1、第一节 葡萄球菌属 一、分一、分 类类 重要菌种有金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，重要菌种有金黄色葡萄球菌，表皮葡萄球菌，头状葡萄球菌，人葡萄球菌和腐生葡萄球菌。头状葡萄球菌，人葡萄球菌和腐生葡萄球菌。人体分离的葡萄球菌还有溶血葡萄球菌、沃氏人体分离的葡萄球菌还有溶血葡萄球菌、沃氏 葡萄球菌、模仿葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施葡萄球菌、模仿葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施 氏葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、耳葡萄球菌、孔氏葡萄球菌、巴氏葡萄球菌、耳葡萄球菌、孔 氏葡萄球菌、木糖葡萄球菌、解糖葡萄球菌、氏葡萄球菌、木糖葡萄球菌、解糖葡萄球菌、山羊葡萄球菌、普氏葡萄球菌和中间葡萄球菌。山羊葡萄球菌、普氏葡萄球菌和中间
2、葡萄球菌。四、微生物检验 （一）（一）采取标本应避免正常菌群污染。采取标本应避免正常菌群污染。（二）（二）直接显微镜检查直接显微镜检查 无菌体液如脑脊液和关节穿刺液涂片革无菌体液如脑脊液和关节穿刺液涂片革 兰染色，查见细菌具有重要临床价值；兰染色，查见细菌具有重要临床价值；其他体液标本如同时伴有炎性细胞也其他体液标本如同时伴有炎性细胞也 具有参考价值，可向临床初步报告具有参考价值，可向临床初步报告“查查 见属革兰阳性葡萄球菌见属革兰阳性葡萄球菌”。其他体液标本如同时伴有炎性细其他体液标本如同时伴有炎性细胞也具有参考价值，可向临床初胞也具有参考价值，可向临床初步报告步报告“查见属革兰阳性葡萄球菌
3、查见属革兰阳性葡萄球菌”。（三）分离培养与鉴定（三）分离培养与鉴定 临床标本可接种血平板，污临床标本可接种血平板，污 染标本接种在选择平板上，如甘染标本接种在选择平板上，如甘 露醇高盐平板，血液标本则用肉露醇高盐平板，血液标本则用肉 汤增菌培养基。汤增菌培养基。孵育过夜平板上可见直径约为孵育过夜平板上可见直径约为2-3mm2-3mm，呈金黄色、白色或柠檬色的光滑、不呈金黄色、白色或柠檬色的光滑、不透明、凸起圆形菌落，有时可见透明、凸起圆形菌落，有时可见-溶血环，挑取菌落作鉴定试验。溶血环，挑取菌落作鉴定试验。鉴定病原性葡萄球菌的方法 1 1凝固酶试验凝固酶试验 试验所用的血浆为试验所用的血浆为
4、 EDTAEDTA抗凝兔血浆。金黄色葡萄球抗凝兔血浆。金黄色葡萄球 菌、中间型葡萄球菌呈现阳性反菌、中间型葡萄球菌呈现阳性反 应。应。(1)(1)玻片凝固酶试验：金黄色葡萄玻片凝固酶试验：金黄色葡萄 球菌表面有结合的凝固酶球菌表面有结合的凝固酶(聚集聚集 因子因子)，与血浆中的纤维蛋白原，与血浆中的纤维蛋白原 交联使菌体快速凝聚。交联使菌体快速凝聚。(2)(2)试管凝固酶试验：细菌分泌到试管凝固酶试验：细菌分泌到 菌体外的凝固酶被血浆中的协菌体外的凝固酶被血浆中的协 同因子激活形成复合物，再使同因子激活形成复合物，再使 纤维蛋白原转变成纤维蛋白。纤维蛋白原转变成纤维蛋白。2.2.耐热核酸酶试验
5、耐热核酸酶试验 大多数金大多数金 黄色葡萄球菌、施氏葡萄球黄色葡萄球菌、施氏葡萄球 菌、中间葡萄球菌、猪葡萄菌、中间葡萄球菌、猪葡萄 球菌能产生耐热核酸酶。球菌能产生耐热核酸酶。将待测菌的过夜肉汤培养物置沸将待测菌的过夜肉汤培养物置沸水浴水浴15min15min后，滴加于含甲苯胺蓝后，滴加于含甲苯胺蓝核酸琼脂上已打好的直径为核酸琼脂上已打好的直径为2 25mm5mm小孔内，置小孔内，置3535孵育，孵育，1h1h后观察后观察结果，绕孔周围蓝色琼脂转变为结果，绕孔周围蓝色琼脂转变为粉红环为阳性。粉红环为阳性。大多数的表皮葡萄球菌和金黄色葡大多数的表皮葡萄球菌和金黄色葡萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡
6、萄萄球菌、施氏葡萄球菌、中间葡萄球菌和猪葡萄球菌为阳性。球菌和猪葡萄球菌为阳性。磷酸酶试验磷酸酶试验 将待测菌种点种在加有硝基酚将待测菌种点种在加有硝基酚磷酸盐的磷酸盐的pH5.6pH5.66.8MH6.8MH琼脂上，琼脂上，孵育孵育181824h24h，菌落周围出现黄，菌落周围出现黄色为阳性。色为阳性。溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、溶血葡萄球菌、里昂葡萄球菌、施氏葡萄球菌和中间葡萄球菌为施氏葡萄球菌和中间葡萄球菌为 试验阳性。试验阳性。将孵育将孵育24h24h斜面培养物接种在含斜面培养物接种在含 吡咯烷酮吡咯烷酮-萘基酰胺肉汤中萘基酰胺肉汤中,35 ,35 孵育孵育2h2h，加入试剂后，加入试
