1、 眼眼科学科学眼科学研究方法概述眼科学研究方法概述本章重点本章重点 掌握眼科学科研基本程序掌握眼科学科研基本程序 掌握常用眼科疾病动物模型的制备掌握常用眼科疾病动物模型的制备 掌握组织培养、病理学、细胞生物掌握组织培养、病理学、细胞生物学、分子生物学技术学、分子生物学技术 了解计算机图像处理技术了解计算机图像处理技术第一节第一节 眼科学科研基本程序眼科学科研基本程序1.科研选题科研选题 文献的查阅和假说（文献的查阅和假说（hypothesis）的建立）的建立 眼科学科研选题来源眼科学科研选题来源与与范围范围科研选题原则：科研选题原则：创新性原则创新性原则 先进性原则先进性原则 科学性原则科学性
2、原则 可行性原则可行性原则 1.科研选题科研选题2.研究计划与科研设计研究计划与科研设计3.实验方法实验方法4.统计分析统计分析5.总结归纳总结归纳 第二节第二节 眼科研究常用动物模型眼科研究常用动物模型 1.实验动物实验动物2.动物模型动物模型：诱发性疾病动物模型；诱发性疾病动物模型；自发性疾病动物模型；自发性疾病动物模型；转基因疾病动物模型统计分析转基因疾病动物模型统计分析3.眼科常用疾病动物模型的制备眼科常用疾病动物模型的制备常用眼科疾病动物模型的制备常用眼科疾病动物模型的制备 1.角膜炎动物模型角膜炎动物模型 单纯疱疹病毒性角膜炎动物模型单纯疱疹病毒性角膜炎动物模型 细菌性角膜炎动物模
3、型细菌性角膜炎动物模型2.白内障疾病动物模型白内障疾病动物模型 半乳糖性白内障模型半乳糖性白内障模型 外伤性白内障动物模型外伤性白内障动物模型3.青光眼（慢性高眼压）疾病动物模型青光眼（慢性高眼压）疾病动物模型 利用激光光凝作用破坏房角小梁结利用激光光凝作用破坏房角小梁结构致眼压升高构致眼压升高。4.视网膜疾病动物模型视网膜疾病动物模型 孔源性视网膜脱离动物模型孔源性视网膜脱离动物模型增殖性玻璃体视网膜病变模型增殖性玻璃体视网膜病变模型视网膜静脉阻塞动物模型视网膜静脉阻塞动物模型衣霉素致视网膜退行性变动物模型衣霉素致视网膜退行性变动物模型光性视网膜损伤动物模型光性视网膜损伤动物模型自发性视网膜
4、变性模型自发性视网膜变性模型：RCS大鼠大鼠，rd1小鼠小鼠种系种系糖尿病产生糖尿病产生视网膜病变视网膜病变犬犬自发性自发性微血管瘤、周细胞消失微血管瘤、周细胞消失、毛细血、毛细血管细胞改变、管细胞改变、出血出血四氧嘧啶四氧嘧啶微血管瘤、周细胞消失微血管瘤、周细胞消失、毛细血、毛细血管细胞改变管细胞改变类固醇类固醇毛细血管细胞丧失毛细血管细胞丧失猴猴四氧嘧啶四氧嘧啶微血管瘤微血管瘤、毛细血管细胞改变、毛细血管细胞改变、棉絮状斑、黄斑病变棉絮状斑、黄斑病变常用糖尿病性视网膜病变模型的类型及特征常用糖尿病性视网膜病变模型的类型及特征种系种系 糖尿病产生糖尿病产生视网膜病变视网膜病变大大鼠鼠胰腺切除
5、胰腺切除小动脉瘤小动脉瘤四氧嘧啶四氧嘧啶玻璃体内新生血管、血管和基底膜超微结玻璃体内新生血管、血管和基底膜超微结构病变、视网膜血管萎缩、新生血管构病变、视网膜血管萎缩、新生血管可的松可的松微血管瘤微血管瘤、毛细血管细胞改变、毛细血管细胞改变链佐星链佐星微血管瘤微血管瘤、毛细血管细胞改变、毛细血管细胞改变、基底膜改基底膜改变、周细胞消失、血管萎缩变、周细胞消失、血管萎缩、血管扩张、血管扩张蔗糖喂养蔗糖喂养血管萎缩和血管瘤血管萎缩和血管瘤种系种系 糖尿病产生糖尿病产生视网膜病变视网膜病变小鼠小鼠遗传性遗传性微血管瘤微血管瘤、毛细血管细胞改变、毛细血管细胞改变链佐星链佐星周细胞消失周细胞消失仓鼠仓鼠
