1、实验室与生物安全实验室与生物安全(Laboratory Biosafety)绪论绪论中山大学中山医学院中山大学中山医学院 余新炳余新炳绪绪 论论几个基本概念几个基本概念一一实验室感染简史实验室感染简史二二实验室污染事故及管理实验室污染事故及管理三三动物实验的生物安全与防护动物实验的生物安全与防护四四生物安全管理生物安全管理五五一、几个基本概念一、几个基本概念由动物、植物、微生物等生物给人由动物、植物、微生物等生物给人类健康和自然环境可能造成不安全类健康和自然环境可能造成不安全的防范；包括由现代生物技术的开的防范；包括由现代生物技术的开发和应用可能产生的负面影响所采发和应用可能产生的负面影响所采
2、取的有效预防和控制措施取的有效预防和控制措施避免危险生物因子造成实验室人避免危险生物因子造成实验室人员暴露、向实验室外扩散并导致员暴露、向实验室外扩散并导致危害的综合措施危害的综合措施 生物安全实验室生物安全实验室（biosafety laboratory）是指通过防护屏障和管理措施，从事传染性物质操作的实验室，包括：研究用实验室、动物实验室、临床检验实验室、公共卫生实验室、传染病监测实验室等由人为操作或人类活动而导致生物由人为操作或人类活动而导致生物体或其产物对人体健康和生态环境体或其产物对人体健康和生态环境的现实损害或潜在风险。这里的危的现实损害或潜在风险。这里的危害包括对操作者、其他相关
3、人员、害包括对操作者、其他相关人员、环境和其他生物的危害环境和其他生物的危害生物因子将要或可能形成的危害，生物因子将要或可能形成的危害，是伤害概率和严重性的综合。又称是伤害概率和严重性的综合。又称生物风险生物风险生物多样性公约生物多样性公约联合国环境规划署和联合国环境规划署和生物多样性公约生物多样性公约秘秘书处从书处从19941994年开始制定年开始制定“生物安全议定书生物安全议定书”共组共组织织1010轮工作组会议和政府间谈判轮工作组会议和政府间谈判20002000年年8 8月，我国政府正式签署月，我国政府正式签署生物多样生物多样性公约性公约的卡塔赫纳生物安全议定书的卡塔赫纳生物安全议定书生
4、物安全生物安全是是生物多样性公约生物多样性公约最重要的议题之一最重要的议题之一生物安全问题生物安全问题 狭义的生物安全问题狭义的生物安全问题 可能对生物多样性、生态环境和人类健康产生可能对生物多样性、生态环境和人类健康产生潜在的不利影响潜在的不利影响包括各类转基因活生物体释放到环境中，可能包括各类转基因活生物体释放到环境中，可能对生物多样性构成潜在威胁对生物多样性构成潜在威胁 生物安全问题生物安全问题 广义的生物安全问题广义的生物安全问题 是国家安全问题的组成部分，是指与生物有关的是国家安全问题的组成部分，是指与生物有关的各种因素对社会、经济、人类健康及生态环境所各种因素对社会、经济、人类健康
5、及生态环境所产生的危害或潜在风险产生的危害或潜在风险 这些因素主要是这些因素主要是：天然的生物因子天然的生物因子 如生物武器、生物恐怖、重大传如生物武器、生物恐怖、重大传染病的暴发流行，是最重要、最现实的生物安全染病的暴发流行，是最重要、最现实的生物安全问题问题 转基因生物转基因生物 生物技术生物技术 滥用或对人类健康、生态环境滥用或对人类健康、生态环境以及社会、经济造成严重危害以及社会、经济造成严重危害 食品安全食品安全时间时间食品安全的定义食品安全的定义世界卫世界卫生组织生组织1984 年年生产、加工、储存、分配和制作食品过程中生产、加工、储存、分配和制作食品过程中确保食品安全可靠，有益于
6、健康并且适合人确保食品安全可靠，有益于健康并且适合人消费的种种必要条件和措施消费的种种必要条件和措施世界卫世界卫生组织生组织1996年年对食品按其原定用途进行制作、食用时不会对食品按其原定用途进行制作、食用时不会使消费者健康受到损害的一种担保使消费者健康受到损害的一种担保国际食国际食品卫生品卫生法典委法典委员会员会消费者在摄入食品时，消费者在摄入食品时，食品中不含有害物食品中不含有害物质，质，不存在引起急性中毒、不良反应或潜不存在引起急性中毒、不良反应或潜在疾病的危险性在疾病的危险性我国我国食品食品(食物食物)的生产、加工、包装、储藏、的生产、加工、包装、储藏、运输、销售和消费等活动过程符合强