7、剂后2 2分钟内呈现分钟内呈现 深紫红色为阳性。深紫红色为阳性。吡咯烷酮芳基酰胺酶试验吡咯烷酮芳基酰胺酶试验(四)药物敏感性试验 葡萄球菌属细菌药敏试验选择抗生素：葡萄球菌属细菌药敏试验选择抗生素：A A组组(常规首选药物常规首选药物)为苯唑西林、青为苯唑西林、青 霉素；霉素；B B组组(临床使用主要药物临床使用主要药物)阿齐霉素、阿齐霉素、克林霉素、甲氨苄啶磺胺甲嗯唑、克林霉素、甲氨苄啶磺胺甲嗯唑、万古霉素；万古霉素；C C组组(对对A A组耐受、过敏或无反应者组耐受、过敏或无反应者)用环丙沙星、庆大霉素、氯霉素；用环丙沙星、庆大霉素、氯霉素；U U组组(尿道中分离细菌尿道中分离细菌)用诺氟
8、沙星、用诺氟沙星、呋喃妥因。呋喃妥因。耐甲氧西林葡萄球菌耐甲氧西林葡萄球菌通过药敏试验可筛选出耐甲氧西林葡萄球菌通过药敏试验可筛选出耐甲氧西林葡萄球菌(methecillin resistant Staphylococcus(methecillin resistant Staphylococcus，MRS)MRS)，它是携带，它是携带mec Amec A基因、编码低亲和力基因、编码低亲和力青霉素结合蛋白导致耐甲氧西林、所有头孢青霉素结合蛋白导致耐甲氧西林、所有头孢菌素、碳青霉烯类、青霉素类菌素、碳青霉烯类、青霉素类+青霉素酶抑青霉素酶抑制剂抗生素的葡萄球菌，该菌是医院内感染制剂抗生素的葡萄球菌
9、，该菌是医院内感染的重要病原菌，感染多发生于免疫缺陷患者、的重要病原菌，感染多发生于免疫缺陷患者、老弱患者及手术、烧伤后的患者、极易导致老弱患者及手术、烧伤后的患者、极易导致感染暴发流行，治疗困难、病死率高。感染暴发流行，治疗困难、病死率高。(六六)检验结果分析与报告检验结果分析与报告葡萄球菌是临床上常见的细菌，经涂葡萄球菌是临床上常见的细菌，经涂片染色镜检观察革兰阳性球菌和典型片染色镜检观察革兰阳性球菌和典型菌落形态，若触酶试验阳性者，应先菌落形态，若触酶试验阳性者，应先用凝固酶试验检查，将其分成凝固酶用凝固酶试验检查，将其分成凝固酶阳性和凝固酶阴性细菌。阳性和凝固酶阴性细菌。前者大多为金黄
10、色葡萄球菌，应及前者大多为金黄色葡萄球菌，应及时快速鉴定和进行药敏试验，尽快时快速鉴定和进行药敏试验，尽快报告临床。后者大多是从输液导管、报告临床。后者大多是从输液导管、人工植入组织中分离出的细菌，应人工植入组织中分离出的细菌，应视为病原菌，须鉴定到菌种。视为病原菌，须鉴定到菌种。对凝固酶阴性葡萄球菌，可先用呋对凝固酶阴性葡萄球菌，可先用呋喃唑酮纸片（喃唑酮纸片（100g/100g/片片)，杆菌肽，杆菌肽纸片纸片(0.04u(0.04u片片)作药敏试验和氧化作药敏试验和氧化酶试验，以此与微球菌属细菌鉴别，酶试验，以此与微球菌属细菌鉴别，微球菌对杆菌肽敏感而对呋喃唑酮微球菌对杆菌肽敏感而对呋喃唑
11、酮耐药、氧化酶试验阳性，与葡萄球耐药、氧化酶试验阳性，与葡萄球菌属正好相反。菌属正好相反。若药物敏感性试验是甲氧西林耐药若药物敏感性试验是甲氧西林耐药的菌株，则报告该菌株耐所有青霉的菌株，则报告该菌株耐所有青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类和素、头孢菌素、碳青霉烯类和-内内酰胺药酰胺药-内酰胺酶抑制剂类抗生素，内酰胺酶抑制剂类抗生素，同时对氨基糖苷类，大环内酯类和同时对氨基糖苷类，大环内酯类和四环素类抗生素也耐药。四环素类抗生素也耐药。第二节第二节 链球菌属链球菌属 一、分一、分 类类 分类发生变化，分类发生变化，D群链球菌独立为肠球菌属群链球菌独立为肠球菌属,N群链球菌为乳球菌属。鉴定仍用传统的分
12、类方法，群链球菌为乳球菌属。鉴定仍用传统的分类方法，分为：分为：1.具有具有A、C、G抗原群抗原群溶血性链球菌。溶血性链球菌。包括包括:菌落直径大于菌落直径大于0.5mm A群的化脓群的化脓 性链球菌性链球菌,C群、群、G群的马链球菌和似马链群的马链球菌和似马链 球菌；球菌；菌落直径小于菌落直径小于0.5mm 具具A、C、G抗原，称米勒链球菌，主要包括咽喉炎抗原，称米勒链球菌，主要包括咽喉炎 链球菌、中间型链球菌和星座链球菌链球菌、中间型链球菌和星座链球菌3种。种。还有溶血和不溶血的细菌。还有溶血和不溶血的细菌。2.具有具有B抗原群抗原群溶血性链球菌又称溶血性链球菌又称 无乳菌。无乳菌。3.溶
