙肝及无症状携带者(CD8)4病毒感染期（如麻疹、水痘、猩红热等）（CD4、CD8）5急性期和复发的传染性单核细胞增多症 （CD8）6肿瘤病人（CD4、CD8)7血液病如AA、粒细胞减少症（CD4、CD8）4.CD4/CD8：1类风湿性关节炎CD4(CD4+CD29+)2重症肌无力3自身溶血性贫血4移植排斥反应5.Th1和Th2细胞1.)在自身免疫性疾病发病机制中起重要作用：在自身免疫性疾病发病机制中起重要作用：SLE、RA患者Th1和Th2细胞发生偏移。RA以Th1占优势。RA患者关节
7、液IFN-/IL-4为近4倍，滑膜中IFN-/IL-4为4.3倍。大量的动物实验证明，通过粘膜耐受下调Th1或上调Th2细胞，均可抑制该病的发生发展，从而起到保护作用。SLE患者有少量细胞产生Th1细胞因子，而有大量细胞产生Th2细胞因子，提示Th2与SLE的致病作用密切相关。（但也有研究表明，SLE患者Th1/Th2细胞比率与正常对照组无明显差别，且并发型狼疮肾炎的SLE患者以Th1细胞因子占优势）。2.)移植排斥反应中的作用：肾移植排斥反应产物中的CD4+和CD8+T细胞克隆比外周血相应克隆更多地产生Th1细胞因子，因此Th1细胞在排斥反应中起重要作用。3)感染性疾病:Th2细胞通过产生I
8、L-4和IL-5诱导强抗体反应,并引起嗜酸性粒细胞和肥大细胞的聚集和活化,从而抵御细胞外病原体感染,特别是寄生虫的感染。(二)肿瘤病人治疗效果的判定及预后肿瘤病人治疗效果的判定及预后 免疫功能正常的病人，一般预后较好，反之预后差。接受常规治疗的肿瘤病人，若治疗引起了免疫抑制，则这种病人的预后较差，缓解期的白血病病人，其免疫功能突然下降，是白血病复发的信号。六六.淋巴细胞表面标志物在白血病免疫学淋巴细胞表面标志物在白血病免疫学分型中的作用分型中的作用 B 系细胞白血病的相关性标记：CD10、CD19、CD20、CD22T 系细胞白血病的相关性标记：CD2、CD3、CD5、CD7、CD4、CD8
9、B-ALL T-ALL AMLCD22 +-CD10 +-CD19 +-CD3 -+-CD5 -+-CD7 -+-/+CD13 -+CD33 -+白血病免疫学分型的意义 选择治疗方案及判断预后有重要意义。T淋巴细胞型白血病对化疗不敏感，常复发和预后差。慢性淋巴细胞白血病多为B淋巴细胞白血病。NK细胞的检测及临床意义1.检测方法：活性测定和细胞计数2.意义：可作为机体抗肿瘤和抗病毒感染的 指标之一。NKNK细胞的识别功能与重大疾病的重新解释细胞的识别功能与重大疾病的重新解释近期发现NK细胞的杀伤对象为MHC-I类分子丢失/变异的细胞，正巧与CTL杀伤靶细胞需要正常MHC-I类分子的存在相反-是N
10、K细胞研究乃至整个细胞免疫学研究史的里程碑。目前证实了NK细胞的识别抑制现象（由KIR完成），并发现该KIR的作用受到NK细胞自身活化受体（KAR）的调节。1.肿瘤免疫逃逸的新解 肿瘤死亡的主要原因在于复发与转移。长期以来就发现肿瘤细胞多发生HLAI类分子的变化而导致CTL细胞无法通过双识别而启动杀伤程序。近来发现NK细胞通过“丢失自我”机制而启动杀伤肿瘤，但发现肿瘤细胞在失去或变构HLA-A、B、C的同时可高表达非常规性I类分子（如HLA-G、HLA-E），传递强烈的抑制信号，从而实现对NK细胞杀伤的逃逸。2.NK细胞可引发自身免疫病 过去一般认为多数自身免疫性疾病与自身反应性T细胞的产生有
11、关。随着NK细胞识别机制的发现，尤其是HLAI类分子变化与NK细胞关系的阐明，少数学者推测自身反应性NK细胞或正常组织因某种原因而引起HLAI类分子的丢失也许是引发自身免疫性疾病的原因。NKNK细胞的发育与重大疾病的重新解细胞的发育与重大疾病的重新解释释病毒逃避NK细胞监视的新解 近几年人们发现病毒可以通过胞内蛋白或基因水平的阻遏作用而致使细胞无法产生针对干扰素的反应而不产生抗病毒蛋白。病毒引发的局部炎症可导致肝脏NK细胞长期处于该类细胞因子的刺激而使相关细胞因子信号十分活跃，该反应可使NK细胞对IFN/的信号通路受抑而无法使NK细胞分泌IFN和出现杀伤活性，从而使病毒逃逸。七淋巴细胞亚群的检测方法 1免疫荧光检测法：l 荧光显微镜 流式细胞仪：快速、准确、简便。2免疫组化法：碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶（APAAP）免 疫桥联染色法；免疫金银染色法（IGSS）。小结一.细胞免疫概念二.细胞免疫检测种类三.T淋巴细胞分群、功能及临床意义()四.B淋巴细胞五.淋巴细胞分化抗原在白血病免疫学分型中的 作用()六.淋巴细胞亚群的检测方法