7、制性标运输、销售和消费等活动过程符合强制性标准和要求，准和要求，不存在可能危害人体健康的有不存在可能危害人体健康的有毒有害物质以及导致消费者病亡或者危及消毒有害物质以及导致消费者病亡或者危及消费者后代的隐患费者后代的隐患生物恐怖生物恐怖 (Bioterrorist)用活的有害微生物或用生物技术制造用活的有害微生物或用生物技术制造的有害微生物以不同的形式（如生物的有害微生物以不同的形式（如生物武器、水源或环境扩散）导致人类生武器、水源或环境扩散）导致人类生命受到严重威胁命受到严重威胁蒙古人用弹射器将鼠疫蒙古人用弹射器将鼠疫病死者的尸体抛入黑海病死者的尸体抛入黑海卡法城卡法城世界第一次细菌战世界第
8、一次细菌战卡法城之战卡法城之战（1346年）年）卡法城热那亚人卡法城热那亚人大量死亡大量死亡化学武器化学武器包括装有毒剂的炮弹、航弹、火箭弹、包括装有毒剂的炮弹、航弹、火箭弹、导弹、地雷以及飞机布洒器、毒烟施放导弹、地雷以及飞机布洒器、毒烟施放器材等。按毒害作用分器材等。按毒害作用分7类类神经性神经性毒剂、糜烂性毒剂、全身中毒性毒剂、毒剂、糜烂性毒剂、全身中毒性毒剂、失能性毒剂、窒息性毒剂、刺激性毒剂失能性毒剂、窒息性毒剂、刺激性毒剂植物除莠剂植物除莠剂受芥子气袭击而受芥子气袭击而失明的英国士兵失明的英国士兵世界第一次化学战世界第一次化学战19151915年德军首次施用年德军首次施用芥子气、沙
9、林毒剂都芥子气、沙林毒剂都是化学武器中的超级是化学武器中的超级杀手，杀手，1915年年4月月22日日，德国首先使用芥，德国首先使用芥子气，各交战国共生子气，各交战国共生产芥子气产芥子气13500吨吨，其，其中中12000吨用于实战。吨用于实战。一战因毒气伤亡人数一战因毒气伤亡人数达达130万万，88.90因因芥子气中毒芥子气中毒一战一战“生物战生物战”主要事件（德国）主要事件（德国）1915年年德国间谍对即将离开美国港口，运往欧洲德国间谍对即将离开美国港口，运往欧洲协约国的马和牛使用细菌战剂协约国的马和牛使用细菌战剂19151916年年企图在俄国彼得堡撒布鼠疫菌的德间谍被企图在俄国彼得堡撒布鼠
10、疫菌的德间谍被捕捕19161917年年德国人在罗马尼亚的布加勒斯特以马鼻疽德国人在罗马尼亚的布加勒斯特以马鼻疽菌和炭疽杆菌感染对方马群菌和炭疽杆菌感染对方马群1917年年2月月德国用飞机播撒污染了细菌战剂的水果、德国用飞机播撒污染了细菌战剂的水果、巧克力和玩具巧克力和玩具1917年年德国用生物战剂感染了德国用生物战剂感染了45004500头美国准备运头美国准备运回协约国的骡子回协约国的骡子二战日本侵华二战日本侵华“生物战生物战”石井四郎石井四郎侵华日军侵华日军526526部队：部队：拿中国人做实验拿中国人做实验100100部队部队16441644部队部队86078607部队部队731731部队
11、部队731731部队生物战的能力部队生物战的能力每年可生产：每年可生产：300kg乳浆鼠疫杆菌菌液，乳浆鼠疫杆菌菌液，500600公斤公斤炭疽杆菌，炭疽杆菌，1000公斤公斤霍乱弧菌和霍乱弧菌和2000kg跳蚤，跳蚤，同时还研制出磁制气雾剂，铜壳榴霰弹同时还研制出磁制气雾剂，铜壳榴霰弹等多种生物炸弹等多种生物炸弹炭疽杆菌炭疽杆菌1876年年Robert Koch首次以该病作为描述细菌首次以该病作为描述细菌性疾病的模型，其病原菌炭疽杆菌是用显微性疾病的模型，其病原菌炭疽杆菌是用显微镜从染病动物材料中检出的第一种微生物。镜从染病动物材料中检出的第一种微生物。第一种第一种以纯培养在实验动物中人工感染
12、成功以纯培养在实验动物中人工感染成功的疫病的疫病1880年年Louis Pasteur用炭疽杆菌研制成第一用炭疽杆菌研制成第一种活菌弱毒疫苗种活菌弱毒疫苗Koch培养的炭疽杆菌培养的炭疽杆菌炭疽用于生物战的历史炭疽用于生物战的历史第一次世界大战第一次世界大战 德军对协约国使用德军对协约国使用(间谍投放间谍投放)第二次世界大战第二次世界大战 日军在我国使用日军在我国使用(飞机投放飞机投放)朝鲜战争朝鲜战争 美军在朝鲜和我国使用美军在朝鲜和我国使用(飞机投放飞机投放)炭疽用于生物恐怖的历史炭疽用于生物恐怖的历史1990-19931990-1993年年“奥姆真理教奥姆真理教”在东京散布炭疽气溶胶。在
13、东京散布炭疽气溶胶。1998-19991998-1999年初年初 美国发生美国发生“炭疽邮件炭疽邮件”袭击事件袭击事件20012001年年911911后后 美国再次发生美国再次发生“炭疽邮件炭疽邮件”袭击袭击实验室相关实验室相关性感染性感染Laboratory associated infections实验室感染实验室感染实验室获得实验室获得性感染性感染Laboratory acquired infections二、实验室感染简史二、实验室感染简史又称定义？二、实验室感染简史二、实验室感染简史1886年年 Koch报告第一例霍乱病的实验室感报告第一例霍乱病的实验室感染：德国柏林的一名学生在处理