13、血或草绿色溶血包括肺炎链球溶血或草绿色溶血包括肺炎链球 菌和草绿色链球菌群。菌和草绿色链球菌群。4.不溶血不溶血D群抗原链球菌称牛链球菌。群抗原链球菌称牛链球菌。二、临床意义 化脓性链球菌是致病力最强的链球菌化脓性链球菌是致病力最强的链球菌,能产生多种毒素、能产生多种毒素、M蛋白、脂磷壁酸和蛋白、脂磷壁酸和链激酶、链道酶、透明质酸酶等致病因链激酶、链道酶、透明质酸酶等致病因子，可引起咽炎、呼吸道感染、丹毒、子，可引起咽炎、呼吸道感染、丹毒、心内膜炎和脑膜炎等，产毒株还可引起心内膜炎和脑膜炎等，产毒株还可引起猩红热。该群细菌可致变态反应性疾病猩红热。该群细菌可致变态反应性疾病如急性肾小球肾炎，风
14、湿热等。如急性肾小球肾炎，风湿热等。无乳链球菌是新生儿脑膜炎的常见菌，无乳链球菌是新生儿脑膜炎的常见菌，该菌定居于妇女生殖道，故感染多发于出该菌定居于妇女生殖道，故感染多发于出生后生后24h，以肺炎为主。晚发型为产后，以肺炎为主。晚发型为产后7天天至至3月月,以脑膜炎和菌血症为主。以脑膜炎和菌血症为主。B群链球菌对成人侵袭力较弱，主要有群链球菌对成人侵袭力较弱，主要有肾盂肾炎、子宫内膜炎肾盂肾炎、子宫内膜炎;糖尿病泌尿生殖道糖尿病泌尿生殖道功能失调，肿瘤和免疫功能低下者易受功能失调，肿瘤和免疫功能低下者易受B群链球菌感染。群链球菌感染。C、G群群溶血性链球菌可引起上溶血性链球菌可引起上述相似的
15、感染。米勒链球菌是口腔、述相似的感染。米勒链球菌是口腔、上呼吸道、消化道、泌尿生殖道正常上呼吸道、消化道、泌尿生殖道正常菌群，引起手术和创伤等内源性感染。菌群，引起手术和创伤等内源性感染。肺炎链球菌是大叶性肺炎、支气肺炎链球菌是大叶性肺炎、支气管炎的病原菌，还可引起中耳炎、乳管炎的病原菌，还可引起中耳炎、乳突炎、鼻窦炎、脑膜菌血症。荚膜的突炎、鼻窦炎、脑膜菌血症。荚膜的侵袭力起重要作用，溶血素、神经胺侵袭力起重要作用，溶血素、神经胺酸酶也是其主要致病物质。酸酶也是其主要致病物质。草绿色链球菌是人体正常菌群，从草绿色链球菌是人体正常菌群，从血液中分离出该菌常被认为是污染的血液中分离出该菌常被认为
16、是污染的细菌。然而它可引起瓣膜异常患者的细菌。然而它可引起瓣膜异常患者的亚急性细菌性心内膜炎。血液链球菌、亚急性细菌性心内膜炎。血液链球菌、温和链球菌、格氏链球菌、口腔链球温和链球菌、格氏链球菌、口腔链球菌、中间型链球菌、常分离自深部脓菌、中间型链球菌、常分离自深部脓肿、尤其是肝和脑脓肿。肿、尤其是肝和脑脓肿。三、微生物特征三、微生物特征 直径小于直径小于2m的革兰阳性球菌，呈链状排的革兰阳性球菌，呈链状排 列，无芽胞和动力，形成荚膜。肺炎链球菌列，无芽胞和动力，形成荚膜。肺炎链球菌 呈矛尖状，宽端相对尖端向外。呈矛尖状，宽端相对尖端向外。兼性厌氧菌，肺炎链球菌和草绿色链球菌兼性厌氧菌，肺炎链
17、球菌和草绿色链球菌 某些菌种需要某些菌种需要CO2：促进其生长。营养要求：促进其生长。营养要求 高，须在培养基中加入血液、血清。最适生高，须在培养基中加入血液、血清。最适生 长温度长温度3537，pH7.47.6，血平板上形，血平板上形 成灰白色，透明表面光滑的小菌落，环绕菌成灰白色，透明表面光滑的小菌落，环绕菌 落形成落形成、三种特征性溶血现象，液三种特征性溶血现象，液 体培养形成絮状和颗粒沉淀。体培养形成絮状和颗粒沉淀。发酵葡萄糖和多种糖，不产气，乳发酵葡萄糖和多种糖，不产气，乳酸为代谢终末产物，触酶阴性。链球酸为代谢终末产物，触酶阴性。链球菌基因菌基因DNA中中G+C mol为为3134
18、。抗原结构复杂，主要有多糖抗原和蛋抗原结构复杂，主要有多糖抗原和蛋白抗原，前者位于细胞壁以此可将链白抗原，前者位于细胞壁以此可将链球菌分类为球菌分类为A、D、C、D、F、G等等13群。群。本菌属对干燥和消毒剂敏感，除肺本菌属对干燥和消毒剂敏感，除肺炎链球菌外，较少引起细菌耐药性。炎链球菌外，较少引起细菌耐药性。四、微生物检验四、微生物检验 1.主要采咽拭标本、痰液、脓汁和血液主要采咽拭标本、痰液、脓汁和血液 等标本，采集后在等标本，采集后在2h内送验，对内送验，对B群群 溶血链球菌的检查，第溶血链球菌的检查，第3537周妊娠周妊娠 妇女的阴道分泌物，置于含多粘菌素妇女的阴道分泌物，置于含多粘菌
