1、 实验设计实验设计 土壤中分解尿素的细菌的分离与记数土壤中分解尿素的细菌的分离与记数 1.土壤取样土壤取样 2.制备培养基制备培养基 3.样品稀释、取样涂布样品稀释、取样涂布 4.微生物的培养、观察并记录结果微生物的培养、观察并记录结果 5.细菌的计数细菌的计数 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数 从肥沃、湿润的土壤中取样。先从肥沃、湿润的土壤中取样。先 铲去表层土铲去表层土3cm左右，再取样，将样左右，再取样，将样 品装入事先准备好的信封中。品装入事先准备好的信封中。 实验步骤实验步骤 1土壤取样土壤取样 制备制备5个牛肉膏蛋白胨培养基和个牛肉膏蛋白胨培养基和
2、15个选择培养基，准备好个选择培养基，准备好无菌试管和无菌试管和 移液管移液管。 实验步骤实验步骤 2.制备培养基制备培养基 制备制备5个牛肉膏蛋白胨培养基和个牛肉膏蛋白胨培养基和15个个 选择培养基，准备好选择培养基，准备好无菌试管和移液管无菌试管和移液管。 注：每个稀释度下需要注：每个稀释度下需要3个选择培养基个选择培养基 （平行重复原则），（平行重复原则），1个牛肉膏蛋白胨培养个牛肉膏蛋白胨培养 基。选用稀释倍数为基。选用稀释倍数为103107的稀释液。的稀释液。 实验步骤实验步骤 2.制备培养基制备培养基 为什么分离不同的微生物为什么分离不同的微生物 要采用不同的稀释度？测定土要采用不
3、同的稀释度？测定土 壤中细菌的总量和测定土壤中壤中细菌的总量和测定土壤中 能分解尿素的细菌的数量，选能分解尿素的细菌的数量，选 用的稀释范围相同吗？用的稀释范围相同吗？ 因为因为土壤中各类微生物的数量土壤中各类微生物的数量(单单 位：株位：株/kg)是不同的是不同的，例如在干旱土壤，例如在干旱土壤 中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌中的上层样本中：好氧及兼性厌氧细菌 数约为数约为2 185万，放线菌数约为万，放线菌数约为477万，万， 霉菌数约为霉菌数约为23.1万。因此，万。因此，为获得不同为获得不同 类型的微生物，就需要按不同的稀释度类型的微生物，就需要按不同的稀释度 进行分离进行分离，同
4、时还应当有针对性地提供，同时还应当有针对性地提供 选择培养的条件。选择培养的条件。 测定土壤中细菌的数量，一般选测定土壤中细菌的数量，一般选 用用104、105和和106倍的稀释液进行平板倍的稀释液进行平板 培养；测定放线菌的数量，一般选用培养；测定放线菌的数量，一般选用 103、104和和105倍稀释液；测定真菌的倍稀释液；测定真菌的 数量，一般选用数量，一般选用102、103和和104倍稀释倍稀释 液液。 注：注： 样品的稀释样品的稀释 将将10g土样加入盛有土样加入盛有90mL无菌水的锥形瓶中无菌水的锥形瓶中, 充分摇匀，吸取上清液充分摇匀，吸取上清液1mL，转移至盛有，转移至盛有9mL
5、水水 的无菌试管中，依次等比稀释至的无菌试管中，依次等比稀释至107稀释度，并稀释度，并 按照由按照由107至至103稀释度的顺序分别吸取稀释度的顺序分别吸取0.1mL进进 行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布行平板涂布操作。按照浓度从低到高的顺序涂布 平板，不必更换移液管。平板，不必更换移液管。 实验步骤实验步骤 3.样品稀释、取样涂布样品稀释、取样涂布 注意：由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因注意：由于初次实验，对于稀释的范围没有把握，因 此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为此选择了一个较为宽泛的范围：稀释倍数为10103 310107 7。 将涂布好的培养皿放在将涂布好的培
6、养皿放在30下下 培养。比较牛肉膏培养基和选择培培养。比较牛肉膏培养基和选择培 养基中菌落的数量、形态等，并做养基中菌落的数量、形态等，并做 好记录。好记录。 4.微生物的培养、观察并记录结果微生物的培养、观察并记录结果 不同种类的微生物，往往需要不不同种类的微生物，往往需要不 同的培养温度和培养时间。同的培养温度和培养时间。细菌细菌一般一般 在在3037的温度下培养的温度下培养12d；放线放线 菌菌一般在一般在2528的温度下培养的温度下培养57d； 而而霉菌霉菌一般在一般在2528的温度下培养的温度下培养 34d。 注：注： 一般来说，在一定的培养条件下一般来说，在一定的培养条件下(相同的
7、培养相同的培养 基、温度及培养时间基、温度及培养时间)，同种微生物表现出稳定的，同种微生物表现出稳定的 菌落特征。菌落菌落特征。菌落形状、大小、隆起程度和颜色形状、大小、隆起程度和颜色 当菌落数目稳定时，选取菌落数当菌落数目稳定时，选取菌落数 在在30300的平板进行计数。在同一稀的平板进行计数。在同一稀 释度下，至少对释度下，至少对3个平板进行重复计数，个平板进行重复计数， 然后求出平均值，并根据平板所对应然后求出平均值，并根据平板所对应 的稀释度计算出样品中细菌的数目。的稀释度计算出样品中细菌的数目。 实验步骤实验步骤 5.细菌的计数细菌的计数 一一无菌操作无菌操作 1 1、取土用的小铁铲
8、的盛土样的信封在使用前都取土用的小铁铲的盛土样的信封在使用前都 需要灭菌需要灭菌。 2 2、应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤。在火焰附近将称好的在火焰附近将称好的 土样倒入锥形瓶中土样倒入锥形瓶中，塞好棉塞塞好棉塞。 3 3、在稀释土壤溶液的过程中在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火每一步都要在火 焰旁操作焰旁操作。 二二做好标记做好标记 注明培养基种类注明培养基种类、培养日期培养日期、平板培养样品的平板培养样品的 稀释度等稀释度等。 三三规划时间规划时间 挑选选择培养基中不同形态的菌落挑选选择培养基中不同形态的菌落接入含酚红培养基接入含酚红培养基 的斜面中的斜面中，观察能否变红。，观察
9、能否变红。 1 1、结合对照结合对照，分析培养物中是否有杂菌污染以分析培养物中是否有杂菌污染以 及选择培养基是否筛选出一些菌落及选择培养基是否筛选出一些菌落。 2 2、是否获得了某一稀释度下是否获得了某一稀释度下，菌落数目在菌落数目在3030 300300的平板的平板。在这稀释度下在这稀释度下，是否至少有两个是否至少有两个 平板的菌落数相近平板的菌落数相近？ 3 3、你统计的每克土壤中含有能分解尿素的细菌你统计的每克土壤中含有能分解尿素的细菌 的菌落数是多少的菌落数是多少？与其他同学的结果接近吗与其他同学的结果接近吗？ 如果差异很大如果差异很大，可能是什么原因引起的可能是什么原因引起的？ 滤膜法滤膜法 以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例。将已知以测定饮用水中大肠杆菌的数目为例。将已知 体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养液基上体积的水过滤后，将滤膜放在伊红美蓝培养液基上 培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。培养。在该培养基上，大肠杆菌的菌落呈现黑色。 可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中可以根据培养基上黑色菌落的数目，计算出水样中 大肠杆菌的数量。大肠杆菌的数量。 微生物计数微生物计数 作业： 1.阅读课本p21-p26 2.完成本节创新设计活页 作业讲评作业讲评