14、霍乱弧菌染：德国柏林的一名学生在处理霍乱弧菌培养物时被感染并发病培养物时被感染并发病1893年年 Reincke报告第一例实验室伤寒感报告第一例实验室伤寒感染染1899年年 Birt和和Lamb报告第一例布氏杆菌引报告第一例布氏杆菌引起的实验室获得性感染起的实验室获得性感染1905年年 Johnston报告第二例布氏菌实验室报告第二例布氏菌实验室感染并作了评价感染并作了评价1931年年 Findlay报告第一例实验室感染肝报告第一例实验室感染肝炎的病例炎的病例1932年年 有报告实验室工作人员被恒河猴咬有报告实验室工作人员被恒河猴咬伤后患猿猴疱疹病毒性脑炎，这是该病毒伤后患猿猴疱疹病毒性脑炎，
15、这是该病毒感染人类的第一例感染人类的第一例1943年年 在巴西的黄热病实验室，两周内在巴西的黄热病实验室，两周内8名实验室人员发生了委内瑞拉马脑炎名实验室人员发生了委内瑞拉马脑炎1967年年 在德国有在德国有26名实验室人员因接触黑名实验室人员因接触黑尾长猴的血液和组织而感染一种病毒尾长猴的血液和组织而感染一种病毒(马马堡病毒堡病毒)，最终有，最终有9人死亡人死亡二、实验室感染简史二、实验室感染简史1969年年 尼日利亚北部一家医院尼日利亚北部一家医院3名护士感名护士感染砂粒病毒，其中染砂粒病毒，其中2人死亡。这是该病毒人死亡。这是该病毒感染人的首次报告感染人的首次报告（1951、1965、1
16、976）美国实验室相关感美国实验室相关感染调查染调查二、实验室感染简史二、实验室感染简史5000个实验室个实验室累计感染总数：累计感染总数：3921例例与已知事故相关的与已知事故相关的80%（气溶胶？）（气溶胶？）最常报告的感染：最常报告的感染：乙型肝炎、肺结核、乙型肝炎、肺结核、伤寒、委内瑞拉马脑炎、布鲁氏菌病伤寒、委内瑞拉马脑炎、布鲁氏菌病1999年年 Walker等报告实验室人员感染率等报告实验室人员感染率 19941995年为年为16.2人人/10万万年年 19881989年为年为82.7人人/10万万年年2003年后年后 新加坡、台湾和北京先后发生了新加坡、台湾和北京先后发生了实验室
17、人员感染实验室人员感染SARS-CoV的报告的报告2004年年 中国中国CDC病毒所形态室病毒所形态室SARS-CoV感染事件导致感染事件导致9人感染，其中人感染，其中1人死亡，人死亡，747人被隔离人被隔离二、实验室感染简史二、实验室感染简史SARSSARS事件过程事件过程2003.2.11中国广东省报告非典型肺炎中国广东省报告非典型肺炎2003.2.19香港确诊有人感染非典型肺炎香港确诊有人感染非典型肺炎2003.3.5越南河内出现非典越南河内出现非典2003.3.12香港报道香港报道SARS病例；新加坡报道病例；新加坡报道3例例2003.3.15加拿大、德国出现非典加拿大、德国出现非典2
18、003.3.31WHO宣布新加坡已控制了宣布新加坡已控制了SARS的疫情的疫情2003.9.10新加坡国立大学微生物实验室一名新加坡国立大学微生物实验室一名27岁中国籍博士后岁中国籍博士后留学生出现非典疑似症状，该学生从事西尼病毒研究留学生出现非典疑似症状，该学生从事西尼病毒研究2003.12.17台北报道一例非典疑似病例，患者为位于台北的台北报道一例非典疑似病例，患者为位于台北的“国国防预防医学研究所防预防医学研究所”的一名的一名SARS病毒研究的工作人病毒研究的工作人员，该患者曾于员，该患者曾于12月月30日到日到10日去过新加坡日去过新加坡DMERI抗击抗击SARSSARS瞬间瞬间温家宝
19、总理：温家宝总理：“党和人民感谢你们！党和人民感谢你们！”向向SARS宣战宣战，共产党员冲锋在前！，共产党员冲锋在前！抗击抗击SARSSARS瞬间瞬间蒙丽莎蒙丽莎“戴戴”着口罩微笑着口罩微笑天使的天使的“时装时装”同学重聚同学重聚宋某宋某3月月23日北京日北京安徽安徽3月月25日发热日发热北京北京3月月29日北京健宫医院日北京健宫医院护士李某陪护（护士李某陪护（3.29-4.2）4月月22日发热日发热4月月2日淮南矿二院日淮南矿二院 宋母魏某宋母魏某3月月31日陪伴日陪伴4月月8日发热，日发热，19日病亡日病亡李某李某3名亲属、同室病人名亲属、同室病人及伴护及伴护5人均被感染发热人均被感染发热