19、素 (10gm1)和萘啶酸和萘啶酸(15g gm1)选择性培养肉汤中孵育选择性培养肉汤中孵育1824h，再，再 作分离培养。作分离培养。2.直接显微镜检查标本涂片革兰染色直接显微镜检查标本涂片革兰染色 镜检，见链状排列革兰阳性球菌有镜检，见链状排列革兰阳性球菌有 助于无正常菌群污染标本，荚膜肿助于无正常菌群污染标本，荚膜肿 胀试验用于检查肺炎链球菌。胀试验用于检查肺炎链球菌。3.直接检测抗原咽拭标本的直接检测抗原咽拭标本的A群和阴群和阴 道标本的道标本的D群链球菌可用抗原检测，群链球菌可用抗原检测，先将标本放于含亚硝酸液中孵育片先将标本放于含亚硝酸液中孵育片 刻，用刻，用ELISA方法检测。标
20、本含菌方法检测。标本含菌 数少可出现假阴性。数少可出现假阴性。4.分离培养与鉴定分离培养与鉴定 用血平板培养有助于识别溶血特性和用血平板培养有助于识别溶血特性和 进一步鉴定。初代分离需用进一步鉴定。初代分离需用5CO环环 境境,3537孵育孵育24h,观察菌落性状：观察菌落性状：溶血的溶血的A、C、G群菌落较大，直径大群菌落较大，直径大 于于0.5mm，而米勒链球菌则小于，而米勒链球菌则小于0.5mm。B群链球菌菌较大，溶血环较群链球菌菌较大，溶血环较A、C、G 群模糊，群模糊，溶血菌落呈草绿色，肺炎链溶血菌落呈草绿色，肺炎链 球菌因荚膜多糖使菌落呈粘性。牛型链球菌因荚膜多糖使菌落呈粘性。牛型
21、链 球菌则为无溶血环呈灰色。球菌则为无溶血环呈灰色。链球菌属鉴定方法链球菌属鉴定方法 1.-溶血链球菌鉴定溶血链球菌鉴定 (1)Lancefield群特异性抗原鉴定：群特异性抗原鉴定：B群群 为无乳链球菌，为无乳链球菌，F群为米勒链球菌。群为米勒链球菌。(2)PYR试验：化脓性链球菌产生的吡试验：化脓性链球菌产生的吡 咯烷酮芳基酰胺酶水解吡咯烷酮咯烷酮芳基酰胺酶水解吡咯烷酮B-萘基酰胺，加入萘基酰胺，加入 N、N-二甲氧基肉二甲氧基肉 桂醛试剂后产生桃红色。桂醛试剂后产生桃红色。(3)杆菌肽敏感试验：可作为筛选试验。杆菌肽敏感试验：可作为筛选试验。0.04U杆菌肽药敏纸片贴在待测菌的杆菌肽药敏
22、纸片贴在待测菌的 血平板上，血平板上，35孵育过液后，观察孵育过液后，观察 抑菌环抑菌环,化脓性链球菌敏感为阳性。化脓性链球菌敏感为阳性。(4)VP试验：挑取平板上孵育过夜菌落试验：挑取平板上孵育过夜菌落 置于置于2ml VP肉汤中，孵育肉汤中，孵育6h后加入后加入 VP试剂，摇匀试剂，摇匀30秒，出现桃红色者秒，出现桃红色者 为阳性。为阳性。(5)CAMP试验：无乳链球菌能产生试验：无乳链球菌能产生 CAMP因子促进金葡菌溶血能力，因子促进金葡菌溶血能力，可作为初步鉴定试验。先将金葡可作为初步鉴定试验。先将金葡 菌菌(ATCC25923)沿直径划线接种，沿直径划线接种，再沿垂直方向接种无乳链
23、球菌，再沿垂直方向接种无乳链球菌，两线不得相接，间隔约两线不得相接，间隔约34mm。35孵育过夜，划线交界处出现孵育过夜，划线交界处出现 箭头状溶血为阳性。箭头状溶血为阳性。2.非非溶血链球菌鉴定溶血链球菌鉴定 (1)optochin试验：含试验：含5optochin 纸片贴于涂布有待测菌的平板上纸片贴于涂布有待测菌的平板上,35孵育过夜，抑菌圈大于孵育过夜，抑菌圈大于14mm 即为敏感。肺炎链球菌敏感。即为敏感。肺炎链球菌敏感。(2)胆汁溶菌试验：将胆汁溶菌试验：将O5ml的麦氏浓的麦氏浓 度细菌悬液和等量的度细菌悬液和等量的2去氧胆盐置去氧胆盐置 于试管内，于试管内，35孵育孵育2小时后小
24、时后,菌液菌液 变清为阳性。肺炎链球菌为阳性。变清为阳性。肺炎链球菌为阳性。(3)胆汁七叶苷试验：将待测菌落接种胆汁七叶苷试验：将待测菌落接种 于胆汁七叶苷斜面，于胆汁七叶苷斜面，35孵育孵育48小小 时，斜面黑色为阳性。牛链球菌试时，斜面黑色为阳性。牛链球菌试 验阳性。验阳性。3草绿色链球菌鉴定草绿色链球菌鉴定 链球菌群链球菌群VP脲酶脲酶 精氨酸精氨酸七叶苷七叶苷甘露醇甘露醇山梨醇山梨醇 温和温和链球菌群链球菌群-变异变异链球菌群链球菌群+-+唾液唾液链球菌群链球菌群+/-+/-+-米勒米勒链球菌群链球菌群+-+/-+/-(五五)抗链球菌溶血素抗链球菌溶血素O试验试验 常用于风湿热的辅助诊
25、断，活常用于风湿热的辅助诊断，活 动性风湿热患者的抗体效价一般动性风湿热患者的抗体效价一般 超过超过400单位。单位。(六六)药物敏感性试验药物敏感性试验 A组为红霉素、青霉素、甲氨苄啶磺组为红霉素、青霉素、甲氨苄啶磺 胺甲嗯唑等；胺甲嗯唑等；B组为头孢吡肟、头孢噻肟、氧氟沙星、组为头孢吡肟、头孢噻肟、氧氟沙星、培南类等；培南类等；C组为阿莫西林、头孢呋辛、氯霉素、组为阿莫西林、头孢呋辛、氯霉素、利福平等。青霉素是抗链球菌的首选药利福平等。青霉素是抗链球菌的首选药 物，此外头孢菌素、红霉素、万古霉素物，此外头孢菌素、红霉素、万古霉素 也是治疗链球菌感染的药物。也是治疗链球菌感染的药物。有报道有