6、遗传性遗传性毛细血管细胞改变、血管瘤样毛细血管细胞改变、血管瘤样损害、损害、小动脉改变小动脉改变链佐星链佐星血管瘤样损害血管瘤样损害鲤鱼鲤鱼四氧嘧啶或自四氧嘧啶或自发性发性血管扩张血管扩张第三节第三节 眼科研究常用实验技术眼科研究常用实验技术 1.常用组织培养技术：常用组织培养技术：细胞培养、器官培养、组织工程学细胞培养、器官培养、组织工程学2.常用病理学技术常用病理学技术3.常用细胞生物学技术常用细胞生物学技术4.常用分子生物学技术常用分子生物学技术5.常用计算机图像处理技术常用计算机图像处理技术6.常用视觉生理研究技术常用视觉生理研究技术常用组织培养技术常用组织培养技术 1.1.细胞培养细
7、胞培养 是在体外无菌、一定营养和温度等是在体外无菌、一定营养和温度等条件下，培养单个细胞或单一型细胞群条件下，培养单个细胞或单一型细胞群体，并使之生存、生长和繁殖的方法。体，并使之生存、生长和繁殖的方法。2.器官培养器官培养 指在体外维持整个器官、器官的部分指在体外维持整个器官、器官的部分或器官的原基生存和生长的方法。或器官的原基生存和生长的方法。3.组织工程学组织工程学 是应用生命科学和工程学的原理与是应用生命科学和工程学的原理与方法，利用生物活性物质在体外模拟体方法，利用生物活性物质在体外模拟体内生物环境，构建一个有生物活性的种内生物环境，构建一个有生物活性的种植体，植入生物体内修复组织缺
8、损，替植体，植入生物体内修复组织缺损，替代器官功能。代器官功能。常用病理学技术常用病理学技术 l 组织的取材与固定组织的取材与固定l 染色技术染色技术l 石蜡石蜡/冷冻切片的制备冷冻切片的制备l 细胞与组织化学技术细胞与组织化学技术l 组织与细胞的免疫化学技术组织与细胞的免疫化学技术l 免疫荧光技术免疫荧光技术l 双重和多重免疫标记技术双重和多重免疫标记技术l 眼球包埋切片技术眼球包埋切片技术常用细胞生物学技术常用细胞生物学技术 1.形态学观察形态学观察l光镜、荧光显微镜光镜、荧光显微镜l激光共聚焦显微镜激光共聚焦显微镜l电子显微镜电子显微镜l显微摄影技术等显微摄影技术等2.细胞化学技术细胞化
9、学技术 酶细胞化学、免疫细胞化学、放酶细胞化学、免疫细胞化学、放射自显影和细胞结构成分的离心分离射自显影和细胞结构成分的离心分离技术等。技术等。3.分析细胞学技术分析细胞学技术 流式细胞分选术、显微分光光度术和流式细胞分选术、显微分光光度术和图像分析技术等。图像分析技术等。4.细胞培养和细胞融合技术细胞培养和细胞融合技术 常用计算机图像处理技术常用计算机图像处理技术 l 图像的重组图像的重组l 图像的测量与分析判读图像的测量与分析判读l 图像的储存、管理与共享图像的储存、管理与共享 常用分子生物学技术常用分子生物学技术 l 电泳技术电泳技术l 基因组基因组DNA 文库构建文库构建l 核酸分子杂
10、交技术核酸分子杂交技术l 聚合酶链反应（聚合酶链反应（PCR）l DNA 序列分析技术序列分析技术l 重组重组DNA 技术技术 蛋白质免疫印迹分析技术蛋白质免疫印迹分析技术 载体和宿主细胞技术载体和宿主细胞技术 基因芯片及高通量测序技术基因芯片及高通量测序技术 蛋白质组学技术：蛋白质组学技术：在大规模水平上研究蛋白质的表达特征在大规模水平上研究蛋白质的表达特征 其他：抑制性消减杂交、基因芯片等其他：抑制性消减杂交、基因芯片等 常用常用视觉生理学研究视觉生理学研究技术技术 1.整体电生理技术整体电生理技术2.细胞外微电极技术细胞外微电极技术3.细胞内记录技术细胞内记录技术4.膜片钳技术膜片钳技术5.脑光学成像技术脑光学成像技术