20、4月月4日安医附院（病毒性肺炎）日安医附院（病毒性肺炎）5月上旬出院月上旬出院北京实验室北京实验室SARSSARS感染概况感染概况宋某发热宋某发热15天后天后其同事杨某发热其同事杨某发热宋、杨均在同一实验室工作，该室一直从事宋、杨均在同一实验室工作，该室一直从事SARS-CoV工作工作封锁病毒所后，未再出现任何封锁病毒所后，未再出现任何SARS病人病人第二代病例魏某胸水中分离到第二代病例魏某胸水中分离到SARS-CoV，其，其全基因序列与实验全基因序列与实验SARS-CoV高度同源高度同源宋、杨从未接触过野生动物宋、杨从未接触过野生动物宋、杨潜伏期内北京没有任何其他宋、杨潜伏期内北京没有任何其
21、他SARS病例病例实验室感染的证据分析实验室感染的证据分析主要原因：病毒灭活不彻底，灭活方法没有主要原因：病毒灭活不彻底，灭活方法没有进行有效的评价，没有规定对每一批病毒的进行有效的评价，没有规定对每一批病毒的灭活效果进行监测和质控灭活效果进行监测和质控责任追究：责任追究：13名处级以上领导被免职名处级以上领导被免职亲切握手亲切握手-热烈交谈热烈交谈-粗心与意外粗心与意外-感染方式与感染途径感染方式与感染途径穿白褂到处走穿白褂到处走戴手套随意开手柄戴手套随意开手柄 台面台面/器皿不清洁器皿不清洁 动物感染时自己被感染（咬）动物感染时自己被感染（咬）不做善后工作不做善后工作 清洁区与污染区不分清
22、洁区与污染区不分针刺、器皿破碎、离心、穿拖鞋针刺、器皿破碎、离心、穿拖鞋空气传播空气传播手口传播手口传播无知最危险无知最危险把所有未知病原都按把所有未知病原都按HIV/HBV处理处理对所有他人都按传染源警惕（除已知者外）对所有他人都按传染源警惕（除已知者外）把要工作的各类设施设备都按污染物对待把要工作的各类设施设备都按污染物对待（除已知者外）（除已知者外）每天先做清洁消毒再开展实验工作每天先做清洁消毒再开展实验工作严格按操作规程工作严格按操作规程工作预防原则预防原则三.实验室污染事故及管理实验室污染事故及管理到目前为止，世界各地已经报道发生的实到目前为止，世界各地已经报道发生的实验室感染事件多
23、达万件。这些实验室感染事验室感染事件多达万件。这些实验室感染事件的主要原因是操作不规范，生物安全意识件的主要原因是操作不规范，生物安全意识低和防护措施不当等。这些事件都没有提及低和防护措施不当等。这些事件都没有提及其发生跟建筑物的选址和布局之间的关系其发生跟建筑物的选址和布局之间的关系 实验室内由于工作人员不慎，或技术不熟练实验室内由于工作人员不慎，或技术不熟练而发生的一些污染事故，必须及时采取应急而发生的一些污染事故，必须及时采取应急措施，以免病原微生物蔓延而造成传染病流措施，以免病原微生物蔓延而造成传染病流行行实验室获得性感染实验室获得性感染 实验室获得性感染都与事故有关，这些事故实验室获
24、得性感染都与事故有关，这些事故包括针刺和动物咬伤，但大多数感染原因不包括针刺和动物咬伤，但大多数感染原因不明。这些感染与偶然产生的微生物气溶胶有明。这些感染与偶然产生的微生物气溶胶有关。在离心机泄露，冷冻干燥和滴瓶等的时关。在离心机泄露，冷冻干燥和滴瓶等的时候发现有气溶胶化的微生物产生候发现有气溶胶化的微生物产生 主要以气溶胶传播的最常见的实验室感染主要以气溶胶传播的最常见的实验室感染包括布鲁氏菌病，包括布鲁氏菌病，Q Q病，兔热病，肺结核，病，兔热病，肺结核，委内瑞拉马脑炎和鹦鹉热委内瑞拉马脑炎和鹦鹉热培养物渗漏或容器破损的处理培养物渗漏或容器破损的处理 盛有感染性标本的容器渗漏，或溅落盛有
25、感染性标本的容器渗漏，或溅落在工作台上，或污染地面时，以在工作台上，或污染地面时，以0.5%0.5%次氯酸钠或过氧化乙酸浸泡的布覆盖至次氯酸钠或过氧化乙酸浸泡的布覆盖至少少1 1小时，再用擦布擦去渗漏物，并将小时，再用擦布擦去渗漏物，并将擦布放在污染物容器内压力灭菌擦布放在污染物容器内压力灭菌 如果手和脚被微生物污染，可用碘吸附如果手和脚被微生物污染，可用碘吸附洗涤消毒；受污染的工作服应立即更换洗涤消毒；受污染的工作服应立即更换 如果发生大量烈性传染病的致病菌污染，如果发生大量烈性传染病的致病菌污染，除采取以上应急措施外，必须立即封闭现除采取以上应急措施外，必须立即封闭现场，并报主管防疫部门，