26、报道A群链球菌红霉素耐药株和群链球菌红霉素耐药株和牛链球菌万古霉素耐药株，耐青霉牛链球菌万古霉素耐药株，耐青霉素的肺炎链球菌和草绿色链球菌。素的肺炎链球菌和草绿色链球菌。若来源于血和脑脊液，对该菌株应若来源于血和脑脊液，对该菌株应检测对头孢曲松、头孢噻肟和美洛培检测对头孢曲松、头孢噻肟和美洛培南的南的MIC以判断敏感、中介或耐药。以判断敏感、中介或耐药。(七七)检验结果分析与报告检验结果分析与报告 -溶血性链球菌和肺炎链球菌溶血性链球菌和肺炎链球菌 系毒力强的致病菌，均应及时报系毒力强的致病菌，均应及时报 告，及时使用抗生素以减少发生告，及时使用抗生素以减少发生 并发症。并发症。C、G群大菌落
27、群大菌落-溶血性链球菌是溶血性链球菌是咽喉炎病原体，而米勒链球菌群是正咽喉炎病原体，而米勒链球菌群是正常菌群，但在脓肿或伤口中分离的应常菌群，但在脓肿或伤口中分离的应视为致病菌而非污染菌。视为致病菌而非污染菌。牛链球菌生物型牛链球菌生物型1和心内膜炎及胃和心内膜炎及胃肠道癌症有关。肠道癌症有关。第三节 肠球菌属 一、分一、分 类类 肠球菌属归类链球菌科，但种系肠球菌属归类链球菌科，但种系 分类法证实粪肠球菌和屎肠球菌分类法证实粪肠球菌和屎肠球菌 不同于链球菌属的细菌，将其命不同于链球菌属的细菌，将其命 名为肠球菌属。有名为肠球菌属。有19种肠球菌，种肠球菌，分成分成5群，临床分离的肠球菌多属群
28、，临床分离的肠球菌多属 于于2群。群。二、临床意义二、临床意义 肠球菌所致感染最多见于尿路感肠球菌所致感染最多见于尿路感 染，多与尿路器械操作、留置导尿、染，多与尿路器械操作、留置导尿、尿路结构异常有关，是重要的医院尿路结构异常有关，是重要的医院 感染病原菌。腹腔和盆腔创伤时也感染病原菌。腹腔和盆腔创伤时也 常见肠球菌感染。近年来用抗生素常见肠球菌感染。近年来用抗生素 而出现的耐药性，使肠球菌感染率而出现的耐药性，使肠球菌感染率 不断上升。不断上升。肠球菌引起的菌血症常发生于有肠球菌引起的菌血症常发生于有严重基础疾患的老年人、长期住院严重基础疾患的老年人、长期住院的免疫功能低下患者。偶尔可见呼
29、的免疫功能低下患者。偶尔可见呼吸道或中枢神经系统的肠球菌感染，吸道或中枢神经系统的肠球菌感染，在临床诊断前应认真评估分离菌的在临床诊断前应认真评估分离菌的临床意义。临床意义。三、微生物特性三、微生物特性 革兰阳性球菌、卵圆形、链状排列。无芽革兰阳性球菌、卵圆形、链状排列。无芽胞和荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛。胞和荚膜，个别菌种有稀疏鞭毛。兼性厌氧菌，最适生长温度兼性厌氧菌，最适生长温度35；大多数；大多数菌株在菌株在1045均能生长。在含均能生长。在含6.5NaCl肉汤中能生长，在肉汤中能生长，在40胆汁培养基中能分解胆汁培养基中能分解七叶苷，多数菌种具有吡咯烷酮芳基酰胺酶，七叶苷，多数菌种具有吡
30、咯烷酮芳基酰胺酶，能水解吡咯烷酮能水解吡咯烷酮-萘基酰胺萘基酰胺(PYR)，不含细，不含细胞色素氧化酶和触酶。粪肠球菌培养于血培胞色素氧化酶和触酶。粪肠球菌培养于血培养基中，可合成细胞色素或触酶。含养基中，可合成细胞色素或触酶。含D群链群链球菌球菌D抗原。抗原。G+Cmol为为3745。四、微生物检验四、微生物检验 1.常规采集血、尿、创伤标本和常规采集血、尿、创伤标本和 其他拭子，标本于其他拭子，标本于1小时内接小时内接 种完毕。种完毕。2.直接涂片染色镜检可见成短链直接涂片染色镜检可见成短链 排列排列,卵圆形革兰阳性球菌。卵圆形革兰阳性球菌。3.接种于含血平板，若含革兰阴性杆菌可接种于含血
31、平板，若含革兰阴性杆菌可 选用选择鉴别培养基，常用叠氮胆汁七选用选择鉴别培养基，常用叠氮胆汁七 叶苷琼脂，可抑制革兰阴性菌生长，而叶苷琼脂，可抑制革兰阴性菌生长，而 肠球菌分解七叶苷为黑色菌落；肠球菌分解七叶苷为黑色菌落；35 37孵育孵育24h后，形成灰白不透明、表面后，形成灰白不透明、表面 光滑、直径光滑、直径0.51大小的圆形菌落，大小的圆形菌落，血平板上为血平板上为溶血或不溶血。溶血或不溶血。细菌鉴定方法细菌鉴定方法 菌属菌属万古霉万古霉素素 分解葡萄分解葡萄糖糖 PYR胆汁七叶胆汁七叶苷苷NaCL10 45 肠球菌属肠球菌属 敏感敏感-+乳球菌属乳球菌属敏感敏感-+可变可变+可变可变