26、请专职防疫人员场，并报主管防疫部门，请专职防疫人员参加研讨和采取相应的处理方法参加研讨和采取相应的处理方法 若盛有培养物的器皿破碎，要用消毒液浸若盛有培养物的器皿破碎，要用消毒液浸泡的布覆盖，至少半小时后才能将破碎物泡的布覆盖，至少半小时后才能将破碎物和用过的布放在容器中高压消毒。然后，和用过的布放在容器中高压消毒。然后，用消毒液浸泡的布擦洗污染的台面或地面用消毒液浸泡的布擦洗污染的台面或地面，擦布使用后也必须高压消毒。做上述处，擦布使用后也必须高压消毒。做上述处理者要戴手套理者要戴手套装有病原体离心管破碎后的处理装有病原体离心管破碎后的处理 如果离心沉淀过程中发现离心破碎，应立即停机，如果离
27、心沉淀过程中发现离心破碎，应立即停机，并于并于3030分钟后打开。假如停机后发现离心管破碎，分钟后打开。假如停机后发现离心管破碎，要重新盖好盖子，要重新盖好盖子，3030分钟后打开分钟后打开 戴上厚橡皮手套，必要时外面再套一层塑料手套，戴上厚橡皮手套，必要时外面再套一层塑料手套，用镊子检出离心碎片用镊子检出离心碎片 全部碎管和套管等应放入无腐蚀性的消毒液中浸泡全部碎管和套管等应放入无腐蚀性的消毒液中浸泡2424小时，或采用高压灭菌小时，或采用高压灭菌 离心机转筒应采用无腐蚀性的消毒液擦拭干净，擦离心机转筒应采用无腐蚀性的消毒液擦拭干净，擦布也需经高压灭菌布也需经高压灭菌事故性刺伤、划伤或擦伤的
28、处理事故性刺伤、划伤或擦伤的处理 经常使用注射器做实验动物接种等操作，可能无意经常使用注射器做实验动物接种等操作，可能无意中刺伤皮肤，造成有感染性液体的事故性注入。尤中刺伤皮肤，造成有感染性液体的事故性注入。尤其对于毒性较强的病原菌，如其对于毒性较强的病原菌，如SARSCoVSARSCoV、AIVAIV、炭疽、炭疽杆菌、鼠疫耶尔森菌核乙型肝炎病毒等，可引起严杆菌、鼠疫耶尔森菌核乙型肝炎病毒等，可引起严重的实验室感染重的实验室感染 一旦发生这样的意外，必须立即报告有关部门，根一旦发生这样的意外，必须立即报告有关部门，根据不同病原体采取相应的应急措施，包括预防接种据不同病原体采取相应的应急措施，包
29、括预防接种和相应的治疗等。类似的事故必须予以较详细的登和相应的治疗等。类似的事故必须予以较详细的登记记 其他事故，如被刀剪或破碎玻璃等划伤或刺伤时，其他事故，如被刀剪或破碎玻璃等划伤或刺伤时，均应先清洗伤口，并给予必要的预防注射和相应的均应先清洗伤口，并给予必要的预防注射和相应的抗生素治疗抗生素治疗气溶胶感染的生物安全气溶胶感染的生物安全 气溶胶感染占实验室感染的气溶胶感染占实验室感染的82%82%左右。气溶左右。气溶胶感染定义为液体产生大量很小的液体小滴胶感染定义为液体产生大量很小的液体小滴散布于环境。大于散布于环境。大于0.1mm0.1mm的小滴很快落地，的小滴很快落地，小于小于0.1mm
30、0.1mm的小滴的小滴1.71.7秒即蒸发，小于秒即蒸发，小于0.5mm0.5mm的小滴的小滴0.40.4秒即蒸发秒即蒸发 这些小滴中的传染性介质在空气中保持干燥这些小滴中的传染性介质在空气中保持干燥状态。越小的有机体和数量越多的介质能更状态。越小的有机体和数量越多的介质能更久保持空气传染，并且由通风和人们交通产久保持空气传染，并且由通风和人们交通产生的空气流围绕建筑物传染生的空气流围绕建筑物传染 许多条件可产生气溶胶传染，如离心力许多条件可产生气溶胶传染，如离心力、磨削、混合、强力震动、拌合、超声、磨削、混合、强力震动、拌合、超声波破碎、低压冻干、开启容器（内部压波破碎、低压冻干、开启容器（
31、内部压力不同于环境压力时）力不同于环境压力时）随着用于疫苗开发和针对气溶胶给药药随着用于疫苗开发和针对气溶胶给药药剂治疗的资金增加，许多欧美大学和研剂治疗的资金增加，许多欧美大学和研究所正在转向发展这一领域的专门技术究所正在转向发展这一领域的专门技术气溶胶污染室内空气的处理气溶胶污染室内空气的处理 实验室因操作不慎，含有感染性液体大量喷出而形实验室因操作不慎，含有感染性液体大量喷出而形成气溶胶并污染室内空气时，室内所有人员应马上成气溶胶并污染室内空气时，室内所有人员应马上撤离污染区域，并应报告主管部门撤离污染区域，并应报告主管部门 至少在至少在1 1小时之内任何人员均不能进入污染区。待气小时之
32、内任何人员均不能进入污染区。待气溶胶排出和较重的感染性微粒沉淀下来，即溶胶排出和较重的感染性微粒沉淀下来，即1 1小时后小时后再在安全员的监督下进行消毒再在安全员的监督下进行消毒 气溶胶感染人员应做相应的预防注射和抗生素治疗气溶胶感染人员应做相应的预防注射和抗生素治疗误服微生物悬液的处理误服微生物悬液的处理 对于误服者必须立即用含漱、洗胃和催对于误服者必须立即用含漱、洗胃和催吐等方式处理，严重者应送往急救室，吐等方式处理，严重者应送往急救室，根据摄入的病原体，采取必要的预防和根据摄入的病原体，采取必要的预防和治理措施，并作好事故登记治理措施，并作好事故登记 若悬液溅入眼内，应先以生理盐水冲若悬
33、液溅入眼内，应先以生理盐水冲洗，然后每隔洗，然后每隔1 1小时以抗生素眼药水滴小时以抗生素眼药水滴眼，再根据具体情况，决定有无必要做眼，再根据具体情况，决定有无必要做针对性的预防注射或给予丙种球蛋白针对性的预防注射或给予丙种球蛋白废弃物的处理废弃物的处理 废弃物是指任何要丢弃的物品废弃物是指任何要丢弃的物品 对于日常用品，污染后被真正地拿出实验室对于日常用品，污染后被真正地拿出实验室销毁的情况很少，大多数的玻璃器皿，用具销毁的情况很少，大多数的玻璃器皿，用具和实验服都将重新投入使用。最重要的原则和实验服都将重新投入使用。最重要的原则就是所有的感染性物品都应该在实验室内净就是所有的感染性物品都应
34、该在实验室内净化、高压灭菌或焚烧化、高压灭菌或焚烧 操作潜在感染性微生物或动物组织的实验室操作潜在感染性微生物或动物组织的实验室拿出物品或材料以前，应问自己如下一些至拿出物品或材料以前，应问自己如下一些至关重要的问题：关重要的问题：这些物品和材料已经通过可靠的程序有效地这些物品和材料已经通过可靠的程序有效地净化和灭菌了吗？净化和灭菌了吗？如果没有，那么它们被可靠的包装过吗？以如果没有，那么它们被可靠的包装过吗？以利于现场焚烧，或运送到另一个有焚烧功能利于现场焚烧，或运送到另一个有焚烧功能的设施的设施 处理已净化的物品时对那些直接参与处理程处理已净化的物品时对那些直接参与处理程序的人员或可能接触
35、这些丢弃物的人员会涉序的人员或可能接触这些丢弃物的人员会涉及任何额外的潜在危险吗（生物的或其他的及任何额外的潜在危险吗（生物的或其他的）？）？突发事件应急处理突发事件应急处理 个人的暴露个人的暴露告知同事告知同事用肥皂和水清洁暴露的体表，洗眼水冲洗眼睛，用肥皂和水清洁暴露的体表，洗眼水冲洗眼睛，盐水漱口盐水漱口请求紧急救助，并按突发事件处理请求紧急救助，并按突发事件处理通知实验室管理者，之后要向安全防护管理部门通知实验室管理者，之后要向安全防护管理部门报告报告与临床医学门诊和心理咨询门诊联系与临床医学门诊和心理咨询门诊联系表面污染的处理表面污染的处理告知同事告知同事划定和隔离污染区域划定和隔离
36、污染区域使用适当的个人防护设备使用适当的个人防护设备用镊子或铲子移走玻璃或团块用镊子或铲子移走玻璃或团块用抹布吸除溅出物，移走大体积物品用抹布吸除溅出物，移走大体积物品用浸有消毒水的抹布擦拭表面用浸有消毒水的抹布擦拭表面让抹布与表面接触适当的时间（让抹布与表面接触适当的时间（2 2秒以上）秒以上）移开抹布，并擦干；随后用酒精或肥皂水清洗移开抹布，并擦干；随后用酒精或肥皂水清洗妥善处理被污染的材料妥善处理被污染的材料通知实验室管理者通知实验室管理者四、动物实验的生物安全与防护四、动物实验的生物安全与防护1.1.动物实验设施环境污染来源动物实验设施环境污染来源人体污染：咳嗽，打喷嚏或说话，会人体污
37、染：咳嗽，打喷嚏或说话，会从口、鼻腔喷出含有大量微生物的液态从口、鼻腔喷出含有大量微生物的液态粒子。人体表皮细胞鳞屑每分钟大约可粒子。人体表皮细胞鳞屑每分钟大约可以脱落以脱落7000-100007000-10000个左右，其中个左右，其中10%10%带带有微生物。饲养人员和工作人员经常在有微生物。饲养人员和工作人员经常在洁净空间或实验室内活动，所以是环境洁净空间或实验室内活动，所以是环境污染的主要来源污染的主要来源空气污染：空气本身虽不能为微生物提供营养源，但空气中悬浮大量尘埃粒子，每升空气中含有带菌颗粒（微生物气溶胶Microbiological aerosol）约为一百万个（=0.5um粒
38、径），所以空气是环境污染的另一个重要来源空调系统污染：空调系统污染：空调系统处理不当将成为第三个污染来源，尘埃粒子和水分是微生物生长和生存条件，凡是有尘埃粒子和水分（或高湿度）的地方就会有细菌的定植和繁殖空调机组的表面冷却器，凝水盘，水封和加湿器等，是最容易滋生细菌的地方。如果这些地方相对湿度过高，则为霉菌的生长繁殖创造了条件2.常见的实验室感染途径常见的实验室感染途径 吸入含病原体的气溶胶引起感染吸入含病原体的气溶胶引起感染 摄入病原体能造成经口摄入病原摄入病原体能造成经口摄入病原体的操作或事故包括：以口吸吸管、将体的操作或事故包括：以口吸吸管、将液体溅洒入口、在实验室吃东西、饮水液体溅洒入