32、链球菌属链球菌属 敏感敏感-可变可变明串珠明串珠菌属菌属 耐药耐药+-可变可变可变可变-可变可变(五五)药物敏感试验药物敏感试验 A组为青霉素或氨苄青霉素，组为青霉素或氨苄青霉素，B组为万古霉素；组为万古霉素；C组为四环素类和红霉素、氯霉素、组为四环素类和红霉素、氯霉素、利福平；利福平；U组为环丙沙星、诺氟沙星等。组为环丙沙星、诺氟沙星等。肠球菌的耐药性对一般剂量或中肠球菌的耐药性对一般剂量或中剂量氨基糖苷类耐药和对万古霉素剂量氨基糖苷类耐药和对万古霉素低度耐药。临床上联合使用青霉素低度耐药。临床上联合使用青霉素G、氨苄青霉素与氨基糖苷类抗生、氨苄青霉素与氨基糖苷类抗生素成为治疗肠球菌首选方法
33、。素成为治疗肠球菌首选方法。对重症感染患者分离的肠球菌应鉴定到对重症感染患者分离的肠球菌应鉴定到种，由于医院内感染肠球菌呈上升趋势，故种，由于医院内感染肠球菌呈上升趋势，故对肠球菌分型的流行病学调查显得越来越重对肠球菌分型的流行病学调查显得越来越重要，传统的分型可用生物分型、抗生素耐药要，传统的分型可用生物分型、抗生素耐药谱、噬菌体、细菌素等分型方法，但费时费谱、噬菌体、细菌素等分型方法，但费时费力，较为先进的分子生物学方法分型，尤其力，较为先进的分子生物学方法分型，尤其是在耐药株暴发流行时，显示其重要价值。是在耐药株暴发流行时，显示其重要价值。(六六)检验结果分析与报告检验结果分析与报告第四
34、节奈瑟菌属和布兰汉菌属一、分一、分 类类奈瑟菌科包括奈瑟菌属、卡他布奈瑟菌科包括奈瑟菌属、卡他布兰汉菌属、莫拉菌属、金氏菌属和不兰汉菌属、莫拉菌属、金氏菌属和不动杆菌属。奈瑟菌属包括淋病奈瑟菌、动杆菌属。奈瑟菌属包括淋病奈瑟菌、脑膜炎奈瑟菌及卡他布兰汉菌。脑膜炎奈瑟菌及卡他布兰汉菌。二、临床意义二、临床意义 1.淋病奈瑟菌淋病奈瑟菌 淋病奈瑟菌是性病病原菌，临床淋病奈瑟菌是性病病原菌，临床 表现为：表现为：淋病；淋病；盆腔炎；盆腔炎；口口 咽部和肛门直肠病；咽部和肛门直肠病；淋菌性结膜淋菌性结膜 炎；炎；播散性淋病。播散性淋病。淋病奈瑟菌致病物质包括菌毛、淋病奈瑟菌致病物质包括菌毛、外膜蛋白、
35、外膜蛋白、IgA蛋白酶、脂多糖和蛋白酶、脂多糖和 铁调节蛋白。铁调节蛋白。2.脑膜炎奈瑟菌脑膜炎奈瑟菌 脑膜炎奈瑟菌是流行性脑脊髓膜炎脑膜炎奈瑟菌是流行性脑脊髓膜炎 病原体病原体,通过呼吸道感染后多数为隐性通过呼吸道感染后多数为隐性 感染或表现为上呼吸道症状，少数可感染或表现为上呼吸道症状，少数可 发展为败血症，进而形成化脓性脑膜发展为败血症，进而形成化脓性脑膜 炎。炎。3.卡他布兰汉菌卡他布兰汉菌 卡他布兰汉菌是导致中耳炎，鼻窦卡他布兰汉菌是导致中耳炎，鼻窦 炎，慢性阻塞性肺炎的病原体。炎，慢性阻塞性肺炎的病原体。三、微生物特性三、微生物特性 为革兰阴性双肾样，坦面相邻的双球为革兰阴性双肾样
36、，坦面相邻的双球 菌菌,直径约为直径约为0.61.5m，无动力无芽，无动力无芽 胞胞,某些菌种形成荚膜，孵育某些菌种形成荚膜，孵育24h后在培后在培 养基上发生自溶。需要丰富营养，对脂养基上发生自溶。需要丰富营养，对脂 肪酸敏感肪酸敏感,在培养基中需加入淀粉。在培养基中需加入淀粉。需氧生长，需氧生长，CO2和湿度刺激奈瑟菌和湿度刺激奈瑟菌生长，最适生长温度为生长，最适生长温度为3537。氧化酶阳性，触酶阳性，对糖分解能氧化酶阳性，触酶阳性，对糖分解能力、硝酸盐还原能力和力、硝酸盐还原能力和DNA合成酶不合成酶不同，常作为鉴别依据。抵抗力弱，对同，常作为鉴别依据。抵抗力弱，对化学消毒剂敏感。化学
37、消毒剂敏感。+mol奈瑟菌奈瑟菌属为属为4654，布兰汉菌属为，布兰汉菌属为4048。四、微生物检验四、微生物检验 1.采集脑脊液、血液、瘀点穿刺液等标采集脑脊液、血液、瘀点穿刺液等标 本后本后,立即送检，或用血平板床边接种立即送检，或用血平板床边接种 后立即孵育。后立即孵育。2.直接镜检直接镜检 涂片固定革兰染色，显微镜涂片固定革兰染色，显微镜 观察可见革兰阴性双球菌和胞内含球观察可见革兰阴性双球菌和胞内含球 菌的多形核白细胞，有助于男性淋病菌的多形核白细胞，有助于男性淋病 早期诊断。女性宫颈拭子标本涂片可早期诊断。女性宫颈拭子标本涂片可 见胞内、胞外大量革兰阴性双球菌见胞内、胞外大量革兰阴
38、性双球菌,由由 于女性阴道有正常菌群寄居，故必须于女性阴道有正常菌群寄居，故必须 由培养结果得以证实方可报告。由培养结果得以证实方可报告。脑脊液或皮肤瘀点渗出液涂片所见革阴脑脊液或皮肤瘀点渗出液涂片所见革阴 性双球菌和白细胞内的革兰阴性双球菌，性双球菌和白细胞内的革兰阴性双球菌，有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断。有助于流行性脑脊髓膜炎早期诊断。3.抗原检测和核酸检测抗原检测和核酸检测 利用利用ELISA检测淋检测淋 病奈瑟菌抗原，该法在检测男性尿道分病奈瑟菌抗原，该法在检测男性尿道分 泌物标本和涂片染色具有相同的敏感度泌物标本和涂片染色具有相同的敏感度 和特异度，但在宫颈和直肠拭子中，由和特异度
39、，但在宫颈和直肠拭子中，由 于奈瑟菌属存在共同抗原，其特异性较于奈瑟菌属存在共同抗原，其特异性较 革兰染色涂片镜检低。革兰染色涂片镜检低。4.分离培养与鉴定。分离培养与鉴定。奈瑟菌属鉴定奈瑟菌属鉴定 1.推测性鉴定推测性鉴定 G-双球菌和氧化酶试验阳性是两个推测双球菌和氧化酶试验阳性是两个推测 性鉴定指标。区分性鉴定指标。区分G-双球菌和双球菌和G-球杆菌方球杆菌方 法是将待检菌接种于巧克力平板上法是将待检菌接种于巧克力平板上,贴贴10U 的青霉素纸片，的青霉素纸片，35孵育孵育1824小时，挑小时，挑 取纸片边缘生长的菌落，涂片取纸片边缘生长的菌落，涂片 染色观察，染色观察，若菌体延长成长索
40、状则为若菌体延长成长索状则为G-球杆菌，而球杆菌，而G-双球菌则仍保持双球菌形态，某些菌体出双球菌则仍保持双球菌形态，某些菌体出 现肿胀。现肿胀。2.确证性鉴定确证性鉴定 利用生化反应，如脑膜炎奈瑟菌、利用生化反应，如脑膜炎奈瑟菌、淋病奈瑟菌葡萄糖试验产酸，而卡淋病奈瑟菌葡萄糖试验产酸，而卡 他布兰汉奈瑟菌为阴性；脑膜炎奈他布兰汉奈瑟菌为阴性；脑膜炎奈 瑟菌麦芽糖试验产酸，而淋病奈瑟瑟菌麦芽糖试验产酸，而淋病奈瑟 菌为阴性。菌为阴性。(五五)药物敏感性试验药物敏感性试验 药物敏感试验选择药物为青霉素、头药物敏感试验选择药物为青霉素、头 孢菌素、四环素、环丙沙星和壮观霉素。孢菌素、四环素、环丙沙
41、星和壮观霉素。治疗首选药物为青霉素。治疗首选药物为青霉素。近年来，由于淋病奈瑟菌耐药质粒转近年来，由于淋病奈瑟菌耐药质粒转 移，由其介导的耐青霉素酶的淋病奈瑟移，由其介导的耐青霉素酶的淋病奈瑟 菌临床上多见，该菌表现对青霉素和四菌临床上多见，该菌表现对青霉素和四 环素耐药，对壮观霉素和三代头孢菌素、环素耐药，对壮观霉素和三代头孢菌素、喹诺酮类敏感，强调临床实验室的药敏喹诺酮类敏感，强调临床实验室的药敏 试验结果，以有助于合理用药。试验结果，以有助于合理用药。对引起的下呼吸道感染卡他布兰对引起的下呼吸道感染卡他布兰汉菌，既往对青霉素敏感，近年来汉菌，既往对青霉素敏感，近年来报告耐药菌株日渐增多，
42、可用广谱报告耐药菌株日渐增多，可用广谱青霉素与青霉素酶抑制剂的合剂进青霉素与青霉素酶抑制剂的合剂进行治疗。行治疗。(六六)检验结果分析与报告检验结果分析与报告 淋病的早期和正确诊断，具有医淋病的早期和正确诊断，具有医 学和社会的重要意义，诊断报告必学和社会的重要意义，诊断报告必 须慎重，对各种实验室诊断试验需须慎重，对各种实验室诊断试验需 掌握其敏感性和特异性的程度，必掌握其敏感性和特异性的程度，必 须综合分析各种试验的结果，最后须综合分析各种试验的结果，最后 的确证还依赖于分离培养和鉴定。的确证还依赖于分离培养和鉴定。脑膜炎奈瑟菌的快速诊断能为治脑膜炎奈瑟菌的快速诊断能为治疗提供时机，故瘀点
43、及脑脊液的染疗提供时机，故瘀点及脑脊液的染色，涂片镜检是快速简便方法。色，涂片镜检是快速简便方法。第七章 肠杆菌科 第一节 概述 肠杆菌科包括肠杆菌科包括24个与医学有关的菌属个与医学有关的菌属,G+Cmol39-59。1.四类引起人类腹泻和肠道感染的细菌：埃四类引起人类腹泻和肠道感染的细菌：埃 希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌希菌属、志贺菌属、沙门菌属、耶尔森菌 属。属。2.八种与医院感染有关的条件致病菌：枸橼八种与医院感染有关的条件致病菌：枸橼 酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源酸杆菌属、克雷伯菌属、肠杆菌属、多源 菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗威登菌属、沙雷菌属、变形杆菌属、普罗
44、威登 菌属和摩根菌属；菌属和摩根菌属；3.其中鼠疫耶尔森菌、伤寒沙门菌对其中鼠疫耶尔森菌、伤寒沙门菌对 人致病性较强。此外，许多细菌既人致病性较强。此外，许多细菌既 是正常菌群，也是条件致病菌。在是正常菌群，也是条件致病菌。在 机体抵抗力下降，寄居部位的改变机体抵抗力下降，寄居部位的改变 或菌群失调时能引起机会感染。或菌群失调时能引起机会感染。且往往为医院感染。鼠疫耶尔森菌可且往往为医院感染。鼠疫耶尔森菌可 引起烈性传染病鼠疫。引起烈性传染病鼠疫。2.人类肠道感染人类肠道感染 埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属和耶埃希菌属、志贺菌属、沙门菌属和耶 尔森菌属。主要引起各种急、慢性肠尔森菌属。主要引起各