39、口、在实验室吃东西、饮水或吸烟，将污染的物品（如铅笔）或手或吸烟，将污染的物品（如铅笔）或手指放入口腔中（如咬指甲）等指放入口腔中（如咬指甲）等 意外接种见于被污染的针尖刺伤，意外接种见于被污染的针尖刺伤，被刀片或碎玻璃割伤，动物或昆虫咬伤被刀片或碎玻璃割伤，动物或昆虫咬伤或抓伤或抓伤 由皮下或粘膜透入含病原体的液体由皮下或粘膜透入含病原体的液体溢出或溅洒在皮肤或眼睛、鼻腔和口腔溢出或溅洒在皮肤或眼睛、鼻腔和口腔粘膜上，皮肤或粘膜接触污染的表面或粘膜上，皮肤或粘膜接触污染的表面或污染物，以及通过由手到脸的动作造成污染物，以及通过由手到脸的动作造成传播（如戴眼镜等）传播（如戴眼镜等）.常用实验动
40、物引起的过敏反应常用实验动物引起的过敏反应大鼠：过敏原主要是大鼠的尿液和唾液，空气大鼠：过敏原主要是大鼠的尿液和唾液，空气中大鼠尿蛋白浓度达到中大鼠尿蛋白浓度达到1ug/m31ug/m3，就有可能发，就有可能发生过敏反应生过敏反应小鼠：主要的致敏原是一种尿蛋白，主要存在小鼠：主要的致敏原是一种尿蛋白，主要存在于尿液中，是血中浓度的于尿液中，是血中浓度的100100倍，雄性鼠含倍，雄性鼠含量是雌鼠的量是雌鼠的4 4倍之多。随动物的数量和活动倍之多。随动物的数量和活动程度，空气粉尘中的过敏性物质浓度在程度，空气粉尘中的过敏性物质浓度在1.8-1.8-825ug/m3825ug/m3之间，其中直径在
41、之间，其中直径在6-18um6-18um的粉尘颗的粉尘颗粒含有多数的致敏原粒含有多数的致敏原豚鼠：豚鼠的皮屑、毛、唾液中，均含豚鼠：豚鼠的皮屑、毛、唾液中，均含有致敏原性复合物，其中尿液中含量最有致敏原性复合物，其中尿液中含量最高。豚鼠多数的过敏原性活动与大于高。豚鼠多数的过敏原性活动与大于5um5um粒子有关，其中约粒子有关，其中约10%10%存在于小于存在于小于0.8um0.8um粒子中，这些小的颗粒物质完全粒子中，这些小的颗粒物质完全可以穿越下呼吸道可以穿越下呼吸道兔：兔毛产生的一种糖蛋白是一种重要兔：兔毛产生的一种糖蛋白是一种重要的致敏原，其他存在于兔的唾液和尿液的致敏原，其他存在于兔
42、的唾液和尿液中。过敏反应与小于中。过敏反应与小于2um2um的粒子有关的粒子有关猫：来自家猫的致敏原可被人员传递给实猫：来自家猫的致敏原可被人员传递给实验动物，如小鼠和大鼠。人哮喘和对猫验动物，如小鼠和大鼠。人哮喘和对猫敏感有密切关系，所以在这种工作环境敏感有密切关系，所以在这种工作环境中的人，如之前接触过过敏原，过敏症中的人，如之前接触过过敏原，过敏症状会更加加重，甚至发生哮喘。猫主要状会更加加重，甚至发生哮喘。猫主要过敏原产生于皮脂腺和毛发、唾液腺中过敏原产生于皮脂腺和毛发、唾液腺中狗：来源于犬的唾液、毛发和皮脂腺。犬狗：来源于犬的唾液、毛发和皮脂腺。犬蛋白也是一种重要的致敏原蛋白也是一种
43、重要的致敏原.废弃物和尸体处理废弃物和尸体处理 血液和体液标本的处理血液和体液标本的处理用于抗体、抗原、病原微生物、生化指标等检用于抗体、抗原、病原微生物、生化指标等检查的血液和体液，按照要求进行处理并检测查的血液和体液，按照要求进行处理并检测，检测后的标本经，检测后的标本经121121，30min30min高压消毒处高压消毒处理理 动物脏器组织的处理动物脏器组织的处理动物器官组织，尤其是用于病原微生物分高的动物器官组织，尤其是用于病原微生物分高的组织按照标准程序进行处理；用于病理切片组织按照标准程序进行处理；用于病理切片的组织，均需要经过甲醛固定后再进行切片的组织，均需要经过甲醛固定后再进行
44、切片。剩余的组织经。剩余的组织经121121，30min30min高压消毒处理高压消毒处理 动物尸体的处理安乐处死的动物尸体，动物尸体的处理安乐处死的动物尸体，取材完毕后，经取材完毕后，经12130min12130min高压灭菌处理高压灭菌处理后，集中送环保部门处理。后，集中送环保部门处理。ABSL-3ABSL-3级的感级的感染动物尸体需经高压灭菌，才能移出实验染动物尸体需经高压灭菌，才能移出实验室室 动物咽试子的处理用于病原分离和动物咽试子的处理用于病原分离和PCRPCR检测的咽试子，按照各自的要求处理后，检测的咽试子，按照各自的要求处理后，进行病毒分离和进行病毒分离和PCRPCR检测，剩余
45、的标本经检测，剩余的标本经12130min12130min高压消毒处理高压消毒处理 病原分离培养物的处理病原分离的培养病原分离培养物的处理病原分离的培养物，不论是阳性还是阴性结果，均需经物，不论是阳性还是阴性结果，均需经12130min12130min高压消毒处理高压消毒处理.含有感染性材料的动物实验要求含有感染性材料的动物实验要求 涉及感染性材料的操作要在生物安全柜涉及感染性材料的操作要在生物安全柜中进行，并防止泄露在安全柜底面。操中进行，并防止泄露在安全柜底面。操作包括感染动物的解剖、组织的取材、作包括感染动物的解剖、组织的取材、采血及动物的病原接种采血及动物的病原接种 动物笼具在清洗前先
46、做消毒处理动物笼具在清洗前先做消毒处理 污物、一次性物品需放入医疗废物专用污物、一次性物品需放入医疗废物专用垃圾袋中，经高压灭菌后方可拿出实验垃圾袋中，经高压灭菌后方可拿出实验室室 动物尸体用双层医疗专用垃圾袋包裹后，加动物尸体用双层医疗专用垃圾袋包裹后，加入标有动物尸体专用的容器中，用消毒液喷入标有动物尸体专用的容器中，用消毒液喷雾容器表面后，运至解剖区域剖检雾容器表面后，运至解剖区域剖检 生物安全柜使用后应用消毒液擦拭、揩干生物安全柜使用后应用消毒液擦拭、揩干 废液需按比例倒入有消毒液的桶中，倒入时废液需按比例倒入有消毒液的桶中，倒入时需沿容器壁轻倒并戴眼罩，防止溅入眼中需沿容器壁轻倒并戴
47、眼罩，防止溅入眼中 如果有感染性物质溅到生物安全柜上、地上如果有感染性物质溅到生物安全柜上、地上以及其他地方，按菌（毒）外溢在台面、地以及其他地方，按菌（毒）外溢在台面、地面及其他表面处理面及其他表面处理 每天工作结束时，应用消毒液擦拭门把手和每天工作结束时，应用消毒液擦拭门把手和地面等表面区域地面等表面区域 废物放入高压灭菌器内时需粘贴指示条，物废物放入高压灭菌器内时需粘贴指示条，物品移出前观察指示条是否达到灭菌要求。颜品移出前观察指示条是否达到灭菌要求。颜色不符时需重复高压灭菌色不符时需重复高压灭菌 高压灭菌器需每月做灭菌测试一次，并作记高压灭菌器需每月做灭菌测试一次，并作记录录五、生物安
48、全管理五、生物安全管理我校生物安全管理体系中山大学生物安全管理委员会学院/医院生物安全领导小组实验室主任（生物安全责任人）实验室生物安全负责人设办公室处理日常工作实验室管理结构实验室管理结构实验室主任实验室主任实验组负责人实验组负责人实验组实验组副主任副主任副主任副主任设施、设备组设施、设备组后勤保障组后勤保障组中央控制区中央控制区动物实验组动物实验组检测组检测组办公室办公室物资供应组物资供应组确保实验室的工作指南、操作规程、标准操作程序确保实验室的工作指南、操作规程、标准操作程序 （SOP）已经）已经 建立，并且是实用的建立，并且是实用的对操作规程、对操作规程、SOP的标准操作程序的实施进行
49、监督的标准操作程序的实施进行监督提供国际上最佳生物安全操作提供国际上最佳生物安全操作对生物安全等级、个人防护装备等提供咨询和建议对生物安全等级、个人防护装备等提供咨询和建议审查风险评估审查风险评估监督教育和培训监督教育和培训制定一般工作程序的制定一般工作程序的SOP：如消毒、废物处理：如消毒、废物处理日常核查（制度）日常核查（制度）实验室安全负责人的职责实验室安全负责人的职责充分、熟悉所操作的微生物充分、熟悉所操作的微生物/化学品的危害化学品的危害及研究方法及研究方法拥有具体微生物拥有具体微生物/化学品安全操作规程方面化学品安全操作规程方面 的文件的文件必须遵循操作规程必须遵循操作规程进行医学
50、监测（含自己血样本底）进行医学监测（含自己血样本底）即时报告事故和意外或不当的行为即时报告事故和意外或不当的行为尊重一起工作的同事；尊重团队的协作尊重一起工作的同事；尊重团队的协作在实验室操作至少要有在实验室操作至少要有2 2个人以上个人以上实验室工作人员的责任实验室工作人员的责任实验室发生事故的报告制度实验室发生事故的报告制度一般紧急情况一般紧急情况生物安全事故生物安全事故当事人当事人/发现人发现人实验室实验室安全负责人安全负责人实验室实验室主任主任学院学院/医院生物医院生物安全领导小组安全领导小组当事人当事人/发现人发现人实验室安全负责人实验室安全负责人实验室主任实验室主任学院学院/医院生