45、种急、慢性肠 道感染、食物中毒、旅行者腹泻及肠道感染、食物中毒、旅行者腹泻及肠 热症等。热症等。三、共同特性三、共同特性 (1)1.形态结构形态结构 -杆状或球杆状、无芽孢、多数有鞭杆状或球杆状、无芽孢、多数有鞭 毛，能运动。致病性菌株有菌毛。毛，能运动。致病性菌株有菌毛。2.抗原成分抗原成分 抗原是细胞壁成分脂多糖。以核抗原是细胞壁成分脂多糖。以核 心多糖为中心的三层结构，内侧是脂类心多糖为中心的三层结构，内侧是脂类 A,为内毒素的毒性成分。外侧是由重复为内毒素的毒性成分。外侧是由重复 的特异多糖，决定抗原的特异性。的特异多糖，决定抗原的特异性。H抗原是不耐热的蛋白质抗原，氨基酸抗原是不耐热
46、的蛋白质抗原，氨基酸 序列和空间构型决定序列和空间构型决定H抗原的特异性。抗原的特异性。表面抗原是包绕在抗原外侧的多糖抗表面抗原是包绕在抗原外侧的多糖抗 原，由多糖结构决定抗原特异性。大肠原，由多糖结构决定抗原特异性。大肠 埃希菌称埃希菌称K抗原、伤寒沙门菌称抗原、伤寒沙门菌称Vi抗原抗原 和志贺菌称和志贺菌称B抗原等。抗原等。O抗原和抗原和H抗原是肠杆菌科血清学分抗原是肠杆菌科血清学分 群和分型的依据。表面抗原存在时可阻群和分型的依据。表面抗原存在时可阻 断。抗原与相应抗体之间的反应，加热断。抗原与相应抗体之间的反应，加热 处理能消除表面抗原的阻断作用。处理能消除表面抗原的阻断作用。共同特性
47、共同特性 (2)3.变异性变异性 S-R变异是初次分离的细菌，菌体变异是初次分离的细菌，菌体 抗原上都有特异性多糖链，菌落为光滑抗原上都有特异性多糖链，菌落为光滑 型。在人工培养基中反复传代时，细胞型。在人工培养基中反复传代时，细胞 壁上特异性多糖链消失而核心多糖仍保壁上特异性多糖链消失而核心多糖仍保 留，菌落变为粗糙型。留，菌落变为粗糙型。H-O变异是有鞭毛的细菌变异是有鞭毛的细菌,失去鞭失去鞭 毛，动力也随之消失，称毛，动力也随之消失，称H-O变异变异,有有 时见于新分离的菌株中。时见于新分离的菌株中。4.培养和生化特性培养和生化特性 营养要求不高，在普通培养基上生长营养要求不高，在普通培
48、养基上生长 良好；兼性厌氧，主要生化特性包括发良好；兼性厌氧，主要生化特性包括发 酵葡萄糖酵葡萄糖(产酸或产酸产气产酸或产酸产气)，触酶阳性，触酶阳性,氧化酶阴性，可将硝酸盐还原至亚硝酸氧化酶阴性，可将硝酸盐还原至亚硝酸 盐。盐。5.抵抗力抵抗力 抵抗力不强，加热抵抗力不强，加热6030min即被杀即被杀 死，不耐干燥，对一般化学消毒剂均敏死，不耐干燥，对一般化学消毒剂均敏 感。对低温有耐受力。能耐胆盐，能抵感。对低温有耐受力。能耐胆盐，能抵 抗染料的抑菌作用。抗染料的抑菌作用。四、微生物检验四、微生物检验 1.标本采集标本采集 肠外标本肠外标本:采自不同的感染部位如血液采自不同的感染部位如血
49、液 、体液、呼吸道、伤口、尿液及其他各、体液、呼吸道、伤口、尿液及其他各 种标本。种标本。肠道标本肠道标本:疾病早期留取新鲜粪便，挑疾病早期留取新鲜粪便，挑 取粘液脓血部分进行培养。应在取粘液脓血部分进行培养。应在2h内进内进 行，以利志贺菌等检出。如不能及时培行，以利志贺菌等检出。如不能及时培 养应冷藏待检。养应冷藏待检。2.直接镜检直接镜检-杆菌，形态及染色性无鉴别杆菌，形态及染色性无鉴别 意义。意义。3分离培养鉴定分离培养鉴定 (1)肠外标本肠外标本:采自无菌部位的标本用血采自无菌部位的标本用血 琼脂，血培养时可用肉汤增菌。其他琼脂，血培养时可用肉汤增菌。其他 标本中含有杂菌，需用选择性
50、培养基标本中含有杂菌，需用选择性培养基 以增加分离率，常用伊红美蓝以增加分离率，常用伊红美蓝(EMB)琼脂，因为琼脂，因为EMB能促进肠杆菌科细能促进肠杆菌科细 菌生长并抑制其他菌生长并抑制其他-菌。菌。(2)肠道标本：常用的选择鉴别培肠道标本：常用的选择鉴别培养基养基(如如EMB)和针对沙门菌和志贺和针对沙门菌和志贺菌的强选择鉴别培养基，菌的强选择鉴别培养基，(如如SS琼脂琼脂)。如疑耶尔森菌感染可用耶尔森菌选。如疑耶尔森菌感染可用耶尔森菌选择琼脂择琼脂(CIN)。肠杆菌科细菌肠杆菌科细菌鉴定鉴定1)常规生化鉴定常规生化鉴定:为实验室最常用的方为实验室最常用的方 法。各菌属法。各菌属(种种)
